培养基及其配制
- 格式：pptx
- 大小：397.74 KB
- 文档页数：45
下载文档原格式
合集下载
培养基及配制
有机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别
配制，也可以混在一起 配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和SO42-， Ca2+、Mg2+和PO43- 一起溶解后，会产生沉淀，一定 要充分溶解再放入母液中。 各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。 母液配好后放冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
4.2 细胞分裂素（CTK）
（1）种类：Kt---激动素
BAP---苄氨基嘌呤 2－iP---异戊烯腺嘌呤 ZT-玉米素 TDZ
（2）作用：启动脱分化、细胞增殖，诱导愈伤组织芽分化、芽 Nhomakorabea殖，丛生芽。
（3）浓度：0.05－10.0mg/L （4）配制：溶于稀酸或稀碱
激素配比模式
生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤 组织、长根还是长芽。
6.2 抗生素
作用：抑制内生菌； 种类：青霉素、链霉素、庆大霉素、利福平、 卡那霉素等， 用量：用量5~20mg/L 注意：抗生素对组织生长有抑制作用，使 用要慎重。
多数需过滤灭菌。
6.3 抗氧化物
1)常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC 2)用量：50－200mg/L， 3)作用：防止氧化 4)注意：可用抗氧化剂洗 涤外植体伤口表面。
不凝原因：①pH<5不凝；②长时间高压灭菌； ③长期存放，易变质；④厂家不同，杂质含量不同 ⑤配制时融解不充分，分装不均匀；
5.2.其它
玻璃纤维 滤纸桥 海绵、卡拉胶等
6 辅 助 性 物 质
6.1 活性炭 6.2 抗氧化物 6.3 抗生素
6.1 活性炭
1)作用：具吸附作用； • 茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 -0.2%）； • 促进生根,根避光生长； • 防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）； • 有利于胚胎培养。 2)常用浓度：0.5－10g/L 3)注意：活性炭具副作用。选择 吸附性差，导致营养损耗和 pH↓， 应适当调高营养物质与激素水平， 并加大Agar用量。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
第三章培养基及其配制
⑷2，4—D(2，4—二氯苯氧乙酸)起动能力比IAA高10倍， 特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽 的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量 常有毒效应。
5.2细胞分裂素类
细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而 在生根培养时使用较少或用量较低。这类激素是腺嘌吟的 衍生物，包括6－BA(6－苄基氨基嘌呤)、Kt (kinetin 激动 素)、Zt (zeatin 玉米素)等，细胞分裂素0.05－10mg／L。 其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6—BA。
（三）母液配制的药品与器材
1、药品：配制MS培养基所需的药品、生长调节 物质、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH，0.1mol/L的 HCL 2、器材：各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、 母液瓶、标签、冰箱等。
（四）母液配制（以MS培养基为例）
无机大量 母液
有机物母液
激素母液
无机微量母液
铁盐母液
配制MS培养基时母液的计算Fra bibliotekGA (赤霉素)： 有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不 同、培养基中添加的是GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长 生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作 用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时 有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化；此外， 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌 发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：
①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 ②促进细胞分裂与扩大。 ③抑制根的分化。
5.3激素配比模式
生长素与细胞分裂素：它们的比例决定着发育的方向，是愈伤 组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降 低生长素的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比 例。 高：有利于根的形成和愈伤组织的形成； 适中：有利于根芽的分化； 低：有利于芽的形成
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
植物组织培养培养基及其配制
• 水解乳蛋白或水解酪蛋白：它们是牛乳用酶法 等加工的水解产物，是含有约20种氨基酸的混 合物，用量在10-1000mg／L之间。由于它们 营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别 需要，以不用为宜。
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组 织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已 养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积 累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组 织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已 养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积 累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
配置培养基的步骤
配置培养基的步骤1、准备培养基：根据培养细菌或霉菌所需养分，准备添加合适量的养分和水份。
可以选用已准备好的快速培养基，或者通过实验中调整成分组成和比例来配置不同养分质量和浓度的培养基。
2、配料步骤：根据配方要求，根据具体实验配置合适的原料质量和量，以谷物粉状的一般原材料为例，如糖、蛋白质、粘粉和滑石粉等，分别从各种原料容器中取出适量原料，放入适当容器中混合，组装成一体。
3、热处理：将搅拌好的原料放入加热装置中，在70℃-80℃的温度下持续加热和搅拌（根据原料不同可能略有改变）10分钟，以除去杂质和有害物质，保证培养基的质量。
4、冷却：培养基热处理搅拌完毕后，送入冷却设备中进行冷却。
控制水温，使温度从100℃～30℃降低，当培养基温度降至30℃～35℃时，可尽快停止加热，不要使培养基在高于50℃的温度下停留时间太长。
5、灭菌：当培养基温度降至50℃以下后，放入灭菌设备中进行滤过灭菌，灭菌温度设置为95℃～105℃，灭菌有功率设置为12W / cm2。
培养基中优先蒸馏或吸附的微生物在温度较低的情况下，然后再进行灭菌。
6、成型：灭菌完毕后，将其中的培养基通过滤装置进行筛选，排除大的杂质，然后将培养基倒入模具中成型，并调节压力，以控制成型品的形状和大小，达到要求。
7、灌装：灌装时，将培养基放入适当的容器，如瓶、盒等，灌装至一定位置，然后进行装封，保证培养基充分被封口，以保持产品质量稳定，防止空气中的细菌进入塑料袋，从而防止培养基污染。
8、包装：通过灌装完毕后，将培养基用内衬袋和外衬袋包装，方便产品的运输和存储，防止空气和光线的污染，同时还可以防止外界杂质进入。
9、检测：将包装完毕的培养基置于检测室中，进行分析检测。
检测产品质量及其各项性能，主要包括微生物活性、消毒效果、润湿性、颗粒大小等。
检测结果与产品要求一致时，即证明培养基产品符合国家标准要求，可以进行量产。
DMEM培养基配方
DMEM培养基配方DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛用于体外细胞培养和研究。
下面是一种常见DMEM培养基的配方，以及其组成成分和原理解析。
1.DMEM基础培养基：-DMEM混合物：420mL-热灭菌的双蒸馏水：500mL2.补充物：-胎牛血清（FBS）：100mL-青霉素和链霉素：1mL-10%海马酸溶液：5mL配方的组成成分和原理解析：1.DMEM基础培养基：DMEM是Eagle培养基的一种改良版，其中包含了额外的氨基酸、维生素和无机盐。
DMEM是无血清培养基，不含胎牛血清，可减少实验结果受到外界因素的影响。
2.热灭菌的双蒸馏水：双蒸馏水是通过蒸馏过程去除水中的杂质和微生物，保证细胞培养过程中的无菌状态。
3.胎牛血清（FBS）：胎牛血清是培养细胞所必需的重要补充物，其中含有许多生长因子、激素和蛋白质，可以提供细胞所需的养分。
4.青霉素和链霉素：青霉素和链霉素是两种广谱抗生素，用于预防和控制细胞培养中的细菌污染。
5.10%海马酸溶液：海马酸（L-glutamine）是一种重要的氨基酸，对细胞的生长和分裂非常关键。
10%的海马酸溶液用于提供细胞所需的L-谷氨酰胺。
补充物中的FBS用于提供细胞所需的生长因子、激素和蛋白质。
青霉素和链霉素的加入可以预防细菌感染，确保细胞培养的纯度和健康度。
海马酸溶液则提供细胞所需的L-谷氨酰胺，促进细胞的生长和分裂。
总结：DMEM培养基是一种常用的细胞培养基，配方中包含基础培养基、水和补充物。
基础培养基提供细胞所需的基本成分，而补充物则提供细胞所需的生长因子、抗生素和氨基酸。
这种培养基的配方可以为细胞提供稳定的生存环境，促进细胞的生长和分裂。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同，因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基（Nutrient Broth）营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，高压灭菌，分装，即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基（MacConkey Agar）大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基，用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为：蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基（Sabouraud Dextrose Agar）Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为：脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基（Vogel-Johnson Agar）VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属（如克雷伯菌）的培养基。
其配方为：葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸，冷却至55-60°C，加入胆盐酯高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础，它们提供了养分和条件，促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种，以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦－鲍德尔培养基（Luria-Bertani agar）配方：成分：1.蛋白胨：10克2.酵母提取物：5克3.食盐：10克4.琼脂：15克5.蒸馏水：1000毫升6.高氯酸钠（0.1M）：2毫升（pH7.2）制备方法：1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中，加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀，再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。
注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基（Nutrient agar）配方：成分：1.蛋白胨：5克2.细胞色素：1克3.维生素B1：0.1克4.卵黄：10克5.食盐：5克6.琼脂：15克7.蒸馏水：1000毫升制备方法：1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。
注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长，但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基（MacConkey agar）配方：成分：1.蛋白胨：17克2.硼砂：1.5克3.细胞色素：2.5克4.氯化钠：5克5.水合甲基红：0.03克6.钴绿：0.015克7.红绿二色砂：0.15克8.琼脂：13.5克9.蒸馏水：1000毫升制备方法：1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。
注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文，供参考使用。
在制备培养基时，需要注意消毒操作，以防止污染。
另外，不同微生物对培养基的要求也有所不同，可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
酵母菌培养基
2.1.2 培养基培养基配方及其配制，参照《The yeast，a taxonomic study》(第三版)[20]和《酵母菌特征与鉴定手册》[21]。
2.1.2.1 平板分离培养基YPD固体培养基：酵母浸膏10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g，溶于1 L蒸馏水中，121℃灭菌20 min。
2.1.2.2 筛选酿酒酵母培养基WL琼脂培养基：酵母浸粉0.5%、胰蛋白胨0.5%、葡萄糖5%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.055%、氯化钾0.0425%、氯化钙0.0125%、氯化铁0.00025%、硫酸镁0.0125%、硫酸锰0.00025%、溴甲酚绿0.0022%，pH值为6.5，121℃灭菌20 min。
2.1.2.3 假酵母菌丝鉴定培养基玉米粉琼脂培养基：取12.5 g玉米粉加水300 mL，装置60 ℃水浴锅维持1 h，过滤，滤液的体积为300 mL，加3.8 g琼脂，121℃灭菌20 min。
2.1.2.4 碳源同化基础培养基(NH4)2SO4 2 g、KH2PO4 2.5 g、MgSO4·7H2O 1 g、酵母浸膏0.5 g、琼脂20g、添加不同碳源20 g，溶于1 L蒸馏水中，121℃灭菌20 min。
2.1.2.5 氮源同化基础培养基KH2PO4 1.36 g、NaH2PO4 2.13 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、FeSO4·7H2O 0.2 g、CaCl2·2H2O 0.5 g、葡萄糖10 g、琼脂20 g、添加不同的氮源10 g，溶于1L蒸馏水中，121℃灭菌20 min。
2.1.2.6 无维生素试验基础培养基(NH4)2SO4 2 g、MgSO4·7H2O 1 g、CaCl2·2H2O 0.1 g、KH2PO4 2.5 g、NaCl 0.1 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g，溶于1 L蒸馏水中，121℃灭菌20 min。
各种培养基的配方
各种培养基的配方在微生物学中，培养基是为微生物提供营养和生长所必需的营养物质的混合物，可以根据微生物的特性和需求来设计不同成分的培养基。
不同种类的微生物需要不同的培养基来生长和繁殖，为了获得最佳的生长效果，需根据微生物的特性制备相应的培养基。
下面介绍几种常用的培养基及其配方。
1. 加尔沙基培养基（Luria-Bertani，LB培养基）LB培养基是一种常用的细菌培养基，适用于大多数细菌的培养。
其成分包括牛肉浸出物、酵母提取物和氯化钠，PH为7.0。
配方：- 水：1000ml-氯化钠：10g-酵母提取物：5g-牛肉浸出物：10gLB培养基的主要特点是富含氨基酸和碳源，适合于细菌的快速生长。
2. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）PDA培养基是一种适合真菌和霉菌生长的培养基，成分简单易得。
它主要包括马铃薯提取物、葡萄糖和琼脂。
PDA培养基是一种半固体培养基，适合于真菌的产孢。
配方：-马铃薯提取物：200g-葡萄糖：20g-琼脂：20g-静置180s后，灭菌PDA培养基适合于真菌和霉菌的生长，常用于菌落计数和生长的研究中。
3.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于多种微生物的培养。
它主要包括蛋白水解物、酵母提取物、氯化钠和琼脂。
配方：-蛋白水解物：5g-酵母提取物：1g-氯化钠：5g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌营养琼脂培养基适合于大多数微生物的生长，是最常用的培养基之一4. 马尼特尔-梅尔特培养基（Mannitol-Salt Agar，MSA）MSA培养基是一种选择性培养基，主要用于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的分离和鉴定。
它的成分包括马尼托尔、氯化钠、酵母提取物和琼脂。
配方：-马尼托尔：5g-氯化钠：75g-酵母提取物：1g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌MSA培养基在金黄色葡萄球菌的生长过程中，可以通过红色菌落的形成来进行识别。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文1.MS培养基Murashige和Skoog于1962年开发了一种被广泛应用于植物细胞培养的培养基，即MS培养基。
它包含微量元素、氨基酸、糖类、维生素和植物激素等成分，能够支持植物的生长和分化。
以下是MS培养基的配方：-盐类：MS盐基础配方中包含氯化钙、硫酸镁、硫酸钾、磷酸二氢钠、硝酸铵和氯化钾等盐类。
-糖类：通常使用蔗糖作为碳源，添加到培养基中以提供植物生长所需的能量。
-植物激素：水杨酸、吲哚醋酸和细胞分裂素等植物激素可用于调控植物的生长和分化。
-维生素：MS培养基中还需要添加维生素，以满足植物对维生素的需求。
2.B5培养基B5培养基是Gamborg等人于1968年开发的一种植物培养基，适用于多种植物细胞培养。
与MS培养基相比，B5培养基中糖类的浓度更高，有利于植物细胞的生长和分化。
以下是B5培养基的配方：-盐类：B5培养基的盐基础配方与MS培养基相似，包含硝酸铵、硝酸钠、氯化钾等盐类。
-糖类：相较于MS培养基，B5培养基中糖类浓度更高，通常使用25~30g/L的蔗糖。
-维生素：B5培养基中也需要添加维生素，以满足植物对维生素的需求。
-激素：植物生长激素如IAA、BA等也会加入到B5培养基中，调控植物生长和发育。
3.N6培养基N6培养基是Chu等人于1985年开发的一种改良型植物培养基，适用于多种植物细胞的培养。
N6培养基中的氨基酸比B5培养基更多，能够更好地支持植物细胞的生长和分化。
以下是N6培养基的配方：-盐类：N6培养基的盐基础配方包括硫酸镁、硝酸钾、氯化钾等盐类。
-糖类：N6培养基中糖类的浓度通常为20~30g/L，通常使用蔗糖作为碳源。
-维生素：N6培养基中也需要添加维生素，以满足植物对维生素的需求。
-激素：N6培养基中的植物激素种类较多，有利于调控植物的生长和发育。
以上是几种常见的植物培养基配方，不同植物对养分的需求各不相同，因此制备培养基时应根据具体的研究目的和植物的生长习性选择合适的培养基配方。
第二章 培养基1
• 水解酪蛋白 为蛋白质的水解物，主要成分 为氨基酸，使用浓度为100-200mg／L。受 酸和酶的作用易分解，使用时要注意。
• 其他 酵母提取液(YE)(0．01％-0．05％)， 主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取 液(0．01％~0.5％)、苹果和番茄的果汁、 黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较 稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。
4．2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)
优点：诱导能力要比IAA高10-20倍，特别在促进愈伤组 织的形成上活力最强。 缺点：但它会强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。因 而其适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。 适用：一般用于细胞启动脱分化阶段，而诱导分化阶段 往往不用2,4-D，而用NAA 或IAA 、IBA等。 脱分化---是指使已分化了的停止分裂的细胞失去分化特 性，回复到未分化的幼龄状态，恢复细胞分裂的 能力的过程。 分化---是指使脱分化形成的处于幼龄状态的细胞团或组 织，再产生根、芽、胚状体等有高层次组织结构 的特化细胞。
五、糖类
糖在组培中是不可缺少的 1.作用： 一是作为离体组织赖以生长的碳源 二是使培养基维持一定的渗透压（一般在1.5-
4.1MPa）。
2.种类：蔗糖（多用），其浓度为1%-5%,也可 用砂糖、葡萄糖或果糖等。
• 不同糖类对生长的影响不同。从各种糖对 水稻根培养的影响来看，以葡萄糖效果最 好，果糖和蔗糖相当，麦芽糖差一些。不 同植物不同组织的糖类需要量也不同，实 验时要根据配方规定按量称取，不能任意 取量。高压灭菌时一部分糖发生分解、制 定配方时要给予考虑。在大规模生产时， 可用食用的绵白糖代替。
1．吲哚乙酸（IAA）:是从植物中提取出来的，它 在高等植物中普遍存在，在幼嫩的生长旺盛的部 位含量更高。 优点：对器官形成的副作用较小 缺点：易受体内酶的分解，受光易氧化，在高温 高压的灭菌中热稳定性较差，并且其药剂 的活性也较低，可能是最弱的激素。 而人工合成的生长素则不会受到酶的分解，高温 高压下表现也比较稳定。所以在组织培养中通常 使用人工合成的类似物，如IBA 、NAA和2,4-D。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
简述配制培养基的基本步骤及注意事项
简述配制培养基的基本步骤及注意事项配制培养基是在实验室中进行细胞培养和微生物培养的重要步骤。
正确的配制培养基对于细胞和微生物的生长和繁殖至关重要。
下面将简述配制培养基的基本步骤及注意事项。
一、准备培养基所需的原料和试剂配制培养基所需的原料和试剂包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、盐酸、硝酸钠等。
在备用的容器中准备好这些原料和试剂，确保其纯度和质量。
二、称量原料和试剂按照所需的培养基配方，准确称量所需的原料和试剂。
注意要使用准确的称量工具，并遵循准确的称量方法，以确保配制的培养基的准确性和一致性。
三、溶解原料和试剂将称量好的原料和试剂逐一加入适量的蒸馏水中，并充分搅拌溶解。
溶解过程中要注意控制溶解温度和时间，避免结晶或沉淀的产生。
四、调节pH值根据培养基配方的要求，使用盐酸或硝酸钠等酸碱溶液逐渐调节培养基的pH值。
调节过程中要注意使用准确的pH计，并逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值过大或过小。
五、加入其他添加物根据具体需要，可以添加抗生素、染料或其他添加物来增强培养基的特定功能。
添加时要注意添加的量不能过多，以避免对细胞或微生物的生长产生不良影响。
六、灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，以杀死其中可能存在的细菌、真菌或其他微生物。
常用的灭菌方法有高温高压灭菌和过滤灭菌。
要选择适合的灭菌方法，并严格按照操作规程进行灭菌处理。
七、保存和使用灭菌后的培养基应尽快冷却并储存在无菌条件下。
使用时要注意避免污染，使用无菌的培养皿或试管，并采取无菌操作，以确保培养基的纯净度。
在配制培养基的过程中，我们需要注意以下几点：1. 严格按照培养基配方的要求进行操作，避免原料和试剂的误用或误量。
2. 使用纯净的蒸馏水和高质量的原料和试剂，以确保培养基的质量和纯度。
3. 在配制过程中要注意溶解的充分和均匀，避免结晶或沉淀的产生。
4. 调节pH值时要小心操作，逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值的剧烈变化。
5. 添加其他添加物时要谨慎，避免添加过多或添加不当。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、玻璃器皿的选择
4、培养皿 规格：9、12cm直径； 适于：游离细胞、 原生质体、花粉等的静置培养、 看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等。 5、果酱瓶 规格：200ml罐头瓶，加盖半透明的塑料盖； 特点：成本较低，操作方便，也减少了培养材料的
损伤；缺点是易引起污染。
6、瓶口封塞
要求：要具有一定的通气性和密闭性， 以防止培养基干燥和杂菌污染。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of
Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus
No MS salts
No sign of regeneration from explant
at all.
肌醇：使用浓度一般为100mg／L 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收
利用，常用甘氨酸。
4、植物生长调节物质
1）生长素类： 作用：诱导愈伤组织形成、根的分化和促进细
胞分裂、伸长生长。 IAA(indo acetic acid吲哚乙酸) NAA(naphthalene acetic acid萘乙酸) IBA(indolebutyri acid吲哚丁酸) 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用的强弱顺序：2,4-D > NAA > IBA >IAA
6-BA reduced to 0.1 mg. l-1
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA
2）微量元素：浓度小于0.5mmol／L的元素
Fe B Mn Cu Mo Co
3、有机物质
碳源和能源：蔗糖、葡萄糖和果糖。蔗糖：2%— 5%，常用3%，可调节渗透压；
维生素：VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸），生物素、叶酸、 VB12等。一般用量为0.1—10mg／L；
沿用，多数以发明人的名字来命名
二、培养基的成分
水 无机营养 有机物质 植物生长调节剂 培养材料的支持物 活性炭 抗生素类 天然复合物
1、水
2、无机营养（无机盐类） 1）大量元素：浓度大于0.5mmol／L N：NO3-N和NH4-N两种形式供应，如KNO3、
NH4NO3 P：KH2P04或NaH2P04 K：Kcl、KN03 Ca、Mg、S：MgSO4·7H20、CaCl2
2、铬酸液的配制
① 配制步骤： 选用合适容器； 按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后
将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中； 缓缓加入浓硫酸，铬酸洗涤液（弱液）：重铬酸钾50g+蒸馏水 1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。
饱和铬酸洗涤液（中液）：用重铬酸钾50g加 入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加 入浓硫酸875ml。
2）细胞分裂素类 ( cytokinin )
作用①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长;②促 进细胞分裂与扩大;③抑制根的分化
6-BA(6-苄基氨基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) 作用的强弱顺序：Zt>6-BA>Kt
3）GA(gibberellic acid赤霉素)
作用：促进幼苗茎的伸长生长，打破休眠， 促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。
激素配比模式
生长素/细胞分裂素 高：有利于根的形成 适中：有利于愈伤组织形成或根芽分化 低：有利于芽的形成
No 6-BA
Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
强铬酸洗涤液（强液）：与浓硫酸加热的同时 缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到 饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g
第二章 培养基及其配制
第一节 培养基的成分 第二节 培养基的配制 第三节 常用培养基的配方
第一节 培养基的成分
一、培养基的产生及名称 1、培养基的产生 1680年和1681年：Sacks和Knop 1943年：white 1962年：Murashige和Skoog （MS） 2、培养基的名称
常用： 1） 棉塞； 2） 聚丙烯塑料薄膜； 3） 也可采用专用的封口膜
二、玻璃器皿的清洗
1、玻璃器皿的清洗步骤 浸泡：目的是软化和溶解附着物，新 5%盐酸 刷洗：放在洗涤剂中反复刷洗 浸酸： 酸液又称洗涤液；有强氧化作用 冲洗：“注满水-倒空”10次以上或注入“2/3
的水振荡冲洗”10次以上→蒸馏水冲洗2～3次
explant. No roots or callus.
5、培养材料的支持物
琼脂 用量：6—10g／L； 优点：操作简便，通气较好，便于观察； 缺点：含杂质，养分扩散慢，有毒物质聚集；
其他 有玻璃纤维、滤纸桥、海绵、卡拉胶等。
6、活性炭(active carbon)
用量：0.5—l0g／L。 作用：吸附 应用：
Poor shoot development and no roots
NAA reduced to 0.1 mg. l-1
Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation
NAA increased to 5.0 mg. l-1
4、培养皿 规格：9、12cm直径； 适于：游离细胞、 原生质体、花粉等的静置培养、 看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等。 5、果酱瓶 规格：200ml罐头瓶，加盖半透明的塑料盖； 特点：成本较低，操作方便，也减少了培养材料的
损伤；缺点是易引起污染。
6、瓶口封塞
要求：要具有一定的通气性和密闭性， 以防止培养基干燥和杂菌污染。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of
Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus
No MS salts
No sign of regeneration from explant
at all.
肌醇：使用浓度一般为100mg／L 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收
利用，常用甘氨酸。
4、植物生长调节物质
1）生长素类： 作用：诱导愈伤组织形成、根的分化和促进细
胞分裂、伸长生长。 IAA(indo acetic acid吲哚乙酸) NAA(naphthalene acetic acid萘乙酸) IBA(indolebutyri acid吲哚丁酸) 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用的强弱顺序：2,4-D > NAA > IBA >IAA
6-BA reduced to 0.1 mg. l-1
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA
2）微量元素：浓度小于0.5mmol／L的元素
Fe B Mn Cu Mo Co
3、有机物质
碳源和能源：蔗糖、葡萄糖和果糖。蔗糖：2%— 5%，常用3%，可调节渗透压；
维生素：VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸），生物素、叶酸、 VB12等。一般用量为0.1—10mg／L；
沿用，多数以发明人的名字来命名
二、培养基的成分
水 无机营养 有机物质 植物生长调节剂 培养材料的支持物 活性炭 抗生素类 天然复合物
1、水
2、无机营养（无机盐类） 1）大量元素：浓度大于0.5mmol／L N：NO3-N和NH4-N两种形式供应，如KNO3、
NH4NO3 P：KH2P04或NaH2P04 K：Kcl、KN03 Ca、Mg、S：MgSO4·7H20、CaCl2
2、铬酸液的配制
① 配制步骤： 选用合适容器； 按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后
将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中； 缓缓加入浓硫酸，铬酸洗涤液（弱液）：重铬酸钾50g+蒸馏水 1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。
饱和铬酸洗涤液（中液）：用重铬酸钾50g加 入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加 入浓硫酸875ml。
2）细胞分裂素类 ( cytokinin )
作用①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长;②促 进细胞分裂与扩大;③抑制根的分化
6-BA(6-苄基氨基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) 作用的强弱顺序：Zt>6-BA>Kt
3）GA(gibberellic acid赤霉素)
作用：促进幼苗茎的伸长生长，打破休眠， 促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。
激素配比模式
生长素/细胞分裂素 高：有利于根的形成 适中：有利于愈伤组织形成或根芽分化 低：有利于芽的形成
No 6-BA
Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
强铬酸洗涤液（强液）：与浓硫酸加热的同时 缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到 饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g
第二章 培养基及其配制
第一节 培养基的成分 第二节 培养基的配制 第三节 常用培养基的配方
第一节 培养基的成分
一、培养基的产生及名称 1、培养基的产生 1680年和1681年：Sacks和Knop 1943年：white 1962年：Murashige和Skoog （MS） 2、培养基的名称
常用： 1） 棉塞； 2） 聚丙烯塑料薄膜； 3） 也可采用专用的封口膜
二、玻璃器皿的清洗
1、玻璃器皿的清洗步骤 浸泡：目的是软化和溶解附着物，新 5%盐酸 刷洗：放在洗涤剂中反复刷洗 浸酸： 酸液又称洗涤液；有强氧化作用 冲洗：“注满水-倒空”10次以上或注入“2/3
的水振荡冲洗”10次以上→蒸馏水冲洗2～3次
explant. No roots or callus.
5、培养材料的支持物
琼脂 用量：6—10g／L； 优点：操作简便，通气较好，便于观察； 缺点：含杂质，养分扩散慢，有毒物质聚集；
其他 有玻璃纤维、滤纸桥、海绵、卡拉胶等。
6、活性炭(active carbon)
用量：0.5—l0g／L。 作用：吸附 应用：
Poor shoot development and no roots
NAA reduced to 0.1 mg. l-1
Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation
NAA increased to 5.0 mg. l-1