实验一游离棉酚的测定

食用植物油中痕量游离棉酚的超高效液相色谱-串联质谱测定王雅朦郭咪咪魏征段章群张东李晓宁薛雅琳(国家粮食局科学研究院, 北京100037)摘要：本实验建立了超高效液相色谱-三重四级杆-串联质谱法（UPLC-ESI-MS/MS）测定食用植物油中游离棉酚的含量，实验以乙醇为提取溶剂提取食用植物油中的游离棉酚，采用Waters AQUITY UPLC BEH C18色谱柱进行分离，以乙腈-0.1%的甲酸水溶液作为流动相，梯度洗脱。

在电喷雾离子源（ESI）负离子模式和多反应通道监测（MRM）模式下进行定量分析。

结果表明：棉酚的质量浓度在0.005~5.0 μg/mL范围内线性关系良好，方法检出限LOD (S/N≥3)为10 μg/kg，定量限LOQ (S/N≥10)为50 μg/kg。

以0.25、2.5、25 μg/g三个不同棉酚浓度进行加标后测得平均加标回收率为80.3%~112.6%，相对标准偏差小于11%，精密度0.42%。

该方法灵敏度高，测定结果准确，回收率稳定，适用于确证检测食用植物油中的棉酚残留。

关键词：食用植物油棉酚超高效液相色谱-串联质谱中图分类号：O657.63; TS207.3 文献标志码：A 文章编号：Determination of free gossypol in edible vegetable oil by ultra performance liquidchromatography with tandem mass spectrometryWang Yameng, Guo Mimi, Wei Zheng, Duan Zhangqun, Zhang Dong, Li Xiaoning, Xue Yalin,（Academy of State Administration of Grain, Beijing 100037）Abstract:A method was developed for the determination of free gossypol in edible vegetable oil by ultra performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (UPLC-ESI- MS/MS). In this method, ethanol was used as the extraction solvent to extract free gossypol from edible vegetable. The separation was carried out on a Waters AQUITY UPLC BEH C18 column with gradient elution. Acetonitrile and water (containing 0.1% (v/v) formic acid) were used as the mobile phase. The detection was achieved using electrospray ionization in negative ion (ESI-) mode and multi reaction channel monitoring (MRM) mode for quantification of the analytes. A good linearity for gossypol in the range of 0.005~5.0 μg/mL under the optimal conditions. The limit of detection (LOD, S/N≥3) was 10 μg/kg and the limit of quantification (LOQ, S/N≥10) was 50 μg/kg. The average recoveries of gossypol at three spiked levels of 0.25、2.5、25 μg/g were 80.3%~112.6% with the relative standard deviation less than 11.0%, and the degree of precision was 0.42%. With the advantages of easy and fast operation, higher recoveries, accurate results and good precision, the method was suitable for the confirmation and quantification of gossypol residue in edible vegetable oil.Key words:edible vegetable oil, gossypol, ultra performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (UPLC-ESI- MS/MS)1棉酚主要存在于锦葵植物棉花的种子、根皮及茎秆等色腺体中的一种黄色有毒多酚物质[1,2]。

棉酚的测定（国标）1 范围本标准规定了用液相色谱法测定食品中游离棉酚的含量。

本标准适用于植物油或以棉籽饼为原料的其他食品中游离棉酚的测定，最低检出量为5 ng，最低检出浓度2.5 mg/kg。

2 原理水溶性样品中的游离棉酚经无水乙醚提取，浓缩至干，再加入乙醇溶解，用C18柱将棉酚与样品中杂质分开，在235 nm处测定。

根据色谱峰的保留时间定性，外标法峰高定量。

3 试剂3.1 磷酸。

3.2 无水乙醇。

3.3 无水乙醚。

3..4 普通氮气。

3.5 甲醇：经0.5μm滤膜过滤。

3.6 棉酚标准储备液：精密称取0.1000 g棉酚纯品，用无水乙醚溶解，并定容至100 mL，此溶液相当于每毫升含棉酚1.0 mg。

3.7 棉酚应用液：取1 mg/mL棉酚储备液5.0 mL于100 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，此溶液相当于每毫升含棉酚50 μg。

3.8 磷酸水：取300 mL水，加6.0 mL磷酸，混匀，经0.5μm滤膜过滤。

4 仪器4.1 液相色谱仪（带紫外检测器）。

4.2 KD-浓缩仪。

4.3 离心机：3000 r/min。

4.4 10μL微量注射器（250 mm-ø6mm）不锈钢色谱柱。

4.5 Micropark-C185 分析步骤5.1 色谱条件：柱温40℃；流动相，甲醇﹕磷酸水=85﹕15；测定波长235 nm；流量1.0 mL/min；纸速0.25 mm/min,衰减：1；灵敏度：0.02 AUFS；进样10μL。

5．2 试料制备水溶性样品；吸取样品10.0 mL于离心试管中，加入10 mL无水乙醚，振摇2 min，静置5 min，取上层乙醚层5 mL，用氮气吹干，用1.0 mL无水乙醇定容，过滤膜，即为试料，取10μL进液相色谱仪。

5．3 测定5.3.1 标准曲线制备：准确吸取1.00，2.00，5.00，8.00 mL的50μg/mL的棉酚标准液于10.0 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，此溶液相应于5，10，25，40μg/mL 的标准系列，进样10μL，作标准系列，根据响应值绘制标准曲线。

迪信泰检测平台
游离棉酚（FG）检测
游离棉酚（Free Gossypol）是指在棉仁组织中呈游离状态存在的棉酚，棉酚是存
在于锦葵科植物棉花的根、茎和种子等色腺体中的一种黄色有毒多酚类化合物，在棉花的进化及抵抗害虫方面起着重要作用。

游离棉酚检测研究大多集中在对棉籽仁、棉粕及棉籽油的检测，对生物样品的检测报道较少，分光光度法和高效液相色谱法(HPLC)是游离棉酚检测的两种常用方法。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)法，结合蒸发光散射检测器(ELSD)或DAD
检测器，可高效、精准的检测样本中游离棉酚的含量变化。

此外，迪信泰检测平台还提供其他多种植物多酚检测服务，以满足您的不同需求。

HPLC测定游离棉酚样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关质谱参数（中英文）。

3. 质谱图片。

4. 原始数据。

5. 游离棉酚含量信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

游离苯酚含量的测定（废水中游离苯酚含量）溴化法1.试验仪器烧杯（150mL），量筒（100mL），天平（0.0001g），容量瓶（250mL），碘量瓶（250mL）。

2.试剂盐酸溶液：试剂；溴酸钾，溴化钾，碘化钾：20%，可溶性淀粉指示剂：1%；溴标准溶液：0.1020mol/L，3g溴酸钾和25g溴化钾溶于1000 mL水中摇匀。

硫代硫酸钠标准溶液：0.1020mol/L。

3.测定步骤a.于碘量瓶中，加入溴标准溶液50 mL左右，加入0.8—1.1g（0.0001 g）试样，迅速加入5 mL盐酸溶液；b.加盖密封加蒸馏水封口，静置15min左右，再迅速加20%碘化钾溶液10 mL，加盖密封加蒸馏水封口，静置10min左右；c.用硫代硫酸钠滴定到淡黄色，加淀粉指示剂数滴，继续用硫代硫酸钠滴定到蓝色消失即为终点。

4. 苯酚含量按式（1）计算：X（%）=[(V1C1-V2C2)×0.01569]/[m(25/250)]式中V1---加入溴标准溶液毫升数，mLC1---加入溴标准溶液的摩尔浓度，mol/LV2---滴定用去硫代硫酸钠毫升数，mLC2---滴定用去硫代硫酸钠摩尔浓度，mol/Lm---试样质量，g0.01569---每毫摩尔滴定溶液所相当苯酚的质量，g四 2、苯酚含量的测定(参考方法)1. 用容量法测定（非标准规定方法）。

2. 原理在酸性溶液中用过量的KBrO 3—KBr 混合液进行溴化，生成三溴苯酚，过量的溴与碘化钾生成碘，再用标准硫代硫酸钠溶液滴定，用淀粉作指示剂。

3. 试剂与仪器盐酸；碘化钾；溴溶液：c （1/2Br 2）=0.1mol/L ；淀粉指示剂，1%溶液； 硫代硫酸钠标准溶液c (Na 2S 2O 3)=0.1 mol/L 。

测定仪器为实验室常用仪器。

4. 分析步骤称取样品0.5g （精确至0.001g ）小心移入1000mL 的容量瓶中（瓶内应先装有300mL 左右蒸馏水）。

液相色谱-串联质谱法测定饲料中的游离棉酚张文华;谢文;陈树兵;黄超群;沈立【摘要】建立了高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)定量测定饲料中棉酚残留的分析方法.待测物经丙酮-水(7∶3)混合溶液振荡提取,C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,3.5 μm)分离,以乙腈和0.1％甲酸为流动相进行梯度洗脱,串联质谱测定,外标法定量.方法的定量下限(S/N＞ 10)为1 mg/kg;棉酚在10～100μg/L质量浓度范围内,线性相关系数为0.993.以1、20、40 mg/kg浓度进行加标后测得平均回收率为83.8％～ 97.5％,相对标准偏差为1.3％～5.2％.该方法操作简单、回收率稳定,可用于饲料中棉酚残留的快速确证及定量分析.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2014(033)005【总页数】4页(P602-605)【关键词】饲料;棉酚;液相色谱-串联质谱法【作者】张文华;谢文;陈树兵;黄超群;沈立【作者单位】浙江出入境检验检疫局,浙江杭州310016;浙江出入境检验检疫局,浙江杭州310016;宁波出入境检验检疫局,浙江宁波315012;浙江出入境检验检疫局,浙江杭州310016;上海出入境检验检疫局,上海200135【正文语种】中文【中图分类】O657.63;O625.31棉酚(Gossypol)是锦葵科植物草棉、树棉或陆地棉成熟种子、根皮中提取的一种多元酚类物质。

棉籽饼(粕)中的游离棉酚，对动物毒性较大，动物过量摄取或长期摄取，会导致动物生长迟缓，生产性能和繁殖性能下降，甚至死亡[1]。

人们常在饲料中添加棉籽饼粕以提高蛋白质的含量，但若使用不当会造成动物的棉酚中毒，同时人类食用含有棉酚的畜产品也存在一定的安全风险。

国家对饲料中的棉酚限量有严格限制，中国饲料卫生标准(GB 13078-2001)[2]规定棉籽饼(粕)原料中棉酚的最大残留限量为1 200 mg/kg，配合饲料为60 mg/kg，对于生育动物要求的限量为20 mg/kg。

饲料中游离棉酚的测定方法一主题内容与使用范围本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法本标准适用于棉籽粉、棉籽粕和含有这些物质的配合饲料中游离棉酚的测定二原理在3-氨基-1-丙醇存在下用异丙醇与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。

三试剂和溶液3.1异丙醇3.2正己烷3.3冰乙酸3.4苯胺3.5 3-氨基-1-丙醇3.6 异丙醇与正己烷的混合溶剂：6:4（V/V）3.7 溶剂A：量取约500ml异丙醇、正己烷混合溶剂（3.6）、2ml3-氨基-1-丙醇、8ml冰乙酸和50ml水于1000ml容量瓶中，再用3.6定容至刻度四仪器4.1 分光光度计4.2 振荡器4.3 恒温水浴4.4 容量瓶：25ml4.5吸量管：1、3、10ml4.6 移液管：10、50ml4.7漏斗：直径50mm4.8 具塞三角瓶：100、250ml五试样制备采集具有代表性的样品，至少2kg，四分法缩至250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。

六步骤6.1 称取1-2g试样，（精确到0.001g），置于250ml具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管准确加入50ml溶剂A，塞紧瓶塞，放入振荡器内震荡1h，用干燥的定量滤纸过滤，过滤是在漏斗上加一层表玻璃以减少溶剂的挥发，弃去最初几滴液，收集滤液于100ml具塞三角瓶中。

6.2用吸量管吸取等量双份滤液5-10ml分别至两个25ml棕色容量瓶中a和b中，如果需要用溶剂补充至10ml。

6.3用异丙醇与正己烷的混合溶剂稀释a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。

6.4 用移液管吸取2份10ml溶剂A分别至两个25ml棕色容量瓶a0 和b中6.5用异丙醇与正己烷的混合溶剂补充a至刻度摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。

6.6 加2.0ml苯胺于容量瓶b和b中，在沸水浴上加热显色30min。

饲料中游离棉酚的测定方法1.棉酚及其含量分析概述棉酚集中于植物的种子和果实，是一种多环芳烃类的人造化学物质，是植物诱变剂的主要作用物质。

棉酚在TA和MF还有其他有害物质中占有主要地位，对人体危害最大，因此这种物质受到国家严格控制。

由于其较低的稳定性，棉酚在干燥和湿润气候中都有很强的离子活性和电离性，棉酚的含量与肥料的携带量有关，其含量的重要标志就是使用相关的检测方法去分析。

2. 棉酚的测定方法(1) 气相色谱法：气相色谱法是对棉酚进行分析的最常用的方法，在一定的棉酚比例下，可以检测出10种棉酚类物质。

(2)二溴甲苯（DBT）法：DBT法是根据棉酚和邻苯二甲酸盐Ketan的配位来测量棉酚含量的。

通过离子化室携带部分或全部棉酚物质，获得一定棉酚物质的重组浓度，可以准确测量棉酚的含量。

(3)高效液相色谱-质谱联用：通过高效液相色谱（HPLC）方法与质谱技术，可以实现精确地测量棉酚含量。

与以上两种方法相比，其灵敏度要高得多，特别是对复杂清洁数据分析上具有重要意义。

3.棉酚在饲料中的测定方法(1)采用气相色谱法进行测定：在无溶剂中，可使用气相色谱仪，以气相色谱法对棉酚在饲料中进行分析。

专用气相色谱仪可以实现归一化成分检测，可以测量10种棉酚类物质的含量，具备准确性、重现性强等特点。

(2)采用二溴甲苯（DBT）法进行测定：采用二溴甲苯（DBT）法是一种非常灵敏的检测方法，可以实现棉酚在饲料中游离物的快速检测，而且结果也准确可靠。

(3)采用高效液相色谱-质谱联用进行测定：高效液相色谱法结合质谱联用，可实现快速准确的棉酚在饲料中游离物的检测，其灵敏度比以前的气相色谱和二溴甲苯（DBT）法高出一个数量级，可以用于精确检测棉酚在饲料中的游离物量。

4.结论棉酚是植物诱变剂的主要作用物质，其含量的重要标志就是使用相关的检测方法去分析。

采用气相色谱仪、二溴甲苯（DBT）法和高效液相色谱-质谱联用等技术，可以实现棉酚在饲料中游离物的快速灵敏准确地检测，对于棉酚在饲料中游离物检测和管理具有重要意义。

高效液相色谱法测定食用植物油中的游离棉酚张庆珍【摘要】研究采用高效液相色谱法测定食用植物油中游离棉酚的方法,最佳色谱条件：色谱柱C18柱,流动相为甲醇-磷酸溶液（1%）=84＋16,波长240 nm,流速为1.0 mL/min,柱温30℃。

曲线方程y=3.1033×10-5x,相关系数r=0.999871,线性关系良好。

检出限为2.5 mg/kg,回收率为98.0%～100.2%。

该法简便,快速,准确性高,重现性好。

%The method of determination that free gossypol in edible vegetable oil was established by using HPLC.The best chromatographic conditions were as follows： the column of chromatogram C18,mobile phase methanol-phosphate buffer（1%）=84 ＋16,U V-240 nm detector,flow rate 1.0 mL/min,and column tempera ture 30 ℃.Linear regression equation y=3.1033×10-5x,the correlation coefficientr=0.999871,and linear relationship was satisfied.The detection limit was 2.5 mg/kg,and recovery was 98.0~100.2%.The method was simple,fast,high accuracy and good reproducibility.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2012(040)015【总页数】2页(P159-160)【关键词】高效液相;植物油;游离棉酚【作者】张庆珍【作者单位】肇庆市质量计量监督检测所,广东肇庆526060【正文语种】中文【中图分类】TS227Abstract:The method of determination that free gossypol in edible vegetable oil was established by using HPLC.The best chromatographic conditions were as follows:the column of chromatogram C18，mobile phase methanol－phosphate buffer(1%)=84+16，U V－240 nm detector，flow rate 1.0 mL/min，and column temperature 30℃.Linear regression equation y=3.1033×10－5x，the correlation coefficient r=0.999871，and linear relationship was satisfied.The detection limit was 2.5 mg/kg，and recovery was 98.0～100.2%.The method was simple，fast，high accuracy and good reproducibility.Key words:HPLC;edible oil;free gossypol游离棉酚是一种多酚类化合物，主要存在于棉籽仁中，化学性质活泼，含有活性醛基和羟基，毒性较大。

食品中游离棉酚的测定GB/T5009.37-20031、方法：紫外分光光度法2、范围：本方法适用于棉籽油3、原理：试样中游离棉酚经丙酮提取后，在378nm 有最大吸收，其吸收值与棉酚量在一定范围内成正比，与标准系列比较定量。

4、仪器：紫外分光光度计5、试剂5.1 丙酮（70%）：将350ml 丙酮加水稀释至500ml 。

5.2棉酚标准溶液：准确称取0.1000g 棉酚，置于100ml 容量瓶中，加丙酮（70%）溶解并稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于1.0g 棉酚。

5.3 棉酚标准使用液：吸取棉酚标准溶液5.0ml ，置于100ml 容量瓶中，加丙酮（70%）稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于50.0ug 棉酚。

6、分析步骤：称取1.00g 精制棉油或0.20g 粗棉油，置于100ml 具塞锥形瓶中，加入20.0ml 丙酮（70%），并加入玻璃珠3-5粒，在电动振荡器上震荡30min,然后在冰箱中放置过夜。

取此提取液之上清液，过滤。

滤液供测定用。

吸取0、0.10、0.20、0.40、0.80、1.6、2.4ml 棉酚标准使用液（相当于0、5、10、20、40、80、120ug 棉酚），分别置于10ml 具塞试管中。

各加入丙酮（70%）至10ml,混匀，静置10min 。

取试样滤液及标准液于1cm 石英比色杯中，以丙酮（70%）调节零点于378nm 波长处测吸光度，绘制标准曲线比较。

7、结果计算试样中游离棉酚的含量按下式进行计算。

21001000100021⨯⨯⨯⨯=m m X 式中：X---试样中游离棉酚的含量，单位为克每百克（g/100g ）;m1---测定用样液中游离棉酚的质量，单位为微克（ug ）;m2---试样质量，单位为克(g)。

计算结果保留三位有效数字。

饲料中游离棉酚的测定方法一主题内容与使用范围本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法本标准适用于棉籽粉、棉籽粕和含有这些物质的配合饲料中游离棉酚的测定二原理在3-氨基-1-丙醇存在下用异丙醇与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。

三试剂和溶液3.1异丙醇3.2正己烷3.3冰乙酸3.4苯胺3.5 3-氨基-1-丙醇3.6 异丙醇与正己烷的混合溶剂：6:4（V/V）3.7 溶剂A：量取约500ml异丙醇、正己烷混合溶剂（3.6）、2ml3-氨基-1-丙醇、8ml冰乙酸和50ml水于1000ml容量瓶中，再用3.6定容至刻度四仪器4.1 分光光度计4.2 振荡器4.3 恒温水浴4.4 容量瓶：25ml4.5吸量管：1、3、10ml4.6 移液管：10、50ml4.7漏斗：直径50mm4.8 具塞三角瓶：100、250ml五试样制备采集具有代表性的样品，至少2kg，四分法缩至250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。

六步骤6.1 称取1-2g试样，（精确到0.001g），置于250ml具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管准确加入50ml溶剂A，塞紧瓶塞，放入振荡器内震荡1h，用干燥的定量滤纸过滤，过滤是在漏斗上加一层表玻璃以减少溶剂的挥发，弃去最初几滴液，收集滤液于100ml具塞三角瓶中。

6.2用吸量管吸取等量双份滤液5-10ml分别至两个25ml棕色容量瓶中a和b中，如果需要用溶剂补充至10ml。

6.3用异丙醇与正己烷的混合溶剂稀释a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。

6.4 用移液管吸取2份10ml溶剂A分别至两个25ml棕色容量瓶a0 和b0中6.5用异丙醇与正己烷的混合溶剂补充a0 至刻度摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。

6.6 加2.0ml苯胺于容量瓶b和b0 中，在沸水浴上加热显色30min。

我国是产棉大国，棉花产量位居世界首位，因此，对棉籽饼粕的开发利用，无疑会对我国畜牧和食品工业起到推动作用并带来显著的经济效益和社会效益。

但由于棉籽饼粕中含有棉酚，对动物具有毒性，使其在使用上受到一定限制。

棉籽饼粕中的棉酚按其存在形式可分为游离棉酚(FC)和结合棉酚(BG)2种。

游离棉酚对心、肝、肾等实质细胞及神经、血管、生殖机能均有毒性，能与铁离子结合引起缺铁性贫血，还能造成动物的生殖机能的损害和影响维生素的吸收利用。

长期食用会造成体内大量蓄积引起中毒甚至死亡。

因此棉籽饼粕以及饲料中游离棉酚的测定显得极为重要。

目前测定游离棉酚含量的方法主要有国标法、液相高压色谱法(HPLC)等。

在国标GBl308691中，采用振荡法检测游离棉酚，虽然方法可靠，但具有一定的局限性，不适于基层单位。

因为在实际生产中由于很多饲料生产厂家缺少振荡设备，导致无法进行此项检验，加之这种操作方法烦琐、耗时，不适于大批量样品的检测。

液相高压色谱法所需仪器设备、试剂过于昂贵，以及前处理过程繁琐，加上实验技能要求高，在生产实践中应用并不广泛。

本研究将棉籽、棉籽饼和饲料分别用有机溶剂浸提4，6，8，10，12，14和16h后，采用分光光度法测定其中游离棉酚的含量，并将其结果与国标法进行比较，旨在建立一种操作简便、结果准确可靠的能广泛应用于基层单位的游离棉酚测定方法。

1 材料与方法1．1 饲料样品样品I：配合饲料1、棉籽1、棉饼1采自河南三鹿花花牛乳业有限公司郑州某奶牛养殖场；样品Ⅱ：配合饲料2、棉籽饼2、棉籽2采自洛阳某奶牛养殖场。

1．2 试剂棉酚标准品(SIGMA公司)、异丙醇(天津市化学试剂一厂)、正己烷(天津市化学试剂一厂)、冰乙酸(天津市裕胜化工有限公司)、苯胺(天津市科密欧化学试剂开发公司)、3-氨基-1-丙醇(AJohnsonMattheyCompany)、异丙醇-iE己烷混合溶剂，试验中所用试剂均为分析纯。

溶剂A：取500mL异丙醇、正己烷混合溶剂，2mL 3·氨基·l·丙醇，8 mL冰乙酸和50 mL 水，放人1 000mL容量瓶中。

第４１卷　高效液相色谱法测定食用调和油中的游离棉酚檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱殗殗殗殗谷物化学与品质分析高效液相色谱法测定食用调和油中的游离棉酚＊于加乾（宜宾市粮油质量监测站　６４４０００）摘　要　采用反相高效液相色谱法测定食用调和油中游离棉酚，流动相为甲醇∶２％的磷酸水溶液：四氢呋喃＝８８∶１０∶２，Ｃ１８（ＯＤＳ）柱分离，紫外２３５ｎｍ处测定。

相对于国标ＧＢ／Ｔ　５００９．１４８－２００３植物性食品中游离棉酚的测定缩短了分析时间。

本方法的重复性（相对标准偏差）优于５％，回收率为９４％～９８％，最低检测限度为１μｇ／ｇ。

本方法简单、易行，可用于食用调和油中游离棉酚的定性定量分析。

关键词　高效液相色谱法　食用调和油　游离棉酚 食用调和油在我国是一种日常普遍食用的油脂，棉籽油作为一种食用油常用来加入食用调和油，棉籽油含有脂溶性色素棉酚，这种物质能导致胃肠障碍，量大时引起肺出血、呼吸困难等症状。

在制油的精炼过程中这种棉酚大部分会被除去，由于其毒性较大，国家标准ＧＢ２７１６－２００５［１］规定食用油棉酚的限量标准为０．０２％，因此建立快速、高效测定食用调和油中的游离棉酚含量的方法具有重要意义。

已应用于棉酚测定的各种分析手段有：重量法、滴定法、分光光度法，由于棉酚和其它相近的色素与相同的分析试剂同样起反应，故这些方法并非特异。

色谱法，包括纸色谱、薄层色谱、气－液色谱已应用于棉酚分析上。

纸色谱和薄层色谱缺乏敏感性，而气－液色谱法需要预先转换成为棉酚的三甲基硅烷基酯衍生物。

高效液相色谱（ＨＰＬＣ）对于分析类似结构的化合物是一种高度敏感、高度选择及比较迅速的技术。

本文描述了棉酚定性定量分析的高效液相色谱方法。

该方法相对于国标ＧＢ／Ｔ　５００９．１４８－２００３植物性食品中游离棉酚的测定［２］缩短了分析时间。

１　实验部分１．１　仪器与试剂１．１．１　Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００型液相色谱仪（配紫外检测器）、超声波振荡器。

棉籽油中游离棉酚的反相高效液相色谱测定沈媛;薛雅琳;金青哲;刘睿杰;张东;朱琳【摘要】采用丙酮提取棉籽油中的游离棉酚,并利用反相高效液相色谱法测定其含量.色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(5μm,4.6 mm ×250 mm),流动相为甲醇-1％磷酸溶液(体积比85∶15),流速1.0 mL/min,检测波长236 nm,柱温25℃.所得游离棉酚的保留时间为13.3 min,平均加标回收率为97.22％～100.32％(RSD为0.62％～ 1.87％),精密度达到0.21％.该方法能简便、快速、准确地测定棉籽油中游离棉酚含量.%Acetone was used to extract free gossypol in cottonseed oil and the free gossypol was quantitatively determined by reverse phase high performance liquid chromatography ( RP - HPLC). The suitable determination conditions were as follows; Agilent ZORBAX SB - C18 column (5 (Jim, 4. 6 mm x 250 mm) , mobile phase methanol-1% phosphoric acid solution (volume ratio 85 : 15) , flow rate 1.0 mL/ min, detecting wavelength 236 nm, column temperature 25 °C. The retention time of free gossypol was 13. 3 min. The average recovery rate of free gossypol was 97. 22% - 100. 32% (RSD0. 62% -1. 87% ) , and the degree of precision was 0. 21% . The established method could determine the free gossypol content in cottonseed oil with the merits of simplicity, quickness and accuracy.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2012(037)010【总页数】4页(P71-74)【关键词】棉籽油;游离棉酚;反相高效液相色谱;测定【作者】沈媛;薛雅琳;金青哲;刘睿杰;张东;朱琳【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡 214122;国家粮食局科学研究院,北京100037;国家粮食局科学研究院,北京 100037;江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡 214122;国家粮食局科学研究院,北京100037;国家粮食局科学研究院,北京 100037【正文语种】中文【中图分类】TS225.1;TS207.5棉酚又称棉毒素或棉子醇，是棉属植物体内形成的一种黄色多酚物质。

高效液相色谱法测定牛肉中的游离棉酚作者：庞昌信来源：《现代食品》 2019年第5期◎ 庞昌信(广州市从化质量技术监督检测所,广东?广州?510925)Pang Changxin(Guangzhou Conghua Quality Technology Supervision and Inspection Institute, Guangzhou?510925, China)摘?要:建立高效液相色谱法测定牛肉中残留的游离棉酚的检验方法。

在低温条件下,以丙酮为提取剂,超声提取牛肉样品中的游离棉酚,以甲醇-2%磷酸(85∶15)为流动相,外标法测定。

通过试验优化其工作条件,确定本方法的检出限、线性、精密度、稳定性以及准确度,均有满意的结果。

本方法是一种操作相对简单的定量测定牛肉中游离棉酚残留量的方法。

关键词:高效液相色谱;牛肉;游离棉酚Abstract:A method for the determination of free gossypol in beef by high performance liquid chromatography was established. The free sample of gossypol was extracted from the beef sample under low temperature conditions with acetone as extractant, and the mobile phase was methanol-2% phosphoric acid (85∶15), whic h was determined by external standard method. Through the experiment to optimize the working conditions, the detection limit, linearity, precision, stability and accuracy of the method were determined, and satisfactory results were obtained. The method is a relatively simple method for quantitatively determining the amount of free gossypol in beef.Key words:High performance liquid chromatography; Beef; Free gossypol中图分类号:S816.17棉籽饼粗蛋白质含量高,常用来作为喂养禽畜的饲料,是喂养牛常用的植物性蛋白质饲料之一。