ESBLs及Ampc酶

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产AmpC酶和ESBLs阴沟肠杆菌的临床分布及耐药性分析

ｔｒｎｕｃｐｉｉｔｅｔＥＳＩＳｗｅｅｃｎｉｍｅｙＮＣＣｏｂｅｄｓｓａ，ａｄｔｒｅｄｍｅｅｉａｄｓｓｅｔｂｌｙｔｓ．ａｉＢｒｏｆｒｄｂＬＳｄｕｌｉｃａｓｙｎｈｅ－ｉｎ
２０．ＶＩ０７ＴＥＫ３ｕｔｍａｉｉｒｉｌａｌｔｃｌｓｓｅｗａｐｐｉｄｔｅｆｍｉｄｅｔｆｃｔｏｆｂｃ２ａｏｔｃｍｃｏｂａｎａｙｉａｙｔｍｓａｌｅＯｐｒｏｒｎｇｉｎｉｉａｉｎｏａ
ｓｏｎｌｔｓｓｕｅＯｄｅｅｔＡｍｐＲｅｕｌｓＡｏａ３ｓｒｉｓｏｔｒａｔｒｃｏａａｅｅｉｏｌ— ｉａｅｔｗａｓｄｔｔｃＣ．ｓｔｔｔｌｏｆ６ｔａｎｆＥｎｅｏｂｃｅｌｃｅｗｒｓａ
产ＥＢｓ９５的菌株同时产生ＡｍｐＳＬ；．Ｃ酶和ＥＢｓ３．的菌株均不产Ａｍｐ酶和ＥＢ。产酶ＳＬ；１８ＣＳＩｓ株的耐药性明显高于非产酶株，药现象在同时产生ＡＣ酶和ＥＢｓ耐ｍｐＳＬ的菌株中尤为严重。结论本地区阴沟肠杆菌产Ａｍｐ酶和ＥＢｓ的流行处于一个相对较高的水平。产ＡｍＣ酶及ＥＢＣＳＬｐＳＩＳ的
国际检验医学杂志２００９年１月第３Ｏ卷第ｌ期
ＩｔａｄＪｎａｙ２０，０．０Ｎ．ｎＪＬｂＭｅ，ｕｒ０９Ｖ１，ｏ１ａ３

铜绿假单胞菌产AmpC酶和ESBLs的检测和耐药性分析

ｎｓＣＥＪｎｇｏ，Ｉｍ－ｉ（ｅｒｅｏｔＨＮｉ－ｕＬｏｍｎＤｐｔｎｏｃｂｌｙＧａｇ历ＭｅｉｌｏｅｅＺａｎ２０３Ｃｉ）￣ａＣｇ．ａｍｔｆＭｉｏｉｏ，ｕｎｒｏｇｄａＣｌｇ，ｈｎｇ５４２，ｈａｃｌｎＡｓａｔＯｂｅｔｅＴｖｓｇｔｔｒｖｌｃｆｍｃ／１ｔｓｎｘｎｅ－ｅｔ￣ｌｔａｅｓｕｏｏａｂｔｃ：ｊｃｉｏｉｅｔａｅｐｅａｎｅｏＡｐ３ａａｅａｄｅｔｄｄｓｃｍａａｓｓｉＰｅｄｍｎｓｒｖｎｉｅｈｅ－ｃｍａｓｅｐｒｃｍｎ
ｍｅｏｃｏｄｎｏｒｃｍｍｅｄｔｎｏｈｌｉａｄＬｂｒｔｒｔｎａｄｎｔｕｅＡｍｏｉｅｈｅ－ｍｅｓｎｌｅ Ⅱ ｃｍｅｏｔｄａｃｒｉｇｔｅｏｈｎａｉｆｔｅＣｉｃｌａａｏａｙＳａｄｒｓＩｓｔｔ．ｄｆｄｔｒｅｄｎｉａｘａｔｔｄｏｎｎｏｉｉｉｏｈ
产ＥＢ．和高产ＡＣ酶的铜绿假单胞菌在临床分离菌株中阳性率较高，ＳＩｓｍｐ产酶
度耐药，大多数抗生素敏感。结论对
菌株对大多数抗生素的耐药性明显高于非产酶菌株。关键词：铜绿假单胞菌；三维试验；超广谱内酰胺酶（ＳＬ）ＡｐＥＢｓ；ｍＣ酶
ＲｅｕｔＡｎ０ｔｉｓｏＰｅｄｍｏａｅｕｉｏａ１４％ｐｏｕｅｎｙＡｐ－ｅａｓｅ７％ｐｏｕｅｎｙＥＢｓ１ｓｌｓｍｏｇ１６ｓａｎｓｕｏｎａｒｇｎｓ，７．ｒｆｓｒｄｃｄｏｌＣ１１ｔｍａｓｍ３ａ８．ｒｄｃｄｏｌＳＬ０．

大肠埃希氏菌产ESBLs和AmpC酶的检测

出率为６０％。结论．３
笔者所在医院大肠埃希氏菌主要产ＥＢｓ，ＳＬ酶其次是ＡｐｍＣ酶，酶菌株临床经验用药应首产
选碳青霉烯类，其次是Ｂ一内酰胺类抗菌素＋酶抑制剂、头霉素类，及其它敏感抗菌素。
【关键词】大肠埃希氏菌；超广谱ｐ一内酰胺酶（ＳＬ）头孢菌素酶（ＭＣＥＢｓ；ＡＰ）
１５例，列腺液６例，汁７例，髓１例。前胆骨１２细菌鉴定．进行鉴定。１２１ＥＢ．．ＳＬ确证实验以大肠埃希氏菌（ＴＣ５２）肺ＡＣ２９２、采用法国梅里埃公司ＶＫＩＥ一２细菌分析仪
菌环直径 ≥５ｍ即判断为产超广谱Ｂ一内酰胺酶。ｍ，
１２２ＡＣ酶表型筛选．．ｍｐ
行药敏试验，进行表型筛选。判断标准按照ＮＣＳ推荐的并ＣＬ
１１菌株来源．
３５株大肠埃希氏菌菌来自２０６０６年１月～
２００８年１２月笔者所在医院分离的阳性标本，中痰液１０其３例，气管刷取物５例，尿液９，４例血液１，７例胸水２例，腹水２例，脑脊液１，例分泌物７２例，引流物８例，穿刺液５例，脓液
埃希氏菌中有９８株单产ＥＢｓ检出率２．％，ＳＬ，６８６株单产ＡｐｍＣ酶，检出率１６，２株同时产ＥＢｓ和ＡＣ酶，．％２ＳＬｍｐ占

肠杆菌科细菌产AmpC酶、ESBLs和碳青霉烯酶的状况及检测分析

类诱持续高产酶和持续低产酶。其中诱导高产
酶通常由染色体编码，具有很强的可诱导性，即产酶株在不接触Ｂ内酰胺抗生素时，只产生少量酶，如有诱导作用的抗生素存在，可
一
使产量显著上升，因而这种酶又称诱导酶。ｍＣ酶可引起革兰阴性Ａｐ杆菌对头孢菌素及单环类、头霉烯类（头孢西丁）内胺酰抗生素耐药。１２头孢菌素酶（ｐ．ＡｍＣ酶）Ｉ临床实验室检测的现状检测不同类型的
ＡＣ酶或检测产不同类型ＡＣ酶的菌株，ｍｐｍｐ其方法也有所不同。目前已陆续报道的多种检测有：孢西丁敏感试验、头三维试验、ｍｐＡＣ
群中的第３组Ｉ１ａ。在肠杆菌科细菌中的碳青霉烯酶主要是Ａ类酶２（Ｐ，ＭＥＩ，，Ｅ）ＫＣＳ，ＮＭＣＧＳ，ＭＩＢ类酶（ＭＰＶＩＮＭ）Ｉ，Ｍ，Ｄ，Ｄ类酶（ＸＡ）Ｏ。碳青霉烯酶编码基因既可以定位在质粒，整合子等呵转移的基因元件
确诊试验。
３碳青霉烯酶
３１青霉素类抗生素和头孢菌素类抗生素耐约性１．在３益严重的情况下，碳青霉烯类药物一度被认为是最具有抗菌活性和对ＥＢＳＬ酶、
ＡｐｍＣ酶稳定的Ｂ内酰胺类抗菌药物。一但是随着碳青霉烯类抗生素的大量使用，耐药菌株的出现也越来越多。这些菌株的出现常使抗感染治疗陷入无药可用的境地，者死亡率很高。临床上对于碳青患
上，通过质粒或转座子在不菌种间传播，也可以由染色体介导。染色体介导较少导致菌属间传播。
酶表型筛选试验、氟氯西林（ｃ双抑制剂扩散协同试验、电聚焦Ｆ）ｃ等及氟氯西林抑制试验等ｌ＂７ｒ。除改良的三维试验较为经典外，其他的检测方法还不成熟。。头孢西丁敏感试验因操作简便，可作为临床微生物实验室检测ＡｍＣ酶的初步筛选方法。ＡｐｐｍＣ酶酶表型筛选试验和氟氯西林双纸片扩散协同实验均利用纸片扩散法对产ＡＣ酶ｍｐ的菌株进行检测。三维试验和等电聚焦及氟氯西林抑制试验均是检测细菌胞体内ＡｐｍＣ酶的活性，不存在抗生素的诱导作用，可用来检测持续高产ＡｐｍＣ酶。三维实验是目前公认的检测质粒Ａｐ酶或ｍＣ（却阻遏）持续高产ＡＣ酶酶的经典方法。ｍｐ

大肠埃希菌质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及耐药性研究的开题报告

大肠埃希菌质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及耐药性研究的开题报告题目：大肠埃希菌质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及耐药性研究研究背景与意义：大肠杆菌是人和动物肠道中的常见菌群，也是医院及社区中最常见的致病菌之一，其感染可引发泌尿系统、胃肠道、呼吸道、软组织等多种感染病。

然而，随着抗生素的广泛应用及滥用，大肠杆菌对抗生素的耐药性越来越严重，其中质粒AmpC酶和ESBLs的产生是造成其耐药性快速蔓延和治疗的难点之一。

因此，对大肠杆菌质粒AmpC酶和ESBLs 的基因型及其耐药性的研究，对于控制大肠杆菌的传播及其感染具有重要的意义。

研究内容与目的：本研究旨在分离临床大肠杆菌中的质粒AmpC酶和ESBLs阳性株，并对其进行药敏试验，比较不同基因型的耐药表型特点。

同时，对质粒AmpC酶和ESBLs的基因型进行PCR扩增及测序，分析其基因类型、序列差异及功能特征。

通过这些研究，探究大肠杆菌质粒AmpC酶和ESBLs基因型及其耐药性特征对于治疗和预防大肠杆菌感染的重要性。

研究方法：1. 分离临床大肠杆菌中的质粒AmpC酶和ESBLs阳性株，并进行药敏试验。

2. 分别利用PCR扩增、测序和比对分析，得到质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及序列。

3. 利用构建重组表达载体等方法，验证质粒AmpC酶和ESBLs的序列特点及其与耐药性之间的联系。

研究进度及安排：1. 完成临床样品的采集及初步病原体分离鉴定（2个月）。

2. 进行药敏试验及筛选质粒AmpC酶和ESBLs阳性株（3个月）。

3. 利用PCR扩增、测序和比对分析，得到质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及序列（4个月）。

4. 利用构建重组表达载体等方法，验证质粒AmpC酶和ESBLs的序列特点及其与耐药性之间的联系（5个月）。

5. 结果分析及撰写论文（2个月）。

预期结果及意义：研究结果将为控制大肠杆菌的耐药性提供科学依据，为制定相应的感染预防策略提供重要参考。

肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的检测及其质粒分析

ｍｅｈｄ；ＥＢＬｒｔｄｅｙｄｕｌｉｃｓｎｒｙａｄｃｎｉｍａｏｙｔｓｓｂｓｄｏｈｔｎｌｎｉｔｅｆｒｔｏＳｓｗｅｅｓｕｉｄｂｏｂｅｄｓｙｅｇｎｏｆｒｔｒｅｔａｅｎｔｅＮａｉａｏＣｏｍａｔｅｏ
ｈｒＵｎｖｒｉｙ，Ｗｕａ３０２，Ｃｎａｉｅｓｔｔｈｎ４０７ｈｉａ）
Ｅｂｔｅ］ＯｊｃｉＴｖｓｇｔｅｐｅａｎｅｏｘｅｄｄｓｅｔｕ￣ｌｔｍａｅＥＢｓｎＡｓａｔｒｂｅｔｅｏｉｅｔａｅｔｒｖｌｃｆｔｎｅ—ｐｃｒｍａａｓｓ（ＳＬ）ａｄＡｍｐ－ｃｖｎｉｈｅｅｃＣＢｌ — ａ
ＤｅｅｔｏｆｅｔｎｄｓｃｒｍｌｃａａｅｎｄＡｍｐｔｃｉｎｏｘｅｄｅ — ｐｅｔｕａｔｍｓｓａＣｌｃａａｅｏａｔｍｓｓｐｒ —
ｄｃｄｂｌｂｉｌａｐｎｅｍｏａｅａｄｐｌｓｉｎａｙｉｕｅｙＫｅｓｅｌｕｎｉｎａｍｄａｌｓｓ
维普资讯
国感染控制杂志２０年９０７月第６卷箜
』！
！！！
业
・３９・２
．
实验研究．
肺炎克雷伯菌产ＥＢｓ和ＡｍｐＳＬＣ酶的检测及其质粒分析
张振鲍连生杨劳荣郑义，，，
况及质粒型耐药基因。方法
法进行最低抑菌浓度（Ｃ）ＭＩ测定；以美国临床实验室标准化委员会（ＣＳ推荐的双纸片协同试验和确证试验检ＮＣＬ）测ＥＢｓ酶提取物三维试验检测ＡｍｐＳＬ；Ｃ酶；质粒接合和消除试验检测耐药基因。结果菌检出率为７．）（７３）产ＡＣ酶的肺炎克雷伯菌检出率为１．６（／８；中同时产ＥＢｓ和ＡＣ１（２／８；ｍｐ５３１５３）其ＳＬｍｐ酶的肺炎克雷伯菌检出率为５２（／８。产酶株对第三代头孢菌素、基糖苷类、．６２３）氨氟喹诺酮类耐药率均较高，对亚胺培南、厄他培南等碳青霉烯类耐药率最低。通过质粒接合和消除试验，Ｏ（／Ｏ产ＥＢｓ４４１）ＳＬ的肺炎克雷伯菌和２】（／）Ａｍｐ（１５产Ｃ酶的肺炎克雷伯菌检测到传播耐药的质粒。结论肺炎克雷伯菌产ＥＢ和ＡｍｐＳＩＳＣ酶是其对多种抗菌药物耐药的主要原因，耐药扩散与细菌质粒的水平传播有关，其对这些产酶株的监测和阻止其传播是控制肺炎克雷伯菌感染的重要措施。［关键词］超广谱内酰胺酶；ＡｍｐＣ酶；微生物敏感性试验；质粒［文献标识码］Ａ［文章编号］１７ —９３（０７０ —０２ —０６１６８２０）５３９４［中图分类号］Ｒ７．９３８９６

呼吸道标本中大肠埃希菌AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析

检出５株单产ＡｍｐＣ酶、８株单产ＥＢｓ８株同时产Ａｍｐ６ＳＬ、Ｃ酶＋ＥＢｓ检出率分别为１８、４３、．。ＡｍｐＳＬ，．２．２３Ｃ酶和ＥＢｓＳＬ总检出率分别为３１和２．。．６６２２２０株大肠埃希菌耐药结果，表１．８见。表１
Ｏ
Ｏ
０
加Ｏ
Ｏ
０
敝
０
Ｏ
１１１菌株来源．．
实验菌株为２０年１至２００６月０８年４月本
阿莫西林／拉维酸克哌拉西林／唑巴坦三
头孢唑啉
院临床微生物室分离的大肠埃希菌２０株。质控菌株为大肠８埃希菌（ＴＣ２９２，肺炎克雷伯菌（Ｃ７０ｏ）阴沟肠ＡＣ５２）ＡＴＣ０６３，
维普资讯
重庆医学２０年９月第３０８７卷第１期８
２０８７
・
经验交流・
呼吸道标本中大肠埃希菌ＡｍｐＣ酶和ＥＢｓＳＬ的检测及耐药性分析
张建辉（四川省绵阳中心医院检验科６１０）２００
抗
．、
色体介导的ＡＣ内酰胺酶引起。大肠埃希菌是临床感染ｍｐ的常见病原菌，用改良酶提取物三维实验法检测大肠埃希菌采
Ａｍｐ酶和ＥＢｓ并对其耐药性进行分析，示其主要耐药ＣＳＬ，揭机制和产酶情况，导临床合理用药。指

多重耐药铜绿假单胞菌ESBLs和AmpC酶检测与分析

益突出闭，其耐药性日趋严重，Ｉ治疗带来极大给临床
困难本研究对我院２００５年１月２００６年１２月各
种临床标本中筛选出的６０株多重耐药铜绿假单胞菌的ＥＢｓ和ＡＣ酶进行检测与分析．ＳＬｍｐ以探讨其耐药机制．临床治疗及控制医院感染提供依据。为
附表
６ｏ株多重耐药铜绿假单胞菌三维试验结果
３讨论
作者单位：２００１浙江省温州第二医院；、州中心医３５０、２湖
院
多重耐药铜绿假单胞菌一直是临床抗感染治
疗的重点和难点．特别是近年来不断出现对所有抗
１培养基与试剂ＭＨ培养基干粉购自杭州天．２
液＋ｌｍｌ４ｌｍｏＬ克拉维酸＋ｌｍｌｘ２／４ｌｍｏＬ氯唑西林．ｘ２／
３ｃ培养过夜．平板上出现沿槽周围生长指向纸片５ｃ的矢状菌苔．即表明该酶能水解亚胺培南或头孢噻
的中心分别贴上１１亚胺培南和３ｌ０ｘｇ０ｇ头孢噻肟．ｘ距纸片边缘５ｎｒｍ处由里向外用无菌刀片均匀切割４个１ｍ宽、５ｍ长的槽，于槽内分别加４ｌ酶ｍ１ｍ０ｘｌ
生素、免疫抑制剂、肿瘤化疗等药物的广泛使用以及各种侵入性操作的增多．菌引起的医院感染日该

三维试验检测革兰阴性杆菌ESBLs及AmpC酶

近年来，随着第３代头孢菌素在临床的大量使用，产耐药酶的革兰阴性杆菌日渐增多，中超其广谱Ｂ内酰胺酶（ＳＬ）高产染色体头孢菌素一ＥＢｓ、
酶（ｍＣ）常见，临床治疗带来极大困难。Ａｐ最给为协助临床选用高效抗生素，尽早、确检测出产准
１０坨ＣＦＵ／ｍＬ
。
菌悬液置一０℃冷冻，０℃解冻，３２
反复５次，次＞。冻融后菌液１０／ｉ每２ｈ２００ｒｒｎａ
ＡｐｍＣ酶的最好方法之一ｌ。我们对１５株革兰ｌＪ７阴性杆菌，利用三维试验进行了产酶株的检测。
菌４０株、炎克雷伯菌２肺４株、酸克雷伯菌６产株、阴沟肠杆菌３０株、铜绿假单胞菌２２株和鲍曼
不动杆菌２２株，劳地枸橼酸菌６株、他菌２弗其５
（３一０℃）保存。３酶型测定将ＣＸ纸片贴于涂布了大肠．Ｔ埃希菌（ＴＣ２９２的ＭＨ平板中央，ＡＣ５２） — 距纸片５ｍｍ处用刀片向外切４个裂隙，分别编为１２３、、、
水解酪蛋白（Ｈ）琼脂、孢噻肟纸片Ｍ－头（Ｔ３ｇ片）头孢硝噻吩纸片（ｉｏｅｎ均ＣＸ，０／、Ｎｔｃｆ）ｒｉ
（ｍｌＬ１Ｌ，５℃过夜培养。２ｍｏ，０ｔ）３／ｘ４结果判读．平皿上若在裂隙与ＣＸ纸片Ｔ
中图分类号：４６５Ｒ４．

阴沟肠杆菌产AmpC酶和ESBLs的检测及其耐药机制研究

ｎｉｏｃｕｃｐｂｉｓｔ４ｋｎｃｍｎｎｉｃｂｌｅｔ．ｓｔｈｒ６ｔｉｒｕｉｍＣｐｌｔａｅａｔｉｉｓｓｅｔｉｔｔｔｏ１ｉｓｍｏｔｉｏｉｇｎｓＲｅｌＴｒｒｅ３ｓａｓｐｄｃｇＡｐ — ｃｍｓｓｂｔｉｌｙｅｄｏｏｆａｍｒａａｕｓｅｗｅｒｎｏｎａａ（３９）２ｔｎｒｄｃｇＥＢｓ１．％）ａｄ１ａｓｒｄｃｇｂｔｍＣａｄＥＢｓａｔａｅ（．％）１ｅｅｕ３．％，８ｓａｓｏｕｉＳＥ（５１ｒｐｉｎｎ８ｔｎｏｕｉｈＡｐｎＳＬ￣ｌａｓｓ９７．１ｒｓｌｏｒｐｉｎｏｃｍｔ１ｆ
ｃｃａｉｏｔｒｂｃｅｌａａ ’ ｌＡｍｐａｄＥＢＬｌｃａｓｓＳ／Ｘｕｌ，ＵｉｉｅｍｅｈｎｓｍｆＥｎｅｏａｔｒｃｏｃｅ’ｉｌ，ｔＣｎＳｓａｔｍａｅＵｉｄｎｒｏａｄｎｒｍｔｏｉｌＷｎｅｇＳａｄｎ６４０Ｃｉ）ＷｎｅｇＯｔｐｅｉａｄＴａａｉＨｓｔ，ｅｄｎ，ｈｎｏｇ２４０，ｈｎｈｃｕｃｐａａ
ＡｓａｔＯｊｃｖＴｖｓｇｔｔｅｅｔｅｅｔｍｐｌｔａｅ（Ｓｋ）ｎｍＣｌｔｓｓｆｎｅａｔｌ — ｂｔｃ：ｂｅｔｅｏｉｅｉｅｈｘｎｄｓｃｕａａｓｓＥＢｓａｄＡｐａａｅｔｒｉｎｔａｅｐｒｃｍｃｍａｏＥｍｂｃｒｏｅｃａ
菌株有２株，１．％；８占５１同时产ＡｐｍＣ酶和ＥＢｓＳＬ的菌株有１株，９７８占．％。药敏结果显示，８株阴沟肠杆菌对头孢１６唑林、氨苄西林、头孢西丁等抗菌药物的耐药率较高，对亚胺培南、舒普深的耐药率较低。结论耐药表型。关键词：阴沟肠杆菌；ｍＣ酶；ＳＬ；ＡｐＥＢｓ耐药性

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一、ESBLs酶
1.初步筛选试验
(使用一种以上的药物进行筛选将会提高检测的敏感性)
判读结果
头孢泊肟10μg 的抑菌圈≤17mm
头孢他啶30μg的抑菌圈≤22mm
氨曲南30μg的抑菌圈≤27mm
头孢噻肟30μg的抑菌圈≤27mm
头孢曲松30μg的抑菌圈≤25mm
提示可能有ESBLs的产生
2.表型确证试验
确证试验需要同时使用头孢噻肟和头孢他啶，单独和联合克拉维酸的复合制剂
（1）头孢他啶30μg与头孢他啶/克拉维酸30/10μg
（2）头孢噻肟30μg与头孢噻肟/克拉维酸30/10μg
2组药物中有任何一组，在加克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比，增大值≥5mm时，判定为产ESBLs（如，头孢他啶的抑菌圈＝16mm；头孢他啶/克拉维酸的抑菌圈＝21mm）
二、Ampc酶（目前还很少将其做为常规监测）
1.初筛：
（1）头孢西汀（30μg/片）与头孢西汀（30μg）/邻氯西林（200μg）。

后者比前者的抑菌圈≥5mm即疑为Ampc。

（2）5种纸片筛选：头孢吡肟、亚胺培南、头孢西汀、头孢他啶与头孢他啶/克拉维酸。

如头孢西汀≤17mm，对头孢吡肟、亚胺培南敏感即疑为产Ampc；如头孢他啶与其酶抑制剂的抑菌圈≥5mm可能产ESBLS。

2.确证试验（参考）
（1）双纸片法：待检菌株接种于M-H琼脂平板，贴上诱导剂头孢西汀纸片，在其左右10 mm 处分别贴上底物头孢他定(CAZ)和头孢噻肟(CTX)纸片，35％孵育16—18 h后，由于诱导型AmpC酶的产生，CAZ或CTX的抑菌圈在靠近诱导剂的一侧被酶抑制而缩小，出现扁平区，即底物离诱导剂远侧的抑菌圈半径减去近侧的抑菌圈半径≥4 mm为阳性。

也可在M- H琼脂平板贴上诱导剂头孢西汀（FOX）和亚胺培南（lP）纸片，两纸片上下相距20 mm，然后在FOX和lP 左右10 mm处分别贴上底物CAZ和CTX纸片。

同理判断，即底物CAZ或CTX离诱导剂远侧的抑菌圈半径减去近侧的抑菌圈半径>／4 mm为阳性。

作为检测的诱导剂，IP优于FOX。

（2）四纸片法：采用亚胺培南(IPM)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、
头孢他定(CAZ)、头孢噻肟(CTX)或头孢曲松(CRO)、氨曲南(ATM))
四纸片。

位置如左图该方法不仅能准确、快速区分产ESBI~和产诱导
AmpC酶，并能同时检出产这2种酶菌。

.（3）三维水相试验方法
将标准菌株ATCC 25922按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H
平板上。

在M-H平板中心贴一片头孢西汀(30ug/片) 纸片，在距纸片边缘1cm处，用无菌手术刀片切3cm长度的小槽，将待测菌株的6个菌落接种于槽内(勿溢出槽外)，35℃孵育18-24h。

结果观察：若抑菌圈向内凹陷，即AmpC酶阳性。

三维水相试验方法的改进(M-H平板打孔[2mm]扩散法)。

（4）质粒型AmpC酶三联纸片方法的检测
将标准菌株ATCC 25922按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H平板上。

在M-H平板中心贴一片头孢西汀(30ug/片) 纸片，在纸片边缘贴有待测菌的纸片（纸片上含20ul， PH8.0，1M Tris-0.1MEDTA）。

另一侧边缘贴有产AmpC酶菌的纸片（同上）。

35℃孵育18-24h，如待检菌出现扁平或凹陷的抑菌环为阳性。