抗氧化能力的检测

抗氧化能力指数测定原理及应用随着人们健康意识的提高，抗氧化能力成为的焦点。

抗氧化能力是指机体在面对氧化应激时，消除和降低氧化压力的能力。

为了更好地了解机体的抗氧化能力，抗氧化能力指数的测定变得越来越重要。

本文将详细介绍抗氧化能力指数测定的原理、方法及应用。

抗氧化能力指数测定主要基于氧化还原反应的原理，通过测定样品对自由基的清除能力来评价其抗氧化能力。

一般情况下，测定的指标包括总抗氧化能力、还原力、氧自由基清除能力等。

总抗氧化能力：总抗氧化能力是指机体对氧化应激的综合防御能力，包括酶类和非酶类抗氧化物质。

测定总抗氧化能力的方法主要是基于比色或荧光法，通过检测样品对自由基的清除率来计算总抗氧化能力。

还原力：还原力是指样品对氧化剂的还原能力，通过测定样品在特定条件下的还原能力，可以评估其抗氧化能力。

常用的测定方法包括邻苯三酚自氧化法和铁离子还原法。

氧自由基清除能力：氧自由基是导致氧化应激的主要因素之一，通过测定样品对氧自由基的清除能力，可以了解其抗氧化能力。

常用的测定方法包括电子自旋共振法和化学发光法。

抗氧化能力指数测定在多个领域均有应用，如生物学、医学、营养学等。

以下是几个具体应用的例子。

生物学：在生物学领域，抗氧化能力指数测定被广泛应用于研究物种演化、生物衰老、药物筛选等方面。

通过测定不同物种或不同组织的抗氧化能力，有助于深入了解生物体的抗氧化机制和衰老过程。

医学：在医学领域，抗氧化能力指数测定可以帮助医生评估患者的抗氧化状态，预测其对疾病的易感性。

例如，某些疾病如癌症、糖尿病等与机体的抗氧化能力密切相关，通过测定患者的抗氧化能力，可以为疾病的预防和治疗提供参考。

营养学：在营养学领域，抗氧化能力指数测定可以评价食品的营养价值。

机体的抗氧化系统需要多种营养素的支持，如维生素C、维生素E、硒等。

通过测定食品中的抗氧化物质含量，可以为膳食营养推荐提供依据。

抗氧化能力指数测定对于评价机体的抗氧化状态具有重要意义，它不仅有助于了解个体的健康状况，还可为疾病的预防和治疗提供指导。

抗氧化活性实验方法（体外实验）之迟辟智美创作1、清除DPPH 自由基能力的测定称取一定量的DPPH ，用无水乙醇配制成0.04mg/mL 的DPPH 溶液.分别取2mL 分歧浓度（2，4，6，8mg/mL ）的溶液，加入2mL DPPH 溶液，混合均匀，室温放置30min 后，5000r/min 离心10min.取上清液于517nm 处测吸光值.用Vc 作为阳性对比.样品对DPPH 自由基的清除率用以下公式计算：DPPH ()1201100%A A A -=-⨯清除率 A 0—2mL 无水乙醇+ 2mL DPPH 溶液的吸光值；A 1—2mL 样品溶液+ 2mL DPPH 溶液的吸光值；A 2—2mL 样品溶液+ 2mL 无水乙醇的吸光值.2、总还原能力的测定在10mL 离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液 2.5mL 和分歧浓度（2，4，6，8mg/mL ）的溶液1mL ，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃ FeCl 3，混匀后静置10min ，在700nm 处检测吸光值.Vc 作为阳性对比.3、对Fe 2+离子螯合能力的测定分别取1mL 分歧浓度（2，4，6，8mg/mL ）的溶液和3.7mL 蒸馏水，加入2mmol/L 的FeCl 2溶液0.1mL 和5mmol/L 的菲洛嗪溶液0.2mL ，25℃水浴10min ，于562nm 处测吸光值.EDTA 为阳性对比.样品对Fe 2+的螯合率计算公式如下：Fe 2+()1201100%A A A -=-⨯螯合率 A 0—1mL 蒸馏水取代反应体系中样品溶液后的吸光值；A 1—样品溶液反应后的吸光值；A 2FeCl 2溶液后的吸光值.4、超氧自由基（O 2-）清除率的测定采纳邻苯三酚自氧化法测定.取50mmol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.2）4.5mL ，置25℃水浴中保温20min ，分别加入1mL 样品溶液和0.4mL 25mmol/L 邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min ，加入1mL 8mmol/L HCl 终止反应，于299nm 处测定吸光度（A x ），空白对比组以相同体积蒸馏水取代样品.按下式计算O 2-清除率：O 2-00100%x A A A -=⨯清除率 A 0—空白对比液吸光度；A x —样品溶液吸光度.5、羟自由基（•OH ）清除率的测定利用H 2O 2与Fe 2+2O 2 1mL 、9mmol/L FeSO 4 1mL 、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL ，分歧浓度的样品溶液1mL.最后加H 2O 2启动反应，37℃反应30min ，以蒸馏水为参比，在510nm 下测定各浓度的吸光度.考虑到样品自己的吸光值，以9mmol/L FeSO 4 1mL 、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL ，分歧浓度的样品溶液1mL 和1mL 蒸馏水作为样品的本底吸收值.按下式计算•OH 清除率： •OH 001100%x x A A A ⎛⎫-=-⨯ ⎪⎝⎭清除率A 0—空白对比液的吸光度；A x —加入样品溶液后的吸光度；A x0—不加显色剂H 2O 2样品溶液本底的吸光度.。

抗氧化功能评价方法
一、化学方法
1.自由基清除能力测定法：常见的方法有DPPH自由基清除法、ABTS 自由基清除法和超氧阴离子清除法。

这些方法通过测定样品对自由基的清除能力，间接反映了其抗氧化能力。

2.过氧化氢清除能力测定法：该方法通过测定样品对过氧化氢的清除能力，评价其抗氧化能力。

3.金属螯合能力测定法：该方法测定样品与金属离子的结合能力，反映了样品的抗氧化能力。

4.过氧化物酶活性测定法：该方法测定样品中过氧化物酶的活性，评价其抗氧化能力。

二、生物学方法
1.细胞实验法：该方法通过将样品加入细胞培养基中，观察其对细胞的保护作用，评价其抗氧化能力。

2.动物模型实验法：将样品通过灌胃、注射等方式给予动物，观察其对动物体内氧化损伤的保护作用，评价其抗氧化能力。

3.人体试验法：将样品通过口服、注射等方式给予人体，观察其对人体内氧化损伤的保护作用，评价其抗氧化能力。

三、综合方法
1.多指标评价法：综合考虑样品在化学方法和生物学方法中的多个指标，给予综合评分，评价其抗氧化能力。

2.生物传感器法：利用生物传感器对样品进行检测，通过测定信号的变化来评价其抗氧化能力。

3.分子生物学方法：通过测定样品中相关基因的表达水平和蛋白质的表达水平，评价其抗氧化能力。

以上仅为抗氧化功能评价方法的一部分，不同方法的选择应根据具体的研究目的和样品类型来确定。

在实际应用中，常常需要结合多个方法进行综合评价，以获得更准确的结果。

abts实验原理宝子！今天咱来唠唠ABTS实验原理，可有趣啦。

ABTS是啥呢？它呀，就是2,2 - 联氮 - 二(3 - 乙基 - 苯并噻唑 - 6 - 磺酸)二铵盐的简称，这名字老长了，就像那种超级复杂的魔法咒语一样。

ABTS在这个实验里可是个超级明星哦。

这个实验呢，主要是用来测抗氧化能力的。

你想啊，咱们生活里有好多东西都有抗氧化的能力呢，像那些超级健康的水果啦，还有一些养生的茶之类的。

那怎么知道它们抗氧化能力有多强呢？这就轮到ABTS实验上场啦。

ABTS一开始呢，要被氧化成ABTS·+阳离子自由基。

这个过程就像是把一个乖巧的小孩变成一个充满活力的小怪兽一样。

怎么让它变成这个自由基呢？通常会用一些强氧化剂，像过硫酸钾之类的。

就像给ABTS注入了一股超强的能量，让它变身啦。

当ABTS变成ABTS·+之后呢，它就有了特殊的能力。

这个时候，如果我们把想要测试抗氧化能力的样品加进去，就像是一场大战要开始了。

如果这个样品有抗氧化能力，那它就会和ABTS·+发生反应。

就好比抗氧化的样品是一群小英雄，ABTS·+是小怪兽，小英雄们会努力去消灭小怪兽呢。

这个反应是怎么发生的呢？抗氧化的样品会把自己的电子给ABTS·+，这样ABTS·+就会慢慢变回原来的ABTS。

就像小怪兽被小英雄打败了，又变回了原来乖乖的模样。

那我们怎么知道这个反应进行得怎么样了呢？这就需要看颜色的变化啦。

ABTS·+是有颜色的，一般是那种蓝绿色，可显眼了。

当它和抗氧化样品反应之后，颜色会慢慢变淡。

就像小怪兽的力量被削弱了，它身上那种特别的光芒也慢慢消失了。

我们可以用分光光度计来测量这个颜色变化。

分光光度计就像是一个超级厉害的眼睛，能精确地看到颜色变化的程度呢。

如果样品的抗氧化能力很强，那颜色就会变得很淡很淡，就像小怪兽被打得落花流水，几乎消失不见啦。

如果抗氧化能力比较弱呢，颜色就不会有太大的变化，就像小英雄们还不够强大，小怪兽还是很嚣张。

精品文档小麦叶片总抗氧化能力测定（FRAP法）一、实验原理FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tri-pyridyl-tria-zine（Fe 3+-TPTZ）产生蓝色的 Fe2+-TPTZ,随后在 593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。

由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。

并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10側，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。

由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。

AntioxidantFe3+-TPTZ （橘黄色）---------- >Fe2+-TPTZ （蓝色）二、实验步骤1. FRAPT作液配制：0.3 M pH 3.6醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL 用1M HCl调节pH至3.6 ;10mmol/L TPTZ溶液25mL 0.078g TPTZ 用40mM盐酸溶液定容至25mL 20mmol/L FeCl3溶液 50mL 2.78g 用 RO水定容至 50mL上述溶液以 10:1:1 的比例混合（现配现用）。

2. 取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取 1.5mL 12000g离心10min（4°C）,取上清液。

3. 在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37°C条件下水浴10min, 于593nm处测定吸光度，4. 标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSQ的标准液替代样品绘制标准曲线。

三、结果计算以1.0mmol/L的FeSQ为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP fi，计算结果。

精品文档2.8.2. Ferric Reducing/Antioxidant Power (FRAP) assayBriefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM L_1TPTZ solution in 40 mM L1HCI plus 2.5 mL 20 mM L1 FeCI^ and 25 mL 0+3 M L1acetate buffer, pH 3*6 was prepared freshly and warmed at 37°C・After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incubation at 37°Cfor 5 min, absorbance of the reaction mixture was measured at 593 nm. The final result was expressed as the concentration of antioxidants having a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM L_1 FeSO4based on the standard curve for FeSO4 x 7H.0 at a concentration range between 100 and 1000 pM L_1 [3 口[1] Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as aMeasure of “ntioxidant Power”： The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6.[2] Katarz yna Szafra nska, Rafa? Szewczyk, Kryst yna Maria Jan as. In volveme nt ofmelat onin applied to Vig na radiata, L. seeds in pla nt resp onse to chilli ng stress[J].Central European Journal of Biology, 2014, 9(11):1117-1126.精品文档欢迎您的下载，资料仅供参考!致力为企业和个人提供合同协议，策划案计划书，学习资料等打造全网一站式需求。

一、抗氧化测定1．DPPH:a)样品溶液浓度初测定，（0~4℃）储藏。

b)称4mg，加无水甲醇溶解于烧杯，转移至100mL容量瓶定容。

浓度为0.04mg/mL。

避光（0~4℃）储藏。

i.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。

以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。

平行测定2次。

A1ii.5ml离心管（2ml待测样+2mL无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。

以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。

A2iii.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml待测样）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。

以无水甲醇为对照分光检测λ=517nm。

A3清除率（Y）=[1-（A3-A2）/A1]∙100%。

平行测定3次，取平均值。

分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。

自由基清除能力，AE=1/IC50。

根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。

2．·OHa)PBS制配：磷酸二氢钠31.2g 1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g1000ml蒸馏水定容。

移液管移液磷酸二氢钠190ml、磷酸氢二钠810ml 于1000ml 烧杯，pH 计调7.4。

b) 邻二氮菲：148mg 蒸馏水定容100ml 。

c) 硫酸亚铁：208.5mg 蒸馏水定容100ml 。

d) 100ml30%双蒸馏水定容300ml 。

封口。

i. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm 。

A1ii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A2 iii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 待测样+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A3iv. 10ml 离心管（1mlPBS+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A 空。

测定抗氧化的六种方法是
1.自由基清除能力测定法：通过测定样品对自由基的清除能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除法和ABTS（2,2'-联氨基二-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)）自由基清除法。

2.氧化还原能力测定法：通过测定样品在氧化还原反应中的电子接受能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括还原能力测定法和Ferric reducing antioxidant power（FRAP）法。

3.金属离子螯合能力测定法：通过测定样品对金属离子的螯合能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括铁离子螯合能力测定法和铜离子螯合能力测定法。

4.脂质过氧化抑制能力测定法：通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括脂质过氧化抑制能力测定法和TBARS（硫代巴比妥酸反应物）测定法。

5.蛋白质氧化抑制能力测定法：通过测定样品对蛋白质氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括蛋白质碳氧化酶活性测定法和蛋白质过氧化物酶活性测定法。

6.细胞抗氧化能力测定法：通过测定样品对细胞内氧化应激的保护作用来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括细胞活力测定法和细胞内氧化应激指标测定法。

abts检测原理宝子们！今天咱们来唠唠ABTS检测原理这个超有趣的事儿。

ABTS呀，它是一种可用于检测抗氧化活性的试剂呢。

想象一下，在一个小小的化学世界里，ABTS就像一个特别的小侦探。

它原本是一种蓝绿色的溶液哦。

这个溶液里的ABTS分子就像是一群整装待发的小士兵，每个分子都有着自己独特的结构和性质。

当我们要检测某个东西的抗氧化能力的时候呢，就把这个待检测的样品，比如说可能是一种植物提取物，或者是某种营养补充剂，放进ABTS溶液里。

如果这个样品具有抗氧化性，那就像是这个样品里有一群超级英雄。

这些超级英雄呢，会和ABTS小士兵发生反应。

抗氧化物质会把ABTS小士兵从原本的蓝绿色状态变成另一种颜色，一般是变成绿色或者无色。

这就好比超级英雄把小士兵的蓝绿色制服给换了，或者直接让小士兵隐身了一样，超级神奇呢！那为啥会这样呢？这是因为抗氧化物质具有提供电子或者氢原子的能力。

ABTS分子呢，在溶液里是一种阳离子自由基的状态，它特别渴望得到电子或者氢原子来让自己变得更稳定。

当抗氧化物质出现的时候，就慷慨地把电子或者氢原子给了ABTS阳离子自由基。

这个过程就像是一场慷慨的赠予仪式。

ABTS得到了这些电子或者氢原子之后，它的化学结构就发生了变化，从而导致颜色也跟着改变啦。

而且呀，这个颜色变化的程度和抗氧化物质的抗氧化能力是成正比的哦。

如果我们放进ABTS溶液里的样品抗氧化能力特别强，那ABTS溶液的颜色就会变得特别淡，甚至完全无色。

就像超级英雄的力量特别强大，一下子就把所有的ABTS小士兵都改变了状态。

相反，如果样品的抗氧化能力比较弱，那ABTS溶液的颜色可能只是稍微变浅一点，从蓝绿色变成浅绿色这样。

我们还可以通过一些仪器，像分光光度计来精确地测量ABTS溶液颜色变化前后在特定波长下的吸光度。

根据吸光度的变化值，就能准确地算出这个样品的抗氧化活性啦。

这就像是给超级英雄们的能力打分一样，吸光度变化大的，抗氧化能力得分就高，变化小的，得分就低。

怎么测量抗氧化能力的方法
测量抗氧化能力涉及许多不同的方法，以下是一些常用的方法：
1. 自由基清除能力测量：通过测量样品对自由基的清除能力来评估其抗氧化能力。

常用的自由基包括DPPH (2,2-二苯基-1-苦味肼)、ABTS (2,2'-联氮二（3-乙基苯并噻唑啉酸琥珀酸盐）二阳离子)和超氧阴离子自由基。

2. 过氧化氢清除能力测量：过氧化氢清除能力（或称过氧化氢酶样本）测量了样品对过氧化氢的清除能力，过氧化氢是由超氧阴离子自由基生成的。

3. 铁还原能力测量：铁还原能力指样品还原Fe3+离子为Fe2+离子的能力。

常用的铁还原能力测量方法包括FRAP (铁还原能力)和CUPRAC (铜还原能力)。

4. 水解抗氧化能力测量：通过测量样品对脂质氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括TBARS (酸性的硫代巴比妥酸反应物)、比色法和荧光法。

5. 抗氧化酶活性测量：通过测量样品中抗氧化酶（如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽-S-转移酶）的活性来评估其抗氧化能力。

需要注意的是，测量抗氧化能力的方法多种多样，选择适合的方法应根据研究目的和样品特性进行。

建议在进行实验之前进行充分的文献调研和试验验证，并在
专业人士的指导下进行实验操作。