大鼠脂肪基质细胞成脂分化及慢病毒感染的实验研究
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脂肪干细胞成脂诱导及鉴定程序一、试剂准备(一)成脂分化诱导液(Adipogenic Medium, AM)配方【1】:试剂名称浓度商品信息1.极限必须培养基(Dulbecco’S Modified Eagle Medium ,DMEM) 1.0 L(SH30021.01B, Hyclone)2.胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)10%(ES-009-B, Millipore)3.青霉素/链霉素(Penicillin/Streptomycin)1%(TMS-AB2C, CHEMICON)4.地塞米松(Dexamethasone,DM) 1µmo/L 分子量:392.46(D4902-25MG, Sigma)5.胰岛素(Insulin, IS) 10 µmol/L 分子量:5808(91077C—1g, Sigma)6.3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Isobutylmethylxanthine,IBMX) 0.5 mmol/L 分子量:222.24( I5879-100MG, Sigma)7.吲哚美辛(Indomethacin,ID) 200 µmol/L 分子量:357.79(I7378—5G, Sigma)(二)成脂分化诱导液浓储液配制试剂名称质量浓缩倍数配制方法1.Stock A胎牛血清1ml/管1X( liquid)分装1ml/管X100 保存:-20℃2.Stock B青霉素/链霉素0.1ml/管100X( liquid)分装0.1ml/管X100 保存:-20℃3.Stock C地塞米松0.0117738 g 1000X 溶于30ml 无水乙醇(0.1%) 分装0.1ml/管X300保存:-20℃4.Stock D胰岛素0.05808 g100X 溶于10ml Hcl(0.1 mol/L,PH2.0) 分装0.1ml/管X100保存:4℃5.Stock E3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.05556 g 200X 溶于2.5ml DMSO(0. 5%) 分装0.05ml/EP管X50 保存:-20℃6.Stock F吲哚美辛0.07155 g 500X 溶于2ml 无水乙醇(0.2%) 分装0.02ml/管X100保存:-20℃(三)成脂分化诱导液工作液配制(10ml)1.取DMEM(L)8.72ml加入15ml离心管(BD);2.加1管Stock A(1ml);3.加1管Stock B(0.1ml);4.取1管Stock C(0.1ml)溶解,加入0.01ml;5.加1管Stock E(0.05ml);6.加1管Stock F(0.02ml);7.加1管Stock D(0.1ml);8.测渗透压,调pH7.2-7.4;9.0.22µm微孔过滤,4℃贮存,一周内使用。
山西农业大学学报第27卷(第5期) 000003J.Shanxi Agr ic.Univ.No.5Vol.272007收稿日期2828作者简介贺建青(2),女(汉),山西原平市人,助理畜牧师,主要从事动物遗传育种和繁殖方面的研究。
脂肪细胞的分化与调控贺建青(山西省原平市畜禽繁育工作站,山西原平034100)摘 要:对20多年来脂肪细胞分化的研究动态:脂肪细胞的分化过程,脂肪细胞分化的调节及其机理进行了综述,以期对脂肪细胞分化及其调控进行全面总结。
关键词:脂肪细胞;分化;调控中图分类号:S852116+3 文献标识码:A 文章编号:167128151(2007)0520006203Adipocyte Diff erent ia t ion a nd It s Regula t ion HE Jian 2qing(Yuanping Pow lt ry B ree ding St ation of S ha nxi P rovine ,Yua nping Shanxi 034100,Chi na)Abstra ct :This a rticle is aimed to review the advance r esea rc h of adipoc yte diff erentiation on the course ,the regulation a nd the mecha nism.K ey w o r ds :Adipoc yte ;Differ entiatio n ;Regulation 脂肪组织和脂肪细胞是近二十年特别是近十年来人们广泛探索的领域之一。
目前已经证明脂肪细胞分化与糖及脂肪代谢、与机体能量平衡、与肥胖症、与I I 型糖尿病、与脂肪肝和高脂血症及乳腺癌等有非常密切的关系.对脂肪细胞分化机制及其调控的研究,不但对于探讨上述重大生命和疾病过程具有重要理论意义,而且对于上述疾病的预防与治疗也具有实际意义。
脂肪细胞的基础知识脂肪细胞的生长全过程及其形态变化脂肪母细胞,是指能向脂肪细胞分化的ADSCs在激素、生物活性因子、寒冷等因素刺激下均能逐渐分化成为单能干细胞。
它可保持着干细胞增殖活跃的特性,脂肪母细胞再进一步分化为前脂肪细胞,即通常人们所说的脂肪细胞前体。
前脂肪细胞再经历细胞融合、接触抑制和克隆扩增等步骤启动向成熟脂肪细胞分化,并在胰岛素、地塞米松等诱导剂作用下完成向成熟脂肪细胞的分化。
全过程可以表示为:多能干细胞——脂肪母细胞——前脂肪细胞——不成熟脂肪细胞——成熟脂肪细胞。
生长期前脂肪细胞的形态与成纤维细胞相似,经诱导分化,其细胞骨架和细胞外基质发生变化,开始进入不成熟细胞向成熟细胞转变。
细胞形态由成纤维细胞样逐渐趋于类圆或圆形,胞体逐渐增大,胞质中开始出现小脂滴,脂质开始累积,以后小脂滴增多并融合为较大的脂滴,可经油红“O”染色等方法于显微镜下显色,从而获得成熟脂肪细胞的形态特征。
此时的细胞无分裂增殖能力,为脂肪细胞分化的终末阶段。
张高娜,梁正翠.动物脂肪细胞的研究进展[J].饲料工业,2009,30(2):42-44.脂肪细胞由起源于中胚层的间充质干细胞逐步分化形成,按间充质干细胞→脂肪母细胞→前脂肪细胞→不成熟脂肪细胞→成熟脂肪细胞的过程发展。
前脂肪细胞在多种转录因子调控下,激活脂肪组织相关基因,并在这些基因的顺序性调控下,经一系列复杂的步骤分化为成熟脂肪细胞。
张艳.脂肪细胞分化过程中的分子事件[J].儿科药学杂志,2008,14(1):56-57.间充质干细胞概念:不同文献中,分别命名为抽脂处理细胞(processed lipoaspirate cells, PLA),脂肪基质微管碎片细胞(stromal vascularfraction cells, SVF),脂肪组织源基质细胞(adipose-tissue derived stromal cells, ATSCs),脂肪源中胚层干细胞(adipose-derived mesodermal stem cells, ADMSCs)等。