紫外分光光度法测角茴香中总黄酮方法学综述

内蒙古医科大学毕业论文(设计)题目紫外分光光度法测角茴香中总黄酮方法学综述学生姓名周艳宏学号2010051567院系药学院专业药学指导教师布仁二Ｏ一四年六月十日紫外分光光度法测角茴香中总黄酮方法学综述周艳宏内蒙古医科大学药学院2014届药学，呼和浩特，010059摘要：紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。

还有薄层扫描法（TLCS），超临界流体色谱法(supercritical fluid chromatography，SFC法)，荧光分光光度法，高效液相色谱法等。

本文还对角茴香的药理作用做了简介。

前言：黄酮类化合物是广泛存在于自然界的、泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结而成的一系列化合物,包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查尔酮、异黄酮类等化合物。

很多黄酮类化合物具有生理活性,例如芦丁、槲皮素等能够增强心脏收缩,减少心脏搏动数;杜鹃素具有止咳祛痰作用;黄芩苷具有抗菌消炎作用;汉黄芩素具有抑制肿瘤细胞作用;水飞蓟素具有保肝作用等[2]。

1.方法介绍：1.1紫外可见分光光度法:是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I(300～400nm)和峰带Ⅱ(220～280nm)光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。

具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。

1.2比色法:是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al(NO3)3为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。

常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al(NO3)3、AlCl3等。

1.3差示分光光度法简称ΔA法:使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。

而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。

1.4双波长和导数分光光度法:用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。

在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。

如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1～2nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法[3]1.5薄层扫描法(TLCS):样品经薄层分离后直接测定或经适当处理后使之显色或产生荧光,在特定波长下用光度计测定其吸光度或荧光强度的方法称为薄层扫描法。

薄层扫描法具有快速、简便、同时可测定多个样品的特点,因而在中药及其制剂的研究中具有广泛的应用,可进行中药的成分研究和含量测定。

兰州大学的Zhao等[4]就采用双波长薄层扫描法,测定波长265nm,参比波长220 nm,在聚酰胺薄膜上展开,同时测定乌贼中的三种黄酮苷。

由于薄层扫描法快捷方便,因此常用于中药鉴别。

L in等[5]对两种化橘红进行质量鉴别时就采用薄层扫描法测定野漆树苷的含量,不但迅速、准确而且稳定性、RSD均不逊于高效液相.1.6荧光分光光度法:黄酮化合物的荧光光度测定法尚不多见,已知桑色素用于铍的荧光光度测定有很高灵敏度。

当黄酮分子中具有3-羟基(或5-羟基)时,可与Al3+、铍等离子配位络合显色,成为荧光光度测定黄酮类化合物的基础。

桑色素为3,5,7,2＇,4＇－五羟基黄酮,常被用作黄酮类化合物荧光光度测定法的标准。

邓淑华等[6]以桑色素－铝络合物(乙醇)为对照,以420nm为激发波长, 510nm为测量波长,测定了山楂、牡荆子等药材中总黄酮化合物含量,与芦丁作对照的铝盐显色分光光度法结果相符,且具有检出限低,灵敏度高的优点;廖声华等[7]以桑色素－铝络合物(乙醇)为对照,选择激发波长λex=365nm,发射波长λem=499nm,测定银杏叶中的黄酮含量,提高了检测灵敏度［8］。

1.7高效液相(HPLC)法:高效液相色谱法是在液相色谱的基础上引入气相色谱的理论和技术,并加以改进而发展起来的一种重要的分离分析方法。

具有分离效能高,分析速度快,灵敏度高等特点。

[9][4]本法主要用于银杏叶及其制剂,按照药典[10]规定,以槲皮素、山柰酚、异鼠李素为对照品,以三者总含量乘以系数得出银杏叶及其制剂中总黄酮醇苷含量。

管玉民等用该法研究了气候、季节、树龄对银杏叶总黄酮含量的影响[11];佘佳红等以槲皮素、山柰酚为对照,按照经验公式采用SFE-HPLC法测定了银杏叶粗提物中黄酮类化合物的含量[12]。

少数学者将该法的应用范围做了拓展,葛明菊等以芦丁为对照,使用C18柱,甲醇:014%磷酸溶液(45B55v/v)为流动相,检测波长360nm,研究了大血藤叶片黄酮类化合物的含量[13];翁德宝等以槲皮素、山柰酚、异鼠李素为对照,使用C18柱,甲醇:014%磷酸溶液为流动相,检测波长370nm,测定了菊花脑茎叶中三种黄酮类化合物总含量[14].1.8毛细管电泳法:毛细管电泳法是离子或荷电粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速的电泳分离新技术。

常用的方法主要有毛细管区带电泳(CZE)、胶束电动力学毛细管色谱(MEKC)、毛细管凝胶电泳(CGE)、毛细管等速电泳(CITP)等。

它的各种操作模式特别是CZE和MEKC都能很好的用于中药成分含量分析。

如:A.Mu ller等[15]对电泳缓冲液的浓度、PH值等条件进行优化,采用胶束电动力学毛细管色谱(MEKC)对黄酮含量进行测定。

此外,毛细管电泳还可以结合一些其他领域的技术方法,对中药总黄酮含量进行测定。

如:毛细管电泳技术和电化学技术相结合,对中药黄酮的含量进行分析,得到满意结果。

东华大学Peng等[16]采用毛细管电泳配合电化学(CE-ED),检测中药Rhododendron dauricum L.中的黄酮含量,检测限达到1.3×10-7。

Cao等[17]也采用CE-ED,优化电压、缓冲溶液浓度及注射时间等条件,连续检测银杏叶二裂片中的六种黄酮的含量。

2.药理作用简介：脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)是革兰阴性菌细胞壁的主要成分［18］，是引起感染性疾病的主要因素［19］。

LPS引发败血症，进一步引起全身炎症反应综合征，而肺脏的生理特点也决定了它是LPS最常累及和最先攻击的器官［20］。

研究显示肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)在炎症反应中发挥重要的作用。

TNF-α能促进肺部炎症细胞募集，增加肺泡巨噬细胞和内皮细胞产生TNF-α及表达其受体，刺激成纤维细胞增殖等［21］。

IL-6是一种具有多种生物学活性的细胞因子，其主要生物学活性为诱导B细胞分泌免疫球蛋白［22］。

李普衍等［23］研究表明，角茴香水煎剂对人型结核杆菌及枯草杆菌有抑制作用;其乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、枯草杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌等均有较强的抑制作用;其氯仿提取物发挥镇痛抗炎作用。

中国沙漠地区药用植物中记载取角茴香根适量，用水煎服，可治疗菌痢。

然而，细果角茴香醇提对小鼠LPS腹腔注射所致的全身炎症反应模型的抗炎效果尚不清楚，因此本研究采用小鼠腹腔注射LPS的方法建立全身炎症反应的动物模型，研究细果角茴香醇提物对小鼠肺组织炎症反应和炎性细胞浸润、外周血白细胞计数、血清TNF-α及IL-6水平的影响，以探讨细果角茴香醇提物的抗炎作用及可能机制。

参考文献：[1]严赞开．《紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法》．食品研究与开发，2007，28:164-165．[2颜仁梁1刘志刚2《中草药、中药制剂中总黄酮类化合物含量测定方法综述》广州医药2005年第36卷第6期[3]田永利许志宇葛林刘娜总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展河北医药2010年8月第32卷第15期[4]Zhao L,Yang X,LiC.Determ ination of th ree f lavonoids in equ isetunh iemale by tlcs[J].Ch in JMAP,2005,22(2):159-61.[5]L iu L,C hen ZX,YuanX J.A ssessm en t of th e qual ity of tw o d ifferent species of exocarp ium citri grand is[J].Jou rnal of Gu angzhou University of Tradit ional Ch ineseM ed icin e,2004,21(4):308-12.[6]邓淑华,陈达美,黄宝华,等.荧光光度法测定黄酮类化合物的研究[J].化学世界, 1999,7:375-9.[７]廖声华,田秋霖,路平.A《l－桑色素二元络合物的荧光光度法测定银杏叶中的黄酮含量》[J].数理医药学杂志,2004,17(1):58-60.［８］马陶陶,张群林,李俊《中药总黄酮的含量测定方法》安徽医药AnhuiM ed ical and Pharmaceu tical Journal2007Nov;11(11)[10]国家药典委员会1中华人民共和国药典1北京:化学工业出版社,200012571[11]管玉民,王健,尤慧莲,等《气候、季节、树龄对银杏叶总黄酮含量的影响》中成药,2000,22(5)B368-3701[12]佘佳红,柳正良《SFE-H PLC测定银杏叶粗提物中黄酮类化合物的含量》中草药,2000, 31(2)B101-1031[13]葛明菊,李钧敏,张利龙《大血藤叶片黄酮类化合物的HPLC分析》浙江中医学院学报,2002,26(6)B71-721[14]翁德宝,汪海峰,翁佳颖《菊花脑茎叶中黄酮类化合物的测定》药物生物技术, 2001,8(3)B167-1691[15]Mu ller A,GanzeraM,S tuppnerH.Analys is of the aerialparts of ver bena officinalisL.by m icellar electrok inetic cap illary chromatography[J].C hromatograph ia,2004,12(18).[16]Peng YY,L iu FH,Y e JN.Determ inat ion of b ioact ive flavonoids inrhododendron dau ricum L.by cap illary electrophores is w ith electro ch em ical detection[J].Ch rom atograph ia,2004,12(18):171-8.[17]C ao YH,Chu QC,Fang YZ,et a.l Analys is of flavono ids in g inkgob iloba L. and its phytopharm aceu ticals by cap illary electrophoresisw ith electrochem icald etect ion[J].Anal B ioanal C hem,2002,374:294-9.[18]Verma S，Lo Y，Chapagain M，et al．West Nile virus infectionmodulates human brain microvascular endothelialcells tight junction proteins and cell adhesion molecules:Transmigration across the in vitro blood-brain barrier［J］．Virology，2009，385(2):425－433．［19］Stuss M，Wiktorska JA，Sewerynek E．N-acetylserotoninreduces lipopolysaccharide-induced lipid peroxidation invitro more ef fectively than melatonin［J］．Neuro EndocrinolLett，2010，31(4):489－496．［20］Reid G，Burton J．Use of Lactobacillus to prevent infectionby pathogenic bacteria［J］．Microbes Infect，2002，4(3):319－324．［21］Loza MJ，Brodmerkel C，Du Bois RM，et al．Inflammatoryprofile and responseto anti-tumor necrosis factor therapy inpatients with chronic pulmonary sarcoidosis ［J］．Clin VaccineImmunol，2011，18(6):931－939．［22］Gregoric PD，Bajec DD，Sijacki AD，et al．Relation betweencytokine IL-6levels and the occurrence of systemiccomplications in patients with multiple injuries and bluntabdominal trauma［J］．Srp Arh Celok Lek，2003，131(23):118－121．[23］李普衍．角茴香醇提物抗炎作用的实验研究［J］．青海医学院学报，2006，27(3):193－195．。