冬虫夏草中腺苷含量的测定

临床医药文献杂志（电子版

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【摘要】冬虫夏草作为我国的著名中草药在近些年的应用很广，相关虫草制品在市场上也越来越多，但质量大多参差不齐，伪劣制品的数量很多。为此，急需精确、简便的虫草制品鉴定方法，保证相关市场的稳定。针对虫草活性成分的种类和含量进行检测能发挥出极好的质量鉴别效果，值得进一步推广。本文将讨论虫草酸和核苷类物质这两种主要虫草活性成分的检测方法，希望能以此强化虫草与其制品的鉴定水平。【关键词】冬虫夏草；虫草制品；活性成分检测；含量测定【中图分类号】R284【文献标志码】A冬虫夏草及虫草制品中活性成分

检测方法的建立及含量测定

韩贵香青海珠峰虫草药业有限公司810001

冬虫夏草的药用价值主要来源于其中的活性成分，而劣质

的虫草制品中，这些活性成分的含量非常低，部分假冒产品中甚

至完全不含活性成分。这些劣质、假冒的虫草制品的药用价值非

常低下，有些甚至含有有毒成分，对使用者的健康危害很大。因

此，对冬虫夏草相关产品的质量检测必须从活性成分的检测入

手，一方面检测其是否有虫草特有的多种活性成分，另一方面测

定这些活性成分的具体含量，以保证产品的能效和药用价值。一、冬虫夏草和虫草制品概述

虫草是一种特殊的药用真菌，其中最主要的一种就是冬虫

夏草，由于其产生方式非常奇妙，而且药用价值很高，所以在我

国具有很高的知名度。从生理功效上来看，这种药物对高血脂、动脉硬化、免疫力低下、心脑血管疾病等都有很好的疗效。遗憾

的是，冬虫夏草的生长地域极其有限，人工培育技术也还未成

熟，因此目前人们往往使用蛹虫草代替冬虫夏草作为虫草制品

的原料。以超临界萃取、水提法、醇提法等分离方式将冬虫夏草

或蛹虫草中的活性成分提取出来，制作成丸剂、胶囊、口服液等

虫草制品，不仅服用方便，而且由于提取精制时去除了虫草中的

部分有害成分，所以毒副作用更小，这使得虫草制品在近些年的

市场愈发火爆。二、冬虫夏草和虫草制品的活性成分检测方法

冬虫夏草有多种活性成分，其中最主要的是虫草酸、核苷类

北方药学2019年第16卷第5期

灵芝作为中华九大仙草之一，是一种药用价值很高的真菌[1-3]。它提高免疫力、保护心血管系统、抗癌抗肿瘤的功效，促进活性成分的深入研究和开发，临床上的广泛使用[4-6]。灵芝口服液是由灵芝提取物加工的主要产品之一，具有宁心安神、健脾胃的作用，对失眠、健忘、疲劳乏力、困倦不振等病症有良好的疗效，临床上常用于治疗心脾两虚引起的神经衰弱[7]。腺苷作为核酸的基本结构单位，是灵芝主要的有效成分之一，具有预防心律失常、改善血液循环、抑制神经递质释放等作用[8-10]。本研究采用D-101型大孔树脂吸附纯化灵芝口服液中的腺苷，应用HPLC法测定灵芝口服液中腺苷的含量，旨在探讨该法的应用价值，更好地控制灵芝口服液的质量。1仪器与试剂TU-1901型双光束紫外分光光度计（北京普析通用有限公司）；LC-2010A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；超声波清洗器（无锡市美极超声波清洗机设备有限公司）。腺苷标准品：中国药品生物制品检定所，纯度98%；灵芝口服液：湖南正清制药集团股份有限公司，国药准字Z20000010；纯化水，乙腈色谱纯，0.45滋m微孔滤膜。D-101型大孔树脂：药用级，南开大学化工厂；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件：色谱柱：DiamonsiC18柱（250mm伊4援6mm，5滋m），柱温为室温，流动相：乙腈-水（10颐90，V/V），进样量：10滋L。流速1.0mL/min，检测波长为260nm。理论塔板数按腺苷峰计应不低于5000，阴性对照品无干扰。2.2溶液制备对照品溶液的制备：精密称取以P2O5为干燥剂减压干燥24h的腺苷对照品适量，使用0.01mol/L磷酸三钠溶液进行溶解，定容稀释至25mL容量瓶后摇匀；作为对照品溶液。供试品溶液的制备：精密量取20mL灵芝口服液，上柱洗脱。具体操作见表1。此外，阴性样品溶液按供试品溶液方法制备。表1供试品溶液上柱洗脱程序2.3方法学考察线性关系考察：分别精密量取1，2，4，6，8mL对照品贮备液置于25mL容量瓶中，加入0.01mol/L磷酸三钠溶液稀释至刻度并摇匀。分别精密吸取10滋L上述溶液进样测定，测得的腺苷峰面积，分别以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，经回归处理，获得回归方程Y=4021.10X-2.5589（r=0.9996），显示腺苷浓度在2.143耀105.6滋g/mL范围内与峰面积呈现良好的线性关系。精密度试验：按上述色谱条件，精密吸取10滋L质量浓度52.8滋g/mL的对照品溶液，连续进样5次。测得的腺苷峰面积分别为2016.26，2025.72，2008.83，2013.27，2031.08，平均2019.30，RSD=0.79豫，显示仪器精密度良好。重复性试验：精密吸取10滋L样品5份进行测定，按上述方法处理分析，得到腺苷含量分别为7.1248，7.1091，7.1318，7.1032，7.0876滋g/mL，平均7.1203滋g/mL，RSD=0.86豫，表明此方法重现性良好。稳定性试验：精密吸取供试品溶液10滋L，每隔2h进样1次，进样5次。按上述方法测定，分别得到腺苷峰面积为1644.45，1639.67，1682.78，1652.64，1670.69，平均1660.77，RSD=1.27豫，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。加样回收率试验：精密吸取10滋L样品溶液（已知浓度7.1312pg/mL），分别加入1.0，1.5，2.0mL质量浓度47.8滋g/mL的对照品溶液，平行操作2次，同样方法制备供试液并测定腺苷含量，计算回收率，结果见表2。表2腺苷加样回收试验结果（n=6）2.4样品含量测定：依拟定方法，取3批灵芝口服液样本制备供试品溶液，分别精密吸取10滋L对照品溶液与供试品溶液各注入色谱仪，按上述色谱条件测定样本，按外标法以峰面积计算腺苷的含量。灵芝口服液中腺苷的含量分别为7.3203，7.4108，7.3726滋g/mL。3讨论3.1供试品溶液的制备：灵芝口服液中含有多种营养成分，如萜类、有机酸、有机碱、多肽和氨基酸，并含有大量的多糖、蛋白等干扰测定的成分，样品溶液黏度大，腺苷含量并不高，样本的除杂、浓集、纯化分离尤为重要[11]。大孔吸附树脂、离子交换树脂、硅胶柱色谱和薄层色谱对灵芝菌丝体中的核苷类成分的分离均供试品溶液上柱洗脱程序ABCD将样品加入预先处理好的D-101型大孔吸附树脂柱（1.5cm伊11cm）50mL水洗脱，流速约0.5mL/min，弃洗脱液100mL30豫乙醇进行洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干0.01mol/L磷酸三钠溶液加入5mL容量瓶中并稀释至刻度，摇匀HPLC测定灵芝口服液中腺苷含量温正辉刘丽丹（嘉应学院医学院附属医院梅州514000）摘要：目的：建立高效液相色谱（HPLC）法测定灵芝口服液中核苷成分腺苷的含量。方法：采用HPLC法，腺苷吸附纯化：D-101型大孔树脂，色谱柱：DiamonsiC18柱（250mm伊4援6mm，5滋m），柱温为室温，流动相：乙腈-水（10颐90，V/V），流速1.0mL/min，检测波长为260nm。结果：腺苷质量浓度在2.143耀105.6滋g/mL（r=1.000）范围内与峰面积呈现良好的线性关系，RSD=1.04豫（n=6），平均加样回收率为98.39豫。结论：高效液相色谱法简单合理，准确可靠，可作为灵芝口服液中腺苷含量测定的分析方法，也为灵芝口服液的质量控制提供参考。关键词：HPLC灵芝口服液腺苷含量测定中图分类号：R286.0文献标识码：A文章编号：1672-8351（2019）05-0001-02

冬虫夏草有效成分及其药理作用的研究进展

武丽斐;邢月;关亚兰;赵丹;刘振权;王永炎

【摘 要】冬虫夏草作为一种传统的名贵中药材,是由冬虫夏草菌的子实体与僵虫菌核(幼虫尸体)构成的复合体.因其特有的虫菌结合体结构,而深受国内外各界学者的广泛关注,本文主要对近年来关于冬虫夏草有效成分和药理作用进行阐述.

【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》

【年(卷),期】2013(011)010

【总页数】3页(P1254-1256)

【关键词】冬虫夏草;核苷;麦角甾醇;药理作用

【作 者】武丽斐;邢月;关亚兰;赵丹;刘振权;王永炎

【作者单位】北京中医药大学,100029;北京中医药大学,100029;北京中医药大学,100029;北京中医药大学,100029;北京中医药大学,100029;中国中医科学院临床基础医学研究所

【正文语种】中 文

【中图分类】R285.1

冬虫夏草（Cordyceps sinensis）属肉座菌目麦角菌科虫草属植物，为虫草菌的子座与其寄主蝙蝠蛾幼虫尸体的复合物，俗称虫草，是中国传统的滋补性中药材。多用于治疗久咳虚喘、劳嗽咯血、阳痿遗精、腰膝酸痛等疾病。现研究证实，冬虫夏草有显著的降血糖、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗纤维化、抗炎等功效[1]，对肺脏、肾脏、中枢神经系统、免疫系统、心脏、肝脏等均有较好的临床保护作用。近年来，有关冬虫夏草的研究日新月异，本文全面综述了冬虫夏草的有效成分及其药理作用的最新进展。

1 冬虫夏草的有效成分

不同的学者采用不同的方法对冬虫夏草及其菌丝体的化学成分进行了广泛的研究，其化学成分大致可分为：多糖类、蛋白质及氨基酸类、脂类、核苷类、甘露醇、麦角甾醇类、微量元素等。

1.1 多糖类 冬虫夏草用盐酸水解，NaOH中和，乙醇沉淀蛋白，标准裴林试剂滴定，测得粗糖23.87%[2]。白云娥等[3]用硫酸－蒽酮比色法测定了粗糖中含糖为42.0%。龚晓健等[4]利用水提醇沉法提取多糖，应用苯酚－硫酸法测定总多糖，含量约为40%。郑波等[5]用紫外分光光度法测定冬虫夏草及蛹虫草中多糖含量分别为32.37%、6.32%。

分析检测　Ｖｏ　１

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（大连轻工业学院食品科学与生物工程系，大连１１６０３４）　鲁晓岩　

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北冬虫夏草俗称蛹虫草，是子囊菌纲麦角苗科　中昆虫病原真菌蛹草菌寄生于夜蛾科昆虫蛹所形成　的真菌子座与蛹体外壳共存的复合体。近年研究证　明［ｔｌ，虫草除了富含蛋白质、氨基酸、维生素及钙、铁、　锰、锌、硒等微量元素外，还含有虫草酸（Ｃｏｒｄｙｃｅ　ｃ　ａｃｉｄ）、虫草素（Ｃｏｒｄｙｒｃｅ－　ｎ）、虫草多糖和ＳＯＤ等生物　活性物质，具有扩张血管、镇静、抗菌、降血压等功　效。特别是其功效成份虫草多糖　具有抗肿檀、抗炎、　抗凝血、抗病毒、抗放射、降血糖、降血脂等活性。多　糖的检测，目前尚无一个统一的方法。多糖的检测方　法一般可分为二大类，一类是直接测定多糖本身．如　高教液相色谱法和酶法。另一类是利用杨酸法、斐林　法、苯酚一硫酸法、硫酸一恩酮法等　。前者需昂贵的　仪器、多糖纯品和特定的酶，操作步骤繁琐，在应用　中受到限制。后者方法简单、快速，无需多糖纯品和　高级仪器，因而被广泛采用。本研究采用活性炭脱　色、醇析、Ｓｅｖａｇ法［４１沉淀蛋白，用苯酚一硫酸法测定　其含量、并用葡萄糖作为标准。实验结果表明，方法　简单快速、灵敏度高、重现性较好。　１材料与方法　１．１仪器与试剂