色谱分析(中国药科大学)第4章第1-6节高效液相色谱分析

第五章现代色谱技术简介第一节高效毛细管电泳分析法（high performance capillary electrophoresis, HPCE）一、概述1、发展1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳——第一次的自由溶液电泳。

1981年，Jorgenson和Luckas，用75m内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——高效毛细管电泳分析法。

2、特点①仪器简单、易自动化②分析速度快、分离效率高③操作方便、消耗少④应用范围极广二、高效毛细管电泳理论基础1、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理电泳：带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度。

当带电离子以速度v在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。

电场力：E F qE = 阻力：F fv = 故：qE fv =q -离子所带的有效电荷；E -电场强度；v -离子在电场中的迁移速度；f -平动摩擦系数 ( 对于球形离子：6f πηγ=,γ-离子的表观液态动力学半径；η-介质的粘度)。

所以，迁移速度：6πqE qv E f γη== 淌度（mobility ）μ ：单位电场强度下的平均电泳速度。

6πv q E μγη== 淌度不同是电泳分离的基础。

2、 电渗现象与电渗流(1) 电渗流现象当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。

电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF ）。

(2)HPCE中电渗流的大小与方向电渗流的大小用电渗流速度V表示，取决于电渗淌度 和电场强度E。

电渗流电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质：①内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极；②内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极；③石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极；(3)HPCE中电渗流的流形电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）；液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远　陈　君　李　萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘　要　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。

采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。

对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

关键词　单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱　2001207204收稿;2002201209接受1　引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。

已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。

由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。

12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。

Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。

本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。

2　实验部分2.1　仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。

衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。

色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。

单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。

（供药学专业使用）一、说明1.该课程的目的和任务药物分析是药学领域不可缺少的重要组成成分，是我国药学专业中规定设置的一门主要专业课程。

药品不同于一般产品，是用于预防、治疗、诊断疾病、增强机体抵抗力的特殊商品。

为了保证用药的安全、合理、有效，在药品研制、生产、供应和临床使用过程中都应该保证和提高药品的质量，实现药品的全面质量控制。

药物分析主要是运用化学、物理化学或生物化学的方法和技术，研究化学药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，研究中药制剂和生化药物及其制剂的质量控制方法。

因此，药物分析是一门研究与发展药品质量控制的“方法学科”和“应用学科”。

为了全面控制药品的质量，药物分析工作应与药品的研发单位、生产部门紧密配合，积极开展药物及其制剂在生产过程中的质量控制，探求、发现药物生产的优良途径，优化工艺条件，促进生产；也应与药物的流通、供应机构密切协作，注意药物在贮藏过程中的质量与稳定性考察，以便采取科学合理的贮藏条件和管理方法，保证药品质量。

值得重视的是，药品质量的优劣和临床用药是否合理将直接影响临床征象和临床疗效。

所以，配合医疗需要，开展体内药物分析十分必要。

研究药物进入体内的变化，如药物在体内的吸收、分布、排泄和代谢转化过程，有利于更好的指导临床用药，减少药物的毒副作用。

因此，摆在药物分析学科和药物分析工作者面前的迫切任务，不再仅仅是静态的常规检验，而要深入到工艺流程、反应历程、生物体内代谢过程和综合评价的动态过程中。

2.课程的基本要求药物分析课程是在有机化学、分析化学、药物化学以及其他有关课程的基础上进行学习的。

学生学习药物分析，应该综合运用以往所学，始终围绕药品质量问题，研究控制药品质量的内在规律和方法，以及提高药品质量的有效途径。

因此既要围绕药典中药物及制剂的质量问题，也应对药物制造的原料、中间体等进行质量控制，并深入药物生产的工艺过程，贮藏过程和临床使用过程，全程的控制药品的质量。

中心问题是如何运用必要的技术与方法来进行药品的质量分析，研究探讨药物的化学结构，理化特性，存在状况与分析方法之间的关系。

高效液相色谱法测定红霉素血药浓度中国药科大学JournalofChinaPharmaceuticalUniversity1996,27(3):165～168l65高效液相色谱法测定红霉素血药浓度张钧寿任献忠kf'中国药科大学药剂学教研室'南京000.摘要3~Tt-mLc测定红霉索血药浓度的新方法.以峰面积定量,浓度与峰面积具有良好相关性(r=0.998),线性范围0.{～4.0/ml,最低检测限0.1g/IT11.浓度为0.{,】.6,3.2~tg/ml的回收率均大于93.4,三个浓度下测定的日内差及目阃差(aSD)分别为1.23.】.d9.】.67和2.18,3.26,4.17,与微生物法测定结果无显着差异..关键调兰c测定南径皂罐,鳓中国药典现用微生物法测定红霉素血药浓度,但此法灵敏度低,速度慢,操作麻烦,测定中药物活性会降解,受其它抗生索的影响,以及对无抗菌活性的前体药物不能进行测定等缺点.近年来,许多文献都对红霉索HPLC测定方法进行了报道.但由于红霉索结构中没有共轭基团,紫外吸收很弱,采用紫外检测器的分析方法,对于剂型中含量测定是适用的,而不能进行微克级的血药浓度测定.Stubbs选用200nm的低波长进行紫外测定,虽能达到血浓测定的灵敏度要求,但血浆杂质干扰很大,需高纯度的样品,虽进行了固相萃取,但基线仍不稳定0].荧光分析检测器设备要求高,并需复杂的柱前衍生化处理0.1_.较常用的是电化学检测法, 但为使系统稳定,需长时间开通系统,造成流动相和设备的浪费,损失增大].本文采用紫外检测器,参考UPSxxI紫外测定红霉索制剂含量的方法,对血浆提取的红霉素用碱开环,使其产生共轭双键,具有较强的紫外吸收],从而建立了一种新的简便,灵敏的HPLC分析方法.l药品与仪器红霉索(镇江医药工业研究所提供,批收穑日期199507—1l本校1992级硕士研究生号950411,效价930U/mg);乙腈(色谱纯,江苏淮阴塑料制品厂精细化工所);其它试剂均为分析纯.高效液相色谱柱:—BondapakoCl.柱(150mm×0.5mm1.D10m);岛津高效液相色谱仪:Lc_6A泵,SPD一6A紫外检测仪, C—R3A记录仪;H66MC超声波仪(无锡超声电子设备厂)}pHS一9U酸度计(杭州华光无线电厂).2实验条件2.1紫外吸收峰的确立称取红霉索28mg,用蒸馏水溶解并定容为i00ml,取5ml于25m1的容量瓶中,加八0.25mol/LNaOH溶液l5ml,蒸馏水定容,60℃水褡5min,冷却,用1m/LHsPO.溶液调pH7~8,进行紫外扫描得最大吸收波长为235.5土lrlm,见图1.2.2样品革取取空白血浆0.9ml,加入lOmJ刻度离心管中,加入药液0.1ml及饱和NazCOa溶液50山,混匀,用萃取溶媒5ml(乙醚一环已烷.3:2)涡旋混合萃取3mIn,3000r/mba离心5min,冰冻(一4C)0.5h后,移取溶中国药科大学27卷22O240260280300320朝0360^nmFLuvSpectrumL口】afte~㈣t]thaoH扑d…nl_恻byHsPO~媒,吹氮挥干,残渣加入0.15mol/LNaOH溶液0.4叫,轻轻摇动使溶解,60℃水浴5min后,冷却,加入1mol/LH3Po'溶液2O中和;3000r/mln离心沉淀3min,取上清液4Ol进样.2.3色谱条件流动相为0.2tool/L醋酸铵一水一乙腈(10:65:25),内含0.05m,~l/L磷酸,2mol/LNaOH调pH6.8;流速0.8ml/min;检测波长235Bm;灵敏度0.04.此条件下药物与血样中内源性干扰物达到完全分离,图2一A,2一B.F2.Typi~lchrumatul~ra.AlOllnkhumanpl~ma;B:ptz~msstandardconing3.2蛐mlEmFc:sampJ*fromasubject;D;samplet~tedbyH.-.SO,3测定方法建立3.1I作曲线的绘制精密稚取标准干燥红霉素2.5mg,溶于重蒸馏水250ml中,分别精密吸取0,1.0, 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0ml于25mI容量瓶中,用重蒸馏水稀释至刻度,即得供试药液, 同法操作,以浓度对峰面积回归得标准曲线:0—2.89×10A+7.1×l0一,=0.998(=5).线性范围0.4～4.0~g/ml,检测限为0.1~g/ml(以Ⅳ>2计)3.2革取回收率以0.4,1.6,3.2~g/ml三种浓度作萃取回收实验.取药液0.1ml,加水0.2ml,0.6 mol/LNaOH0.1ml混匀,同时取相应浓度的药液0.1ml,加入空白血浆0.9ml,同上述萃取后,加入0.15mol/LNaOH0.4ml,两液同时置60℃水浴5rain,冷却,加入lm.l/ LHaPO.20ul中和,离心,取40进样.以两液所得峰面积相比,得萃取回收率,结果如表1.Tab1.Analieali曲ofEmfromplⅢ(z4) Conc.(pg/m1)Reoovery(,;±g)()093.7士..521.69351士.2.3d329377士.93.993.3精密度试验以血浆配制0.4,1.6,3.2vg/ml三种浓度标准药液,冰冻保存,每陌4h取出熔化●●3期张钧寿等:高效液相色谱法测定红霉索血药浓度l67 药液,同工作曲线绘制项下操作,以峰面积代入标准曲线计算浓度,得日内差,第6天,第12天同法操作得日问差,结果见表2.Tab2.ArJalydCalprecisionforEmdeI时mjrmⅡ锄inplasma sample(_)3.4样品测定精密称取红霉素标准品25.0mg于250ml容量瓶中,加重蒸馏水稀释至刻度,即得标准溶液.置塑料离心管中冰冻保存.在洁净离心管中加入空白血浆0.9ml及标准溶液0.1rnl,即得标准样品.血样采自健康男性志曝者,在禁食一夜后,于清晨7时空腹,白开水250ml迭服500mg红霉素肠溶胶囊,按2.0,4.0.6.0,8.0,10.0h的时间点.从上胺静脉采血3m1.4000r/min离心l0mfn,分离血浆.将血样1ml和两份标准样品,按样品萃取项下操作,样品典型图谱如图2-C,以样品峰面积计算浓度,计算公式:(2一岱L)+(As2一以).一————————一血-,山,-,c分别为标准样品的峰面积和浓度;A为所测样品的峰面积.3.5与微生物测定法的相关性取上述不同时间点的血浆样品0.4ml供微生物法测定将高压蒸汽灭菌后的培养基于50U恒温,按0.1加入浊度为lO～lO.的藤黄八叠球菌液,混匀后每个玻璃培养皿中加培养基l5ml.冷却后,每一培养皿分别用打孔器等距离打6个孔取浓度分别为3.2,1.6,0.8,0.4)ag/m[的标准血清40,加入同一培养皿中的不同孔中,于37℃恒温箱中培养l8～24h.测量标准血清抑菌圈直径,以lgG对进行回归,得标准曲线一1.3l缸一0.17l,一0.983(n=5)测量样品血清抑菌圈直径,代人标准曲线,计算每一时间点的浓度.与相同时间点HPLC法测定的浓度相比较,数据见表3两组数据经检验,无显着性差异.对两组数据进行配对比较￡检验,所得结果表明两种方法无显着差异.Tab3.轴m叫嚣山detetm~HPLC肋dmicrobiolo2~Cal 4讨论1)差示紫外分光光度法测定制剂中红霉素含量的原理是利用红霉素加碱后在235.5nm处产生最大吸收峰,排除其它杂质干扰.据文献报道,红霉素在碱催化下引起开环反应,而在23613m产生强的紫外吸收].将碱开环后的药液.用1mol/LHaPOt溶液调pH7～8,所得样品在室温放置24h,A—s值基本不变,表明红霉素碱开环产物在pH7左右有稳定的紫外吸收.2)红霉素的胃酸破坏产物主要是红霉素糖胺和红霉糖,结构式中不含共轭双键],无强紫外吸收,对紫外测定无干扰[将红霉素用HSO.水懈后,以NaOH中和,再以0.15),ol/LNaOH加热开环后,在235.5/]m处测定几乎无紫外吸收,用H.PO调pH7.5后进样,色谱图如图2-D所示,表明酸降懈产物对测定无干扰.3)红霉素的其它代谢产物,脱水红霉素和6,9-半缩醛红霉素,与红霉糖胺的结构式相似.因而可以推断,经碱处理后不可能影响HPLC色谱峰的性质,但还需用加样法实验证实.其它代谢物,如一脱甲基红霉素,4一乙酰红霉素对色谱峰的影响尚有待进一步研究.4)血浆样品HPLC法测定结果与微生物法测定结果无显着性差异,肯定了该方法l68中国药科大学27卷的可靠性.研究结果表明,红霉素碱开环紫4外检测HPLC分析方法,具有灵敏度高,重现性好,操作简便,快速的特点,适应于血样浓度的测定.参考文献1K?KaneMP—Improvedhl卜p脚nliquidchromato- graphicmetbedf∞the"oferythromydrtin|o"dd∞a弘foetus.JⅢ%.1962.71(10):116062唐敢瑾,申五珍,吴秉芩等红霉素的高技渣相色谱法测定.药轴分析杂志,1985,15(4)l2233StuVbSC.gll3M,KanferJ.Determirmfi~nofery-7 thrccnydnini~'~ulfturinebyiflgh—petfotaumcvliquid dLmagfaphywithidtravioletdetection.J^mI,1985,74(1O)11268TaerngKY,WagnerJG.FluorometricdeterminationoferytkrominanderythromycJnpropionateinwhoJebloodorp]a~laandcorrelationofreetdtgw】IIImkr0Mdcas-my..1976.48(2)I348T蛐K.F]ucc~mettdcdetermination0ferythromyOnantierythromy~neth3miduc~aate】ns盯umbyahf窖b—perf优m撇Ik;aidr0ma岫,lli0p0n一~lurm',,on—gⅡ日mderiV∞【dexfca~onⅡl耐.JⅧ",1978.15l:337DuIILuGS.A==ay0ferythrom~cinfromhumansermbyhighp时for㈨∞liquidchr∞I¨Hph~withelectrocbeml一deteet]o~~.Jdm姆,1984,7(5){1023okmML,C[1JouWL.Amlly.is0fery~~ctninbJolo~l-~aifiukbbyh_咄_pe对orm如睥Uq1.ddchmmmo~aphywithidectroc~micald∞.JC/owm~p",1983.27lI91V,gpXX1.612.AHigh-performanceLiquidChromatographicMethod fortheDeterminationofErythromycineinPlasmaZhangJunshou,RenXianzhon&De~rtmergPtuzrnmc~ics,China∞疏,,Nmzjmg210009 AbstarctAhigh—performanceliquidchi'omatographicmethodforthedeterminationofery thromycineinplasmaisdescribed.Themethodcomprisestheextractionfromtheplasmasam ples,andthebase—catalyzeddecyclisation.Thereactionproductwasdetectedbyareversed—phaseHPLCsysteminstalledwithUV—measurementsat235.5士1nm.Thelinearrangeofconcentrationwas0.4to4.0pg/mlwiththecorrelationccefficient0.998.Theminimaldeterminableconcentration was0.1/m1.Atthethreeconcentrationsof0.4,1.6,3.2g/ml,therecoverieswereabove93.4%;theintra—andinter-dayvariationcoefficientwere2.18,3.26,4.17and1.23,1.49,1.67respcedv~y.TheresultofthemicrobiologicmethodagreedwiththatoftheHPLC method.Keywot~lsErythromycine:HPLCsystem。

高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量李会军 李 萍(中国药科大学生药学教研室 南京 210038)摘要 目的:建立酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量测定方法,为该药材提供质量控制标准。

方法:应用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPL C-EL SD),Allspere ODS-2(250mm 4 6mm ,5 m)色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(70 30 1)为流动相,测定了酸枣仁中酸枣仁皂苷A 及B 的含量。

结果:分析了11批商品药材。

酸枣仁皂苷A 及B 的平均回收率分别为92 4%(RSD =3 8%)和91 8%(RSD =3 9%)。

结论:方法快速简便,重现性良好,可用于酸枣仁药材的质量控制。

关键词 酸枣仁 高效液相色谱法 蒸发光散射检测器酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziz ip hus j uj uba var sp inosa (Bunge)H u ex H. F.Chou 的干燥成熟种子,具有养心安神的功效,是较为常用的镇静催眠中药。

酸枣仁皂苷A 及B 为其镇静催眠的有效成分之一[1],含量测定方法报道的有一阶导数光谱法[2]及薄层扫描法[3],本文首次采用高效液相色谱法利用蒸发光散射检测器(ELSD)对酸枣仁皂苷A 及B 进行了含量测定研究。

实验结果表明该法灵敏度、稳定性和重现性均能满足要求,是一种检测皂苷类成分的有效方法。

1 仪器与试剂日本岛津LC -10AD 液相色谱仪;法国SEDEX55型蒸发光散射检测器;H S 色谱数据工作站(杭州英谱科技开发有限公司);各地酸枣仁药材样品(见表1)均经作者鉴定;酸枣仁皂苷A 及B 对照品由中国药品生物制品检定所提供,纯度 98 5%;试验用水为上海获特满公司产纯净水;甲醇为淮阴化学试剂厂产色谱纯;其它试剂均为南京化学试剂厂产分析纯。

2 色谱及检测条件色谱柱:Allspere ODS-2(250mm 4 6mm ,5 m );预柱:Pellicular C 18(7 5mm 4 6mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(70 30 1);流速:1mL min-1。

药物分析知到章节测试答案智慧树2023年最新中国药科大学第一章测试1.在《中国药典》中，通用的测定方法收载在（）。

参考答案:附录部分2.根据药品质量标准规定，评价一个药物的质量采用（）。

参考答案:鉴别、检查、质量测定3.美国国家处方集收载的内容为（）。

参考答案:药用辅料的标准4.药品质量标准的性状项下主要记叙药物的（）。

参考答案:物理常数;溶解度;外观、臭、味5.可以在药物分析工作中参阅的国外药典有（）。

参考答案:EP;JP;USP;BP第二章测试1.药品检验工作的基本顺序为（）。

参考答案:取样→检验→留样→报告2.《中国药典》中的“精密称定”指称取重量应准确至所取重量的（）。

参考答案:千分之一3.药品贮藏条件的凉暗处是指（）。

参考答案:避光并不超过20℃4.取样的要求是（）。

参考答案:;代表性;真实性5.关于恒重的定义及有关规定正确的是（）。

参考答案:炽灼至恒重的第二次及以后各次称重应在继续炽灼30分钟后进行;干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行;连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量第三章测试1.测定易粉碎的固体药物的熔点，《中国药典》2010年版采用的方法是（）。

参考答案:第一法2.旋光度是（）。

参考答案:偏振光旋转的角度3.光的吸收定律公式A = E∙C∙L中，E 为（）。

参考答案:4.影响药物旋光度的因素有（）。

参考答案:溶液浓度;化学结构;测定温度;光路长度;光源5.测定吸收系数时，采用的溶剂应（）。

参考答案:测定波长附近无干扰吸收峰;化学惰性第四章测试1.硫色素反应可以用于鉴别（）。

参考答案:维生素B12.紫外光谱的纵坐标范围一般是（）。

参考答案:0～13.下面关于中国药典所收载标准红外光谱图的说法，错误的是（）。

参考答案:以分辨率为1 cm-1条件绘制4.中药定性鉴别中使用较多的色谱法是（）。

参考答案:高效液相色谱法;薄层色谱法5.关于薄层色谱法，叙述正确的是（）。

高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用植物丁颖班何健伟 200930700207摘要 :对近年来高效液相色谱法分离和测定蛋白质技术作一综述，比较详细地介绍了各种HPLC模式、检测器,以及联用技术的应用情况。

对今后高效液相色谱法在蛋白质研究方面的作用作一展望。

关键词：高效液相色谱检测模式蛋白质分离测定联用技术前言：蛋白质是生命有机体的主要成分,在生命体生长发育的各个阶段都起着重要作用。

所以蛋白质的分离和检测一直是人们研究的热点。

然而蛋白质是一种长链高分子化合物,相对分子量大,在溶液中的扩散系数小、黏度大、易变性,这增加了蛋白质分离、分析的困难。

目前，高效液相色谱法广泛用于蛋白质的分离和检测。

高效液相色谱(HPLC)具有分析速度快、分离效能高, 检测灵敏度高样品适用范围广等优点因此在药学研究和生物医学测定中都得到了广泛的应用。

在高效液相色谱技术中,分配色谱、亲和色谱、离子交换色谱和凝胶排阻色谱都能够用于蛋白质的分离与鉴定。

本文对这几种色谱作一简要介绍。

1 HPLC基本原理HPLC由液体输送系统、进样系统、色谱柱和检测系统 4部分所组成。

输液泵将流动相以稳定的流速 (或压力)输送至分析体系 ,在进入色谱柱之前通过进样器将样品导人 ,流动相将样品带人色谱柱 ,在色谱柱中各组分依照分配系数、吸附力大小、带电性质 ,乃至分子量大小的差异而被分离 ,并依次随流动相流至检测器 ,将检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。

随着HPLC技术的日趋成熟,它已成为分离和检测蛋白质的重要工具。

2 蛋白质的HPLC分离模式物理、化学功能等特征差异是蛋白质分离、检测的基础。

根据蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性功能等特性以及蛋白质的来源、实验要求等可以选择不同的模式来分离目标蛋白质2.1 反相高效液相色谱 (RP-一HPLC)RP_HPLC在HPLC各种模式中的应用最为广泛,但目前比较流行的色谱柱在蛋白质的检测方面并不多见。

第一章测试1.在高效液相色谱中可以忽略范式方程的哪一项A:涡流扩散项B:纵向扩散项C:传质阻力项D:所有选项都不对答案:B2.色谱法最早用于下列哪种物质的分离A:药物B:植物色素植物色素 B、胡萝卜素 C、食品 D、药品植物色素 B、胡萝卜素C、食品 D、药品植物色素 B、胡萝卜素 C、食品 D、药品植物色素C:食品D:胡萝卜素胡萝卜素答案:B3.以下哪本期刊的主题不涉及色谱领域A:Journal of Separation ScienceB:AtherosclerosisC:Journal of Chromatography AD:Journal of Chromatographic Science答案:B4.色谱法分离混合物的可能性决定于试样混合物在固定相中的差别的是A:沸点差B:分配系数C:吸光度D:温度差答案:B5.在气-液色谱系统中，被分离组分与固定液分子的类型越相似，它们之间A:作用力越小，保留值越小B:作用力越大，保留值越小C:作用力越小，保留值越大D:作用力越大，保留值越大答案:D6.色谱基本理论中理论塔板数反映了A:柱的效能 C．保留值 D．分配系数柱的效能B:分离度C:保留值D:分配系数答案:A7.下列有关色谱特点说法正确的是A:灵敏度高B:定性能力强C:分析效率高D:自动化程度高答案:ACD8.以下色谱分析法中属于定性指标参数的是A:分配系数B:相对保留时间C:保留指数D:保留时间答案:BCD9.色谱法在以下哪种应用中不具有特殊优势A:化合物的定性鉴别B:化合物的结构鉴定C:化合物的理化性质测定D:混合物的分离答案:ABC10.以下对色谱分析法描述正确的是A:色谱法通常利用某一特定的色谱系统（如TLC，HPLC或GC系统等）进行分离分析B:分配系数的不同使不同组分在色谱中得到分离C:色谱分析法是一种物理或物理化学的分离分析方法D:色谱分析法的定性能力高于化学法和光谱法答案:ABC第二章测试1.气相色谱仪主要包括：A:分离和温控系统B:进样系统C:气源系统D:检测系统答案:ABCD2.影响线性分流的因素包括：A:气化室温度B:柱温C:进样量D:分流比答案:ACD3.影响电子捕获检测器灵敏度的因素正确的是：A:载气与尾吹气的流速B:检测器的温度C:载气需经过脱氧棒脱氧、分子筛脱水后，才能导入GC仪器D:与进样量多少无关答案:ABC4.下列关于顶空气相色谱法特点说法正确的是A:采用气体进样，分析速度快，灵敏度低B:适用于低沸点化合物C:分析过程中无需有机溶剂提取，操作简便D:只取气相部分进行分析，大大减小了样品基质的影响答案:BCD5.通过化学反应的方法将被测组分转变成另一种化合物（衍生物），再用气相色谱法分析的方法称为衍生化气相色谱法A:错B:对答案:B6.电子捕获检测器属于质量型检测器A:对B:错答案:B7.气相色谱法中，氢气和空气的流速对氢火焰离子化检测器的灵敏度和线性没有影响。

中国药科大学《天然药物化学》习题及答案第一章总论一、选择题(选择一个确切的答案)1、高效液相色谱分离效果好的一个主要原因是(A):A、压力高B、吸附剂的颗粒小C、流速快D、有自动记录2、蛋白质等高分子化合物在水中形成(B):A、真溶液B、胶体溶液C、悬浊液D、乳状液3、纸上分配色谱,固定相是(B)A、纤维素B、滤纸所含的水C、展开剂中极性较大的溶剂D、醇羟基4、利用较少溶剂提取有效成分,提取的较为完全的方法是(A)A、连续回流法B、加热回流法C、透析法D、浸渍法5、某化合物用氧仿在缓冲纸色谱上展开,其R f值随pH增大而减小这说明它可能是(A)A、酸性化合物B、碱性化合物C、中性化合物D、酸碱两性化合物6、离子交换色谱法,适用于下列(B)类化合物的分离A、萜类B、生物碱C、淀粉D、甾体类7、碱性氧化铝色谱通常用于(B)的分离,硅胶色谱一般不适合于分离(B)A2B3B4A5A6B7BBA、香豆素类化合物B、生物碱类化合物C、酸性化合物D、酯类化合物二、判断题Y1.两个化合物的混合熔点一定低于这两个化合物本身各自的熔点。

Y2.糖、蛋白质、脂质、核酸等为植物机体生命活动不可缺少的物质,因此称之为一次代谢产物。

Y3.利用13C-NMR的门控去偶谱,可以测定13C-1H的偶合数。

极性4.凝胶色谱的原理是根据被分离分子含有羟基数目的不同.达到分离,而不是根据分子量的差别。

√2√3√4х三、用适当的物理化学方法区别下列化合物1.用聚酰胺柱色谱分离下述化合物,以不同浓度的甲醇进行洗脱,其出柱先后顺序为()→()→()→()C ABD四、回答问题1、将下列溶剂按亲水性的强弱顺序排列:1乙醇、6环己烷、2丙酮、4氯仿、5乙醚、3乙酸乙酯乙醇>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯仿>环己烷2、将下列溶剂以沸点高低顺序排列:甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸、正丁醇、甲苯、苯、吡啶、氯仿、乙醚、二氯甲烷、正戊醇3、请将下列溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱到强进行排序A B CDA、水B、甲醇C、氢氧化钠水溶液D、甲酸铵4、分离天然产物常用的吸附剂有哪些,各有何特点?五、解释下列名词二次代谢产物、HPLC、DCCC、F AB－MS、HR－MS六、填空某植物水提液含中性、酸性、碱性、两性化合物若干。

高效液相色谱法测定米力农注射液遗传毒性杂质含量摘要：目的：建立高效液相法测定米力农注射液遗传毒性杂质含量方法。

方法：色谱柱为十八烷基键合硅胶，规格为25cm×0.46cm, 5μm，以硼酸缓冲液为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C，进行梯度洗脱；柱温35℃，流速1.0mL/min；检测波长为210nm；结果：专属性考察结果显示分离度较好，杂质Ⅲ线性浓度范围为0.010～2.074µg/ml；杂质Ⅳ的线性浓度范围为0.010～2.054µg/ml；准确度、精密度及耐用性良好。

结论：本发明检测方法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测米力农注射液遗传毒性杂质含量，有利于提高米力农注射液的产品质量，提高患者用药安全性。

关键词：高效液相法、米力农、米力农注射液；遗传毒性杂质、准确度。

心力衰竭已经日益成为心血管病中最常见、对患者危害最大的疾病，是迄今为止唯一发病率仍在继续增长的心血管疾病。

米力农主要是用于治疗充血性心力衰竭、肺动脉高压、心脏术后低心排综合症及心肌病。

目前已在临床得到了广泛的应用。

米力农（Milrinone，甲氰吡酮，米力酮）是人工合成的第2代PDEⅢ抑制药，是氨力农的二吡啶衍生物，化学名为1，6-二氢-2-甲基-6-氧基-(3，4-二吡啶)-5-甲腈，作为一种非儿茶酚胺，非洋地黄类的正性肌力药，在治疗充血性心力衰竭（CHF）和扩血管等方面发挥了越来越重要的作用。

在包括美国在内的欧美多个国家临床验证，静脉注射米力农安全有效，并已被广泛用于改善心力衰竭病人的心脏功能。

根据米力农工艺路线，在制备中间体过程中会产生工艺副产物遗传毒性杂质Ⅲ（4-甲基吡啶氮氧化物）、杂质Ⅳ（米力农氮氧化物）；终产品米力农注射液在生产和贮存过程中也会产生遗传毒性杂质Ⅲ、Ⅳ。

根据米力农注射液用法用量，成人的总剂量不应超过1.13mg/kg/天，按成人正常体重70公斤计，最大日剂量应不超过79.1mg。