细胞的原代培养(Cell primary culture)

跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳
定，有时难以和其他细胞相区别。
4、多型细胞型：
有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定 的形态，统归于此类。
背景资料
悬浮型：
• 胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这 类细胞容易大量繁殖。 • 见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及 白血病细胞。
背景资料
状况。
实验原理
• 来自机体的细胞、组织、器官；
• 类似体内的体外环境；
• 人工培养条件下生存、生长、繁殖。
实验用品
主要仪器：
纯水仪；离心机；CO2培养箱； 电热干燥箱；高压蒸汽消毒锅；过滤器 及0.22 m滤膜； 超净台；眼科剪、镊；培养瓶；青霉素 瓶；平皿；吸管；移液管；血球计数板
实验用品
实验步骤
三、植块培养法培养鸡表皮细胞
从鸡胚体表撕取表皮，剪成组织块进行培养。 具体实验操作过程与心肌细胞的培养相同。
注意事项
☞ 严格无菌操作。 ☞ 植块培养时注意黏附，加液量不 可过多或过少，过多，会漂浮；
过少，会干死。
实验步骤
四、观察培养结果
• 培养2－3天，细胞从植块向外迁移，随着培养时
间延长，在植块周围形成一圈细胞——“晕”，称 之为生长晕(growth hallow)。
贴附型
培养细胞的 生长类型 悬浮型
游走型细胞 多形型细胞
背景资料
1、成纤维细胞型：
• 胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形
核，胞质突起，生长时呈放射状。
• 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起 源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管
内皮等常呈本型状态。
• 培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为
实验 十一
细胞的原代培养
(Cell primary culture)
背景资料
原代培养(primary culture)：
从生物体取材进行培养，中途不分割培
养物、不更换培养物的生长器皿。
细胞的生长条件：
① 无菌 ② 温度 ③ pH ④ 渗透压 ⑤ 氧气 ⑥ 营养及生长调节因子
背景资料
成纤维细胞型细胞 上皮型细胞
淋巴细胞的培养 (Lymphocyte culture)
实验目的
• 学习悬浮细胞的培养方法
• 细胞活力检查
• 悬浮细胞的形态特征观察
实验原理
• 外周血淋巴细胞表面具有有丝分裂原受体， 当在培养液中加入有丝分裂原PHA时，可与 淋巴细胞表面的相应受体结合使其激活，从 而促进淋巴细胞增殖。
m: 稀释倍数
实验报告
1.简述体外培养细胞的形态特征。
2.淋巴细胞分离液的作用？ 3.细胞培养获得成功的关键要素是什么？ 4.实验结果：培养后淋巴细胞增加的数量、
提高百分率。
Thanks !
实验试剂：
（1）RPMI 1640 培养液 （2） 小牛血清 （3）肝素钠（180 IU／ml） （4） 青、链霉素 （5） PHA（2 mg/ml） （6） Hank’s液
（7） 5％NaHCO3
（9） 2％碘酒棉球
（8） 1N 盐酸
（10） 75％酒精棉球
（11） 1%台盼蓝
实验步骤
（1） 配培养液：
成纤维细胞。
背景资料
2、上皮型细胞：
• 细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细 胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，
处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。
• 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生
物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮
型形态。
背景资料
3、游走细胞型：
呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活
RPMI 1640基础培养液 80％
小牛血清
肝素（180 IU／ml） PHA（2 mg/ ml） 青、链霉素
20％
3.6 IU/ml 40 g/ml 100 IU/ml 100 g/ml
调pH至6.8－7.2，0.22 m滤膜过滤除菌。
实验步骤
（2）采血：肝素抗凝，静脉采血。 （3）分离淋巴细胞 （4）洗涤淋巴细胞 （5）细胞计数、细胞活力检查 （6）稀释培养
实验用品
主要仪器：
纯水仪、离心机、CO2培养箱、 电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、过滤器 及0.22 m滤膜、 超净台、培养瓶、离心管、吸管、移液 管、血球计数板、一次性注射器
实验用品
实验材料：
（肝素）抗凝血

注射器中吸入0.1 ml 180 IU／ml肝素钠溶
液，鸡翅下静脉采血5 ml。
实验用品
原代细胞培养的一般方法:
• 植块培养法(explant culture) • 分离(散)细胞培养法
(dissociated cell culture)
一、心肌细胞、表皮细胞的培养
二、淋巴细胞的培养
心肌细胞、表皮细胞的原代培养
实验目的
• 了解细胞体外培养的原理、基本方 法，掌握无菌操作方法及注意事项。 • 学习观察体外培养细胞的形态及生长
（5） 洗手和着装
（6） 进入无菌室
实验步骤
二、植块培养法培养鸡心肌细胞
（1） 配培养液：
含抗生素的M199基础培养液 小牛血清 9 ml 1 ml
过滤除菌。
实验步骤
（2） 获取心脏：
① ② ③ 消毒鸡蛋 取出鸡胚，Hank’s液洗涤。 取出心脏，Hank’s液清洗。
实验步骤
（3） 处理心脏
① 漂洗心脏，剪成约1 mm3大小的小块。 ② 将组织块排放在培养皿中，贴壁 ③ 培养
实源自文库材料：
7－12日龄的鸡胚
实验用品
实验试剂：
（1） M199 培养液
（2） 小牛血清
（3） 青、链霉素 （4 ） Hank’s液 （5） 5％NaHCO3 （6） 2％碘酒 （7） 75％酒精
实验步骤
一、培养前的准备工作
（1） 清洗与消毒 （2） 配制溶液 （3） 预热溶液 （4） 紫外线消毒
实验步骤
（7） 结果：培养3天后观察结果。
细胞计数：淋巴细胞增殖情况。
注意事项
1. 过滤消毒
2. 淋巴细胞的分离
3. 洗涤：Hank’s 液、RPMI 1640培养液4 ml
各洗涤一次。
4. 计数：浓度3-5×105个/ml，1 ml /10 ml瓶。
5.培养
原细胞悬液细胞数/ml=n/4×10 000×m n: 4大格中的细胞总数