大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化为脂肪细胞的实验研究

时珍国医国药２００８年第１９卷第３期　

丹酚酸Ｂ体外诱导骨髓间充质　

干细胞向心肌样细胞分化的实验研究　

徐秀梅，郭茂娟，赵旭，范英昌　

（天津中医药大学，天津３００１９３）　

摘要：目的观察丹酚酸Ｂ（ＳａｌＢ）干预体外诱导骨髓间充质干细胞（ＭＳＣｓ）分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分　

离培养及鉴定大鼠ＭＳＣｓ，对其进行分组诱导：ＳａｌＢ组（终浓度为２５０　ｇ／Ｌ）、５一氮胞苷组（终浓度为１０　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ）、ＳａｌＢ联　

合５一ａｚａ组（终浓度分别为２５０　ｇ／Ｌ与１０　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ），诱导２４　ｈ后继续培养４周，观察其形态学变化，免疫细胞化学法鉴　

定心肌特异性肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）的表达，实时荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ法检测心肌早期基因ＮＫＸ２．５、ＧＡＴＡ一４、Ｄｅｓｍｉｎ和ａ　

—ａｃｔｉｎ　ｍＲＮＡ的表达。结果诱导后的ＭＳＣｓ体积增大，增殖减慢，并出现肌管样结构；免疫细胞化学结果显示诱导后的　

ＭＳＣｓ表达心肌特异性蛋白ｃＴｎＴ，与５一ａｚａ组相比，ＳａｌＢ组ｃＴｎＴ表达较低，ＳａｌＢ联合５一ａｚａ组ｃＴｎＴ表达升高；实时荧光　

定量ＲＴ—ＰＣＲ结果显示各组均表达心肌分化早期基因，ＳａｌＢ联合５一ａｚａ组诱导后的ＭＳＣｓ的心肌早期分化基因表达明　

显高于其他两组。结论ＳａｌＢ可在体外诱导大鼠ＭＳＣｓ定向分化为心肌样细胞，其与５一ａｚａ联合诱导可明显提高ＭＳＣｓ　

向心肌细胞分化的能力。　

关键词：丹酚酸Ｂ；　骨髓间充质干细胞；　体外诱导；　免疫细胞化学；　实时荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ　

中图分类号：Ｒ９７２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８—０８０５（２００８）０３－０５７４－０３　

骨髓间充质干细胞（ＭＳＣｓ）系自体来源，取材容易，扩增能力ＡＢ１７３００实时定量ＰＣＲ仪。　

强，是一种体内外均有极强的分化潜能的干细胞…。１９９５年，　

Ｗａｋｉｔａｎｉｓ等　发现体外分离培养的大鼠ＭＳＣｓ体外可波５一ａｚａ　

诱导分化为心肌样细胞。但５一ａｚａ作为抗肿瘤药物具有一定的　

骨髓和脂肪来源的间充质干细胞治疗2型糖尿病的疗效比较

臧丽;谢宗燕;刘杰杰;郝好杰;母义明

【摘 要】目的 比较大鼠骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在2型糖尿病中的疗效.方法 30只成模2型糖尿病大鼠随机分为3组:糖尿病组(T2DM,n=10)、骨髓间充质干细胞治疗组(BMSC,n=10)及脂肪间充质干细胞治疗组(ADSC,n=10),同期正常大鼠(n=10)作为对照组.干细胞分别从正常大鼠骨髓及腹股沟脂肪组织分离培养获得.制模后和细胞注射后每日检测各组血糖.细胞注射后第7天行空腹糖耐量和胰岛素敏感性实验.胰腺组织行胰岛素/胰高血糖素免疫荧光染色.结果 与T2DM组比较,干细胞注射7d后2型糖尿病大鼠的随机血糖持续缓慢下降,糖耐量及胰岛素敏感性均得以改善,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)降低,胰岛内β细胞数量增加(P＜0.05),但是两种类型的间充质干细胞的疗效并无显著差异.结论 骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在2型糖尿病大鼠中的疗效相当,脂肪间充质干细胞可作为2型糖尿病治疗的理想细胞.

【期刊名称】《解放军医学杂志》

【年(卷),期】2016(041)007

【总页数】5页(P534-538)

【关键词】间质干细胞;糖尿病;胰岛素抗药性;胰岛素分泌细胞

【作 者】臧丽;谢宗燕;刘杰杰;郝好杰;母义明

【作者单位】100853 北京 解放军总医院内分泌科;100853 北京 解放军总医院内分泌科;100853 北京 解放军总医院基础医学所;100853 北京 解放军总医院基础医学所;100853 北京 解放军总医院内分泌科 【正文语种】中 文

【中图分类】R587.1

间充质干细胞(MSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，其来源广泛，可以从骨髓、脂肪及脐带等[1]多种组织分离获得，具有低免疫原性[2]，能够分泌大量活性因子并参与机体的免疫调节，在多种疾病模型中发挥治疗效应，如糖尿病[3-5]、心肌梗死[6]、急性肾损伤[7]。尽管来源于骨髓的MSCs已被证实在2型糖尿病中发挥降糖及改善胰岛素抵抗的效应[3,8]，但骨髓的获取会带来疼痛，甚至需要全麻或椎管内麻醉，并且获得的细胞数量有限，患者难以接受，一定程度上限制了在临床的应用。而脂肪来源的MSCs具有获取方便、来源丰富等优点，成为治疗2型糖尿病的另一选择。因此，本实验旨在比较骨髓及脂肪来源的MSCs在2型糖尿病中的疗效，探讨脂肪来源MSCs能否成为治疗2型糖尿病的理想细胞。

益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化张运克1,车志英2(1.河南中医学院第一附属医院,河南郑州450000;2.河南中医学院,河南郑州450008)摘　要:目的:探讨益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。方法:采用密度梯度离心法分离获取SD大鼠骨髓单个核细胞层,将细胞经过传代培养使细胞得到扩增和纯化,用流式细胞仪鉴别。用益气活血方联合二甲亚砜(DMSO)、丁羟茴醚(BHA)和β-巯基乙醇(BME)等对碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导的MSCs诱导向神经细胞定向分化。用免疫细胞化学方法检测诱导1h、3h后巢蛋白(nestin)的表达,诱导5h后神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,鉴定分化细胞的类型,并计数MSCs分化的各种细胞的阳性率。结果:益气活血方体外诱导MSCs1h、3h后分化为nestin免疫细胞阳性率为45.5%±3.4%和38.3%±1.8%,诱导5h后NSE和GFAP免疫细胞阳性率为82.3%±2.4%、12.1%±1.6%,与对照组相比有极显著性差异(P<0.01)。结论:成年大鼠骨髓MSCs可以在体外培养扩增,益气活血方有体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。关键词:大鼠;骨髓间充质干细胞;巢蛋白;神经元特异性烯醇化酶;胶质纤维酸性蛋白;益气活血方中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1002-2392(2008)01-0022-04

基金项目:本课题得到河南省自然基金(0611040400)、河南省高校杰出科研人才创新工程项目(2007KYCX007)的资助。收稿日期:2007-09-28 修回日期:2007-12-15作者简介:张运克(1966-),男,副主任医师,副教授,医学博士,中国中医科学院博士后,硕士研究生导师,从事中医药防治神经系统疾病的临床与实验研究。 骨髓间充质干细胞((MesenchymalStemCellS,MSCs)属多能干细胞,具有高度自我更新能力和多向分化潜能,体内移植后不良反应较弱,是细胞替代治疗的理想种子细胞,MSCs能够穿越血脑屏障,促进大小胶质细胞的形成[1],其向神经细胞分化潜能为神经系统损伤后的修复提供了一个新的干细胞来源。中药及提取物如黄芪、龟板、丹参等可以诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞等诱导分化,但关于中药复方诱导分化的报道较少。笔者既往的研究证明了益气活血方补阳还五汤具有抑制脑缺血及再灌注模型细胞凋亡、抗自由基等作用[2,3],但关于本方对干细胞分化的影响,尚无相关的报道。本实验研究旨在探讨益气活血方补阳还五汤对骨髓间充质干细胞向神经细胞进行体外诱导分化,为中药复方联合干细胞移植治疗神经系统疾病的临床应用奠定实验基础。1　材料1.1　实验动物　清洁级SD大鼠,1～2个月龄,雌雄各半,体重100g～150g,共20只,购自河南省实验动物中心。1.2　药物与试剂　DMEM培养基,GibcoBRL公司提供;胎牛血清,Hyclone公司提供;淋巴细胞分离液,上海恒信公司提供;胰蛋白酶,华美公司提供;Rabit-Anti-Ratnestin,北京中山公司提供;Rabit-Anti-RatNSE,北京中山公司提供;Rattus-anti-RatGFAP,Neo2Marker公司提供;Histostain-SP试剂盒,北京中山公司提供;BHA、DMSO、BME,Sigma公司提供。实验药物由本院制剂室生产,选用当归60g、桃仁30g,川芎30g加水720ml,提取挥发油,备用。药渣及提取液加入黄芪1200g、赤芍60g、地龙30g、红花30g,再加入920ml水,煎煮1h,滤过,药渣再加入8640ml水,煎煮1h,滤过,合并两次煎液,浓缩至600ml,加入挥发油及吐温-803ml,混匀,装瓶进行高压高温消毒。每毫升相当于生药2.4g。1.3　主要实验设备和仪器　净化工作台,苏州净化集团安泰公司生产;MCO175CO2培养箱,日本SANYO生产;OLYMPUSIX-71倒置显微镜,日本OLYMPUS生产;荧光显微镜,日本OLYMPUS生产;双重纯水蒸馏器,上海亚荣生化仪器厂生产。　方法　获取骨髓　%水合氯醛(3Π)腹腔注射22中 医 药 学 报ActaChineseMedicineandPharmacology 2008年第36卷第1期Vol136,No11,2008

第１８卷第６期　

２００８年１１月　江苏大学学报（医学版）　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）　Ｖｏｌ＿ｌ８　Ｎｏ．６　

ＮＯＶ．２０ｏ８　

褪黑激素体外定向诱导骨髓间充质干细胞的研究　

何伟，沈铁城，狄荣科，杨　勇，张志坚　

（江苏大学附属医院骨科，江苏镇江２１２００１）　

［摘要］　目的：探讨褪黑激素（ｍｅｌａｔｏｎｉｎ，ＭＴ）体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（ｍａｒｒｏｗ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ，　

ＭＳＣｓ）不同时段向神经细胞分化的情况。方法：采用细胞培养技术分离培养和纯化大鼠ＭＳＣｓ，以ＭＴ为诱导剂诱导　

大鼠ＭＳＣｓ向神经细胞分化。分别在诱导后３，７，１０，１４　ｄ以免疫荧光法测定神经千细胞特异性标志（ｎｅｓｔｉｎ）、神经元　

细胞特异性标志（ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ，ＮＦ）和星形胶质细胞特异性标志（ＧＦＡＰ）的表达。结果：ＭＴ诱导分化３　ｄ，部分细胞　

胞体收缩成三角形，有些成为简单的双极或多极细胞。诱导３　ｄ细胞开始表达ｎｅｓｔｉｎ，７～１４　ｄ表达ｎｅｓｔｉｎ和ＮＦ，细胞　

不表达ＧＦＡＰ。结论：ＭＴ可诱导大鼠ＭＳＣｓ分化为神经细胞。　

［关键词］骨髓间充质干细胞；褪黑激素；神经细胞　

［中图分类号］　Ｒ３２９．２　［文献标志码］　Ａ　［文章编号］　１６７１—７７８３（２００８）０６—０５０１—０２　

／ｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍｅｌａｔｏｎｉｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｒｒｏｗ　

ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　

ＨＥ　Ｗｅｉ，ＳＨＥＮ　Ｔｉｅ－ｃｈｅｎｇ，ＤＩ舶　一ｋｅ，ＹＡＮＧ　ｙ０　，ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉ－ｊｉａｎ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ　Ｊｉａｎｇｓｕ　２１２００１，Ｃｈｉｎａ）