人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化

１２３２　Ｉ＿固天容医学２０１　１午８月第２０卷第８期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｉｎ＇ｈａｌ　ｏｆ　Ａｅｓｔｂｅｔｉ￣・Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｕｇ．２０１　１　ｖ　Ｊ１．２０．　８　・基础研究・　・论著・　人脂肪干细胞的体外培养鉴定及分化特性　赵建辉　，李龙　，杨阳　，易成刚　，刁建升・，夏炜　，刘蓓　，郭树忠ｔ　（１．第四军医大学西京医院全军整形外科研究所　陕西西安７１　００３２；２．第四军医大学口腔医院口腔颌面外科）　［摘要］目的：在体外从脂肪块中分离出脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａ１　ｃｅｌ１　ｓ，ＡＳＣｓ），对其进行形态观察、干细　胞鉴定、增殖和分化能力检测。方法：将腹部取皮术的皮下脂肪利用胶原酶消化法，进行体外分离培养，取第３代的细胞进行细　胞爬片ＨＥ染色、流式鉴定、ＭＴＴ、细胞周期检测等，利用成脂和成骨培养液诱导，油红０和茜素红染色鉴定诱导结果。结果：原代　培养第１次换液时细胞多呈多角形和短梭形，第３代ＡＳＣｓ细胞爬片ＨＥ染色显示形态多为长梭形，呈漩涡状生长；流式鉴定显　示：ＣＤ２９　，ＣＤ３１一，ＣＤ３４，ＣＤ４４　，ＣＤ４　５一，ＣＤ４９　，ＣＤ１　０６一，ＣＤ１　３３一；ＭＴＴ显示ＡＳＣ　ｓ生长增殖活性强；细胞周期检测结果显示：Ｇ１＝８６．　８％，６２＝８．７７％；成脂诱导后油红０染色阳性，对照组为阴性；成骨诱导后茜素红染色阳性，对照组为阴性。结论：人ＡＳＣ　ｓ具有贴壁　生长、多向分化以及干细胞表型等特征，且生长增殖活性强，是一种很有应用前景的间充质干细胞。　［关键词］脂肪干细胞；培养；鉴定；分化　［中图分类号］Ｑ８１　３．１　［文献标识码］Ａ［文章编号］１　００８－６４　５５（２０１１）０８—１２　３２一Ｏ６　Ｅｘ　ｖｉｖｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｒＷｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ＺＨＡＯ　Ｊｉａｎ—ｈｕｉ’，ＬＩ　Ｌｏｎｇ￣，ＹＡＮＹ　Ｙａｎｇ’，ＹＩ　Ｃｈｅｎｇ—ｇａｎｇ’，ＤＩＡＯ　Ｊｉａｎ－ｓｈｅｎｇ’，ＸｌＡ　Ｗｅｉ’，ＬＩＵ　Ｂｅｉ’，ＧＵＯ　Ｓｈｕ—ｚｈｏｎｇ　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｓｔｉｃ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｘｉｊｉｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ　ａｎ　７１００３２，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ；２　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｒａｌ　ａｎｄ　Ｍａｘｉｌｌｏｆａｃｉａｌ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ＣＤ　ｍａｒｋｅｒ　ａｎｄ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａＩ　ｃｅｌｌｓ（ＡＳＣｓ）ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｉｎｔａｃｔ　ｆａｔ　ｅｘ　ｖｉｖｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＡＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｉｎｔａｃｔ　ｆａｔ　ｏｆ　ａｂｄｏｍｅｎ　ｈａｒｖｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｓｋｉｎ　ｇｒａｆｔｓ．Ｔｈｅ　３ｒｄ　ｐａｓｓａｇｅ　ＡＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｄｏ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ：ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＭＴＴ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｂｅｓｉｄｅｓ．ｐａｓｓａｇｅ　３　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｉｎｔｏ　ｌｉｐｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏｃｙｔｅｓ　ＯｉＩ　ｒｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｅｘａｍｉｎｅ　ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　Ａｌｉｚａｒｉｎ　ｒｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｃＯ　ｅｘａｍｉｎｅ　ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｐｒｉｍａｒｙ　ＡＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ｍｕｌｔｉ—ａｎｇｕｌａｒ　ａｎｄ　ｓｈｏｒｔ　ｓｐｉｎｄｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｌｕｉｄ　ｃｈａｎｇｉｎｇ．ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｐａｓｓａｇｅ　３　ｃｅｌｌｓ　ｇｒｅｗ　ｌｉｋｅ　ｓｗｉｒｌｓ　ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｌｏｎｇ　ｓｐｉｎｄｌｅ－ｓｈａｐｅｄ．Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ｓｈｏｗｅｄ　ＣＤ２９　，ＣＤ３１，ＣＤ３４一，ＣＤ４４　，ＣＤ４５，ＣＤ４９　，ＣＤ１０６一．ＣＤ１３３一ＭＴＴ　ｍａｎｉｆｅｓｔｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＳＣｓ　ｗａｓ　ｇｒｅａｔ　Ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｓｈｏｗｅｄ　ＡＳＣｓ　ｉｎ　Ｇ　１　ｐｅｒｉｏｄ　ａｃｃｏｕｎｔｅｄ　ｆｏｒ　８６．８％ａｎｄ　Ｇ２　ｐｅｒｉｏｄ　８．７７％．ＯｉＩ　ｒｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ａｌｉｚａｒｉｎ　ｒｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｂｏｔｈ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｈｕｍａｎ　ＡＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｔｈ　ｇｒｅａｔ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｐ　ｒｏｓｐｅｃｔ，　ｗｈｉｃｈ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　ａｄｈｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ，ｍｕｌｔ　Ｊｐｏｔｅｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＡＳＣｓ；ｃｕｌｔｕｒｅ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　自从２００１年Ｚｕｋ等　人从抽脂脂肪中发现脂肪干细胞　（ａｄｉｐｏｓｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ，ＡＳＣｓ）以来，关于　ＡＳＣｓ的研究迅速增多，现已成为整形美容外科研究热点之　一。ＡＳＣｓ是一群成纤维细胞样的基质干细胞，能分化为不同　的细胞系嘲，包括脂肪细胞嘲、骨细胞　、软骨细胞嘲、骨骼肌　细胞　、心肌细胞　、内皮细胞　、神经细胞嘲等等。ＡＳＣｓ不仅　在整形外科应用于自体脂肪移植、创面愈合等，而且在心肌　缺血、神经系统疾病、组织工程等领域中也有着广泛的用途。　Ｋｏｔａｒｏ等　从２００３年就开始采用细胞辅助脂肪移植术　（ｃｅｌｌ—ａＳＳｉｓｔｅｄ　１ｉｐｏｔｒａｎｓｆｅｒ，ＣＡＬ），将ＡＳＣｓ应用到自体　脂肪移植隆胸和软组织填充中，取得了不错的临床效果。随　着研究的不断深入，ＡＳＣｓ将是很有临床应用前景的干细胞。　１材料和方法　１．１实验材料　１．１．１主要试剂：ＤＭＥＭ—ＨＧ培养基（［Ｉｙｃｌｏｎｅ），胎　ｔ一血Ｌ消　（Ｇｉｂｃｏ），胰酶消化液（碧云天），Ｉ　胶原酶（Ｓｊｇｍａ），　一钉士　霉素（Ｈｙｃｌｏｎｅ），苏木精（上海蓝季科技公司），曙红Ｙ（Ｓｉｇｍａ，　ｗｏｌｓｅｎ分装），牛胰岛素（Ｓｉｇｍａ），吲哚关中（Ｓｉｇｍａ），地塞水　松（Ｓｉｇｍａ），Ｂ一　油磷酸钠（Ｓｉｇｍａ），　旋抗坏血酸（科吴乍　物），３一异丁基一１甲基黄嘌呤（ｓｉｇｍａ），茜索红（犬汁科惭　欧），Ｔｒｉｓ—ＨＣＩ（碧云天）。　１．１．２主要仪器：细胞培养孵箱（Ｔｈｅｒｍｏ），超净Ｌ作台（ｉ＇ｌｌ　苏净集团有限公刮ｓｗ—ｃＪ～１ＦＢ），台式低速离心机（Ｋ沙湘仪　离心机仪器有限公司ＴＤＺ５一ＷＳ），空气恒温摇床（Ｉ　海揣玛实　基金项目：国家自然科学基金面上项目（３０９７３１３２）；西京医院学科助推计划自主创新探索项目（ｘ．】ＺＴＯ８ＭＩＯ）　通讯作者：郭树忠，男，教授，博士研究生导师；主要研究方向：器官再造和创伤修复：Ｅ－ｍａｉ１：ｓｈｕｚｈｏｎｇ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｒｌ

中国组织工程研究 第19卷 第32期 2015–08–06出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research August 6, 2015 Vol.19, No.32

ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH

5155 肖建红，女，1980年生，四川省绵阳市人，羌族，2012年中山大学毕业，博士，主治医师，主要从事造血干细胞抑制、干细胞与组织工程，以及免疫性血小板减少性紫癜的临床研究和基础研究。 通讯作者：张阳春，硕士，主治医师，中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700 中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2015)32-05155-07 稿件接受：2015-07-01 Xiao Jian-hong, M.D., Attending physician, Department of Internal Medicine, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, China Corresponding author: Zhang Yang-chun, Master, Attending physician, Department of Lower limbs Orthopedics, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, China Accepted: 2015-07-01 人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定 肖建红1，张阳春2，张常然1，杨 兴2(中山大学附属第一医院东院，1普通内科，2下肢骨科，广东省广州市 510700) 文章亮点： 1 实验通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。 2 实验发现第5代脂肪干细胞比较适合进行成脂及成骨诱导分化，以确定其多向分化潜能。 3 DAPI是一种简单、有效的标记人脂肪干细胞的方法，DAPI不损伤细胞活性，对细胞标记率高。 关键词： 干细胞；脂肪干细胞；人来源的脂肪干细胞；细胞分化；脂肪组织；细胞培养；细胞鉴定；国家自然科学基金 主题词： 干细胞；皮下脂肪；细胞分化；细胞，培养的 基金资助： 国家自然科学基金青年项目(81500091)；广东省自然科学基金博士启动项目(2015A030310022)；广州市黄埔区科技计划项目(201444-02) 摘要 背景：脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞，在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更多优势，是当今的研究热点之一。 目的：在体外建立一种分离纯化人皮下脂肪来源脂肪干细胞的方法，进行体外培养扩增及诱导其向成骨、成脂细胞分化。 方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。倒置显微镜下观察人脂肪干细胞的细胞形态和生长特性。选取第2代及第5代细胞，用CCK-8法检测细胞活性，绘制细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记。选取第5代细胞，分别进行成脂及成骨诱导分化，以确定其多向分化潜能。 结果与结论：①采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法，可成功从人脂肪组织中获得纯度较高的人脂肪干细胞。②人脂肪干细胞经历了生长滞缓期、对数增殖期和生长平台期，符合正常细胞的生长规律，且其生长具有对数生长期，其倍增时间较短。③人脂肪干细胞表达干细胞表面抗原标记，具有低免疫原性，且具有成脂成骨多向分化潜能。④DAPI是一种简单、有效的标记人脂肪干细胞的方法，DAPI不损伤细胞活性，对细胞标记率高。 肖建红，张阳春，张常然，杨兴. 人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定[J].中国组织工程研究，2015，19(32):5155-5161. doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.32.013 Human subcutaneous adipose-derived stem cells: osteoblastic/adipogenic differentiation and identification Xiao Jian-hong1, Zhang Yang-chun2, Zhang Chang-ran1, Yang Xing2 (1Department of Internal Medicine, 2Department of Lower limbs Orthopedics, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Adipose-derived stem cells are a kind of mesenchyam stem cells with multipotent differentiation capacity, which have more advantages than bone marrow mesenchymal stem cells in tissue engineering research. OBJECTIVE: To establish a method to isolate and purify adipose-derived stem cells from human subcutaneous adipose tissues followed by in vitro amplification and osteoblastic/adipogenic differentiation. METHODS: Adipose-derived stem cells were isolated from human subcutaneous adipose tissue and cultured by density gradient centrifugation and adherent culture. Cell morphology and growth features were observed under inverted microscope. Adipose-derived stem cells at passages 2 and 5 were selected for viability measurement using cell counting kit-8 method, and then cell growth curves were drawn. The immunophenotype identification was analyzed by flow cytometry. Passage 5 cells underwent osteoblastic/adipogenic induction to confirm the multi-differentiation potential. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Using density gradient centrifugation and adherent culture method, high-purity human adipose-derived stem cells can be successfully isolated from human adipose tissues. (2) The growth process of human adipose-derived stem cells includes stagnant phase, logarithmic phase and plateau phase, which meets the growth rhythm of normal cells. Moreover, the population doubling time is shorter. (3). 肖建红，等. 人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定

干细胞诱导分化具体步骤及注意事项

一、技术简介

干细胞诱导分化是诱导干细胞定向分化，使之成为成熟的功能细胞，是目前干细胞研究的关键环节。 干细胞是一种未充分分化，具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。如：骨髓间充质干细胞是位于骨髓基质中的一类中胚层来源的未分化细胞，在体内外均发现有极强的增殖能力，具有很强的自我更新和多向分化潜能。在一定诱导条件下，可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等，还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞，具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。

在体胚胎分化过程中，组织发生和身体构造的形成具有时空顺序性和相互诱导性。在个体发育过程中，细胞分化是程序控制的有序有规律过程，程序的运行结果表现为不同发育阶段、不同组织部位的细胞表现出不同的形态、不同的生长方式和不同的生理功能。从分子水平上来看，这一结果取决于细胞在基因表达上的时空差异，这种基因表达差异除由细胞内在发育程序决定外，还受细胞外环境影响和调控，且有时这种外部控制条件或环境对形成特定细胞有着决定性作用。干细胞体外定向诱导分化的原理，就是选择适当的诱导剂和诱导模式，通过诱导物与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等，使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化，然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代，从而得到人们所需要的细胞类型。

二、实验流程

1. 干细胞的分离、原代和传代培养。

2. 定向诱导干细胞分化。

3. 成长曲线测定。

4. 诱导分化后细胞鉴定。

5. 结果统计分析。

２Ｏｌ４年３月　第２４卷第３期　中国比较医学杂志　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　Ｍａｒｃｈ，２０１４　Ｖｏ１．２４　Ｎｏ．３　

树嗣骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导　

陆彩霞，李晓飞，王文广，孙晓梅，仝品芬，匡德宣，代解杰　

（１．中国医学科学院，北京协和医院医学生物学研究所树嗣种质资源中心，昆明６５０１１８；　２．云南省重大传染病疫苗研发重点实验室，昆明　６５０１１８）　

【摘要】　目的　探讨树朐骨髓间充质干细胞（ＢＭ．ＭＳＣｓ）的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞　的可行性。方法　通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼢骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化，倒置相　差显微镜进行形态学观察。用成脂诱导液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ＦＢＳ＋１００　Ｕ／ｍＬ青霉素＋１００　ｇ／ｍＬ链霉素＋１．０　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ地塞米松＋０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ吲哚美辛＋０．Ｏ１　ｍｇ／ｍＬ胰岛素＋０．５　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＩＢＭＸ）和成骨诱导液（高糖ＤＭＥＭ　＋１０％ＦＢＳ＋１００　Ｕ／ｍＬ青霉素＋１Ｏ０￣ｇ／ｍＬ链霉素＋５０　ｎｇ／ｍＬ　ＢＭＰ－２）对分离的树嗣ＢＭ—ＭＳＣｓ分别定向诱导为脂　肪细胞和成骨细胞。结果　原代和传代细胞为梭形或三角形，可增殖形成克隆。ＢＭ．ＭＳＣｓ成脂诱导后油红Ｏ染　色细胞内出现红色脂滴，成骨诱导后茜素红染色可观察到矿化结节。结论　密度梯度离心联合贴壁培养法分离　培养树嗣ＢＭ．ＭＳＣｓ简便可行，获得的ＢＭ—ＭＳＣｓ可体外诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。　【关键词】　树鼢；骨髓间充质干细胞；细胞培养；成脂诱导；成骨诱导　【中图分类号】Ｒ３２９　Ｒ３３２　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７１－７８５６（２０１４）０３－００１０－０４　ｄｏｉ：１０．３９６９．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１．７８５６．２０１４．００３．００３　

Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅ，ａｄｉｐｏｃｇｅｎｉｃ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ