(完整word版)植物可溶性糖含量的测定方法

九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。

了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。

本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。

糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。

该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

三．实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。

稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。

四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。

在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。

2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。

从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。

按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。

植物组织中可溶性糖含量的测定碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。

（二）试剂1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL）。

植物组织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。

一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100Mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nM波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定时间在160Min以上。

【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20Ml刻度试管；刻度吸管5Ml 1支，1Ml 2支；记号笔；吸水纸适量。

【试剂】90％苯酚溶液：称取90g苯酚(AR)，加蒸馏水10Ml溶解，在室温下可保存数月；9％苯酚溶液：取3Ml 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30Ml，现配现用；浓硫酸(比重1.84)；1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。

加少量水溶解，移入100Ml容量瓶中，加入0.5Ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；100μg／L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1Ml加入100Ml容量瓶中，加水定容。

【方法】1.标准曲线的制作取20Ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表1－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1Ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20s时间加入5Ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8Ml，在恒温下放置30Min，显色。

然后以空白为对照，在485nM波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

表1-1各试管加入溶液和水的量试管 1 2 3 4 5 6100ug/L蔗糖液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0水（ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0苯酚（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0浓硫酸（ml） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0蔗糖量（μg）0 20 40 60 80 1002.可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10Ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30Min(提取2次)，提取液过滤入25Ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。

蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。

其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。

溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。

蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。

四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。

样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。

eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。

置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。

）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。

编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。

在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

Ⅰ 蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。

（二）试剂1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（100 μg/mL ）。

植物组织中可溶性糖含量的测定XXX,YYY,ZZZ(版权所有，仅限个人)一.实验目的1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。

2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。

二、实验原理：（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。

（二）测定：蒽酮比色法五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

蒽酮比色法该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。

该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。

三、实验材料：大白菜Brassica campestris ssp.pekinensis四.实验步骤：1．标准曲线的绘制配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。

显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分钟。

比色：测定A600nm的吸光度值。

浓度：ug/mL050100150200吸光度：a00.1950.3550.5150.689绘制标准曲线：．可溶性糖的提取：称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~ 40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。

实验8 植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。

对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。

因此，可溶性糖的定量研究对果树的品质育种具有重要意义。

一、试材及用具1．试材新鲜或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL 容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。

二、原理本实验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。

通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。

三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO4•5H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。

2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4•4H2O，分析纯）138g 溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。

3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。

在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。

测定时，取1%转化糖液25.00mL 放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。

4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。

5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)2•2H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL 稀释至100mL。