光合细菌嗜酸柏拉红菌5-氨基乙酰丙酸合成酶基因的克隆与原核表达

原核表达（原理、材料与实验方案）一、原理1、E . coli表达系统E . coli是重要的原核表达体系。

在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。

2、外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。

常用的有温度诱导和药物诱导。

本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。

不同的表达质粒表达方法并不完全相同，因启动子不同，诱导表达要根据具体情况而定。

二、材料1、诱导表达材料( 1 ) LB （Luria—Bertani）)培养基酵母膏(Yeast extract) 5g 蛋白胨(Peptone) 10gNaCl 10g 琼脂(Agar) 1-2%蒸馏水(Distilled water) 1000ml pH 7.0适用范围：大肠杆菌( 2 ) IPTG 贮备液：2 g IPTG溶于10 mL 蒸馏水中，0 . 22 μm 滤膜过滤除菌，分装成1 mL /份，－20 ℃保存。

( 3 ) l×凝胶电泳加样缓冲液：50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 )50 mmol / L DTT2 % SDS （电泳级）0.1 ％溴酚蓝10 ％甘油2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料1 ）酶溶法（1）裂解缓冲液：50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 )1 mmol / L EDTA100 mmol / LNaCI（2）50 mmol / L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）。

（3）10 mg / mL 溶菌酶。

（4）脱氧胆酸。

（5）1 mg / mL DNase I。

2 ）超声破碎法( 1 ) TE 缓冲液。

( 2 ) 2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液：100 mmol / L Tris-HCI ( pH 8 . 0 )100 mmol / L DTT4 %SDS0.2 ％溴酚蓝20 ％甘油三、实验方案1、外源基因的诱导表达( 1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。

湖南省第十二届自然科学优秀学术论文ﻩ一等优秀学术论文一种基于多目标优化的进化算法用于约束优化蔡自兴中南大学信息科学与工程学院王勇中南大学信息科学与工程学院ﻩ非线性波浪与沙质海床相互作用的耦合模型ﻩ程永舟长沙理工大学王永学ﻩ大连理工大学蒋昌波长沙理工大学基于人工智能网络的具有隐式功能函数的工程结构可靠度分析邓建ﻩ中南大学ﻩ古德生ﻩ中南大学ﻩ李夕兵ﻩ中南大学ﻩ一种以糖基金属卟啉为分子识别元件的荧光增强型丙硫苯咪唑传感器龚福春长沙理工大学科协吴道新ﻩ长沙理工大学科协ﻩ曹忠长沙理工大学科协提高矩阵变换器电压传输比的新型调制策略ﻩ郭有贵ﻩ湘潭大学ﻩ喻寿益ﻩ中南大学朱建林湘潭大学基于小波分析的键合动力学行为监控韩雷中南大学机电工程学院高荣芝中南大学机电工程学院钟掘中南大学机电工程学院时变时滞系统基于自由权矩阵方法的进一步改进何勇ﻩ中南大学信息科学与工程学院林崇ﻩ青岛大学自动化工程学院外部粘贴预应力碳纤维板技术加固桥梁结构的工程应用与评估ﻩ何贤锋长沙市公路管理局彭晖长沙理工大学罗杰ﻩ湖南省交通科学研究院ﻩ高通量表面等离子体成像免标记阅读蛋白质微阵列ﻩ黄昊文ﻩ湖南科技大学ﻩ陈义中国科学院化学研究所ﻩ中国大陆的脊髓小脑性共济失调6型:4个家系的分子和临床特征江泓中南大学湘雅医院神经内科ﻩ唐北沙中南大学湘雅医院神经内科ﻩ夏昆中国医学遗传学国家重点实验室非对称二甲基精氨酸诱导内皮细胞凋亡涉及RＯS－p3８MAPK途径ﻩ姜德建中南大学药学院药理学系贾素洁ﻩ中南大学药学院药理学系ﻩ戴忠广东医学院药理学教研室在混合分布情况下的最优老化及预防替换模型ﻩ蒋仁言长沙理工大学科协ﻩＳcｈwarｚscｈilｄ-aｎtｉ-ｄｅＳｉtteｒ和 Rｅisｓner－Ｎｏｒdstｒom-ａntｉ-de Ｓitteｒ黑洞时空中Dｉrａc场的似正模频谱荆继良湖南师范大学ﻩ潘启沅湖南师范大学超声倒装键合的界面机理ﻩ李军辉中南大学机电工程学院ﻩ韩雷中南大学机电工程学院段吉安中南大学机电工程学院EＲK通路在二烯丙基二硫诱导人胃癌MＧC803细胞分化中的作用凌晖ﻩ南华大学ﻩ张良运ﻩ广东佛山市人民医院苏琦ﻩ南华大学不确定动态网络的鲁棒脉冲同步刘斌湖南工业大学ﻩ刘新芝ﻩ加拿大Wａterlｏｏ大学陈关荣香港城市大学β１肾上腺素受体遗传多态性影响高血压病人美托洛尔单药降压疗效ﻩ刘洁中南大学临床药理研究所刘昭前中南大学临床药理研究所ﻩ余帮宁LA-Louｉsiaｎａ,United Ｓtates Compaｎy:LoｕｉｓianaﻩＳｔａteArｋａdiａ-Smａｄ7介导TＧF-β信号通路的正向调控与肾小管间质纤维化的关系ﻩ刘伏友中南大学湘雅二医院李小照ﻩ中南大学湘雅二医院彭佑铭ﻩ中南大学湘雅二医院ﻩ复合下齐次GrÖbner基的进一步结果刘金旺ﻩ湖南科技大学ﻩ王明生ﻩ中科院软件所ＫＬF4调控RAＷ264.7巨噬细胞中IL-10的表达ﻩ刘俊文中南大学基础医学院ﻩ张华莉ﻩ中南大学基础医学院刘瑛ﻩ中南大学基础医学院不同亚科间远缘杂交多倍体鲫鲂的形成及其进化意义刘少军湖南师范大学ﻩ覃钦博湖南师范大学刘筠湖南师范大学集群式创新与创新能力集成——一个培育中小企业自主创新能力的战略新视角ﻩ刘友金湖南科技大学商学院转ｃrｙ１Ａc/ｓｃk基因抗虫水稻对稻田寄生蜂群落影响的评价刘雨芳湖南科技大学生命科学学院ﻩ贺玲湖南科技大学生命科学学院ﻩ汪琼湖南科技大学生命科学学院引起中国家族性并缺指（趾）遗传病的Ｐ63基因一个新的突变位点的鉴定ﻩ罗桐秀ﻩ湖南师大邓云湖南师大袁婺洲ﻩ湖南师大ﻩ热循环条件下热障涂层系统残余应力场变化规律的预测模型毛卫国湘潭大学材料与光电物理学院周益春湘潭大学材料与光电物理学院杨丽ﻩ湘潭大学材料与光电物理学院人居环境——新城市主义的本质及启示ﻩ冒亚龙ﻩ长沙理工大学土木与建筑学院ﻩ长期稻草还田对土壤球囊霉素和土壤C、N的影响聂军湖南省土壤肥料研究所周健民中科院南京土壤研究所王火焰中科院南京土壤研究所ﻩ晒北滩溢流坝台阶坝面的水力特性欧阳福生ﻩ省水电设计研究院周翠云ﻩ省水电设计研究院ﻩ林珍喜省水电设计研究院ﻩ硒硫化镉合金纳米带颜色可调谐的光发射ﻩ潘安练湖南大学ﻩ杨华ﻩ中科院物理所ﻩ禹日成中科院物理所长期施肥对水稻土耕层微生物生物量氮和有机氮组分的影响彭佩钦中南林业科技大学仇少君湖南农业大学童成立中国科学院亚热带农业生态研究所金属纳米微粒结合能的推广型键能模型齐卫宏中南大学黄伯云ﻩ中南大学汪明朴中南大学中国长颊茧蜂属二新种(膜翅目，茧蜂科，小腹茧蜂亚科）宋东宝湖南农业大学生物安全科学技术学院ﻩ陈家骅福建农林大学植物保护学院杨建全福建农林大学植物保护学院ﻩCaｒnot群上水平凸函数的利普希茨连续性ﻩ孙明保湖南理工学院ﻩ杨孝平ﻩ南京理工大学ﻩ含两耦合侧端结构的量子线中的热输运性质唐黎明湖南大学ﻩ王玲玲湖南大学ﻩ陈克求ﻩ湖南大学瘤蛋白LＭP1调节EＧFＲ核移位及加速细胞周期G1/S期ﻩ陶永光ﻩ中南大学肿瘤研究所宋鑫中南大学肿瘤研究所邓锡云中南大学肿瘤研究所中国人工林桉树木材解剖性质与皱缩收缩特性相关性研究吴义强中南林业科技大学林和男ﻩ日本国立爱媛大学刘元中南林业科技大学ﻬ候选抑瘤基因LRRC４通过LRR结构域调控ＥＲK/AKＴ／NF-κＢ信号通路抑制脑胶质瘤细胞增殖武明花中南大学肿瘤研究所黄琛中南大学肿瘤研究所李桂源中南大学肿瘤研究所钻头螺旋槽的设计和刃磨的CＡD系统向文江邵阳学院ﻩ周志雄ﻩ湖南大学CTＧF-siRNＡ对硬皮病成纤维细胞CTGF,胶原Ⅰ/Ⅲ表达的影响ﻩ肖嵘湘雅二医院皮肤科刘伏友湘雅二医院肾病内科罗婧莹ﻩ桂林医学院附属医院皮肤科养老基金管理的常方差弹性模型及Lｅgeｎｄre变换一对偶最优决策肖建武中南林业科技大学翟弘ﻩ中南林业科技大学ﻩ秦成林ﻩ上海大学ﻩ电导率分块均匀的瞬变电磁2．5维有限元数值模拟熊彬中南大学信息物理工程学院ﻩ罗延钟中国地质大学地球物理与空间信息学院采用阴离子开环聚合方法合成聚酰胺6修饰的多壁碳纳米管ﻩ阳梅ﻩ湘潭大学化学学院高勇湘潭大学化学学院黎华明湘潭大学化学学院ﻩＶＥＧF转染MSＣs心肌移植对心肌梗死后大鼠心功能及血管新生的作用杨进福ﻩ中南大学湘雅二医院周文武ﻩ湖南省儿童医院郑维湖南省人民医院ﻩ非诺贝特通过抑制内皮细胞NF－κ B活性降低ADＭA水平ﻩ杨天伦中南大学湘雅医院陈美芳ﻩ中南大学湘雅医院罗百灵ﻩ中南大学湘雅医院ﻩ外资进入中国传媒业态势与政府规制创新ﻩ姚德权湖南大学曹海毅财富证券研发中心指纹图像的两步分割法ﻩ殷建平ﻩ国防科技大学计算机学院ﻩ祝恩ﻩ国防科技大学计算机学院ﻩ杨学军ﻩ国防科技大学计算机学院小肽对山羊氮平衡、营养物质消化率和若干门静脉血清指标的影响张彬ﻩ湖南农业大学动物科学技术学院ﻩ薛立群湖南农业大学动物医学院李丽立中国科学院亚热带农业生态研究所ﻩ双向增强体复合地基承载机理研究张玲ﻩ湖南大学赵明华湖南大学贺炜长沙理工大学ﻩ光合细菌嗜酸柏拉红菌5－氨基乙酰丙酸合成酶基因的克隆与原核表达张德咏ﻩ湖南省植物保护研究所ﻩ成飞雪湖南省植物保护研究所程菊娥ﻩ湖南省植物保护研究所ﻩ质量贸易条件与农产食品贸易的质量风险控制张汉江湖南大学葛伟娜ﻩ湖南大学ﻩ罗端红湖南大学具时变状态时滞与输入时滞的线性系统的时滞相关稳定化张先明ﻩ中南大学数学科学与计算技术学院ﻩ吴敏中南大学信息科学与工程学院ﻩShe,Jiｎ-HuaﻩSｃhool oｆＢiｏniｃs,Toｋｙo ＵniversiｔｙofTechｎoｌogy,T湖南几种耕地土壤固定添加铵的动力学研究张杨珠ﻩ湖南农业大学资源环境学院ﻩ万大娟湖南师范大学资源与环境科学学院ﻩ黄顺红ﻩ衡阳师范学院外语系ﻩ碳纳米环中的持续电流:结构变形及手性效应ﻩ张振华长沙理工大学科协ﻩ袁剑辉长沙理工大学科协邱明ﻩ长沙理工大学科协中国西南地区降水中氧稳定同位素比率与相关气象要素之间的关系ﻩ章新平湖南师大资源与环境科学学院刘晶淼中国气象科学研究院孙维贞ﻩ中国科学院寒区旱区环境与工程研究所ﻩ掺铕含量对Bi4-x EU xＴｉ3O12铁电薄膜微结构和铁电性能的影响郑学军ﻩ湘潭大学材料与光电物理学院低维材料及其应用技术ﻩ教育部重点实验室ﻩ何林ﻩ湘潭大学材料与光电物理学院低维材料及其应用技术教育部重点实验室ﻩ周益春ﻩ湘潭大学材料与光电物理学院低维材料及其应用技术ﻩ教育部重点实验室ﻩ对苯醌或H2O2电还原触发碳纳米管-壳聚糖-葡萄糖氧化酶生物传感复合膜的电沉积ﻩ周庆美湖南师范大学化学生物学及中药分析教育部重点实验室谢青季湖南师范大学化学生物学及中药分析傅迎春湖南师范大学化学生物学及中药分析ﻩ三阶热力学摄动理论的性能与现今液体状态理论的比较研究周世琦ﻩ中南大学物理科学与技术学院ﻩ流感灭活疫苗免疫糖尿病小鼠抗致死性流感病毒攻击的研究ﻩ朱强ﻩ湖南师范大学常海艳ﻩ湖南师范大学陈燕湖南师范大学。

植原体基因组学研究进展杨毅;车海彦;曹学仁;罗大全【摘要】Phytoplasmas are important bacterial plant pathogens transmitted by insects,such as leafhoppers and plant hoppers. Phytoplasmas can infect thousands of plants and also frequently induce witches’broom(prolifera-tion of stems,branches,and leaves),generalized yellowing and phloem necrosis,which can cause devastating yield losses. This review summarized the research history of phytoplasmagenomes,current opinions and phyto-plasma effectors.%植原体（phytoplasma）是一类重要的植物病原细菌，可经叶蝉、飞虱等昆虫介体传播，感染1000多种植物，产生丛枝、黄化、韧皮部黑斑坏死等症状，给农业、林业生产带来巨大的损失。

本文对植原体基因组学研究的历史、现状及当前植原体效应蛋白等方面的研究进展进行了综述。

【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】7页(P1-6,24)【关键词】植原体;基因组;效应蛋白;病原;寄主互作【作者】杨毅;车海彦;曹学仁;罗大全【作者单位】中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室，海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室，海口571101;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室，海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室，海口571101;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室，海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室，海口571101;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室，海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室，海口571101【正文语种】中文【中图分类】S432.1植原体(phytoplasma)是一类植物病原原核生物，分类上隶属于软壁菌门(Tenericutes，又称无壁菌门)柔膜菌纲(Mollicutes)植原体暂定属[Candidatus (Ca.) genus Phytoplasma]。

摘要UDP-鼠李糖是植物糖苷类衍生物的重要糖供体，参与各种鼠李糖苷的形成。

鼠李糖苷广泛存在于植物不同组织部位，具有重要生物活性。

然而，商品化的UDP-鼠李糖难以获得，限制了植物鼠李糖苷相关的生物学研究。

本论文以杨梅（Morella rubra）和桃（Prunus persica）为研究材料，鉴定不同组织中黄酮醇鼠李糖苷的种类，克隆UDP-鼠李糖合成酶基因，并对其生化功能进行研究。

主要结果如下：1、利用HPLC，在杨梅不同组织中检测到三种黄酮醇鼠李糖苷，即杨梅素-3-O-鼠李糖苷（M3Rha）、槲皮素-3-O-鼠李糖苷（Q3Rha）和山奈酚-3-O-鼠李糖苷（K3Rha）；在桃不同组织中检测到四种黄酮醇鼠李糖苷，即槲皮素-3-O-鼠李糖基-葡萄糖苷（芸香糖苷）（Q3Rut）、山奈酚-3-O-芸香糖苷（K3Rut）、异鼠李素-3-O-芸香糖苷（I3Rut）和K3Rha。

2、从杨梅中克隆了两个UDP-鼠李糖合成酶基因，命名为MrRHM1和MrNRS/ER，编码区长度分别为2016 bp和909 bp。

MrNRS/ER氨基酸序列与MrRHM1的C端序列高度相似。

重组蛋白体外催化反应表明，MrRHM1可以催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖，其催化反应最适pH为9.0，最适温度为25℃。

MrNRS/ER不能独立催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖，但可以与AtRHM2的N端（AtRHM2-N）共同催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖。

3、从桃中克隆了两个UDP-鼠李糖合成酶基因，命名为PpRHM1和PpRHM2，编码区长度分别为2028 bp和2016 bp。

PpRHM1和PpRHM2氨基酸序列相似度为84.47％，重组蛋白体外催化反应表明，PpRHM1和PpRHM2均可以催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖，催化反应最适pH分别为9.0和8.5，最适温度分别为35℃和30℃。

本研究结果表明，MrRHM1，PpRHM1和PpRHM2均能催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖，对于后续开展植物鼠李糖相关的糖苷类物质生物合成及调控研究具有重要意义。

光合细菌产生S}}l,基乙酞丙酸(ALA)的研究摘要从36个光合细菌菌株中筛选出的7株紫色非硫红假单胞菌有产ALA能力，其中菌株99 28 ALA产量最高.用紫外线对菌株99 28进行诱变处理，筛选出产量比野生菌株高1倍多的菌株L -1.对影响菌株的生长和ALA产量的因子进行了探索.抑制剂加入时间和加入次数对ALA产量有显著影响.在最佳条件下(pH 7. 5,培养对数生长期加入ALA脱水酶抑制剂乙醚丙酸30 mmol, ALA生物合成前体甘氛酸30 mmol和琉泊酸30 mmol, 3 000 1、光照)，菌株L -1的ALA产量可达22. 15 m到L.关键词:ALA;光合细菌;乙醚丙酸;甘氛酸;琉泊酸AbstractIn the laboratory 7 strains of rhodopseudomonas sp were selected from 36 photosynthetic bacteria strains. Rhodopseudomonas sp strain 99一8 had the highest ALA production in these 7 strains.Rhodopseudomonas sp 99 28 strain was mutated using ultraviolet radiation and a mutant strain L-1 was obtained, in which ALA production was higher than wild strain 99一8 by about 100%·The elements which affect strain 99 28 and L-1 ALA formation were studied. Under the optimal condition of ALAformation(pH of 7. 5, in the condition of supplementation of ALAD inhibitor LA and precursors glycineand succinct, and light 3 000 lx) ALA formation of mutant L-1 was as high as 22. 15 mg/L.Key words: ALA; photosynthetic; bacteria; LA; glycine; succinct5氰基乙酞丙酸(5 aminolevulinic acid)，以下简称ALA，是叶琳、(亚铁)血红素和维生素Biz的类似物[i. z}.近年来，5氰基乙酞丙酸(ALA)作为一种无公害绿色的除草剂而备受关注[31.另外，ALA作为一种光动力学剂(photodynamic agent)，可用作杀虫剂、抗微生物药剂、植物生长促进剂及用于治疗癌症与其他疾病[z}.光合细菌生物合成ALA因工艺简单、产率高，具有工业化生产潜力，且ALA对人畜无毒性，在环境中易降解无残留，因而倍受国外研究者及产业界的关注.自然界中很多微生物可合成ALA，但产量较低[;} . 70年代日本率先开展了这方面的研究，并应用生物工程方法获得了ALA高产重组菌株[a}.国内还没有这方面的研究.本实验利用现有的光合细菌菌株资源，筛选、选育高产ALA菌株，探索影响ALA产量的影响因子及操作条件.1材料与方法1.1菌株来源本实验室保存的36株光合细菌菌株分属于Rhodobacter, Rhodopseudomonas，是1997年以来从不同水域取样，经多次富集培养，分离纯化所得.诱变菌株L一是以分离纯化得到的野生菌株99 28经紫外线诱变得到.菌株99 28属于Rho<lopseu<lomonas.1. 2培养基制备和培养条件1. 2. 1分离培养基采用GM培养基L浴氨酸钠4. 83 g/ L, DL萍果酸2.7 g/L，I}zHPOa·3 Hz0 0. 65 g/ L, I}HzPOa 0. 5 g/ L, ( N H4) z HP04 0. 8 g/ L,[NH4HzP04 0. 696 g/L]，大量金属元素:M gS04·7 Hz0 0. 2 g/ L，CaCI " 2Hz0 5. 3 X 10- zg/ L, M nSOa " 5 Hz0 1. 2 X 10- ;g/ L，生长因子:泛酸VB}生物素，酵母膏0. 2%1 .2. 2微量元素，pH 7. 0^-7. 2.培养条件100 m L血清瓶中加入60 m L液体培养基，10 mL培养40 h的菌液，3 000 r/ min离心后得到的湿菌体接种入血清瓶，30 0C暗培养24 h后，3 000 lx光照.1.2.3废水去除实验废水摇均，味精废水稀释10倍，豆制品废水与啤酒废水不稀释，柠檬酸废水稀释2倍，调pH7. 5，分装250 mL碘量瓶中，接种60 mL培养48 h的菌液，30 0C暗培养过夜，3 000 lx光照.1. 3分析方法1. 3. 1 ALA的测定无菌操作条件下取培养菌液5 mL于离心管内，离心30 min.取离心上清液3 mL，加入等量2N乙酸钠(p H 4. 6)缓冲液和0. 6 m L乙酞丙酮，沸水水浴加热10 min，冷却至室温，取上述溶液2mL与2 mL Ehrlich's试剂混合，15 min后用1 cm比色皿在553 nm分光光度检测。

生物法合成5-氨基乙酰丙酸的研究进展傅维琦,林建平,岑沛霖(浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027)摘要:对国内外生物法合成5-氨基乙酰丙酸(A LA )的进展进行综述,重点比较了诱变育种法和代谢工程技术在ALA 生物合成研究中的应用,揭示了新兴的代谢工程技术在A LA 的生产开发中极具应用前景,为生物法合成ALA 的进一步发展指明了方向,有利于促进A LA 生物合成的产业化。

关键词:5-氨基乙酰丙酸;生物合成;诱变育种;代谢工程中图分类号:TQ033　文献标识码:A 文章编号:0253-4320(2008)S2-0190-04R ecent advances in biosynthesis of 52aminolevulinic acidFU W ei 2qi ,L I N J ian 2pi ng ,CEN Pe i 2lin(Department o f Chemical and Biochem ical Eng ineering ,Z hejiang U niv ersity ,H angzh ou 310027,Chin a)Abstra ct :T he research progress in the b iosyn thes is of 52amin olevulin ic acid (A LA)at h ome and abroad is review ed.And the application of induced mutation breeding meth od and metab olic eng ineering technology in A LA biotechn ol og ical production was d iscussed in detail.Further s tudy on A LA producti on can be ex pected t o lead t o high productiv ity of A LA v ia regulation of metabolic pathw ay in mircoorgan isms.K ey w or ds:52am in olev ulinic acid;bios ynth esis;induced mu tation breeding ;metabolic engineerin g　收稿日期:2008-09-10　基金项目国家自然科学基金资助项目(366)和“3”资助项目(B 5)　作者简介傅维琦(),男,博士生;林建平(),男,博士,副教授,主要研究方向为生物反应工程、代谢工程,通讯联系人,j @zj 。

莱茵衣藻酰基辅酶A合成酶cDNA克隆及其酵母表达宋燕子;贾彬;林柏成;胡章立;黄瑛【摘要】This work aims to predict and clone cDNA of Chlamydomonas reinhardtii acyl-CoA synthetase(gene cracs), and analyze its function in yeast Saccharomyces cerevisiae YB525. The cracs sequence was cloned by RT-PCR, its conserved sequence of encoded protein and phylogenetic tree were analyzed with ClustalW and MEGA6.0, then the substrate specificity in YB525 of expressed gene was analyzed. As the results, a cracs was cloned for the first time with sequence of 2 004 bp and encoded a 72.3 kD protein crACS of 667 amino acids containing two conserved regions of including acyl-CoA synthetase:the AMP-binding domain and the FACS motif. The phylogenetic tree analysis indicated that crACS shared high homology with LACs of Arabidopsis thaliana. Yeast expression experiments showed that crACS restored acyl-CoA synthetase deficient phenotype of YB525 and assimilated foreign palmitoleic acid and myristic acid. Conclusively, cracs of C. reinhardtii can activate exogenous fatty acid and belongs to acyl-CoA synthetase family.%旨在预测并克隆莱茵衣藻酰基辅酶A合成酶cDNA （cracs），分析其在酵母中的功能。