多糖的提取纯化研究

多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类由多个单糖单元组成的生物大分子，具有多种生物活性和广泛的应用价值。

多糖的提取、纯化、化学修饰和抗氧化性研究是多糖研究中的重要内容。

本文将对多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性的研究进展进行综述。

多糖的提取纯化是多糖研究的第一步，目前常用的多糖提取方法有酸碱法、酶解法和热水法等。

酸碱法是最常用和经济的提取方法。

在酸碱法中，多糖首先通过酸处理将其脱除，然后用碱中和溶液pH值调整至碱性，在极性溶剂中进行提取。

酶解法是一种通过酶分解作用将多糖从生物背景中提取出来的方法。

热水法是将生物样品与水加热浸泡，使多糖溶解于水中，然后通过沉淀、离心等步骤来纯化。

多糖的化学修饰是利用化学反应将不同的官能团引入到多糖分子中，从而改变多糖的结构和性质。

常用的多糖化学修饰方法有酯化、醚化、磷酸化和羟烷化等。

酯化是将多糖上的羟基与酸反应形成酯键的过程，可以增加多糖的溶解性和稳定性。

醚化是将多糖上的羟基与醇反应形成醚键的过程，可以提高多糖的溶解性和抗氧化性。

磷酸化是将多糖上的羟基与磷酸反应形成磷酸酯键的过程，可以提高多糖的生物活性和生物相容性。

羟烷化是将多糖上的羟基与环氧丙烷反应形成环氧丙基键的过程，可以增强多糖的交联性和机械强度。

多糖具有显著的抗氧化性，可以作为天然抗氧化剂应用于食品、生物医药和化妆品等领域。

多糖的抗氧化性主要通过清除自由基、抑制氧化酶活性、增强抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化等机制实现。

目前，越来越多的研究表明多糖的抗氧化性与其结构和物理化学性质密切相关。

多糖的抗氧化性受多糖分子量、空间构象、结构稳定性、官能团等因素的影响。

通过多糖的化学修饰来改变多糖的结构和性质，可以进一步提高其抗氧化性能。

多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究是多糖研究中的重要内容。

多糖的提取纯化方法有酸碱法、酶解法和热水法等。

多糖的化学修饰方法有酯化、醚化、磷酸化和羟烷化等。

多糖具有显著的抗氧化性，其抗氧化性与其结构和物理化学性质密切相关。

多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类含有多个糖基的生物高分子化合物，广泛存在于植物和动物体内。

多糖具有多种生理功能，如调节免疫系统、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等。

多糖的提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究对于开发多糖的生物活性和应用具有重要意义。

多糖的提取和纯化是多糖研究的基础工作。

传统的多糖提取方法包括浸提法、酶解法和离子溶液沉淀法等。

浸提法是将原料与溶剂接触，在适当条件下提取多糖。

酶解法是通过适当的酶对原料进行酶解，从而获得多糖。

离子溶液沉淀法是利用离子溶液与多糖反应，形成离子复合物，再通过沉淀和洗涤等步骤获得纯净的多糖。

还有一些新型的多糖提取方法，如超声波辅助法、微波辅助法和离子液体辅助法等。

这些新型的提取方法能够更高效、更快速地提取多糖，并且能够减少对环境的污染。

多糖的纯化是为了去除多糖样品中的杂质，提高多糖的纯度。

目前常用的纯化方法有超滤、透析、凝胶渗透层析和离子交换层析等。

超滤是利用超滤膜的筛分作用，将多糖和较小分子的杂质分离。

透析是通过半透膜的选择性渗透，将多糖和低分子物质分开。

凝胶渗透层析是利用凝胶颗粒的孔隙大小分离不同分子大小的物质。

离子交换层析是通过阳离子交换剂和阴离子交换剂对多糖样品进行交换，从而实现多糖的分离纯化。

化学修饰是将多糖分子与化学试剂反应，改变多糖的化学结构和性质。

常用的化学修饰方法有酯化、醚化、羧化、硫酸化和甲基化等。

酯化是将多糖中的羟基与酸反应，形成酯键的修饰方法。

醚化是将多糖中的羟基与醚试剂反应，形成醚键的修饰方法。

羧化是将多糖中的羟基与羧基试剂反应，形成酯键或酰胺键的修饰方法。

硫酸化是将多糖中的羟基与硫酸试剂反应，形成硫酸酯的修饰方法。

甲基化是将多糖中的羟基与甲基试剂反应，形成甲基基团的修饰方法。

化学修饰能够改变多糖的理化性质和生物活性，拓宽多糖的应用领域。

多糖的抗氧化性是指多糖对有害自由基的清除能力和抑制氧化反应的能力。

多糖的抗氧化性主要通过两种方式实现：直接清除自由基和间接抑制氧化反应。

植物多糖提取与纯化方法的步骤与技巧植物多糖是一类具有广泛生物活性的天然产物，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、免疫调节等多种药理作用。

因此，植物多糖的提取与纯化方法备受关注。

本文将介绍植物多糖提取与纯化的步骤与技巧，以帮助读者更好地了解和应用这些方法。

首先，植物多糖的提取需要选择适当的溶剂。

常用的提取溶剂包括水、醇类和酸碱溶液。

水是最常用的提取溶剂，因为植物多糖多为水溶性。

但有些植物多糖在水中溶解度较低，此时可以选择醇类溶剂如乙醇、丙醇等。

酸碱溶液的选择要根据不同的植物多糖来确定，一般来说，酸性条件有利于提取酸性多糖，碱性条件有利于提取碱性多糖。

其次，植物多糖的提取需要注意样品的准备。

样品的选择要根据植物多糖的来源来确定，可以是植物的根、茎、叶、果实等部位。

样品在提取前需要经过粉碎处理，以增加提取效果。

此外，样品的质量也会影响提取效果，因此要选择新鲜、干燥、无霉变的样品。

接下来是植物多糖的提取步骤。

一般而言，提取步骤包括浸提、过滤、浓缩和沉淀等。

浸提是将样品与提取溶剂接触一段时间，使植物多糖溶解到溶剂中。

过滤是将提取液中的固体颗粒去除，以获得澄清的提取液。

浓缩是将澄清的提取液进行浓缩，以减少体积。

沉淀是通过加入沉淀剂使植物多糖从溶液中沉淀出来，然后通过离心等方法将沉淀物收集。

在提取过程中，还需要注意一些技巧。

首先是浸提时间的控制，过短的浸提时间可能导致多糖未能充分溶解，过长的浸提时间可能导致多糖的降解。

因此，需要根据不同的植物多糖来确定合适的浸提时间。

其次是提取溶剂的选择和用量，溶剂的选择要根据植物多糖的特性来确定，用量要适量，既能保证提取效果又能节约溶剂。

此外，还可以采用超声波辅助提取、微波辅助提取等方法来提高提取效率。

提取完成后，还需要对提取液进行纯化。

纯化的目的是去除杂质，提高植物多糖的纯度。

常用的纯化方法包括醇沉、蛋白酶处理、离子交换层析、凝胶过滤层析等。

醇沉是将提取液中的植物多糖用醇类溶剂沉淀出来，然后通过离心等方法将沉淀物收集。

多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。

首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。

其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。

水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。

稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。

稀碱法适合于提取碱溶性糖。

然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。

第四步是沉淀多糖。

大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。

常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。

最后是除去蛋白质。

除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。

得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。

多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。

纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。

此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。

(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。

纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。

因此，测得的分子量一般为平均分子量。

过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。

目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。

1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。

多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。

水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。

(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。

酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。

(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。

碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。

多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。

原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。

温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。

得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。

也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。

然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。

然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。

将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。

干燥后可得粉末状的粗多糖。

微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。

由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。

而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。

聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。

超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。

多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。

多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。

本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。

2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。

下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。

2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。

通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。

溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。

2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。

树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。

离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。

2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。

多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。

凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。

2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。

超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。

超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。

2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。

填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。

逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。

2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。

多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。

电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。

2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。

多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。

气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。

一、实验目的1. 了解多糖的基本概念、性质和分类；2. 掌握多糖提取的基本原理和实验方法；3. 学习利用水提法、醇沉法等方法提取多糖；4. 掌握多糖的纯化、鉴定和含量测定方法。

二、实验原理多糖是一类由单糖分子通过糖苷键连接而成的天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。

多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗病毒等。

本实验主要采用水提法、醇沉法等方法提取多糖，并对其纯化、鉴定和含量进行测定。

三、实验材料1. 实验材料：植物样品（如玉米、小麦、胡萝卜等）；2. 实验试剂：蒸馏水、乙醇、丙酮、苯酚、硫酸、蒽酮、葡萄糖标准品等；3. 实验仪器：组织捣碎机、离心机、分光光度计、磁力搅拌器、容量瓶、移液管、试管等。

四、实验方法1. 植物样品预处理：将植物样品洗净、晾干、磨碎，过筛，得到植物粉末。

2. 水提法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入乙醇，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。

3. 醇沉法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入丙酮，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。

4. 纯化多糖：（1）将粗多糖溶解于适量的蒸馏水中；（2）加入适量的苯酚，使多糖与苯酚形成复合物；（3）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到纯多糖。

5. 多糖鉴定：（1）采用苯酚-硫酸法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入苯酚和硫酸，观察溶液颜色的变化；（2）采用蒽酮法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，观察溶液颜色的变化。

6. 多糖含量测定：（1）采用硫酸蒽酮法测定多糖含量：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，在特定波长下测定吸光度；（2）以葡萄糖标准品为对照，绘制标准曲线，根据样品吸光度计算多糖含量。

实验三、天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定第一部分多糖的提取、纯化1、目的要求了解多糖提取和纯化的一般方法。

2、实验原理多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子。

早在60年代，人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。

它可以调节免疫功能，促进蛋白质和核酸的生物合成，调节细胞的生长，提高生物体的免疫力，具有抗肿瘤、抗疡和抗爱滋病(AIDS)等功效。

由于高等真菌多糖主要是细胞壁多糖，多糖组分主要存在于其形成的小纤维网状结构交织的基质中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有机溶剂的特点，通常采用热水浸提后用酒精沉淀的方法，对多糖进行提取。

影响多糖提取率的因素很多，如：浸提温度、时间、加水量以及脱除杂质的方法等都会影响多糖的得率。

多糖的纯化，就是将存在于粗多糖中的杂质去除而获得单一的多糖组分。

一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级。

常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀，其中Sevag方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。

本实验采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合摇匀)进行脱蛋白，用DEAE Sepharose 层析柱进行纯化，然后合并多糖高峰部分，浓缩后透析，冻干，得多糖级分。

3、试剂和器材一、试剂平衡缓冲溶液：0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2。

洗脱液：A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。

氯仿、正丁醇、乙醇(95％)等，均为分析纯。

二、材料灰树花子实体。

三、器材DEAE Sepharose Fast Flow，旋转真空蒸发仪，摇床，离心机，层析柱：26×10。

4、操作方法一、粗多糖的提取将多糖子实体切碎烘干后称量，采用热水浸提法，每次原料和水之比均为1：5，浸提温度为70℃－80℃，浸提时间3－5h，共提取4次，合并4次浸提液。

多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一种天然的高分子化合物，在许多植物和动物中广泛存在，具有多种生物活性。

因此，近年来越来越多的研究者对多糖进行了提取、纯化、化学修饰和抗氧化性等方面的研究。

本文将对多糖提取、纯化、化学修饰和抗氧化性的研究进展进行综述。

一、多糖的提取和纯化多糖的提取和纯化是研究多糖化学修饰和生物活性的必要步骤。

多糖的提取方法通常包括水提法、酶解法、超声波法、微波法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法等。

其中，酶解法是一种较为常用的方法，可以从大分子的多糖中释放出低分子的多糖，易于提取和纯化。

多糖的纯化方法包括凝胶层析法、透析法、溶剂提取法、离子交换层析法、亲和层析法等。

其中，亲和层析法是一种基于生物分子或化学分子之间特异性相互作用而实现多糖纯化的方法。

亲和层析树脂可以是化学物质或生物分子（如酶、抗体等）固定在固定相上，多糖可以通过自身特定的分子识别结合到树脂上，从而实现多糖纯化。

二、多糖的化学修饰多糖的化学修饰是通过化学反应引入不同的官能团或化学基团，改变多糖的性质和结构。

多糖的化学修饰方法包括磺化、甲基化、酯化、醚化、羟丙基化、羟甲基化、氧化、还原等。

其中，磺化和甲基化是常用的化学修饰方法。

磺化是指通过反应引入磺酸基（-SO3H）到多糖分子中，可以增加多糖的水溶性和稳定性。

甲基化是指通过反应引入甲基基团（-CH3）到多糖分子中，可以增加多糖的脂溶性和稳定性。

三、多糖的抗氧化性研究表明，多糖的抗氧化性不仅与其结构和化学组成密切相关，也与其来源和采集方法有关。

例如，来自熟化的蘑菇和发酵食品的多糖具有较高的抗氧化性。

综上所述，多糖的提取、纯化、化学修饰和抗氧化性的研究已成为当前的热点领域。

多糖具有广泛的应用前景，可以用于食品、医药、化妆品等领域，并有望成为一种新型的天然抗氧化剂。

一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色，然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。

提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀，沉淀部分可反复多次离心沉淀，以除去部分水溶性色素等杂质。

1．除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质，常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。

前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖。

Sevag 法是经典的除蛋白质方法，复杂、费时，且样品损失较大。

冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果，从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价．认为三氯乙酸法最好，但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白，建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。

2．脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的去除方法。

常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。

D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色目的，而且可以进行多糖的分离。

H2 O2：是一种氧化脱色剂，浓度不宜过高，宜在低温下进行，否则引起多糖的降解。

对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素，即加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。

吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。

3．多糖的分级采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的，其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。

分级可以达到纯化的目的，可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。

(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离，常用的有两种方法，即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。

多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。

有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。

与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。

3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。

此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。

（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。

超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。

（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。

二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。

提取和纯化植物中的多糖类物质植物中的多糖类物质是一类具有重要生物活性的天然产物，拥有广泛的应用价值。

为了充分发挥多糖类物质的功效，需要将其进行提取和纯化。

本文将介绍提取和纯化植物中多糖类物质的方法及其在不同领域中的应用。

一、植物多糖类物质概述植物多糖类物质是指存在于植物中的多种糖类化合物，包括纤维素、半纤维素、果胶和低聚糖等。

这些多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗炎等，因此受到广泛关注和应用。

但在植物中，多糖类物质与其他成分混杂在一起，因此需要进行提取和纯化，使其更好地发挥功效。

二、提取植物多糖类物质的方法1. 水提法水提法是提取植物多糖类物质最常用的方法之一。

该方法简便易行，无毒无害，适用于大多数植物材料。

其步骤包括将植物材料切碎后与水进行浸泡，然后用低温加热或超声波处理来促进多糖的释放，最后通过离心等操作得到提取液。

2. 酶解法酶解法利用酶的作用来提取植物多糖类物质。

通过在植物材料中添加适宜的酶解酶，可以将多糖与其他成分分离。

这种方法操作简便，提取效果较好，但酶解酶的种类和浓度需要根据不同植物材料的特点来选择。

3. 超临界流体提取法超临界流体提取法是一种新兴的提取方法，其优点包括提取效果好、工艺简单、操作方便等。

该方法使用超临界流体（如二氧化碳）作为溶剂，能够在较低的温度和压力下提取植物中的多糖类物质，避免热力学和传质困难。

三、纯化植物多糖类物质的方法1. 溶剂结晶法溶剂结晶法是植物多糖类物质纯化的常用方法之一。

通过在提取液中添加适当的有机溶剂，使多糖类物质结晶出来，然后通过过滤、洗涤和干燥等步骤得到纯化的多糖。

2. 凝胶过滤法凝胶过滤法是一种利用凝胶材料对多糖类物质进行纯化的方法。

该方法利用凝胶的孔隙大小与多糖的分子大小不同，从而实现纯化效果。

通过调节凝胶的类型和浓度，可以提高纯化的效果。

3. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种使用高效液相色谱仪进行分离和纯化的方法。

该方法通过植物多糖类物质在固定相和流动相的不同作用下，实现不同组分的分离和纯化。

多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。

有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。

与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。

3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。

此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。

（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。

超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。

（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。

二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。

多糖的提取和纯化之杨若古兰创作多糖的提取和纯化多糖的提取和纯化摘要本文较具体地介绍了多糖的提取和纯化方法，为多糖的研讨和生产提供参考根据.关键词多糖；提取；纯化；活性炭多糖（polysacharides，PS），又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物.它广泛分布于天然界高等植物、藻类、微生物（细菌和真菌）与动物体内.20世纪60年代以来，人们逐步发现多糖具有复杂的、多方面的生物活性和功能[1]：(1)多糖可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，能医治风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫零碎疾病，甚至能抗AIDS病毒[2].如甘草多糖具有明显的抗病毒和抗肿瘤感化[10]，黑木耳多糖、银杏外种皮多糖和芦荟多糖可抗肿瘤和加强人体免疫功能[3-5].(2)多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成感化.如柴胡多糖具有抗辐射，加强免疫功能等生物学感化[6]，麦冬多糖具有降血糖及免疫加强感化[7-8]，动物黏多糖具有抗凝血、降血脂等功能[9].(3)多糖能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老.如爬山虎多糖具有抗病毒和抗衰老感化[10]，银杏外种皮粗多糖具有抗衰老、抗过敏、降血脂、止咳祛痰、减肥等功能[11].另外，多糖作为药物，其毒性极小，因此多糖的研讨已惹起人们极大的爱好. 因为多糖具有的生物活性与其结构紧密相干，而多糖的结构又是相当复杂的，所以在这一领域的研讨绝对缓慢.但人们在多糖的分离提取与纯化方面已做出了很多工作.1. 多糖的提取[12]1.1 热水浸提法：1.1.1多糖提取条件的优选根据文献报导[13]：影响热水浸提多糖的身分次要有提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度、pH值、醇析浓度和植物颗粒大小等.在试验前对上述多种身分利用正交实验法做出优选，才干选出最好提取方案.1.1.2其步调为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗濯→干燥首先除去概况脂肪.原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣普通用水作溶剂（也有效氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M 氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖.温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次.得到的多糖提取液大多较黏稠，可进行吸滤.也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则须要中和）.然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物资结合生成不溶性络合物或盐类沉淀.然后顺次用乙醇、丙酮和乙醚洗濯.将洗干后疏松的多糖敏捷转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）.干燥后可得粉末状的粗多糖.1.2 微波辅助提取法：其道理为利用分歧极性的介质对微波能的分歧接收程度，使基体物资中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物资从基体或体系平分离出来，进入到介电常数小，微波接收能力较差的萃取剂中[14].因为微波能极大加速细胞壁的破裂，因此利用于中草药中无效成分的提取能极大加快提取速度，添加提取产率.而且因为其选择性好，提取后基体能坚持良好的性状，提取液也较普通的提取方法澄清[15].聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）.1.3 超声辅助法：其道理是利用超声波的空化感化加速植物无效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16].超声波辅助法与惯例提取法比拟，具有提取时间短、产率高、无需加热等长处[17].1.4 索氏提取法：将植物粉末置于索氏提取器中，加入石油醚，60℃-90℃条件下提取至无色（普通为6小时）.过滤，滤渣挥发干燥完溶媒后加入80%乙醇，再提取6小时，过滤，滤渣乙醇挥发干燥后加蒸馏水.回流提取2次，趁热过滤，滤液减压浓缩，再除蛋白，醇沉，除色素.60℃干燥，称重.1.5 醇提法：前后将90%和50%乙醇加入植物粉末中，振荡充分再抽滤.滤液中加入充足无水乙醇，至于4℃冰箱中过夜.减压抽滤，再除去色素，得多糖粗品，在60℃通风干燥箱中干燥，再置干燥皿中恒重保管.醇提法方法简单，易于操纵，但提取率较低，乙醇使用量大，不宜大规模提取使用.1.6 其它方法：多糖的提取方法还有稀碱液浸提法、稀酸液浸提法、酶法等.但因为稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因此很多试验中防止采取稀碱液浸提法和稀酸液浸提法.2. 多糖的纯化2.1 多糖中杂质除去方法粗多糖中常常混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别除去.2.1.1 除蛋白质采取醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋白质，脱去蛋白质的方法有多种：如选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲烷、鞣质等试剂来处理，但用酸性试剂宜短，温度宜低，以避免多糖降解.经常使用的方法有[19]：2.1.1.1 沙维积法（Sevag法）[20]：根据蛋白质在氯仿等无机溶剂变性而不溶与水的特点，将多糖水溶液、氯仿、戊醇（或正丁醇）之比调为25:5:1或25:4:1，混合物剧烈振摇20到30分钟，蛋白质与氯仿－戊醇（或正丁醇）生成凝胶物而分离，然后离心，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质.此种方法较暖和，在防止降解上有较好后果，但效力不高，如五味子多糖的提取实验中要反复处理达三十几次.而且每次除去蛋白量变性胶状物时，不成防止的溶有少量多糖，另外少量多糖与蛋白质结合的蛋白聚糖和糖蛋白，在处理时会沉淀上去，形成多糖的损失.如能配合加入一些蛋白质水解酶，再用Sevage法后果更佳.2.1.1.2 三氟三氯乙烷法[21]：多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温下搅拌10min摆布，离心得上面水层，水层继续用上述方法处理几次，即得无蛋白质的多糖溶液，此法效力高，但溶剂沸点较低，易挥发，不宜大量利用.2.1.1.3 三氯醋酸法：在多糖水溶液中滴加5％－30％三氯醋酸，直至溶液不再继续混浊为止，在5－10℃放置过夜，离心除去沉淀即得无蛋白质的多糖溶液.此法会惹起某些多糖的降解.Sevag法、三氟三氯乙烷法和三氯醋酸法三种方法均不适合糖肽，因糖肽也会像蛋白质那样沉淀出来.对于对碱波动的糖蛋白，在硼氢化钾存鄙人，用稀碱暖和处理，可以把这类结合蛋白质分开[1].2.1.1.4 酶解法[22]：在样品溶液中加入蛋白质水解酶，如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等，使样品中的蛋白质降解.通常将其与Sevag法综合使用除蛋白质后果较好.2.1.1.5 盐酸法[23]：取样品浓缩液，用2mol/L盐酸调节其PH至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心，弃去沉淀，即脱去蛋白质.另有李知敏[23]和叶将瑜[25]等人分别在植物多糖实验中证实：盐酸法、三氯乙酸法及Sevag法脱蛋白率分别为72.5％、46.1％和42.3％，多糖的损失率分别为15.1%、6.1％和14.3％.盐酸法脱蛋白率高，但多糖的损失率也较高;三氯乙酸法较暖和，但除蛋白效力不高；Sevag 法的脱蛋白后果不及前两种.2.1.1.6 其它方法：可以加入5%ZnSO4溶液和饱和Ba（OH）2溶液，振荡后离心去蛋白.此法除蛋白不敷完整，可结合Sevag法使用.还可在提取液中加入50%的TCA溶液至沉淀完整，在4000r/min的条件下离心10min，收集上清液，即为除蛋白液.还有人使用4:1的氯仿-乙醇溶液除蛋白，将混合液清摇，再静置，取上清液.此过程需反复多次方可除尽蛋白.除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验，观察在280mm处是否有接收，如果无接收则标明蛋白质曾经除尽[24].2.1.2 除色素2.1.2.1活性炭（activated carbon）除色素[12]：活性炭属于非极性吸附剂，有着较强的吸附能力，特别适合于水溶性物资的分离.它的来源充足，价格廉价，上柱量大，适用于大量制备性分离.目前用于色谱分离的活性炭次要分为粉末状活性炭、颗粒状活性炭、锦纶活性炭三种.普通情况下，尽量防止用活性炭处理，因为活性炭会吸附多糖，形成多糖的损失.2.1.2.2对于植物来源的多糖，可能含有酚型化合物而色彩较深，这类色素大多呈负性离子，不克不及用活性炭接收剂脱色，可用弱碱性树脂DEAE纤维素或DuoliteA－7来吸附色素.2.1.2.3若糖和色素时结合的，易被DEAE纤维素吸附，不克不及被水洗脱，这类色素可进行氧化脱色：以浓氨水或NaOH液调至PH8.0摆布，50℃。

多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类生物大分子，在自然界中广泛存在于植物、菌类和海洋生物等中。

它们由许多重复单元组成，具有多种生物活性和功能。

多糖具有广泛的应用价值，如食品工业、医学和生物材料领域。

多糖的提取、纯化以及化学修饰和抗氧化性的研究对于开发多糖的应用潜力具有重要意义。

多糖的提取和纯化是多糖研究的基础。

传统的提取方法主要包括热水提取、乙醇沉淀和酸碱水解等。

热水提取是最常用的方法之一，它通过加热将多糖从细胞壁中释放出来。

乙醇沉淀是一种富集多糖的方法，通过加入乙醇使多糖在溶液中沉淀出来。

酸碱水解是将多糖经过酸碱处理，使其分解为单糖或低聚糖的方法。

这些方法都具有一定的局限性，如提取效率低、纯度不高等。

近年来，一些新的多糖提取和纯化方法逐渐被开发出来。

超声波提取法利用超声波的机械作用和热效应，可以快速高效地提取多糖。

超声波破碎细胞壁，使多糖从细胞中释放出来，提高了提取效率。

离子液体提取法利用离子液体的溶解性和选择性，可以选择性地提取多糖。

这些新的方法提高了多糖提取的效率和纯度，为后续的研究提供了更好的基础。

多糖的化学修饰是将多糖的结构进行改变，从而获得具有特定功能和性能的多糖。

常见的化学修饰方法包括酰化、酯化、磷酸化和氨基化等。

这些修饰方法可以改变多糖的溶解性、稳定性和生物活性等，进一步拓展了多糖的应用领域。

氨基化可以增加多糖的带电性，使其在药物传输和生物材料方面具有更好的应用前景。

化学修饰还可以改变多糖的空间结构，从而改变其与生物分子的相互作用，进一步调控多糖的功能。

多糖具有一定的抗氧化性，可以帮助清除体内的自由基，减少氧化应激对身体的损害。

抗氧化性是多糖的重要功能之一，吸引了人们的广泛关注。

目前，研究人员已经发现了许多具有较强抗氧化活性的多糖，如海藻酸、菌藻多糖和植物多糖等。

这些多糖可以通过清除过氧化物自由基和调节抗氧化酶活性等途径发挥抗氧化作用。

研究人员还通过改变多糖的结构和修饰多糖，提高其抗氧化性能。