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基因MDR1高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性

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糖尿病患者多药耐药基因mdr1的表达

糖尿病患者多药耐药基因mdr1的表达

糖尿病患者多药耐药基因mdr1的表达黄治存【期刊名称】《中国社区医师（医学专业）》【年(卷),期】2010(012)009【摘要】目的:体外观察糖尿病患者肝细胞诱导发生胰岛素抵抗(IR)中多药耐药基因mdr1的表达.方法:采用高浓度胰岛素诱发肝源性细胞HepG2建立IR细胞模型(HepG2 IR细胞),GOD-POD微量化法测定葡萄糖消耗量,RT-PCR检测胰HepG2 IR细胞mdr1基因和胰岛素受体(InsR)mRNA的表达,流式细胞术(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)和InsR蛋白水平.结果:胰岛素诱发HepG2发生IR后,HepG2 IR细胞葡萄糖消耗量降低约10%～45%,InsR基因mRNA表达显著下调、受体表达量降低50.2%～82.9%.胰岛素诱导HepG2细胞产生抗性的过程中,耐药基因mdr1基因表达同步显著增强,mRNA转录增高0.7～2.1倍,P-gp表达阳性细胞增加0.6～1.7倍、表达强度增高.结论:胰岛素诱发的肝脏胰岛素抵抗细胞mdr1基因和P-gp 的表达显著增强,提示耐药基因可能与胰岛素抵抗相关联.【总页数】2页(P116-117)【作者】黄治存【作者单位】733000,甘肃武威市中医医院检验科【正文语种】中文【相关文献】1.中药复方熄风胶囊对难治性癫痫大鼠多药耐药基因MDR1mRNA表达的影响[J], 陈会;李新民;路岩莉;孙丹;聂坤;房艳艳;任艳艳2.毛蕊异黄酮体外转运研究及对多药耐药基因MDR1表达的影响 [J], 聂根;黄旭军;张信平;徐江琳;毛园清;朱真;程时刚3.多药耐药基因MDR1在胃肠癌的表达及其临床意义 [J], 毕品端;杨斌;梁云4.愈痫灵方对KA致痫大鼠海马及颞叶皮质多药耐药基因MDR1b表达的影响 [J], 李振光;宋祖丽;王净净;李智雄;谢静涛;左亚杰;张曦;肖瑶5.TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达 [J], 王慧群;张开光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

实体肿瘤MDR1多药抗药基因表达RT—PCR检测的临床意义

实体肿瘤MDR1多药抗药基因表达RT—PCR检测的临床意义

实体肿瘤MDR1多药抗药基因表达RT—PCR检测的临床意
义
毛慧生;冯玉梅
【期刊名称】《中国肿瘤临床》
【年(卷),期】1998(025)003
【摘要】多药耐药性是化疗失败的主要原因，采用ＲＴ－ＰＣＲ核酸扩增技术检
测了１８例实体肿瘤，１６例恶性胸腹水肿瘤细胞多药抗药基因ｍＲＮＡ的表达水平，并分析了表达水平与化疗药物治疗反应的关系。

３４例中ＭＤＲ１不表达３例，低表达１２例，中度表达１０例和高表达９例。

ＣＤ３例ＭＤＲ１表达均为（＋）和（－），并初步观察到，肿瘤组织中ＭＤＲ１中，高表达临床无效的占８８．９％，ＭＤＲ１不或低表达临床反应ＣＲ／ＰＲ的８１．
【总页数】3页(P213-215)
【作者】毛慧生;冯玉梅
【作者单位】天津市肿瘤医院肿瘤研究所;天津市肿瘤医院肿瘤研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R730.53
【相关文献】
1.RT—PCR技术检测原发上皮性卵巢癌MDR1基因表达 [J], 刘东光;杨本付
2.应用RT-PCR方法定量分析肾癌患者多药耐药基因表达水平及其临床意义 [J],
庄建平;周先举;卢建林;樊峰;钱润卿
3.荧光定量RT-PCR检测mdr1在急性白血病中的表达及临床意义 [J], 王松梅;于建宪;徐克惠;邢秀华
4.RT—PCR定量检测急性白血病多药耐药基因(MDR1)的表达 [J], 傅卫军;王东星;王昶;余润泉;黄隆安
5.用RT-PCR法检测急性白血病患者MDR1基因表达 [J], 齐君原;武永吉
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多耐药基因mdr-1检测

多耐药基因mdr-1检测

「临床意义」药物耐受是影响肿瘤化疗的最大障碍。

多药耐药（MDR）是指细胞可耐受结构、功能及杀伤机制不同的多种药物的致死剂量。

耐药的根本原因是多耐药基因mdr-1表达升高。

mdr-1基因是一个相对保守的基因，人类mdr-1基因位于染色体7q21-21、1，共有28个外显子，其cDNA长度4.3kb，编码一个170kD的膜糖蛋白（P-170）。

通过检测mdr-1基因表达可以预测患者对化疗的敏感性并据此进行有针对性的化疗。

用反转录PCR （RT-PCR）测定mdr-1基因表达的方法有灵敏、快速、简便的特点。

mdr-1高表达对致肿瘤对多种药物产生耐受，但并非对所有的药物都耐受。

单纯mdr-1表达升高与化疗药物DDP 的耐受关系不大。

mdr-1基因表达主要可造成肿瘤对几种脂性药物产生程度不同的耐受；对生物碱类高度耐受；对蒽环类中度耐受；对VP-16中低度耐受；对烷化剂或抗代谢类药物不耐受。

故在mdr-1阴性或低表达肿瘤中使用上述药物。

而在mdr-1阳性病人的化疗方案中，注重CDDP、MTX、5-Fu或氮芥等则更可取。

目前利用mdr的逆转剂Verapamil等来提高肿瘤对化疗药物的敏感性，同时可减轻心脏毒性。

Pirk在63例AML患者中发现：29%为mdr-1阴性，其化疗完全缓解率为89%；71%为mdr-1阳性，其化疗完全缓解率为53%；所有较早死亡的患者都为mdr-1阳性。

mdr-1阳性表达为预后不良因素。

mdr-1表达阴性一般来说对化疗敏感，但也存在不敏感的，可能除mdr-1以外还可能有未明机制的存在。

多药耐药(MDR)基因检测

多药耐药(MDR)基因检测
多药耐药(MDR)基因检测
介绍
01 正常值
03 注意事项 05 相关症状
目录
02 临床意义 04 相关疾病
多药耐药(MDR)基因编码P-糖蛋白(P-170)，该蛋白位于细胞膜上，有药物泵作用，将进入细胞的药物泵出细 胞外而使细胞产生耐药。MDR阳性表示各种癌症的多药耐药。
正常值
ห้องสมุดไป่ตู้
正常范围：阴性。
感谢观看
临床意义
1.判断肿瘤病人对当前化疗用药是否产生耐药; 2.在化疗前可指导临床用药，以便选择或制定化疗发案。
注意事项
无绝对或相对禁忌症。
相关疾病
子宫内膜癌，多发性内分泌肿瘤综合征Ⅰ型，膀胱癌，皮肤癌，先天性肿瘤，男性尿道癌，肾盂肿瘤和输尿 管肿瘤，胰腺癌，肿瘤性息肉，大肠癌
相关症状
基因融合，脓肿，贫血，恶心与呕吐，消瘦，毛发异常，发烧

肿瘤多药耐药基因 (MDR1)核酸检测试剂盒说明书

肿瘤多药耐药基因 (MDR1)核酸检测试剂盒说明书

CatSA-67021MDR1(RNA)2010(第二版)1/2肿瘤多药耐药基因(MDR1)核酸扩增检测试剂盒说明书(PCR-荧光探针法)【名称】通用名：肿瘤多药耐药基因(MDR1)核酸检测试剂盒说明书英文名：Multidrug Resistance Gene (MDR1)Fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction (PCR)Diagnostic kit 汉语拼音：zhong liu duo yao nai yao ji yin (MDR1)he suan kuo zeng jian ce shi ji he shuo ming shu【目的】本试剂盒适用于检测肿瘤患者新鲜组织、全血等样本中多药耐药基因(MDR1)mRNA ，用于对化疗药物产生耐药的辅助诊断及其病人药物治疗的疗效监控。

其检测结果仅供临床参考。

【原理】本试剂盒选取一对肿瘤多药耐药基因(MDR1)特异性引物和一条特异性荧光杂交探针，应用Trizol 提取RNA ，经逆转录酶作用将RNA 转录成cDNA ，后者在、耐热DNA 聚合酶（Taq 酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg 2+、Tris-HCl 等)四种核苷酸单体（dNTPs ）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对肿瘤多药耐药基因(MDR1)进行扩增，从而达到快速准确实时定量检测之目的。

【组成】名称数量规格RNA 提取液B 1管500μl/管逆转录酶系1管40μl/管MDR1-RT MIX 2管140μl/管Taq 酶系1管80μl/管MDR1-PCR MIX 1管960μl/管MDR1阳性质控品1管50μl/管(1×107Copies/ml)阴性质控品1管500μl/管DEPC 水1管2000μl/管备注：10×RCLB 、RNA 提取液A (500500μμl Trizol reagents reagents))等另行配备。

肿瘤多药耐药机制的研究进展

肿瘤多药耐药机制的研究进展

肿瘤多药耐药机制的研究进展发表者：燕速多药耐药（MDR）系指肿瘤细胞对1种抗肿瘤药物出现耐药性的同时，对其他多种结构不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也有耐药性。

随着肿瘤化疗药物的广泛应用，肿瘤的耐药性问题越来越突出，已成为肿瘤有效治疗的主要障碍之一。

目前研究肿瘤耐药机制主要是从MDR基因表达的产物入手，探讨此类产物引起的耐药机制。

主要有P－糖蛋白（P－gP）、细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）及谷胱甘肽转移酶（GST）、DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ（TOPOⅠ、Ⅱ）、多药耐药相关蛋白（MRP）和肺耐药蛋白（LRP）等。

P－糖蛋白（P－gP）P－gP是一种跨膜糖蛋白，由MDR1基因编码所产生，起外流泵作用，能将抗肿瘤药物逆浓度从细胞内泵出到细胞外，降低细胞内药物浓度而导致肿瘤耐药。

这种糖蛋白是由1281个氨基酸组成的两个完全相同的单体构成，每个单体均有6个跨膜区和1个三磷酸腺苷（ATP）结合点。

跨膜区作为膜通道有利于药物转运，而ATP结合点与能量供应有关。

大量研究证明，P－gP高表达伴随肿瘤患者预后不良，如低缓解率、高复发率、化疗疗效差、生存期短，可作为肿瘤患者预后的评价指标。

细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）及谷胱甘肽转移酶（GST）GSH过度表达，能与化疗药物的氧化物质结合，从而阻止化疗药物攻击肿瘤细胞，从而产生耐药。

GST分α（碱性）、π（酸性）、μ（中性）3类，它可催化GSH与化疗药物的结合。

GSH、GST的表达强度与平均生存期有关，表达强度越高，生存期越短。

GSH、GST亦可保护细胞对抗放疗的损伤，因而产生对放疗的耐受。

DNA拓扑异构酶（TOPOⅠ、Ⅱ）DNA拓扑异构酶是一种能催化DN A超螺旋结构局部构型改变的基本核酶，分Ⅰ、Ⅱ类。

化疗药物通过该酶与DNA交联形成共价复合物，即可分割复合物，引起DNA断裂，导致肿瘤细胞死亡。

DNA拓扑异构酶同时又是许多化疗药物重要的攻击靶点，导致该酶减少或活性下降，使得可分割的复合物减少，肿瘤细胞DNA损害减少，并具有修复力，使肿瘤细胞不因DNA断裂而死亡，从而产生耐药。

多药抗药基因MDR-1的表达实验

多药抗药基因的表达实验标签：抗药基因多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测特定基因的过度表达。

PCR扩增法实验方法原理大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。

实验材料RNA试剂、试剂盒PBS氯仿异丙醇萘酸异硫氰酸肽十二烷基肌酸钠构橼酸钠乙酸钠二疏基乙醇乙醇Taq酶仪器、耗材离心机紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳PCR仪实验步骤一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107个细胞，冷PBS洗涤后，加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的异硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸钠，0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0，0.25 mol/l 乙酸钠，pH4.0，0.5%二疏基乙醇，50%萘酸），混匀。

2. 加入400 ul 氯仿，混匀，以13 000 r/min 于4℃离心15 min。

3. 取上清液加入等体积的异丙醇，4℃放置30 min。

4. 然后以13 000 r/min 离心15 min，吸上清，将RNA成点用75%的乙醇洗涤1次，溶于100 ul 的无菌双蒸馏水中。

5. 并用紫外分光光度计检测RNA纯度（A260/A280应为1.8~2.0）后备用。

二、反转录及PCR扩增1. 引物2. 取细胞总RNA10 ul 加入20 ul AMV逆转录酶反应体系中，42℃保温30 min 进行反转录，合成cDNA。

3. 然后置95℃，3 min 终止反转录。

4. 接着在Taq酶的作用下，用mdr-1和β2-MG引物，对cDNA上的目的片段进行PCR5. 94℃预变性2 min，然后94℃变性1 min，50℃退火1 min，72℃延伸1 min，扩增35个循环。

6. 最终在60℃保温7 min，以保证产物充分延伸。

7. 取10 ul 扩增产物在3%琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下照相，与mdr-1 cDNA阳性对照，等位的DNA条带为阳性，反之为阴性。

多药耐药基因MDR1在大肠癌的表达及意义

多药耐药基因MDR1在大肠癌的表达及意义
阴冠程;亓春花;刘君;崔刚
【期刊名称】《泰山医学院学报》
【年(卷),期】2007(028)001
【摘要】目的探讨多药耐药基因(MDR1基因)在大肠癌组织中的表达及其与临床
病理的关系.方法应用RT-PCR方法检测了93例手术切除大肠癌组织中的MDR1 mRNA.结果MDR1 mRNA的阳性率为37.63%,MDR1基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移及Dukes分期等无关.结论化疗前大肠癌组织中MDR1基因即存在较高的表达率,且独立于病理形态学之外.提示化疗前要区别对待,对MDR1基因表达阳性者应合理选择化疗.
【总页数】3页(P32-34)
【作者】阴冠程;亓春花;刘君;崔刚
【作者单位】泰山医学院附属泰安医院,山东,泰安,271000;泰山医学院附属泰安医院,山东,泰安,271000;泰山医学院附属泰安医院,山东,泰安,271000;泰山医学院附属泰安医院,山东,泰安,271000
【正文语种】中文
【中图分类】R969
【相关文献】
1.多药耐药基因MDR1在胃肠癌的表达及其临床意义 [J], 毕品端;杨斌;梁云
2.急性白血病患者多药耐药基因MDR1的表达及临床意义的研究 [J], 陈伟;杨沛;
邓少丽;胡永发
3.多药耐药基因MDR1在乳腺癌中的表达及意义 [J], 林惠忠;陈磊;崔京远;崔伟;周东风
4.多药耐药基因MDR1在乳腺癌中的表达及意义 [J], 孟珍;唐来香
5.多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义 [J], 徐晓妹;林惠忠;鲁杰;张日民;黄维青;林兆武
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乳腺癌细胞多药耐药基因(MDR1)表达的检测及其临床意义的探讨

乳腺癌细胞多药耐药基因(MDR1)表达的检测及其临床意义的
探讨
赵永华;鲍丽萍;石正
【期刊名称】《中国误诊学杂志》
【年(卷),期】2001(1)6
【摘要】目的探讨多耐药基因 MDR1在乳腺癌中的表达及其临床意义。

方法用 Pgp单抗 C2 19、C49、JSB1免疫组化方法检测 42例乳腺癌组织中的 MDR1表达水平 ,并行化疗疗效的判定 ,将各指标对比分析。

结果 MDR1表达的阳性率为 38.1% ,MDR1表达与化疗疗效呈负相关 ,MDR1表达水平与肿瘤大小、病理组织学分化程度及 ER情况均有相关性。

结论 MDR1在乳腺癌中普遍存在 ,MDR1不仅是耐药性指标。

【总页数】3页(P826-828)
【关键词】乳腺肿瘤;乳腺癌;多药耐药基因;基因表达
【作者】赵永华;鲍丽萍;石正
【作者单位】本钢职工总医院肿瘤外科;本钢职工总医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R737.9
【相关文献】
1.多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/Adr中体外转录的小分子干扰RNA(siRNA)对mdr1基因的干扰作用 [J], 袁亚维;孙爱民;刘英
2.反义寡脱氧核苷酸抑制多药耐药基因mdr1表达并逆转耐药肝癌细胞的体外试验研究 [J], 彭志平;蒋明东;尹晓玲;文明;李少林
3.乳腺癌耐药基因MDR1表达的临床意义及耐药机制研究 [J], 张剑权;吴海红;黄桂林
4.多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义 [J], 徐晓妹;林惠忠;鲁杰;张日民;黄维青;林兆武
5.47例原发性乳腺癌多药耐药MDR1基因表达及其临床意义 [J], 周东风;李红梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

力达霉素抗肿瘤作用及其分子机制研究新进展


ＬＤＭ与５００ｎｍｏｌ／Ｌ吉西他滨联用，能够明显抑制
胰腺癌细胞ＰＡＮＣ－ｌ增殖，ＣＤＩ＜０．７５，具有协同抗 肿瘤作用ｆ８ｉ。０．１ｎｍｏｌ／Ｌ ＬＤＭ与５１．ｔｍｏｌ／Ｌ ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ联 合作用时，能够显著抑制肺癌细胞Ｈ４６０增殖，其
万方数据
４０４
力达霉素抗肿瘤作用及其分子机制研究新进展陈淑珍等
表１
Ｔａｂ．１
力达霉素对不同人肿瘤细胞的细胞毒作用（克隆形成法比较）圆
Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ
ｌｉｄａｍｙｃｉｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ（Ｃｌｏｎｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎｌ
‘ＮｒＤ：末进行试验。
万方数据
中国抗生素杂志２０１０年６月第３５卷第６期
．４０３．
＋ＮＤ：未进行试验。
中国抗生素杂志２０１０年６月第３５卷第６期
４０１
文章编号：１００１．８６８９（２０１０）０６－０４０１－０７
力达霉素抗肿瘤作用及其分子机制研究新进展
陈淑珍甄永苏邵荣光
（中国医学科学院，中国协和医学院，医药生物技术研究所，北京１０００５０）
摘要：力达霉素属于烯二炔类抗肿瘤抗生素，由一个酸性蛋白和一个烯二炔发色团通过非共价键结合而成，通过多种作用 机制在体内外对多种肿瘤产生强烈的抗肿瘤作用。目前，力达霉素已经进入ＩＩ期临床研究，本文介绍了力达霉素的抗肿瘤作用 和分子作用机制方面的新进展，为进一步研究力达霉素提供参考。 关键词：力达霉素；抗肿瘤作用；分子机制 中图分类号：Ｒ９７９．１＋４ 文献标志码：Ａ
抗肿瘤作用及分子机制方面的新进展进行综述。
１
力达霉素的抗肿瘤作用
１．１体外抗肿瘤作用
ＬＤＭ是经过精原细胞法筛选得到的，在体外具 有极强的杀伤肿瘤细胞的作用。按克隆生存测定的
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药学学报 -*WL 9QL31L*5UWO*L XOAO*L ’""H ， F! （ !’ ） ： !!FH E !!#!
基因 !"#$ 高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性
师以康，吴淑英，黄云虹，甄永苏 !
（ 中国医学科学院、 中国协和医科大学 医药生物技术研究所，北京 !"""#" ） 摘要：目的$ 利用经药物诱导获得的 !"#$ 基因高表达细胞株以及通过 !"#$ 基因转染建立的稳定高表达细胞 株， 研究多药耐药肿瘤细胞对力达霉素 （ %&!"’( ） 的药物敏感性。方法 $ 构建 !"#$ 重组真核表达质粒 )*+,-./ ! 0 利用脂质体转染技术， 获得 !"#$ 高表达 45)6’ 肝癌细胞。经 78&9%7、 细胞荧光免疫化学及罗丹明外排实验， 123! ， 鉴定了细胞的 !"#$ 表达水平和药物外排活性。:88 方法测定敏感细胞及相对应的多药耐药细胞对力达霉素等多 种抗肿瘤药物的药物敏感性。结果$ !"#$ 稳定转染细胞株 45)6’ 0 123! 、 多药耐药 ;<=’"" 细胞和 :%>&( 0 -+7 细胞 （ "/ "’" @ "/ "!! ）A1BC ・ D E ! ， （ "/ ’F @ "/ ’" ）A1BC ・ D E ! 和 （ "/ "’G @ "/ "!! ）A1BC ・ D E ! 。 对力达霉素的 ?%#" 值分别为 相对于各自的敏感细胞， 多药耐药细胞 45)6’ 0 123! ， ;<=’"" 和 :%>&( 0 -+7 对力达霉素的抗药倍数分别是 !/ . ， H/ G 和 !/ H 倍， 对阿霉素的抗药倍数分别是 G/ G ， .(/ ’ 和 !G!/ . 倍， 对紫杉醇的抗药倍数分别是 F"/ . ，..H/ G 和 FI/ ’ 倍。 未表现出抗药性。 结论 !"#$ 高表达的多药耐药肿瘤细胞对力达霉素仍高度敏感， 关键词：多药耐药性；力达霉素；!"#$ 基因；9&糖蛋白 中图分类号：7IH.$ $ $ 文献标识码：-$ $ $ 文章编号： "#!. E FG(" （ ’""H ） !’ E !!FH E "H
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以及人口腔鳞癌 DE 细胞和 DEF;:: 细胞均由本实 验室保存。细胞于 W< \ ， Q] 9T; 条件下在含 7:] 小牛血清的高糖 0/I/ 培养液中培养传代。 重组真核表达质粒 !"#$%&’ ( ) *+,( 的构建、 酶切鉴定及基因序列测定 ! 根据 J1KL6$ 试剂盒说 明书从多药耐药乳腺癌 /9B3< C >01 细胞中提取总 1=>， 再根据 1J3291 一步法试剂盒操作步骤获得 !"#$ 基因的全长 .0=> 片段。分别以 !"#$ 基因的 Q^端和 W^端基因序列为引物， 并且在引物 Q^ 端分别 加入 =V* K 和 _V6 K 酶切位点。上游引物为 Q^3H9J >H9 >JH H>J 9JJ H>> HHH H>93W^， 下游引物为 Q^39J9 H>H J9> 9JH H9H 9JJ JHJ J3W^。把 1J3 291 产物上 样 于 ;] 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳， 切取 !"#$ 基因对应的条带， 用玻璃奶回收试剂盒提取获 得 !"#$ .0=>；同时，用 限 制 性 内 切 酶 =V* K 和 _V6 K 双酶切质粒 4.0=>W[ 7 ， 电泳， 玻璃奶回收酶 切后的线性 4.0=>W[ 7 ， 最后在室温用 JA 0=> 连接 酶把 !"#$ 基因和酶切后的 4.0=>W[ 7 连接成重组 质粒 4.0=>W[ 7 C "’(7 。把该重组质粒转化到感受 态的 %& ’()* 0GQ ! 大肠杆菌中，在 8E 琼脂平皿中 W< \ 培养过夜， 挑取单克隆于 8E 液 7[ Q "8 中摇菌 过夜， 提取质粒， 酶切鉴定。对酶切鉴定阳性的克隆 进行基因测序分析。 !"#$ 基因高表达人肝癌 -.!/0 稳定转染细胞 株 -.!/0 ) *+,( 的获得与鉴定 ! 经基因测序 !"#$ 基因序列完全正确的重组真核表达质粒 4.0=>W[ 7 C "’(7 用转染级别的质粒提取试剂盒提取后， 按照脂 质体 8&46P*.%,"&-* ;::: 转染操作说明书把该质粒 转染到 !"#$ 低表达的人肝癌 G*4H; 细胞，用7 :::
67&).45)：6($$ 8B OA=5SWO[LW5 WQ5 *Q51BS5ASOWO=OWR WB CO2L1R*OA（ %&!"’( ）OA !"#$ [5A5 B=535M& )35SSOA[ *LA*53 *5CC COA5S 5SWLVCOSQ52 VR 23U[ OA2U*WOBA LA2 VR [5A5&W3LAS^5*WOBAJ 8#)"%1& $ +,- _LS *CBA52 VR 78&9%7 LA2 WQ5A 5UZL3RBWO* 5M)35SSOA[ 35*B1VOALAW )CLS1O2 )*+,-./ ! 0 123! _LS *BASW3U*W52J ]SOA[ DO)B^5*WL1OA5 ’""" ，L SW3LOA B^ SWLVCR W3LAS^5*W52 QU1LA Q5)LWB1L *LA*53 *5CCS，45)6’ 0 123! ，_LS BVWLOA52J 8Q5 !"#$ 17,- C5=5C，9&[CR*B)3BW5OA（ 9&[)）C5=5C LA2 WQ5 L*WO=OWR B^ 9&[) WB 5MW3U25 23U[S OA *LA*53 *5CCS _535 25W531OA52 VR 78&9%7，O11UAB^CUB35S*5A*5 LALCRSOS LA2 3QB2L1OA5 !’. 5^^CUM LSSLRJ 8Q5 *Q51BS5ASOWO=OWR B^ *LA*53 *5CCS _OWQ CB_ B3 QO[Q !"#$ 5M)35SSOBA WB CO2L1R*OA LA2 BWQ53 LAWOWU1B3 23U[S _LS W5SW52 VR :88 LSSLRJ 9#&23)& $ 8Q5 !"#$ 17,- LA2 9&[) C5=5CS OA ;<=’"" ，:%>&( 0 -+7， LA2 SWLVCR W3LAS^5*W52 45)6’ 0 123! *5CCS _535 1U*Q QO[Q53 WQLA WQLW OA 35S)5*WO=5 )L35AW ;< ，:%>&( LA2 45)6’ *5CCSJ 8Q5 ?%#" =LCU5S B^ CO2L1R*OA ^B3 ;<=’"" ， :%>&( 0 -+7 LA2 45)6’ 0 123! *5CCS _535 （ "/ ’F @ "/ ’" ） A1BC ・ D E ! ， （ "/ "’G @ "/ "!! ） A1BC ・ D E ! ， LA2 （ "/ "’" @ "/ "!! ） A1BC ・ D E ! ， 35S)5*WO=5CRJ %B1)L352 _OWQ )L35AWLC *5CCS，WQ5 =LCU5S B^ 35SOSWLAW ^BC2 ^B3 ;<=’"" ，:%>&( 0 -+7 LA2 45)6’ 0 123! *5CCS WB CO2L1R*OA _535 H/ G ，!/ H LA2 !/ . ^BC2；WB L23OL1R*OA _535 .(/ ’ ，!G!/ . LA2 G/ G ^BC2；WB WLMBC _535 ..H/ G ，FI/ ’ LA2 F"/ . ^BC2，35S)5*WO=5CRJ !%’532&(%’$ DO2L1R*OA OS QO[QCR L*WO=5 WB 1UCWO23U[ 35SOSWLAW *LA*53 *5CCSJ 8Q5 *Q51BS5ASOWO=OWR B^ WQBS5 35SOSWLAW *LA*53 *5CCS WB CO2L1R*OA OS L))3BMO1LW5CR LW WQ5 SO1OCL3 C5=5C LS WQLW B^ )L35AW *LA*53 *5CCSJ :#+ ;%.1&：1UCWO)C5 23U[ 35SOSWLA*5；CO2L1R*OA；!"#$ [5A5；9&[CR*B)3BW5OA
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。本研究利用经药物诱导
获得的多药耐药乳腺癌 /9B3< C >01 细胞、 人口腔 鳞癌 DEF;:: 细胞以及通过构建 !"#$ 重组真核表 达质粒、 获得 !"#$ 高表达的稳定转染肝癌细胞株 G*4H; C "’(7 ， 探讨 80/ 对 !"#$ 高表达的多药耐药 肿瘤细胞的生长抑制作用， 为 80/ 的临床应用及其 分子作用机制研究提供依据。
师以康等： 基因 !"#$ 高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性 ! ! 肿瘤细胞多药耐药 （ "#$%&’(#) (*+&+%,-.*， /01 ） 是影响肿瘤化疗效果的重要因素之一， 而肿瘤细胞 （ 23)$5.64(6%*&- ） 多药耐药基因 !"#$ 编码的蛋白 23)4