50×TAE缓冲液使用说明

核酸电泳【2 】相干试剂.缓冲液的配制办法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸,100 mM EDTA配制量 1 L配制办法 1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中.2.3.参加57.1 ml的乙酸,充分搅拌.4.加去离子水将溶液定容至l L后,室温保存.10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度 890 mM Tris-硼酸,20 mM EDTA配制量 1 L配制办法 l.称量下列试剂,置于l L烧杯中.2.3.加去离子水将溶液定容至l L后,室温保存.10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度 200 rnM MOPS,20 mM NaOAc,10 mM EDTA配制量 1 L配制办法 1.称41.8 g MOPS,置于1 L烧杯中.2.加约700 ml DEPC处理水,搅拌消融.3.应用2 N NaOH调节pH值至7.0.4.再向溶液中参加下列试剂.5.用6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质.7.室温避光保存.注：溶液见光或高温灭菌后会变黄.变黄时也可应用,但变黑时不要应用.溴乙锭 (10 mg/ml)组份浓度 10 mg/ml溴乙锭配制量 100 ml配制办法 1.称量1 g溴乙锭,参加到100 ml容器中.2.参加去离子水100 ml,充分搅拌数h完整消融溴乙锭.3.将溶液转移至棕色瓶中,室温避光保存.4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml.留意：溴乙锭是一种致癌物资,必须当心操作.Agarose凝胶配制办法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(平日是0.5×TBE或1×TAE).2.根椐制胶量及凝胶浓度,精确称量琼脂糖粉,参加恰当的锥形瓶中.3.参加必定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量).注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须同一.4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜,并在膜上扎些小孔,然后在微波炉中加热融化琼脂糖.加热进程中,当溶液沸腾后,请戴上防热手套.当心动摇锥形瓶.使琼脂糖充分平均融化.此操作反复数次,直至琼脂糖完整融化.必须留意,在微波炉中加热时光不宜过长,每次当溶液起泡沸腾时停滞加热,不然会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会破坏微波炉.融化琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完整融化,不然,会造成电泳图像隐约不清.5.使溶液冷却至60℃阁下,如须要可在此时参加溴乙锭溶液(终浓度0.5 µg/ml).并充分混匀.注：溴乙锭是一种致癌物资.应用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套.6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在恰当地位处插上梳子.凝胶厚度一般在3~5 min之间.7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h),然后放置于电泳槽中进行电泳.注：凝胶不立刻应用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存2~5天.琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辩规模6×Loading Buffer(DNA电泳用)组份浓度配制量配制办法 1.称量下列试剂,置于500 ml烧杯中.2.3.参加180 ml的甘油(Glycerol)后,应用2 N NaOH调节pH值至7.0.4.用去离子水定容至500 ml后,室温保存.10 × Loadlng Buffer(RNA电泳用)组份浓度配制置配制办法 1.称量下列试剂,置于10 ml离心管中.2.3.参加5 ml的甘油(Glycerol)后,充分混匀.4.用DEPC处理水定容至10 ml后,室温保存.四.核酸.蛋白质杂交用相干试剂.缓冲液的配制办法20×SSC组份浓度 3.0 M NaCl,0.3 MNa3citrate·2H2O(柠檬酸钠)配制量 1 L配制办法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中.2.3滴加14 N HCl,调节pH值至7.0后,加去离子水将溶液定容至1 L.4.高温高压灭菌后,室温保存.20×SSPE Buffer组份浓度 3.0 M NaCl,0.2 M NaH2PO4,0.02 M EDTA配制量 1.L配制办法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中.2. 3.加NaOH 调节pH 值至7.4(约6.5 ml 的10 N NaOH). 4.加去离子水将溶液定容至l L. 5.高温高压灭菌后,室温保存.50 X Denhardt’S 溶液 组份浓度 配制量 500 ml 配制办法 1.称量下列试剂,置于500 ml 烧杯中. 2.加去离子水约400 ml,充分搅拌消融3.加去离子水将溶液定容至500 ml.4.用0.45µm 滤膜过滤后,分装成每份25 ml.5.-20℃保存.0.5 M 磷酸盐Buffer 组份浓度 0.5 M Na 2HPO 4. 配制量 l L配制办法 1.称量134 g Na 2HPO 4·7H 2O 置于l L 烧杯中. 2.参加约800 ml 的去离子水充分搅拌消融. 3.参加85%的H 3PO 4(浓磷酸)调节溶液pH 值至7.2. 4.加去离子水定容至1 L. 5.高温高压灭菌后,室温保存.Salmon DNA (鲑鱼精DNA)组份浓度 10 mg/ml Salmon DNA配制量约100 ml配制办法 1.称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中,参加约200 ml的TE Buffer.2用磁力搅拌器室温搅拌2~4h,消融后参加4 ml的5 M NaCl,使其终浓度为0.1 M.3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次.4.收受接管水相溶液后,应用17号皮下打针针头快速吸打溶液约20次,以割断DNA.5.参加2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀.6.离心收受接管DNA后,消融于100 ml的去离子水中.测定溶液的OD260值.7.盘算溶液的DNA浓度后,稀释DNA溶液至10 mg/ml.8.煮沸10min后,分装成小份(1 ml/份).-20℃保存.9.应用前在滚水浴中加热5min后,敏捷冰浴冷却.DNA变性缓冲液组份浓度 1.5 M NaCl,0.5 M NaOH配制量 1 L配制办法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中.2.3.加去离子水将溶液定容至l L后,室温保存.预杂交液/杂交液(DNA杂交用)组份浓度Array配制置 100 ml配制办法 1.称量下列试剂,置于200ml烧杯中.分混匀后,应用质后应用.(RNA 杂交用)组份浓度 配制量 100 mL 配制办法 1.称量下列试剂,置于200ml 烧杯中.分混匀后,应用杂质后应用.(Western 杂交用)组份浓度 39 mM Glycine,48 mM Tris,0.037%(W/V)SDS,20%(V/V)甲醇 配制量 1 L配制办法 1.称量下列试剂,置于l L 烧杯中.2. 3.加去离子水将溶液定溶至800 ml 后,参加200 ml 的甲醇. 4.室温保存.TBST Buffer(Western 杂交膜清洗液)组份浓度 20 mM Tris-HCl,150 mM NaCl,0.05%(V/V)Tween 20 配制量 1 L配制办法 1.称量下列试剂,置于l L 烧杯中.2.3.参加0.5 ml Tween 20后充分混匀.4.加去离子水将溶液定容至l L后,4℃保存.关闭缓冲液(Western杂交用)组份浓度 5%(W/V)脱脂奶粉/TBST Buffer配制量 100 ml配制办法 1.称5 g脱脂奶粉参加到100 mlTBST Buffer中,充分搅拌消融.2.4℃保存待用(本关闭液应当现配现用).五.试验室常用造就基的配制办法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度 100 mg/ml Ampicillin配制量 50 ml配制办法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中.2.参加40 ml灭菌水,充分混杂消融后,定容至50 ml.3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌.4.小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存.IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度 24 mg/mL IPTG配制量 50 mL配制办法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中.2.参加40 ml灭菌水,充分混杂消融后,定容至50 ml.3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌.4小份分装(1 ml,份)后,-20℃保存.X-Gal (20 mg/ml)组份浓度 20 mg/ml X-Gal配制量 50 ml配制办法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中.2.参加40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混杂消融后,定容至50 ml.3.小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存.LB造就基组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物),1%(W/V)NaCl 配制量 1 L配制办法 1.称取下列试剂,置于l L烧杯中.2.3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1),调节pH值至7.0.4.加去离子水将造就基定容至1 L.5高温高压灭菌后,4.C保存.LB/Amp造就基组份浓度配制量 1 L配制办法 1.称取下列试剂,置于l L烧杯中.2.3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL).调节pH值至7.0.4.加去离子水将造就基定容至1 L.5.高温高压灭菌后,冷却至室温.6.参加1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后平均混杂.7.4℃保存.TB造就基组份浓度配制量 1.L配制办法 1.配制磷酸盐缓;中液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml.消融2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌消融后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌.2.称取下列试剂,置于l L烧杯中.3.4.加去离子水将造就基定容至1 L后,高温高压灭菌.5.待溶液冷却至60℃以下时,;参加100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液.6.4℃保存.TB/Amp造就基组份浓度配制量 1 L配制办法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml.消融2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌消融后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌.2.称取下列试剂,置于l L烧杯中.第11页，－共11页。

缓冲液的配制方法(总14页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加入 ml的乙酸，充分搅拌。

4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×TBE Buffer组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称 g MOPS，置于1 L烧杯中。

2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。

3.使用2 N NaOH调节pH值至。

6.用 m滤膜过滤除去杂质。

7.室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。

变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

溴乙锭 (10 mg/ml)组份浓度 10 mg/ml溴乙锭配制量 100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。

2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。

3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4.溴乙锭的工作浓度为 g/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。

Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是×TBE或1×TAE)。

2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。

注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。

加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。

三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L配制方法1.2.3.加入57.1 ml 的乙酸，充分搅拌。

4.加去离子水将溶液定容至l L 后，室温保存。

10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris- 硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L配制方法l.2.3.加去离子水将溶液定容至l L 后，室温保存。

10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L配制方法1.称41.8 g MOPS，置于1 L 烧杯中。

2.加约700 ml DEPC 处理水，搅拌溶解。

3.使用2 N NaOH 调节pH 值至7.0。

4.5.用DEPC6.用0.45 m 滤膜过滤除去杂质。

7.室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。

变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

溴乙锭(10 mg/ml) 组份浓度10 mg/ml 溴乙锭配制量100 ml 配制方法 1.称量 1 g 溴乙锭，加入到100 ml 容器中。

2.加入去离子水100 ml ，充分搅拌数h 完全溶解溴乙锭。

3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml 。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。

Agarose 凝胶配制方法1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5×TBE 或1×TAE）。

2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3.加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。

注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。

加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。

北京雷根生物技术有限公司 Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE,RNase free)
产品简介：
Tris-乙酸电泳缓冲液即Tris acetate-EDTA buffer，简称TAE。

1×TAE工作液中含有40mM Tris-acetate、1mM EDTA（pH8.0）。

TAE是非常常用的DNA电泳缓冲液。

本试剂是50倍浓缩的用0.1%DEPC处理水配制的TAE，使用时需用DEPC处理水稀释50倍后使用。

50×TAE(RNase free)主要用于RNA电泳。

产品组成：
操作步骤（仅供参考）：
1、用DEPC处理水稀释到1×后使用。

注意事项：
1、如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。

2、实验过程中，避免RNase污染。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关产品：
产品编号 产品名称
NA0006DNA凝胶加样缓冲液(6×DNA Loading Buffer)
NA0015MOPS电泳缓冲液(1×,RNase free)
NA0034Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE)
NA0042Tris-磷酸电泳缓冲液(1×TPE)
NA0067碱性琼脂糖凝胶加样缓冲液(6×)
PE0025SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×)
PE0092Tris-甘氨酸电泳缓冲液(5×SDS-PAGE)。

三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。

4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法l.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。

2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。

3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

4.再向溶液中加入下列试剂。

5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L。

6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。

7.室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。

变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。

2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。

3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。

Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。

2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)10×TBE Buffer (pH8.3)10×MOPS Buffer ■组份浓度 2 M Tirs-醋酸，100 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

Tris 242 gNa2EDTA·2H2O 37.2 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。

■组份浓度 890 mM Tirs-硼酸，20 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

Tris 108 gNa2EDTA·2H2O 7.44 g硼酸 55 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。

■组份浓度 200 mM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。

2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。

3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。

4. 再向溶液中加入下列试剂。

1 M NaOAc（DEPC处理） 20 ml0.5 M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20 ml5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。

6. 用0.45 μm滤膜过滤除去杂质。

7. 室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。

变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

溴乙锭(10 mg/ml) Agarose凝胶■组份浓度 10 mg/ml溴乙锭■配制量 100 ml■配制方法 1. 称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。

2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。

一、电泳缓冲液概述电泳缓冲液是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。

常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。

作用缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。

电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。

一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。

电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。

电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。

特点二、TAE是使用最广泛的缓冲系统。

其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。

TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb 的片段时分离效果更好。

TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。

TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。

三、50×TAE Buffer 配制方法：1。