茚三酮比色法与甲醛滴定法测定棉籽粕蛋白水解度的比较_刘丽红

谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定蛋白质中赖氨酸（lysine，Lys）的含量是谷物品质的主要指标之一。

由于动物及人类不能合成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。

本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法（dye binding lysine，DBL）测定玉米种子中赖氨酸含量。

Ⅰ茚三酮显色法一、原理谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的c-NHz，它与茚三酮（ninhydrin）试剂可发生颜色反应，生成紫红色物质，其颜色与赖氨酸残基的数目成正相关。

选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配成标准溶液，做出标准曲线，可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量。

二、材料、仪器设备及试剂（一）材料不同品种的玉米种子，用粉碎机粉碎，过100目筛子，收集过筛后的细粉，放入广口瓶内，加入沸程60~90℃的石油醚，使其淹过粉面，浸泡8h，不时搅动进行脱脂。

然后过滤，并用石油醚淋洗沉淀若干次，弃去滤液。

将脱脂玉米粉晾在干净的滤纸上，置阴凉通风处吹干石油醚。

收集干粉，置干燥器内，保存备用。

（二）仪器设备722型分光光度计、水浴锅，试管，圆头玻璃棒（圆头大小要与试管大小配套）。

（三）试剂（1）缓冲溶液，称取30g甲酸钠，溶解于约60mL蒸馏水中，加入10mL8%的甲酸，最后加水到100mL。

（2）茚三酮试剂：称取1g茚三酮和1g氯化镉（CdCl2·H2O），加入25mL上述缓冲溶液和75mL乙二醇，室温下放置一天、第二天使用。

若出现沉淀、则过滤后使用。

该溶液一定要头一天配制，第二天使用，不宜放置过久，也不能现用现配。

（3）4%和2%无水碳酸钠溶液各50mL。

（4）标准亮氮酸溶液，准确称取25mg亮氨酸，加数滴稀盐酸，待溶解后定容至50mL，该溶液亮氨酸浓度为500μg/mL。

准确吸取上述母液1mL、3mL、5mL、7mL、9mL，分别稀释至25mL，待用。

三、实验步骤（一）绘制标准曲线准确吸取已配好的标准浓度系列的亮氨酸溶液各0.5mL，分别放入5支试管中，每种浓度做三个重复。

棉籽蛋白水解物水解度3种测定方法的比较林虬;黄薇;宋永康;姚清华;颜孙安;钱爱萍【摘要】介绍了一种比较简单可行、适用于棉籽蛋白水解度的测定方法——OPA 法.选用中性蛋白酶将棉籽蛋白水解成棉籽多肽,通过新建立的方法测定不同酶解时间棉籽蛋白水解液的水解度,并与文献所报道的甲醛滴定法和茚三酮比色法进行比较.结果表明,与甲醛滴定法和茚三酮比色法相比,OPA法更简便、更快速,且灵敏度高、可重复性强、对环境友好,是3种方法中最适合测定棉籽蛋白水解液水解度的方法,同时该方法也适用于饲料及食品行业中其他蛋白水解度的测定.%This paper introduced a method that based on the reaction oi primary ammo groups with o-phthaldialdehyde (OPA) for determining the hydrolytic degree of cottonseed protein. Neutral protease was used to hydrolyze cottonseed protein and the degree of hydrolysis (DH) was compared with three assay methods, I. E. O-phthaldialdehyde method, formaldehyde titration method and ninhydrin colorimetric method. Comparing with formaldehyde titration and ninhydrin colorimetric methods, results showed that OPA method performed more accurate and faster in analyzing, easier to handle, repeatable in results and friendly for environment. It is recommended that OPA method is an appropriate method for evaluating in hydrolytic degree of cottonseed protein.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2011(026)006【总页数】5页(P1076-1080)【关键词】水解度;棉籽蛋白;对苯二甲醛法【作者】林虬;黄薇;宋永康;姚清华;颜孙安;钱爱萍【作者单位】福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003【正文语种】中文近年来，棉籽蛋白受到饲料业的普遍关注，提高棉籽蛋白资源利用率成为当前国内外学者研究的热点，其中使用蛋白酶生物技术将低值的蛋白源转化成多肽、寡肽等高值蛋白原料的方法极具生命力，是目前棉籽蛋白质的开发和利用的新方法和思路。

总氨基酸含量测定方法咱今儿就来说说这总氨基酸含量测定方法。

你可别小瞧了这个，它就像是解开食物营养密码的一把钥匙呢！想象一下，氨基酸就像是一群小精灵，在各种食物里蹦跶。

我们要测定它们的含量，就得有巧妙的办法。

先来说说茚三酮比色法，这就好像是个神奇的魔法，能让氨基酸现形。

把样品处理好后，加上茚三酮试剂，然后就等着颜色变化。

这颜色一变，就好像小精灵们穿上了特定颜色的衣服，我们就能知道它们有多少啦！这多有趣呀，就跟变魔术似的。

还有个方法叫甲醛滴定法，这就像是一场和氨基酸的小游戏。

加入甲醛，然后通过滴定来确定氨基酸的量。

就好像我们在和氨基酸捉迷藏，一点点找到它们的踪迹。

咱再说说高效液相色谱法，这可是个厉害的角色呢！它就像是个超级侦探，能把不同的氨基酸一个一个地分辨出来，准确又可靠。

把样品放进去，它就能把各种氨基酸都给揪出来，让它们无所遁形。

那我们为啥要这么费劲去测定总氨基酸含量呢？这可重要啦！你想想，知道了食物里有多少氨基酸，我们就能更好地搭配饮食呀，让身体更健康。

就好比我们知道了前方的路该怎么走，才能走得更稳当。

而且呀，这对食品行业也很重要呢！厂家可以根据测定的结果来改进产品，让我们吃到更好的东西。

这不是很棒吗？测定总氨基酸含量的过程也不是一帆风顺的哟，有时候也会遇到些小麻烦。

比如样品处理不好啦，或者操作的时候不小心出了点差错。

但咱可不能被这些小困难打倒呀，要像勇士一样去克服它们！总之呢，总氨基酸含量测定方法是个很有意思又很有用的东西。

我们要好好去了解它，掌握它，让它为我们的生活服务。

咱可不能小瞧了这些方法，它们就像是隐藏在科学世界里的宝藏，等着我们去挖掘呢！你说是不是？。

发酵液中苏氨酸含量测定方法研究目录：公司动态作者： wanglihong 更新时间：2011/3/21 19:42:56 点击量：2406 来源:中国标准物质网L-苏氨酸是一种必需的氨基酸,主要用于医药、化学试剂、食品、饲料添加剂等方面。

目前,L-苏氨酸含量测定方法有氨基酸分析仪法、纸层析法、茚三酮法和甲醛法。

本文对上述几种测量方法的原理和方法进行介绍,并比较了各种方法的优缺点。

关键词L-苏氨酸;纸层析;茚三酮;甲醛法1 L-苏氨酸的理化性质L-苏氨酸(Threonine)化学名称是α—氨基—β—羟基丁酸,分子式为NH2—CH(C00H)—CHOH—CH3,分子量为119.12,外观为白色斜方晶系晶体或结晶性粉末、无臭、味微甜,约256℃熔化分解。

易溶于水,不溶于乙醇、乙醚和氯仿。

2 L-苏氨酸的应用L-苏氨酸是一种必需的氨基酸,苏氨酸主要用于医药、化学试剂、食品强化剂、饲料添加剂等方面。

特别是饲料添加剂方面的用量增长快速,它常添加到未成年仔猪和家禽的饲料中,因此,在欧盟国家和美洲国家,已广泛地应用于饲料行业。

3 L-苏氨酸的生产及检测方法苏氨酸的生产方法主要有发酵法,蛋白质水解法和化学合成法3种,微生物发酵法生产苏氨酸,因其工艺简单,成本低廉等优点已成为目前主流方法。

发酵中间过程中苏氨酸含量的测定方法有多种,主要有氨基酸分析仪法、茚三酮法、纸层析法、甲醛滴定法等。

3.1氨基酸分析仪法3.1.1原理氨基酸分析仪中的阳离子交换柱,利用氨基酸的pKa值的不同,用柠檬酸缓冲液不同的pH的变化使氨基酸被逐一淋洗下来;经处理后的苏氨酸发酵液经离子交换树脂吸附、分离,并以茚三酮作柱后衍生反应测定3.2纸层析法3.2.1原理纸层析法是以纸为载体的色谱法。

固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂。

将试样点在纸条的一端,然后用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后,由于各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点。

4种大米蛋白水解度测定方法比较
李皖光;汪桃花;王新文;季一顺
【期刊名称】《粮食科技与经济》
【年(卷),期】2017(042)005
【摘要】采用pH-stat法、甲醛滴定法、茚三酮比色法和TCA指数法4种方法,检测了碱性蛋白酶在一定底物浓度和工艺条件下大米蛋白水解度的变化,并进行了较为深入的对比.结果表明:在固定水解条件下,4种方法检测结果所反映蛋白质水解度的变化规律均符合碱性蛋白酶的酶解变化过程.4种检测方法中,TCA指数法测定的水解度偏高,与其他3种方法的差异较大,而pH-stat法、甲醛滴定法和茚三酮比色法的结果相差不大,均具有较高的准确度.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】李皖光;汪桃花;王新文;季一顺
【作者单位】安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽 230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽 230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽 230031
【正文语种】中文
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茚三酮比色法检测饲料中赖氨酸含量的研究一r34IXlJl1畜牧兽医1995年3月第一期Irys合量,所桂结蓑与实际值比较?相对谒差符合国标规定,检测范围达o?1～12.缺少氨基畦自动分析仪的单位应用此方法,县有费省垃宏的毒义-p7关键词茚三塑堡鱼鎏控遵些氨醴含量1’l人们习惯于将赖(1丽t)等耆禽机露面预虿■4.2CO十和HS十的反应物及反应方程为量酸:慧,苎兰,兰盐Na!c0+2H1:2NI+H:O+CO按一定比例配合生产的混合物称之为氨基酸潺加剂.一…’拽～_..些厂家和经销者利用氨基酸与其他原料的价格差,打着NazS+2Hcl_=2Nacl+H:s氮基酸添加荆的招牌,弄虚作假,步加或不如氨基酸,损4.3对最后滤藏V加热之目的:一是驱除掳l液中的害消费者利益的事件屡屡发生.因此.加强氨基酸的捡测NH;,HzO,H~CO),H=S,HCL等}二是蒸发除去过多水已追在眉睫.这也是贯彻《质量怯》.保护消费者利益的重分.蒸发除去多少术份,最后定容至多少m1数为佳,应先要措施.虽然,可用AA自动分析仪测定氨基酸的吉量,查看AA蒲加荆中对AA的说明用量,尔后确定定容量.但因购买此设备单位较少.无法开展氨羞酸项目的检测.一般地.AA用量为2,定容至100ml2～5用量定容笔者对此作了韧步探索,取得了较为满意的效果.至500ml}5以上者定容至1000m1.1拴科原理4.4在除杂中发现撼掖过多,均可采用加热蒸发部茚三酮(水合)在弱酸性(PH6.5～68)溶液中与氨分水分后.再进行下一步.这种作法一不会弓I起AA挥发基酸加热.发生氨化,脱氨,脱按作用,生成兰紫色茚三或蒸发-酮.氨基酸含量越高显色越深,符合比耳定律.选择适当5对AA露加卉|中lys的检测:嫂长,用分光光度计测定消光值与AA标准曲线比较得取上述样品的处理掖5ml于50ml的容量瓶?调氨基酸总量.称总量是因为氮基酸均具茚三酮反应特性,PH6?5～68?加0?1茚三酮5ml?在电炉上加热3rain但在A傣加剂中以添加赖氨酸为多见,困此.谫I定AA后t加水30ml,静置15mln.用术定窖至刻度,在491nm总量实际上是删定1ys,所以选择波长为1ys的波长波长下测定消光值(用蒸馏术作空白).与lys标准曲线(491~m)比较得样品中赖氨酸的rag数2主要仪器,量及装置2.1分光光度甘(581,721或751型)2.2分析天平(感量0.1ing)I2.3旋片式真空泵(P=0.18Kw)I2.4电炉fP=IKW),酒灯I2.5烧稚簪量瓶等}2.6广搓试纸等2.7CO:十发生装置,H!s十发生装置.3主要试剂见AA添加押I样品分析前的睬杂程序置和对AA台. 量测定中所列.4分析前除杂程序.由于AA添加荆中存在大量的金属离子(Cu抖,FL,Zn,Mn,Caz+,Mg,Co)和酸报离子(SO.卜,I一)等.其中有的离子直接或与茚三酮反应生成近似兰紫色物质,干扰AA的测定.固此.测定前必须对样品去杂对应用除杂程序的几点说明,4.1加入荆的量或通入气体的时阿,应视不同AA添加荆而定.一般情况.o.01MBaCIj加2---5ml}10 的NI-I~,H:O加5～8ml}通入cO#和H:s时间是1～3 分钟/改.样品中1的含量的计算式:lvS():l二Xl00~m公式中:1ys——赖氨酸.}w——在标准曲线上查得的样品中lys的mg数n——样品处理后的定容体程乘以比色时取掖的稀释倍数之积与比色时取掖体积之比tm——称取AA添加荆之质量,g6验证先将含Cu(814.6ppm),Fe(5458ppm),Zn(4892ppm),Mn(107印pm),Co(11.6ppm),Ca(35.6),Mg(765.8ppm)的无机盐混合均匀(税微量元素添加荆后),再将赖氨酸接0.1,0.5,1,2……12的梯度(为实际值)分别加入微量元素添加荆中,生产出AA 添加荆(代号为A,B,C……N).再按以上弁绍方法攫喧样品中lys的含量.测定结果及统计见上表.由表申可见,茚三酮比色法测定AA添加剂中lys的含量是可行的,不仅解决了缺少AA自动分析仪仍可检测AA含量的迫切问题,而且检测范围宽.准确性高. 因此,这种方法很值得加以推广应用.在应用中应注意I 6.1操作要精细,在除杂程序中不得将游藏有任何损失.四川畜牧兽医1995年3月第一期——堡*a表示经t检验,铡皇值与实两}值差异极不显着(P<o.01)?b 6.2在睬杂中,为了尽可能除去各种干扰因素?可反复加入(通人)沉淀荆.多次处理.直至无干扰离子(或E示经t捡鼙,器窟值与实两}值差异不显薯(P<o?os)?I高潞羊耐可先甩茚三酮比色法制定出AA总量,尔后再嗣算绋J仪器(如旋光仪)测定某一种(或几种)从的分另j【台参虹羔羊成括率.减少死亡数.加快48～50支半细毛羊新品种培育步伐有重要作用.本试验于1991~1993年在昭觉县好各草种场进行.经过三年试验探明了48~50支半细毛羊在当地生态条件下的适宜产羔月份.现将试验结果报告于后.’1试验地区的气候环境试验地昭觉县好答草种场,海拔2300米.午均温l0.§℃,7月最热.月均温18.2℃.极端最高温3z.9C,1月最砖,月均温1℃.授端最低温一zo.6℃,年降雨量1100~1200毫米,相对温度60~70,无霜期226天,气候特点表现为冬寒春旱,夏秋温暖湿润.牧草生长l1月枯萎,次年4月返青.产羔季节的月均气温为11～l2月6.5℃.1～2月2.4℃.3～4月10.5℃.2试验材料与方法在昭觉县好古草种场选择48～50支半细毛母羊?#支荤l四川农业土学胨圣偶最艟审阅.特壁谢3结果与分析t3.I不同月份出生羔羊初生重,斯奶重,1.5岁育成体重比较见表1.’由表l看出ll～l2月份出生的公母羔羊比1～2出生的公母羔羊分别高0.34l【g和0.5kg(高8.3和l4.卫4).比3～4月份出生的公母羔羊分男提高1.36kg和1.55kg(高44.73和63)l断奶重比1～2月出生的公母羔羊分别提高3.54kg和z.64kg(高20.5和17),比3～4月出生公母羔羊分别提高5.37kg和4.45kg(高35.4和32.5)l育成羊体重比1～2月出生的公母羔羊分别提高4.50l【g和4+l8kg(高10.5和11.6),比3～4月出生的公母羔羊舟男提高8.82kg和8.”/Tkg(高22.8和27.9l).以上结果表明,11～12月份出生羔羊的卸生重,断奶重,育成重都明显高于l～2月份出生的羔羊和3～4月出生的羔羊.。

收稿日期:2000—05—10文章编号:1003—7969(2000)06—0176—02蛋白质水解度的测定郭兴凤(郑州粮食学院食品工程系,450052郑州市嵩山南路140号;作者:女,35岁,工程师) 摘要:介绍了一种新的测定蛋白质水解度的方法,该方法利用待测蛋白样品的完全水解液做为茚三酮比色的标准样品测定蛋白质的水解度,并和常用的几种测定水解度的方法进行了比较。

该种方法消除了由一种氨基酸做为对照样品所带来的测定误差,是一种简单易行的测定水解度的方法。

关键词:蛋白质;水解度;测定中图分类号:T Q64519+9 文献标识码:A 水解度是指蛋白质分子中由于生物的或化学的水解而断裂的肽键占蛋白质分子中总肽键的比例。

测定蛋白质水解度的方法很多,常用的方法有三氯乙酸沉淀法、三硝基苯磺酸法[1]、茚三酮比色法、甲醛滴定法[2]、pH -stat [3]法等。

甲醛滴定法快速简单,但采用此法测定结果低于氨基酸理论含量[2];茚三酮比色法由于采用的是单一氨基酸做标准,而不同的氨基酸对茚三酮的呈色度不同,因此采用茚三酮比色法结果也有偏差[2];三硝基苯磺酸法测定的结果相对较准确,但由于所用的试剂不易获得且分析方法非常繁杂,通常情况下采用此种方法的还不太多;现在有许多研究采用pH -stat 法,这种方法也有误差,在工业生产中可用于监控水解终点,但在研究中则需要用其他的方法进行校正。

本文介绍一种新的测定水解度的方法,本方法采用茚三酮比色法,利用待水解原料的完全水解液作为标准,消除了由于不同氨基酸与茚三酮结合产物的呈色度不同对测定结果造成的误差,本方法是依据Qin -Y un Chen [4]的方法和现行的方法进行改进,使测定结果更接近真实值。

1　原料和试剂111　主要仪器751分光光度计,上海。

112　试剂11211　茚三酮显色液:2g 茚三酮加入100ml 蒸馏水,溶解,放棕色瓶中保存,应每次使用前配制。

11212　pH8缓冲溶液:012m olNa 2HPO 49417ml 与012m olNaH 2PO 4513ml 合并,混匀。

水解度指标测定水解度的测定方法一：(茚三酮比色法)（1）标准曲线制定：1、20μg／ml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。

2、茚三酮显示剂：水合茚三酮0.5g，果糖0.3g，磷酸氢二钠11.2g，磷酸二氢钾 6g,定容到100ml.稍热溶解，避过低温保存1周。

3、40%乙醇标准曲线制作试管0 1 2 3 4 5 6 7 8 待测样品标液ml 0.00 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 1.0 0.5 蒸馏水ml 2.00 1.90 1.80 1.70 1.60 1.50 1.40 1.30 1.00 1.5 茚三酮显示1 1 1 1 1 1 1 1 1 1剂ml摇匀，沸水浴15min，用冷水迅速冷却至室温40%乙醇ml 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5甘氨酸μg 0 2 4 6 8 10 12 14 20 ?? OD(570nm)N----水解液蛋白含量（凯氏定氮）F-----米糠蛋白换算系数5.95方法二：采用甲醛滴定法。

水解度（%）=（水解后生成的氨基氮的量/样品中总氮含量）×100%（1）粗蛋白含量的测定：采用凯氏定氮法。

（2）氨基氮的测定氨基酸含有氨基和羧基，具有两性，加入甲醛与氨基酸中的氨基作用，可消除其碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定，即可对氨基酸进行定量。

1、酚酞指示剂：0.5g酚酞溶于100ml 50%的乙醇中2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（36~37%，分析纯）50ml，加入0.5%的酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mo l／L NaOH，使溶液显微粉色，储存于棕色瓶中，临用前配制。

具体方法如下：分别吸取2mL不同水解度的水解液于烧杯中加蒸馏水5mL，向烧杯中加入5滴酚酞指示剂，混合后加中性甲醛溶液2.0ml再混合，用0.1mo l／L NaOH滴定显微粉色。

同时取同浓度但未水解的蛋白液2mL做空白实验。

式中：V—样品耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；V0—空白耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；N—氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；14.008—1 mL浓度为1.000 mol/L氢氧化钠标准溶液相当于氮的质量（mg）。

基于茚三酮比色法测定闽产细叶石仙桃总氨基酸含量温秀萍;于虹敏;蔡沓栗;范世明;刘蔚雯;杨成梓;林羽【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2024(49)2【摘要】目的:优化溶剂回流提取-茚三酮比色法测定福建省不同产地细叶石仙桃中总氨基酸含量。

方法:以甘氨酸为对照品,采用茚三酮比色法测定细叶石仙桃中总氨基酸含量;考察不同影响因素对茚三酮法测定细叶石仙桃总氨基酸含量的影响,确定最佳检测条件;在单因素实验基础上,采用L9(34)正交试验考察溶剂用量、溶剂浓度、提取时间及提取次数对细叶石仙桃中总氨基酸提取工艺的影响,并以其为考察指标,优化筛选最佳提取工艺。

结果:最佳检测条件为测定波长568 nm、2%茚三酮溶液用量3.0 mL、缓冲液pH值6、缓冲液用量2.0 mL、水浴加热温度80℃、水浴加热时间40 min;最佳提取条件为乙醇浓度85%,乙醇用量35.0 mL,提取时间60 min,提取2次。

在所收集到的福建省4个产地的细叶石仙桃中总氨基酸含量由高到低依次为永泰县、上杭县、屏南县、永春县。

结论:优选的提取工艺稳定可行,建立含量测定方法简便、准确、重复性好,为细叶石仙桃的质量评价和进一步开发利用提供依据。

样品中以永泰县所产的细叶石仙桃质量最佳。

【总页数】6页(P238-243)【作者】温秀萍;于虹敏;蔡沓栗;范世明;刘蔚雯;杨成梓;林羽【作者单位】福建中医药大学药学院;福建省福州市皮肤病防治院【正文语种】中文【中图分类】S567.237;R282.5【相关文献】1.茚三酮比色法测定青天葵中总游离氨基酸的含量2.茚三酮比色法测定蒜氨酸原料药中总氨基酸的含量3.茚三酮比色法测乙肝宁水提物中总游离氨基酸含量4.细叶石仙桃不同萃取物总酚含量和抗氧化活性的比较5.茚三酮比色法测定冻干药膳鸡汤中氨基酸含量因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。