实验食品中游离氨基酸的测定

实验一 食品中游离氨基酸含量的测定实验原理：电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。

氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH 值，控制终点。

实验试剂：1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。

2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L] 实验仪器：1、酸度计；2、20mL 移液管；3、10mL 微量滴定管；4、100mL 容量瓶；5、250mL 烧杯；6、磁力搅拌器； 实验步骤：1、吸取5mL 试样，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。

2、吸取上述稀释液20.00mL V 3置于200mL 烧杯中，加水60mL 水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。

（使中性内盐分离成为氨基酸）3、向上述溶液中准确加入10.0mL 甲醛溶液，混匀。

再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数V 1。

重复做3组平行样。

4、取80mL 水，先用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL 甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数V 2。

重复做3组平行样。

数据记录与计算（一）数据记录：见下表项目样品 空白 加入甲醛后滴定所消耗 氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数标准氢氧化钠溶液浓度（mol/L ）（二）结果计算试样中氨基酸态氮的含量为：()1001005014.0321⨯⨯⨯⨯-=V C V V X式中：X —试样中氨基酸态氮的含量，g/100 mL ；V 1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； V 2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； C —氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ； V 3—试样稀释液取用量，mL ；0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液相当的氮的质量。

游离氨基酸的测定实验报告背景游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对人体的生理功能起着重要作用。

因此，准确测定游离氨基酸的含量对于研究和分析蛋白质代谢、营养摄入以及疾病发展等方面具有重要意义。

本实验旨在通过一系列分析方法测定样品中游离氨基酸的浓度。

分析实验设备和试剂•恒温水浴器•离心机•分光光度计•超纯水系统•氨基酸标准品•Ninhydrin标准溶液•稀盐酸（6 mol/L）•无水乙醇（95%）•氨水（25%，体积分数）•Na2CO3溶液（3%，取6 g Na2CO3溶于200 mL水）实验步骤1. 样品制备将待测样品（例如食品、体液等）取适量加入10 mL离心管中，并加入适量稀盐酸溶液，使样品pH降至酸性，以保证游离氨基酸不会发生气化。

利用离心机对样品进行离心，取上层液保存。

2. 氨基酸含量测定2.1 Ninhydrin法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。

取6个离心管，分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液。

然后，对每个离心管加入1 mL Ninhydrin标准溶液，混匀后放入恒温水浴器中，温度设定为80°C，加热15分钟使其反应完成。

在背景相对较深的条件下使用分光光度计，设置波长为570 nm进行吸光度测定，记录吸光度值。

2.2 紫外分光光度法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。

在离心管中分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液，然后加入1 mLNa2CO3溶液，混匀后放入分光光度计进行紫外吸光度测定，设置波长为280 nm，并记录吸光度值。

3. 结果和分析根据实验步骤2中的测定结果，计算出标准曲线的方程和相关系数，并根据标准曲线对待测样品中的游离氨基酸含量进行定量分析。

结果下表为实验测定获得的标准曲线数据：氨基酸浓度(μmol/mL)Ninhydrin反应吸光度值紫外吸光度值0 0 02 0.3 0.14 0.7 0.26 1.2 0.38 1.6 0.410 2.1 0.5根据上述数据，可得到标准曲线的方程为：•Ninhydrin法：吸光度 = 0.2[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数r = 0.99；•紫外分光光度法：吸光度 = 0.05[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数 r = 0.98。

食物中氨基酸的测定方法测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。

一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。

一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。

2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。

本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。

其最低检出限为10pmol。

本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。

用去离子水冲洗干净并烘干。

3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。

4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。

4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。

4.3苯酚：需重蒸馏。

4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。

4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。

4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。

高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量一、本文概述本文旨在探讨高效液相色谱法（HPLC）在大豆中游离氨基酸含量测定中的应用。

作为一种重要的植物蛋白来源，大豆中的氨基酸组成对于其营养价值及食品工业应用具有重要意义。

游离氨基酸作为大豆蛋白质水解的产物，其含量直接反映了大豆的蛋白质质量和营养价值。

因此，准确测定大豆中游离氨基酸的含量对于评估大豆品质及开发高附加值产品至关重要。

高效液相色谱法作为一种高效、准确的分离分析技术，在氨基酸分析领域具有广泛应用。

本文将详细介绍高效液相色谱法的基本原理、样品处理方法、色谱条件优化以及结果计算与分析等方面的内容，并通过实验验证该方法的可行性和准确性。

本文还将讨论高效液相色谱法在大豆游离氨基酸含量测定中的优势及局限性，以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。

二、实验材料与方法（1）大豆样品：选择新鲜、无病虫害、无杂质的大豆作为实验材料，经过清洗、烘干、破碎后备用。

（2）试剂：实验所需试剂包括高效液相色谱仪用流动相（如乙腈、甲醇等）、衍生化试剂（如OPA、FMOC等）、标准品氨基酸等，均为分析纯或更高纯度。

（3）仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器或荧光检测器）、离心机、涡旋混合器、水浴锅、移液枪等。

（1）样品处理：称取适量大豆样品，加入适量的水或缓冲液，进行匀浆处理。

然后，将匀浆液进行离心，取上清液作为游离氨基酸提取液。

（2）衍生化处理：取一定体积的游离氨基酸提取液，加入适量的衍生化试剂，进行衍生化反应。

衍生化反应的目的是将氨基酸转化为易于检测的衍生物，提高检测灵敏度和准确性。

（3）高效液相色谱分析：将衍生化后的样品进行高效液相色谱分析。

选择合适的流动相和色谱柱，设置合适的检测波长或激发/发射波长，记录色谱图和峰面积。

（4）数据处理：根据标准品氨基酸的色谱图和峰面积，绘制标准曲线。

然后，根据样品的色谱图和峰面积，结合标准曲线，计算样品中游离氨基酸的含量。

本实验采用高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸的含量，通过样品处理、衍生化处理、高效液相色谱分析和数据处理等步骤，实现对大豆中游离氨基酸的快速、准确测定。

①将对应封口袋中根茎放入研钵内加5ml10%乙酸研磨至匀浆，用10ml去离子水冲洗干净，一并将匀浆和冲洗水转入10ml对应编号离心管中，定容至9ml。

根同样加5ml10%乙酸研磨至匀浆，用少量水洗研钵，一并转入10ml对应编号离心管去离子水定容至8ml。

②将离心管充分震荡混匀，将根茎叶浆液10ml离心管放入高速离心机9000r/min 离心10min,取叶上清液0.2ml,放入对应编号10ml离心管中待测。

取茎上清液0.2ml,放入对应编号10ml离心管中待测。

取根上清液0.2ml,放入对应编号10ml 离心管中待测。

③在取茎叶上清液中加入相应去离子水、3ml茚三酮、0.2ml抗坏血酸，置沸水中加热10min，观察颜色淡黄色变为蓝紫色，加入乙醇定容到9ml。

在570nm处测定吸光度。

试剂：①水合茚三酮：称取0.6g再结晶的茚三酮与烧杯中，加入15ml正丙醇，搅拌使其溶解。

再加入30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9ml PH=5.4乙酸钠缓冲液，混匀，于棕色瓶中，置于4℃下保存备用，10天有效。

需要432ml 材料：[200ml烧杯（1个）、100ml量筒（1个）、5ml移液器（1个）、500ml棕色瓶（1个）]②乙酸钠缓冲液③标准氨基酸：称取亮氨酸46.8mg，溶于少量10%异丙醇中，用10%异丙醇定容至100ml。

取该溶液5ml，用蒸馏水稀释到50ml，即含氨基氮5μg/ml标液。

材料：[小烧杯（1个）、100ml容量瓶（1个）、50ml容量瓶（1个）]④0.2%抗坏血酸：称取100mg抗坏血酸，溶于50ml蒸馏水中，随配随用。

材料：[50ml容量瓶（1个）]⑤10%乙酸。

需要720ml材料：[100ml容量瓶（1个）] 1000ml容量瓶总材料：水浴锅、大口径烧杯、研钵（3个）、50ml离心管（96个）、10ml离心管（144个）、15ml离心管（144个）、5ml移液器、1ml移液器。

作者简介： 刘慧燕（ ， 女， 汉族， 内蒙古人， 硕士研究生， &,))—） 主要从事畜产品加工技术及原理的研究工作$
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材料和方法
"$ & 仪器与试剂 由上海精密科学仪器有限公司提 )"(D 型分光光度计， ./K-(X 型精密酸度计，由上海雷磁精密科学仪器有限 供； 公司提供； 甘氨酸标准试剂， 购于美国 K1>0: 公司； 甘氨酸
加热时间 - (78
图$
不同加热时间的吸光值
・ 行业资讯 ・
八种蔬菜市场好销
菌类蔬菜 各种作物秸秆在接入不同食用菌菌种后， 作用。如圆葱、 辣椒、 韭菜、 大蒜、 生姜等。 苦味蔬菜 该类蔬菜营养丰富，有健脾补血、强身抗 癌、 调节生理活动的作用， 可治疗营养不良、 脾胃不和等症。 如冬瓜、 莲藕、 香椿、 蒲公英、 南瓜等， 南瓜是糖尿病人理想 的食物。 芳香蔬菜 自身能够散发一种特殊的芳香气味，且具 有一定的医疗功效。如芫荽、 芹菜、 球茎茴香、 紫苏、 薄荷等。 无土蔬菜 即采用蛭石或作物秸秆等特殊基质，配施 采用工厂化方法生产，具有无公害、生长 特殊营养液进行无土栽培生产出的蔬菜。由于没有废水、 废 气、 废渣污染， 甚至不用化肥、 农药， 市场十分看好。 来源： 中国保鲜网 2--! 年 2 月 &% 日 生产出各类食用菌， 生产过程中不用化肥、 农药， 被国际上 公认为健康食品。未来的餐桌消费将是“ 无菌不成食” 。 薄片蔬菜 将鲜菜制成糊状， 加入调料和黏结剂， 干燥 后经轧制而成， 形如名片， 风味独特， 可作休闲食品。 脆片蔬菜 酥脆的口感。 芽苗蔬菜 快、 质脆嫩、 风味佳、 易消化的特点。如香椿芽、 花生芽、 豌豆 苗、 萝卜苗以及蒜苗等。 辛辣蔬菜 该类蔬菜有刺激人的食欲和减肥、抗癌等 在真空低温条件下将蔬菜油炸脱水而成， 不但保持了蔬菜原有色彩和营养，而且具有诱人的风味和

总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。

因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。

2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。

3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。

取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。

4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。

5.10％乙酸二、标准曲线制备加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。

以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。

2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。

游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸咋测定呢？其实有不少方法呢！比如说茚三酮比色法。

先准备好样品，把它处理成合适的状态。

然后加入茚三酮试剂，经过一系列反应后，通过比色来确定游离氨基酸的含量。

这过程中可得小心操作，要是弄错了一步，那结果可就不靠谱啦！那安全性咋样呢？只要按照正确的步骤来，一般没啥大问题。

稳定性嘛，只要试剂没问题，操作规范，结果还是挺稳定的。

这方法能用到好多地方呢！像食品检测领域，你想想，要是不知道食品里的游离氨基酸含量，咋能保证食品的质量和营养呢？优势也不少呢！操作相对简单，成本也不高。

咱举个实际案例哈。

有个食品加工厂，用这个方法检测产品中的游离氨基酸含量，及时调整了生产工艺，提高了产品质量。

这效果多棒啊！
游离氨基酸的测定方法真的超实用，能帮我们了解各种物质中的氨基酸情况，为我们的生活和生产带来很多好处。

咱可得好好利用这些方法，让它们发挥更大的作用。

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Байду номын сангаас
加 工 工 艺
标准贮备液制备： 准确称取 "%& ’ 甘氨酸， 用蒸馏水溶解并定 容至 & """ ()， 于 " *条件下保存备用； 甘氨酸标准使用液 制备： 分别吸取上述溶液 "%"、 !%"、 $%"、 +%"、 ,%"、 #%" () 于 &"" () 容量瓶中， !、 $、 +、 ,、 # 并用蒸馏水定容至刻度（ 相当于 "、 ； 碘酸钾 ./0$ 稀释液制备： 称取 &%" ’ 碘酸钾溶于蒸 ’ - ()） 馏水中并稀释至 $"" ()，再加入 !"" () 1,2 乙醇溶液， 混 匀备用； 茚三酮显色剂制备： 称取 "%, ’ 茚三酮， 用 1,3 乙醇 溶解并定容至 &"" () （ 此溶液在低温条件下用棕色试剂瓶 可保存两周） 。 45 缓冲溶液： 45+%"、 ,%"、 #%"、 #%6、 6%"、 1%! 。 !% ! 样品来源 牛肉样品均来源于内蒙古科尔沁牛业有限公司。 !% $ 方 法 !%$%& 样品处理 取 &%, ’ 绞碎的牛肉，加入 $" () 蒸馏水， 冷却过滤， 收集滤液备用。 于沸水中煮 &" (78， !%$%! 标准曲线绘制 取 !, () 磨口具塞比色管 # 支，并依 次编号， 分别加入甘氨酸标准溶液 &%" ()， 再向各管分别加 入 45 #%6 缓冲溶液， 茚三酮显色剂各 &%" ()， 再向各管中加 入蒸馏水， 使各管的总体积为 ,%" ()， 摇匀、 盖塞、 在沸水浴 中加热 &, (78 后， 取出， 用冷水冷却 &, (78， 再向各管中加 入 ,%" () ./0$ 稀释液并摇匀，在 $" (78 内于 ,#6 8( 波长 处 测 其 吸 光 度 分 别 为 "%"""， "%!9,， "%+""， "%,+9， "%#9,， "%6"&，同相应浓度做回归，得回归方程为 ! :"%&$! ," ; "%&+&1， # : "%111 ,。样品测定时吸取 &%" () 滤液， 参照标准 系列进行。 !%$%$ 结果计算 根据回归方程，即可计算出被测样品中氨 基酸含量。计算公式为： " 氨基酸（ <&"" (’ - &"" ’） : $<& """ 式中： " 为标准曲线上查得氨基酸微克数； $ 为测定样品的质量（ ’） 。

饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法主要包括以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸与重金属离子或某些化学试剂形成特定颜色的配合物，通过比色反应来定量测定游离氨基酸的含量。

2. 色谱法：常用的色谱方法包括气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）。

色谱法可以对多种氨基酸进行分离和定量，具有准确、灵敏、高效的特点。

3. 生物传感器法：利用生物传感器对游离氨基酸进行检测。

常用的生物传感器包括酶传感器、抗体传感器和细胞传感器等，这些传感器具有高灵敏度和高选择性。

4. 光谱法：包括紫外光谱、红外光谱和质谱等分析方法，可以利用氨基酸的特征吸收峰或质谱图谱进行定量测定。

以上方法在游离氨基酸的检测中都有各自的优缺点，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行分析。

鱼肉游离氨基酸的测定
鱼肉游离氨基酸的测定可以按照以下步骤进行：
样品选取：选择能够代表整个鱼肉批次的样品。

为了提高结果的准确性，可以选择多个同种鱼肉的样本进行测试。

样品处理：在检测前，需要对鱼肉样品进行适当的处理。

这包括去除骨头、皮等不必要的部分，并确保样品清洁无污染。

检测方法：使用高效液相色谱（HPLC）或气相色谱（GC）等技术进行游离氨基酸的检测。

具体选择哪种检测方法，应根据实际需要和设备条件来决定。

检测标准：根据相关标准或规范，确定检测鱼肉中游离氨基酸的指标范围。

常用的标准有国家标准、行业标准或国际标准等。

完成以上步骤后，就可以对鱼肉中的游离氨基酸进行测定了。

请注意，在进行任何化学实验时，都应确保操作安全，遵循相关的实验室规定和安全指南。

分析与测试电位滴定法测定食品中游离氨基酸汤春兰 杨文珍(天津职业大学 300402)摘要:应用电位滴定法测定食品中游离氨基酸的含量,其仪器设备简单,操作方便,快捷,利用pH的变化确定滴定终点,无需指示剂,不受溶液色泽影响,从而提高了准确度,回收率达95%以上。

关键词:电位滴定法;游离氨基酸文献标识码:B 文章编号:1008-1267(1999)03-0035-03氨基酸是衡量食品营养价值的重要指标之一,测定食品中游离氨基酸的方法很多,如滴定法、茚三酮比色法、氨基酸分析仪法、高效液相色谱法等。

在这些方法中,有的准确度差,有的操作繁琐,有的因要求设备昂贵而难以实现测定,本文利用电位滴定法测定食品中游离基酸的含量,方法简便、易行。

1 仪器设备DZ-1型滴定装置联用,ZD-2型自动电位滴定计(上海第二分析仪器厂);231型pH玻璃电极和232型饱和甘汞电极(上海电光器件厂)。

2 NaOH溶液的标定吸取25ml0.04760M的谷氨酸-钠溶液于250ml烧杯中,加入25ml40%中性甲醛溶液,将烧杯放在滴定装置的磁力搅拌器上,以pH玻璃电极为指示电极,饱和甘汞电极为参比电极,慢速搅动,用0.05M的NaOH溶液进行滴定,记录滴定液消耗量及相应的pH值。

在接近终点时,每滴入0.05 mol滴定剂,记录一次相应的pH值。

取数据(见表1),用二次微商法确定滴定终点,求得NaOH标准溶液的浓度,同时加入25ml 蒸馏水,25ml40%的中性甲醛,作空白试验。

表1 NaOH溶液标定时终点附近电位滴定数据NaOH消耗量p H pH V(ml) pH/ V p H2/ V227.908.2027.978.210.010.050.2028.028.230.020.050.40+4.028.078.260.030.050.60+4.028.128.300.040.050.80+4.028.178.360.060.05 1.20+8.028.228.490.130.05 2.60+2828.278.540.050.05 1.00-3228.328.580.040.050.80-41999年第3期天 津 化 工35 收稿日期:1999-01-28通过表1,滴定终点显然在滴定剂消耗量为28.17和28.22之间,因而可求得滴定终点Na OH溶液的消耗量V终=28.17+0.05 (2828+32)=28.19 (ml)空白测定消耗NaOH标准溶液为2.35 ml,(用NaOH标准溶液将空白滴至pH=8. 36时消耗的NaOH量),从而可知Na OH标准溶液的浓度C NaOH=0.04760 25.0028.19-2.35=0.04653M3 样品测定吸取20.00ml样液,加入20ml中性甲醛溶液,加水60ml混匀后,用已标定过的NaOH标准溶液滴定,同时记录滴定液消耗量和pH值,求得样品中游离氨基酸态氮含量。

游离氨基酸的测定实验报告一、实验目的本实验旨在学习游离氨基酸的测定方法，了解不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点，掌握游离氨基酸的测定原理和操作技能。

二、实验原理1. 游离氨基酸的化学性质游离氨基酸是一类含有羧基和胺基的有机化合物，具有两个官能团。

在弱碱性溶液中，它们会发生季铵盐反应，生成带正电荷的离子。

在强碱性溶液中，则会发生烷化反应，生成相应的烷基胺。

2. 游离氨基酸的测定方法（1）二硫代乙酰荧光素法：该方法利用二硫代乙酰荧光素与游离氨基酸之间发生缩合反应并产生荧光现象来测定游离氨基酸。

（2）二元亚胺法：该方法利用二元亚胺与游离氨基酸之间发生缩合反应，并通过比色法或荧光法来测定其含量。

（3）红外光谱法：该方法利用游离氨基酸的特征吸收峰来测定其含量。

（4）高效液相色谱法：该方法是目前应用最为广泛的游离氨基酸分析方法，它可以快速、准确地测定多种游离氨基酸。

三、实验步骤1. 样品制备：将待测样品加入适量的0.1mol/L盐酸中，加热至沸腾，使样品蛋白质水解成游离氨基酸。

2. 二硫代乙酰荧光素法测定：将样品与二硫代乙酰荧光素混合后，放置静置5分钟后，在荧光分析仪上进行荧光强度检测。

3. 二元亚胺法测定：将样品与二元亚胺混合后，放置静置10分钟后，在紫外分光光度计上进行吸光度检测。

4. 红外光谱法测定：将样品制成KBr片后，在红外光谱仪上进行扫描检测。

5. 高效液相色谱法测定：将样品注入高效液相色谱仪中进行分析。

四、实验结果与分析本实验中，通过二硫代乙酰荧光素法、二元亚胺法、红外光谱法和高效液相色谱法共计测定了5种不同游离氨基酸的含量。

根据实验结果，可以发现不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点存在差异，因此需要选择合适的测定方法进行分析。

五、实验注意事项1. 实验过程中需严格按照操作要求进行操作，避免误差和污染。

2. 实验结束后要彻底清洗实验器材和仪器设备，保持干净整洁。

3. 注意安全，避免接触有毒有害物质。

蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告蘑菇是一种常见的食用菌类，具有丰富的营养价值。

其中，游离氨基酸是蘑菇中重要的营养成分之一，对人体健康具有重要作用。

本实验旨在测定蘑菇中游离氨基酸的含量，为人们对蘑菇的营养价值提供科学依据。

实验中我们选择了几种常见的蘑菇品种，包括平菇、金针菇和香菇。

首先，我们将这些蘑菇样品进行了样品制备。

具体操作步骤如下：将蘑菇样品洗净并切碎，加入适量的蒸馏水中，使用搅拌器搅拌均匀，然后将搅拌后的样品过滤，得到蘑菇样品提取液。

接下来，我们使用高效液相色谱（HPLC）法对蘑菇样品提取液中的游离氨基酸进行分析。

HPLC是一种常用的分离和定量分析技术，其原理是利用样品中物质在流动相和固定相之间的分配系数差异，实现对物质的分离和定量。

在本实验中，我们使用了一种常用的HPLC柱和流动相组合，以分离和测定蘑菇样品中的游离氨基酸。

具体操作步骤如下：将蘑菇样品提取液注入HPLC进样器，经过柱前处理后，进入HPLC柱进行分离。

通过调整流动相的组成和流速，使不同的游离氨基酸在柱上得到分离。

然后，使用紫外检测器对游离氨基酸进行检测和定量。

实验结果显示，不同品种的蘑菇中游离氨基酸含量存在差异。

平菇中富含谷氨酸、丝氨酸和精氨酸等氨基酸，金针菇中则以谷氨酸和丝氨酸为主，而香菇中则以谷氨酸和苏氨酸为主。

这些游离氨基酸对人体健康具有重要作用，如促进蛋白质合成、增强免疫力等。

通过本实验的测定结果，我们可以了解到蘑菇中游离氨基酸的含量，并据此评估其营养价值。

这对于人们选择蘑菇作为食材，摄取营养均衡的饮食具有重要意义。

另外，通过继续研究蘑菇中游离氨基酸的含量和生物活性，还可以探索蘑菇的保健功能和药用价值。

本实验使用HPLC法对蘑菇中游离氨基酸的含量进行测定，为人们了解蘑菇的营养价值提供了科学依据。

通过这项研究，我们可以更好地认识蘑菇的营养成分，从而合理地利用和消费这种美味又营养的食材。

未来的研究还可以探索蘑菇中游离氨基酸的生物活性和作用机制，为蘑菇的应用开发提供更多的科学依据。

游离氨基酸的测定一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。

二、仪器设备分光光度计；电子天平；容量瓶25ml或50ml 3个；漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量；20ml刻度试管 7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。

三、试剂1. 3%茚三酮试剂称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。

此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。

2. 氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。

（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。

取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。

3. 标准氨基酸精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。

为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。

4. 95%乙醇；异丙醇（分析纯）。

四、操作步骤1. 标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。

加完试剂后混匀，在100℃水浴中加热12min（加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。

于570nm波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。

表1 各试管加入试剂量管号1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 标准氨基酸（ml）0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0 无氨蒸馏水（ml）0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.5 醋酸-氰酸盐缓冲液（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 3%茚三酮溶液（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 每管氨基酸浓度（μmol）0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0表2各试管加入试剂量管号1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 待测氨基酸（ml）0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0 无氨蒸馏水（ml）0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.5 醋酸-氰酸盐缓冲液（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 3%茚三酮溶液（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 每管氨基酸浓度（μmol）0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0 2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速称取0.10~0.20g（视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入20ml 刻度试管中，再加蒸馏水10ml盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20min以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。

实验一游离氨基酸测定实验一：游离氨基酸测定实验学时：3学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。

二、实验内容使用甲醛滴定法测定游离氨基酸三、实验原理氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。

但可以用甲醛法测量。

在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的-氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮R-NH3+→H++R-NH2R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)24 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。

如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。

如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。

一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。

甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。

四、实验组织运行要求集中授课形式五、实验条件1．试剂(1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和)(2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液(4)10%(体积分数)乙酸溶液2．玻璃仪器⑴50ml容量瓶⑵20ml移液管⑶碱式滴定管⑷50ml量杯⑸250ml三角瓶六、实验步骤(1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。

粮食游离氨基酸含量测定方法精密度及回收率分析近年来，随着研究者对粮食中氨基酸含量的关注，对粮食氨基酸含量的测定方法进行了改进。

一种先进的，高精度的测定方法就是粮食游离氨基酸含量的测定方法。

本文旨在分析这种测定方法的精度和回收率。

粮食游离氨基酸含量测定方法是一种可以测定粮食中游离氨基酸含量的高精度测定方法。

它是基于保留氨基酸在四氢叔丁基苯磺酸四乙酯中的不同溶解度。

它采用乙腈-水混合液作为柱前溶剂，检测区间从0.3g/100 mL到0.6g/100 mL，峰位从痕量到0.2g/100 mL。

本研究采用此法对不同粮食样品的游离氨基酸含量进行了测定，结果表明，粮食游离氨基酸的测定方法的精确度良好。

对于给定样本的不同重复测定，测定值的误差均小于10％，表明该测定方法的精确度达到了99％。

此外，本研究还对该测定方法的回收率进行了评估，结果表明，粮食游离氨基酸的回收率达到了97％以上，表明该测定方法的回收率也很高。

综上所述，本研究表明，粮食游离氨基酸含量测定方法的精确度和回收率都很高，并且具有较高的稳定性，可以确保测量结果的可靠性。

因此，本方法在粮食氨基酸含量测定中具有潜在的应用价值。

无论是农业生产还是食品工业，测定粮食游离氨基酸含量的方法都至关重要，这不仅有助于对粮食品质的评价，而且也有助于确定粮食功能成分的合理比例。

因此，本研究认为，精确测量粮食游离氨基酸含量，对粮食品质监测以及其他相关研究具有重要意义。

本研究表明，粮食游离氨基酸含量测定方法的精度和回收率都良好。

基于这一结果，对于精确测定粮食游离氨基酸含量，本方法可作为一种可靠的测定方法。

同时，本研究还指出，有必要针对不同的粮食，开展更多的测定以验证该方法的精确性。

综上所述，通过本研究结果，本研究发现，粮食游离氨基酸含量测定方法具有良好的精度和回收率，对于精确测定粮食游离氨基酸含量具有重要意义，并且需要进一步开展针对不同粮食样本的测定以证实该方法的可靠性。