生化实验操作方法

实验一基因的PCR扩增技术一、实验目的与原理简介聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。

因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。

常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。

通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。

二、复性。

降低温度使DNA单链分子同引物结合。

温度为55℃，时间1min。

三、延深。

升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。

同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。

经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。

PCR反应包含的七种基本成分：1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg.2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。

3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。

每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。

4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。

Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。

5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。

在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。

总胆红素(T-Bil)标准操作程序（SOP）【目的】保证总胆红素检测结果准确，可靠。

【该SOP变动程序】本SOP的改动，可有任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管，科室主任。

【本SOP适用范围】BT-815A半自动生化仪总胆红素重氮法测定。

【试剂来源】上海荣盛生物技术有限公司。

【标本类型】血清、血浆【实验原理】对氨基苯磺酸＋亚硝酸钠−−→−盐酸重氮苯磺酸盐胆红素＋重氮苯磺酸盐酸盐−−−→−二甲亚砜重氮复合物（红紫色）【实验仪器】BT-815A半自动生化仪【操作步骤】1、一份R1于一份R2等比例混合。

2、每个病人600微升温浴10分钟备用。

3、取离心后标本30微升加入600微升试剂温浴10分钟，后检测。

【参考值】血清：<5.17mmol/L。

【临床意义】总胆红素的测定对于急性性肝炎，慢性肝炎，肝硬化，胆管炎，胆石症，急性胆囊炎等肝胆疾病和溶血性贫血的诊断具有重要意义。

【注意事项】1、标本为血清或肝素血浆。

标本采集后应避光保存。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)标准操作程序（SOP）【目的】保证丙氨酸氨基转移酶检测结果准确，可靠。

【该SOP变动程序】本SOP的改动，可有任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管，科室主任。

【本SOP适用范围】BT-815A半自动生化仪丙氨酸氨基转移酶测定。

【试剂来源】上海荣盛生物技术有限公司【标本类型】血清、血浆【实验原理】一步法或者两步法、速率法L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+ L-谷氨酸（ALT催化）丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2O(LDH催化)【实验仪器】BT-815A半自动生化仪【操作步骤】1.取标本与试剂30/600的比例混匀。

2.上机检测。

【参考值】血清：<40umol/L。

【临床意义】血清ALT活力的检测对中毒性肝炎,病毒性肝炎,肝癌,肝硬化活动期,脂肪肝,阻塞性黄疸,胆管炎,胆囊炎,心血管疾病,心肌梗塞,心肌炎,骨骼肌疾病,内脏和肌肉炎症性坏死等病症的诊断具有重要的价值。

生化实验基本操作目的要求：1．熟悉实验室规则及常用生化仪器2．清点洗刷实验用具。

3．掌握各种仪器的正规操作及维护实验操作1．玻璃仪器的洗涤(1) 洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。

②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品(2) 洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。

步骤：不净的器皿：洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。

(3)玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。

烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。

③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。

④下列玻璃仪器应避免烘烤：吸管：容易造成器壁变形而致容量不准。

比色杯：易在烘烤时发生破裂。

2．移液操作：(1)吸量管的使用①吸量管的选择：在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管。

·对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最后液滴沿器壁而下或吹出③读数·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，(2)枪式移液器的使用①枪式移液器的结构1. 液体吸放钮2．体积选取钮3. 体积、显示4．枪头排放钮5. 枪头排放器6．枪头接嘴其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感十分清楚。

(一）碳水化合物代谢实验糖(醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖得能力与该菌就是否含有分解某种糖得酶密切相关,故分解糖得能力各不相同，细菌分解糖类后得终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变，从而判断细菌就是否分解某种糖或其她碳水化合物。

（2)基本培养基：在培养基中加入0、5％-1％得糖类(单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类(水杨苷、菊糖等）、培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型.（3)实验方法：取某一种细菌得２4h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养2４h，观察结果并记录.（4)结果判定：如果接种进去得细菌可以发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。

如发酵得同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。

（5)应用:就是鉴定细菌最主要最基本得实验,特别就是对肠杆菌科细菌得鉴定尤为重要。

氧化型与发酵型（Ｏ/F）得测定（1）原理:细菌在分解葡萄糖得过程中，必需有氧得参加，称为氧化型(O),细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解得,称为发酵型(F）。

发酵型细菌无论在有氧无氧得环境中都能分解葡萄糖。

不分解葡萄糖得细菌称为产碱型（-)。

这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义.（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5ｇ,磷酸氢二钾0、３g,葡萄糖10g,琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水10００mL。

将蛋白胨、盐、琼脂与水混合,加热溶解，校正PH至7、2，然后加葡萄糖与指示剂，加热溶解,分装试管，３-4ｍL/管；115℃,高压蒸汽灭菌20m ｉn,取出冷却成琼脂柱。

（3）试验方法：挑取18—2４h得幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1ｍL液体石蜡，3７℃培养２4h或更长时间。

（4）结果判定:(５)应用:O／F试验主要适用于G—肠道杆菌得鉴别。

生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。

配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。

2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。

3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。

不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。

4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。

5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。

倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。

6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。

7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。

手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。

还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。

8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。

9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。

一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。

10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。

（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。

2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。

而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。

滤纸越致密，过滤就越慢。

3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。

沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。

最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。

4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。

折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。

放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。

撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。

生化实验基本操作技术一：玻璃仪器的洗涤及干燥：（一）意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。

（二）常用洗涤剂：1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。

2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。

3．铬酸洗液------见附2。

4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。

（三）洗涤方法：* 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱1．新仪器的洗涤：2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

注意：检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。

3．窄口仪器的洗涤（容量瓶、试剂瓶）使用后立即在洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→洗涤剂溶液倒入容器内（约1/4）→小心转动或摇动仪器→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

4．刻度吸管的洗涤使用后立即用大量自来水冲洗（切勿使样品干在管内，否则难以洗净）→干燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜→取出，在特制的容器中用自来水冲洗30 分钟→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。

（四）判断洗净的标准：洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。

（五）干燥方法1、晾干：仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。

2、烘干：尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。

普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。

3、有机溶剂干燥：体积小的容器急需干燥时，可用此法。

洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。

二：吸管和微量移液器的使用及注意事项：（一）刻度吸管：1．作用：用于准确移取一定体积的溶液。

一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。

最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。

2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。

若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。

在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。

因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。

生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。

其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。

重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。

因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。

由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。

洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。

（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。

（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。

（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。

（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。

玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。

菌株生理生化鉴定实验方法菌株的生理生化鉴定是确定菌株的分类地位和特性的重要实验方法。

下面将介绍一种常用的菌株生理生化鉴定的实验方法，包括实验步骤和鉴定结果的解析。

实验步骤：1.菌株的预处理将菌株从培养基上取下，用生理盐水或无菌的蒸馏水洗净，放入灌装好的试管或培养皿中。

2.观察形态特征观察菌株在不同培养基上的形态特征，包括菌落形状、颜色和质地等。

也可以在显微镜下观察菌丝和孢子的形态特征。

3.生化特性鉴定（1）氧需求鉴定：将菌株接种到含有不同浓度的氧气的试管中，观察菌株在厌氧和需氧条件下的生长情况。

（2）温度需求鉴定：将菌株接种到不同温度的培养基上，观察菌株在不同温度下的生长情况和生长速率。

（3）酸碱度鉴定：将菌株接种到不同pH值的培养基上，观察菌株在不同酸碱度条件下的生长情况。

（4）氧化还原鉴定：通过添加不同氧化剂和还原剂来观察菌株的氧化还原反应能力。

（5）酶活性鉴定：利用不同底物和指示剂来检测菌株的酶活性，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。

（6）碳源利用鉴定：将菌株接种到含有不同碳源的培养基上，观察菌株对不同碳源的利用情况。

4.生理特性鉴定（1）产酸和产气鉴定：将菌株接种到含有指示剂的管中，观察产酸和产气的情况。

（2）抗生素敏感性鉴定：通过将菌株接种到含有抗生素的培养基上，观察菌株对抗生素的敏感性。

（3）生长速率鉴定：观察菌株在不同培养基和条件下的生长速率，包括生长曲线的绘制和计算生长速率。

（4）生殖方式鉴定：通过观察菌丝和孢子的产生情况来确定菌株的生殖方式。

鉴定结果的解析：例如，菌株的形态特征观察结果可以用来确定菌株的属名，生化特性鉴定结果可以用来确定菌株的代谢途径和功能，生理特性鉴定结果可以用来确定菌株的环境适应能力和生长要求。

综上所述，菌株的生理生化鉴定是一种全面了解菌株特性和分类地位的重要实验方法，通过观察形态特征、生化特性和生理特性，可以准确鉴定菌株的分类地位和特性。

一、实验目的1. 熟悉生化实验的基本操作流程；2. 掌握常见生化实验仪器的使用方法；3. 学习并掌握相关生化实验的操作技巧；4. 培养严谨的科学态度和实验技能。

二、实验原理本实验主要涉及以下生化实验：1. 血液生化检测：通过测定血液中的生化指标，了解人体健康状况；2. 蛋白质定量分析：通过测定蛋白质浓度，了解蛋白质含量；3. 糖类定量分析：通过测定糖类含量，了解糖代谢情况；4. 酶活性测定：通过测定酶活性，了解酶的催化能力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血液样本；- 蛋白质标准品；- 糖类标准品；- 酶活性测定试剂盒；- 试剂：缓冲液、显色剂、终止剂等。

2. 实验仪器：- 酶标仪；- 恒温水浴箱；- 移液器；- 离心机；- 烧杯、试管等。

四、实验步骤1. 血液生化检测（1）采集血液样本，按照实验要求进行处理；（2）使用移液器将处理后的血液样本分别加入不同的试剂中，进行检测；（3）将加入试剂的样本放入酶标仪中，按照仪器操作规程进行检测；（4）记录检测结果，绘制曲线图。

2. 蛋白质定量分析（1）称取一定量的蛋白质标准品，按照实验要求进行稀释；（2）使用移液器将稀释后的蛋白质标准品和待测样品分别加入不同的试剂中，进行检测；（3）将加入试剂的样本放入酶标仪中，按照仪器操作规程进行检测；（4）记录检测结果，绘制曲线图。

3. 糖类定量分析（1）称取一定量的糖类标准品，按照实验要求进行稀释；（2）使用移液器将稀释后的糖类标准品和待测样品分别加入不同的试剂中，进行检测；（3）将加入试剂的样本放入酶标仪中，按照仪器操作规程进行检测；（4）记录检测结果，绘制曲线图。

4. 酶活性测定（1）按照试剂盒说明书进行试剂配制；（2）使用移液器将试剂和待测样品分别加入不同的试管中，进行反应；（3）将加入试剂的样本放入酶标仪中，按照仪器操作规程进行检测；（4）记录检测结果，绘制曲线图。

五、实验结果与分析1. 血液生化检测结果分析：根据曲线图，计算血液样本中的生化指标，与正常值进行比较，判断样本是否异常。

2. SOD 活力测定[1] 邻苯三酚自氧化率的测定取4.5ml 50mmol/L pH8.3的磷酸缓冲液，4.2ml 蒸馏水和1ml 10mmol/L EDTA-Na 2溶液，混匀后在25℃水浴保温20分钟，取出后立即加入25℃预热过的邻苯三酚溶液0.3ml ，迅速摇匀，倒入光径1cm 的比色杯内，用10mmol/L HCl 作空白，325nm 波长下每隔30秒钟测光吸收值一次，整个操作在4分钟内完成，计算出每分钟A 325的增值，此即为邻苯三酚自氧化率。

要求自氧化速率控制在0.070/min 左右。

[2] 酶活力测定操作与⑴基本一致，加入邻苯三酚前，先加入一定体积的SOD 样液，蒸馏水则减少相应的体积，同理测其光吸收值，计算加酶后邻苯三酚自氧化率。

[3] 酶活性单位的计算根据酶活性单位的定义，按下列公式计算酶活性：样液体积样液稀释倍数反应液总体积数）（单位活性⨯⨯⨯-=%50%100/)/(00A A A ml U m其中，A 0：为邻苯三酚自氧化率；A m ：加酶后邻苯三酚自氧化率；总活性(U)＝单位活性×酶原液总体积 [4] 蛋白质含量测定考马斯亮蓝G-250法）：⑴ 标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，按下表加入试剂：试剂管号12 3 4 5 6 蛋白质标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 考马斯亮蓝G-250(ml) 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量(ug)20406080100盖上塞子，摇匀。

注意各管振荡程度尽量一致。

放置10分钟，在595nm 波长下比色测定光吸收值，比色应在1小时内完成。

以牛血清白蛋白含量（ug ）为横座标，光吸收值为纵坐标，绘出标准曲线。

⑵ 样品中蛋白含量的测定将待测的SOD 溶解并稀释到一定浓度，取1支试管，准确加入0.1ml 样品提取液，加入0.9ml 蒸馏水和5ml 考马斯亮蓝G-250试剂，其余操作与标准曲线制作相同。

乙醇沉淀法1. 简介乙醇沉淀法是一种常用的生化实验方法，用于分离和纯化蛋白质、核酸等生物大分子。

该方法利用乙醇与水中蛋白质或核酸形成不溶性复合物，从而使其沉淀出来。

乙醇沉淀法具有简单、快速、高效的特点，在分子生物学和生物化学研究中得到广泛应用。

2. 实验原理乙醇沉淀法的基本原理是利用乙醇与水中溶解的蛋白质或核酸发生亲和作用，形成水合复合物，使其从溶液中析出。

在低温下，乙醇的高极性使其与蛋白质或核酸中的亲水基团发生相互作用，导致复合物形成。

通过离心将复合物沉淀下来，可以实现对目标分子的纯化。

3. 实验步骤步骤一：提取目标分子首先需要从样品中提取目标分子，例如蛋白质或核酸。

提取方法根据实验目的和样品特性可选择不同的方法，如细胞裂解、酶切等。

步骤二：加入沉淀剂将提取得到的目标分子溶液加入适量的沉淀剂，通常使用无水乙醇。

沉淀剂的加入量一般为溶液体积的1/2至2/3。

步骤三：充分混合用振荡器或轻轻颠倒试管等方式，将溶液和沉淀剂充分混合均匀。

注意避免产生过多气泡。

步骤四：冷藏沉淀将试管或离心管置于低温环境中（通常为4℃），使复合物在低温下充分形成。

冷藏时间一般为30分钟至数小时，具体时间根据样品和实验要求而定。

步骤五：离心沉淀使用高速离心机，以适当的转速离心样品管。

离心时间和转速根据样品特性而定，一般为10-20分钟，转速约为10000-15000 rpm。

步骤六：去除上清液用移液器或吸管小心地将上清液吸除，避免破坏沉淀。

步骤七：洗涤沉淀加入适量的冷乙醇（通常为70%无水乙醇），轻轻颠倒试管使沉淀悬浮于乙醇中。

然后离心样品管，将上清液吸除。

步骤八：干燥沉淀将离心管倒置在纸巾或吸水纸上，待乙醇蒸发完全后，可将干燥的沉淀用适量的缓冲液重溶。

4. 实验注意事项•实验过程中应注意操作规范，避免污染和交叉感染。

•离心时应注意平衡样品管数量和位置，以确保离心机运转平稳。

•操作过程中应注意个人安全，避免接触到有害物质。

•实验前后要对实验器材进行消毒和清洁工作。

最简单的生化操作方法
最简单的生化操作方法可能是进行用试管或培养皿进行混合试剂和溶液的步骤。

下面是一个简单的生化操作方法的步骤：
1. 准备工作台和所需实验器材。

2. 配制好所需的溶液，并将其倒入试管或培养皿中。

3. 将需要混合的试剂慢慢加入到试管或培养皿中。

4. 使用试管架或移液器轻轻摇动试管或培养皿，使试剂混合均匀。

5. 把试管或培养皿放置在适当的温度和条件下培养一段时间，等待所需的反应发生。

6. 根据实验的需要，可能需要进一步通过离心、过滤或其他技术对混合物进行处理。

7. 最后，根据实验的要求，可能需要进行进一步的分析和测量。

需要注意的是，不同的实验需要不同的操作方法和技术，简单的生化操作方法仅适用于一些基础的混合和反应步骤。

在进行复杂的生化实验前，建议先阅读相关实验方案并咨询专业人士的指导。

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生化检验操作规程一. 血脂血糖1.胆固醇(1）方法学：胆固醇氧化酶法(2）实验仪器：上海科华卓越330全自动生化分析仪(3) 试剂成分：R1-胆固醇酯酶,抗坏血酸氧化酶，过氧化物酶，ESPAS，R2-胆固醇氧化酶，4-氨基安替比林(4)操作流程：开机->进入主程序->开始->杯空白测定->正常->将待测管放入样品盘检测孔中（如1孔）->进入样品界面->在界面左侧输入相应起始样品号（如1号）以及相应起始杯号（如1杯）->在右侧检测项目界面中选择“胆固醇”->点击下方申请测试->开始测试->加样针吸取样品管内血清3μL于比色盘的1号比色杯中->试剂针吸取胆固醇 R1试剂250μL于1号比色杯中->搅拌器搅拌混匀->37℃恒温5分钟->试剂针再吸取胆固醇 R2试剂125μL于1号比色杯中->搅拌器再次搅拌混匀->37℃恒温5分钟后比色测定->结果数据传至主程序开始菜单内的报告列表界面->检测完毕->在报告列表输入检验报告单相关信息->点击右下方打印报告->签字审核后发单。

(5）注意事项：①保证比色盘与试剂盘的洁净，定期检查。

每日检查试剂剩余量，及时补足。

②注意主程序界面内的试剂盘的温度变化，一旦持续增高，则考虑冷冻剂问题，予以更换。

③保证样品的良好待检状态，样本为血清，肝素或EDTA抗凝血浆，若当时不能检测则可2℃～8℃冷藏保存。

过度溶血的宜重新取血，若无法重新取血的应在检验报告单上注明，脂血的样本也应在检验报告单上标注，并且稀释后再行检测，黄疸的应先做空白对照，再行检测并将结果减去空白对照后再行出单。

④每日跟随样品进行质控检测绘出质控图，观察质控值是否在2SD以内，3SD为失控限，以便据此观察机器与试剂的状态是否在控。

⑤注意试剂的效期问题，定期检查试剂是否变质，保证试剂在有效期内使用。