溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中ERK—1、sRAGE表达研究
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溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达水平及临床意义霞明;朱杰伦;陈娟;程建国【期刊名称】《临床和实验医学杂志》【年(卷),期】2018(017)011【摘要】Objective To study the expression levels and clinical significances of LRG1,transforming growth factor β (TGF - β)and Smad2 in the colonic mucosa tissues of patients with ulcerative colitis (UC). Methods The most significant intestinal mucosa tissues of 85 pa-tients with UC in our hospital from March 2016 to November 2017 were selected as the study group,the normal intestinal mucosa of 52 reexamina-tion of normal healthy subjects after single polyp resection in the same period was used as the control group,the expression levels of LRG1,TGF- β and Smad2 in intestinal mucosa tissues was detected by immunohistochemical staining,the relationships between the expressions of LRG1, TGF - β and Smad2 in the mucous tissues of UC patients with the stage of the disease and the classification of endoscopy were analyzed,the ex-pression levels ofLRG1,TGF - β and Smad2 in the mucous tissues of different degree of disease during active stage,and the correlations between the expression of TGF - β and the expressions of LRG1 and Smad2 in the mucous tissues of the UC patients were analyzed. Results The positive expression rates of LRG1 and TGF - β in the intestinal mucosa tissues of the study group wassignificantly higher than that of the control group (P < 0. 05). The positive expression rate of Smad2 was significantly lower than that of the control group (P < 0. 05). The LRG1 and TGF - βwere mainly expressed in the cytoplasm of normal mucosa tissues,and also expressed significantly in the cytoplasm and nucleus of the UC mucosa tissues,the Smad2 was mainly expressed in the cytoplasm and membrane of normal mucosa tissues and expressed in the cytoplasm of UC mucosa tissues;the positive expression rates of LRG1,TGF - beta in intestinal mucosa tissues of active UC patients were significantly higher than that of remission patients (P < 0. 05). The positive expression rate of Smad2 was significantly lower than that of remission patients (P < 0. 05). The positive expression rates of LRG1 and TGF - β in intestinal mucosa tissues showed the increasing trends with the increase of endoscopic grade of UC patients (P < 0. 05). The positive rate of Smad2 showed a decreasing trend with the increase of endoscopic grade of UC patients (P <0. 05). The positive expression rates of LRG1 and TGF - β in intestinal mucosa tissues of active UC patients showed the increasing trends with the aggrava-tion of the disease (P < 0. 05). The Smad2 positive expression rate showed a decreasing trend with the aggravation of the disease (P < 0. 05). The TGF - β expression in intestinal mucosa tissues of UC patients was positively correlated with LRG1 (r = 0. 632,P = 0. 000),and Smad2 was negatively correlated (r = - 0. 650,P = 0. 000). Conclusion The expressions of LRG1 and TGF - β in colonic mucosa tissue of UC patients were significantly increased,the expression of Smad2 was significantly decreased,which was related to the severity of thedisease,it may play an important role in the pathogenesis of UC and development of the disease.%目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织中富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)、转化生长因子β(TGF-β)和Smad2表达水平及临床意义.方法前瞻性采集2016年3月至2017年11月接受诊治的85例UC患者病变最显著的肠黏膜组织为研究组,同时期单发息肉切除后行结肠镜复查正常的52例健康者正常肠黏膜组织为对照组.采用免疫组织化学染色法分别检测肠黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达水平.分析UC患者黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达与病情分期、内镜分级的关系.活动期不同病情程度黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达水平.UC患者黏膜组织中TGF-β表达与LRG1、Smad2表达的相关性.结果研究组肠黏膜组织中LRG1、TGF-β阳性表达率显著高于对照组(P<0.05),Smad2阳性表达率显著低于对照组(P<0.05);LRG1、TGF-β主要在正常黏膜组织细胞质中表达,在UC黏膜组织细胞质和细胞核中均有明显表达,Smad2主要在正常黏膜组织细胞质和细胞膜上表达,在UC黏膜组织细胞质中表达;活动期UC患者肠黏膜中LRG1、TGF-β 阳性表达率显著高于缓解期患者(P<0.05),Smad2阳性表达率显著低于缓解期患者(P<0.05);肠黏膜中LRG1、TGF-β阳性表达率随UC患者内镜分级增高呈上升趋势(P<0.05),Smad2阳性表达率随UC患者内镜分级增高呈下降趋势(P<0.05);活动期UC患者肠黏膜LRG1、TGF-β阳性表达率随病情加重呈上升趋势(P<0.05),Smad2阳性表达率随病情加重呈下降趋势(P<0.05);UC患者肠黏膜组织中TGF-β表达与LRG1呈正相关关系(r=0.632,P=0.000),与Smad2呈负相关关系(r=-0.650,P=0.000).结论 UC患者结肠黏膜组织中LRG1、TGF-β 表达量显著增加,Smad2表达量显著降低,与患者病情严重程度有关,可能在UC发病及病情发展过程中起重要作用.【总页数】5页(P1149-1153)【作者】霞明;朱杰伦;陈娟;程建国【作者单位】中国人民解放军第一六一医院消化内科湖北武汉 430010;中国人民解放军第一六一医院消化内科湖北武汉 430010;中国人民解放军第一六一医院消化内科湖北武汉 430010;中国人民解放军第一六一医院消化内科湖北武汉430010【正文语种】中文【相关文献】1.CD4+CD29+T细胞在溃疡性结肠炎患者血清及结肠黏膜组织中的表达变化 [J], 封艳玲2.溃疡性结肠炎患者血浆和肠黏膜组织中神经降压素的含量及其临床意义 [J], 张惠芳;张凤玉;曹务成3.HIF-1α和COX-2在溃疡性结肠炎患者外周血及黏膜组织中的表达及临床意义[J], 成斌4.丹参酮ⅡA联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎患者炎症因子及结肠黏膜组织中MHC-Ⅱ水平的影响 [J], 张洁5.胸腺基质淋巴细胞生成素在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织中的表达 [J], 林艳;林连捷;崔月;郑长青因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
PPARγ、NFkB P65在溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜组织中的表达及意义尹剑;董蕾【摘要】目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPARγ)、核转录因子-kB p 65(NFkB p65)在溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜组织中的表达及意义。
方法20只健康雄性小鼠,随机分为模型组和对照组,各10只,模型组小鼠自由饮用5%葡聚糖硫酸钠( DSS)溶液,连续7天,对照组小鼠自由饮用生理盐水7天。
造模成功后处死小鼠,取同水平段结肠组织,以免疫组化法观察两组小鼠黏膜形态学变化,进行疾病活动指数( DAI)评分及病理组织学分级,并检测PPARγ和NF-κB p65表达水平。
结果模型组小鼠 DAI 评分为8.42±1.13分,对照组 DAI 评分为0.47±0.23分,组间差异显著( P<0.01)。
PPARγ和NF-κB主要表达于上皮细胞的细胞核中,对照组可见大量PPARγ阳性细胞,NF-κB阳性细胞较少,模型组PPARγ阳性细胞较少,可见大量NF-κB阳性细胞。
模型组小鼠病理分级越严重,PPARγ表达水平越低,NF-κB表达水平越高,两两比较,差异均有统计学意义( P<0.01)。
结论PPARγ和NFkB P65可能参与UC小鼠炎症的发生发展,联合检测其表达水平有助于判定病情严重性。
%Objectives To explore the expression and significance of peroxisome proliferators activated receptor ( PPARγ) and nuclear factor kappa-kB p 65 (NFkB p65)in the intestinal mucosal tissues of mice with ulcerative colitis(UC).Methods A total of 20 healthy mice were randomly divided into model group and control group, 10 for each group.Model group was given 5%dextra sulfate sodium (DSS) freely for continuously 7days, whereas control group with normal saline for 7days.After model establishment, themice were sacrificed to obtain the colonic tissues of the same segment.Immunohistochemistry was used to observe the morphologi-cal changes of mucous membrane of mice in both groups, evaluate disease activity index ( DAI) score and histopathological grades, and detect the expression of PPARγand NF-κB p65.Results DAI scores were 8.42 ±1.13 points and 0.47 ±0.23 points in mod-el group and control group respectively, and there was significant difference (P<0.01).PPARγand NF-κB mainly expressed in the nucleus of epithelial cells.Control group showed abundant PPARγpositive cells but less NF-κB positive cells, whereas model group showed less PPARγpositive cells but abundant NF-κB positive cells.In model group, the severer the pathological grade, the lower the PPARγexpression level and the higher the NF-κB expression levels, which had significant differences when compared with con-trol group(P<0.01).Conclusions PPARγand NFkB P65 may participate in the development and progression of the inflammation in UC mice, and their combined detection can help diagnose the disease severity.【期刊名称】《中国老年保健医学》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】3页(P51-53)【关键词】过氧化物酶增殖物激活受体;核转录因子-kB;溃疡性结肠炎;免疫组化【作者】尹剑;董蕾【作者单位】西安交通大学第二附属医院消化内科 710004;西安交通大学第二附属医院消化内科 710004【正文语种】中文溃疡性结肠炎(UC)是发生于结肠黏膜的慢性非特异性炎症,呈反复发作特征,目前其确切病因尚不明缺,可能与遗传因素、免疫及肠道菌群等多因素相互作用有关[1]。
溃疡性结肠炎患者病灶组织血管内皮生长因子、细胞外调节蛋白激酶-1、-2表达与病程的相关性刘宝海朴雪花1(辽宁医学院附属第一医院消化科,辽宁锦州121001)〔摘要〕目的探讨溃疡性结肠炎病灶组织血管内皮生长因子(VEGF )、细胞外调节蛋白激酶-1(ERK )-1和ERK-2表达与病程的相关性。
方法128例老年溃疡性结肠炎患者根据疾病病程分为初发型组、慢性复发型组、慢性持续型组和急性暴发性组。
采用RT-PCR 检测所有患者病灶组织中VEGF 、ERK-1和ERK-2mRNA 转录水平,采用免疫组化检测VEGF 、ERK-1和ERK-2表达阳性细胞率。
结果四组患者病灶组织VEGF 和ERK-1/2mRNA 相对光密度值逐渐增加,四组患者VEGF 和ERK-1/2平均阳性率逐渐增多,在急性暴发性患者中VEGF 阳性率高达39.59%,ERK-1阳性率高达31.47%,ERK-2阳性率高达24.12%,比较各组间阳性率具有显著性差异(均P <0.05)。
结论病灶组织VEGF 、ERK-1和ERK-2是溃疡性结肠炎发生的危险因素,其表达水平随着病情的进展而增加,具有预测溃疡性结肠炎严重程度的潜在价值。
〔关键词〕血管内皮生长因子;细胞外调节蛋白激酶;溃疡性结肠炎;相关性〔中图分类号〕R574.62〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202(2012)20-4394-03;doi :10.3969/j.issn.1005-9202.2012.20.0181辽宁医学院附属第一医院中医科第一作者:刘宝海(1981-),男,博士,医师,主要从事消化系疾病的诊断与治疗研究。
溃疡性结肠炎主要因结肠黏膜表皮溃疡,导致肠道无法发挥正常消化吸收功能,进而造成排便困难和便血等症状,临床主要以腹泻、排便出血等症状为主〔1〕。
老年人患溃疡性结肠炎后,身体虚弱,抵抗能力急剧下降,各方面体征较年轻人严重〔2〕。
本文主要探讨血管内皮生长因子(VEGF )、细胞外调节蛋白激酶-1(ERK-1)和ERK-2与不同程度的溃疡性结肠炎的相关性。
第四军医大学硕士学位论文BALB/c小鼠溃疡性结肠炎远段结肠Cajal间质细胞分布及超微结构变化的研究姓名:***申请学位级别:硕士专业:内科学(儿科)指导教师:***20070501缩略语表缩略语英文全称中文全称英文缩写英文全称中文全称ICC interstitial cells of Cajal Cajal间质细胞UC ulcerativecolitis 溃疡性结肠炎DSS dextran sulfate sodium 葡聚糖硫酸钠CM circular muscle layer 环肌层LM longitudinallayer纵肌层muscleENS enteric nervous system 肠神经系统plexus 肌间神经丛MYP myentericplexus 粘膜下神经丛SMP submucosalAch acetylcholine 乙酰胆碱VIP vasoactive intestinal peptide 血管活性肠肽P P物质SP substanceGAS gastrin 促胃液素(胃泌素)CCK cholecystokinin 胆囊收缩素MT motilin 胃动素SS somatostatin 生长抑素IC-MY myenteric plexus ICC 肠肌丛Cajal间质细胞IC-SM submucosal plexus ICC 粘膜下丛Cajal间质细胞IC-DMP deep muscular plexus ICC 深肌层Cajal间质细胞ICC 肌内Cajal间质细胞IC-IM intramuscularcell 平滑肌细胞mucleSMC smoothSCFstem cell factor 干细胞因子 MCGF mast cell growth factor 肥大细胞生长因子SW slow wave慢波 BERbasic electrical rhythm 基本电节律 DGIM disordersof gastrointestinal motility 胃肠动力疾病 GER gastroesophagealreflux 胃食管反流 LESlower esophageal sphincter 食管下括约肌 AOCAchalasia of cardia 贲门失弛缓症 IHPS infantilehypertrophic pyloric stenosi 婴儿肥厚性幽门狭窄 IGPidiopathic gastric perforation 特发性胃穿孔 CIIPChronic idiopathic intestinal pseudo-obstruction 慢性假性肠梗阻 NEC necrotizingenterocolitis 坏死性小肠结肠炎 CIA congenitalintestinal atresia 先天性肠闭锁 HD Hirschsprung’sdisease 先天性巨结肠 STC slowtransit constipation 慢传输型便秘 CD Crohn’sdisease 克罗恩病 MMIHS Megacystismicrocolon intestinal hypoperistalsis syndrome 巨膀胱-小结肠-肠蠕动迟缓综合征 ARM anorectalmalformations 肛门直肠畸形 IASA internal anal sphincter肛门内括约肌弛缓不能独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德,本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
溃疡性结肠炎的研究进展丁栋;李佳妮;齐冉;陆源;杨勇【摘要】溃疡性结肠炎是一种由免疫反应介导的慢性易复发的炎症肠病。
最新研究表明多种基因异常导致T细胞对一系列肠道共生菌产生异常免疫反应,进而损伤肠黏膜是其主要病因。
多种环境因素能瞬时破坏黏膜屏障,与基因异常共同作用,扰乱免疫反应或者肠道菌群,导致了溃疡性结肠炎的异质性。
溃疡性结肠炎的异质性决定了其诊断的复杂性,目前的诊断主要依赖临床评估,内窥镜检测,组织学和生物学相结合的方法。
治疗药物主要包括氨基水杨酸盐,免疫抑制剂和生物学抗体等。
本文总结了溃疡性结肠炎的研究现状及进展,为结肠炎预防、诊断、治疗以及新药研发提供了新的策略。
【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2017(036)007【总页数】5页(P404-408)【关键词】溃疡性结肠炎分类发病机制诊断【作者】丁栋;李佳妮;齐冉;陆源;杨勇【作者单位】中国药科大学药物科学研究院,江苏南京211198;中国药科大学药物科学研究院,江苏南京211198;中国药科大学药物科学研究院,江苏南京211198;中国药科大学药物科学研究院,江苏南京211198;中国药科大学药物科学研究院,江苏南京211198【正文语种】中文【中图分类】R574.62溃疡性结肠炎是两种常见炎性肠疾病(IBD)中的一种。
溃疡性结肠炎发生时,肠道免疫系统的平衡被破坏,并具有极高的复发可能。
该病发病的高峰是在15~25岁,临床上诊断主要通过内窥镜和组织学手段[1]。
溃疡性结肠炎是一种慢性炎症疾病,特点表现为直肠与结肠中的连续黏膜溃疡,起始于直肠,不同程度地扩展,最长可以蔓延到盲肠[2]。
其病因至今仍未确定,普遍认为是受到了环境、遗传和微生物等因素的影响,并且也有研究认为其符合太阳耀斑的活动规律[3]。
多重因素导致了近些年该病的高发,2009年在美国大概有593 000例溃疡性结肠炎患者,而在欧洲,每10万人中就有21~246人受到该病的影响。
结直肠癌组织SSTR亚型和ERK1表达与临床病理因素间的关系的研究作者:包莉朱润庆来源:《魅力中国》2011年第07期摘要:研究生长抑素受体亚型和ERK1在结直肠癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系,探索SSTR亚型和ERK1在结直肠癌发生、发展的作用。
方法:应用免疫组织化学的方法检测SSTR亚型在结直肠癌、结肠腺瘤和正常结肠组织中的表达,并比较SSTR亚型和ERK1的表达与临床病理因素的关系。
结果:三组SSTR表达的优势亚型是SSTR1,三种组织中结直肠癌组织中ERK1的表达阳性率最高,结肠癌组织中5种SSTR亚型表达在患者的性别,年龄,肿瘤的大小间的差异无统计学意义(p>0.05),SSTR2在肿瘤的分化程度、肿瘤的分期间的差异有统计学意义(p关键词:生长抑素受体;结直肠癌;ERK1;免疫组化近年来,对生长抑素极其受体的深入研究,使得生长抑素在肿瘤的治疗作用日益受到重视。
本研究应用免疫组织化学方法检测比较人结肠癌组织,结肠腺瘤组织和正常结肠粘膜组织中SSTR亚型的表达,旨在确定结肠癌组织中SSTR亚型表达与临床病理因素间的关系,探索SSTR亚型在结直肠癌发生、发展中的作用,为SSTA治疗结直肠癌提供理论依据。
1 材料和方法1.1 研究对象2005-2009年襄樊职业技术学院附属医院结直肠癌存档标本55例,结肠腺瘤标本35例。
对照组55例正常结肠粘膜组织标本取自距肿瘤5cm外处结肠粘膜(镜下诊断为正常结直肠组织)。
1.2 标本和试剂每份标本常规苏木精一伊红染色,进行组织形态学观察和细胞分化程度判断。
兔抗人SSTRl、SSTR2、SSTR3、SSTR4、SSTR5和ERK1多克隆抗体一抗(美国Santa Cruz Biotechnology公司)、即用型SABC试剂盒(福建迈新生物实验材料研究所)、联苯二胺及PV-6001二抗(北京中山生物技术有限公司)用于标本的免疫组织化学检测。
1.3 统计学方法采用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析,采用Pearson χ2检验(必要时进行连续性校正)或Fisher精确概率检验等,检验水准α=0.05,p2 结果2.1 SSTR在结直肠癌组织、结肠腺瘤组织和正常结肠粘膜上皮细胞中的表达 SSTR表达的优势亚型是SSTRl,SSTRl在结肠癌组织和正常结肠粘膜上皮细胞中的表达无显著差(P>O.05)。
溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中ERK—1、sRAGE表达研究作者:杨俊曹勇王东旭潘迪张营郑长青来源:《中国医药导报》2016年第33期[摘要] 目的探讨溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中细胞外调节蛋白激酶-1(ERK-1)、人可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)的表达及意义。
方法选取90只健康成年雄性BALB/c 小鼠,根据随机数字表分为溃疡性结肠炎组(n=30)、细菌性肠炎组(n=30)及对照组(n=30),溃疡性结肠炎组给予饮用葡聚糖硫酸钠(DSS)造模,细菌性肠炎组给予大肠埃希菌菌液灌肠造模,对照组不做处理。
造模成功后处死小鼠,观察各组小鼠疾病活动指数(DAI)、结肠组织病理学评分(HPS);取小鼠结肠标本,应用免疫组化法测定ERK-1、sRAGE表达。
结果与对照组、细菌性肠炎组相比,溃疡性结肠炎组小鼠DAI、HPS评分显著升高(P < 0.05),而细菌性肠炎组DAI、HPS评分高于对照组(P < 0.05)。
溃疡性结肠炎组小鼠结肠组织中ERK-1、sRAGE阳性表达率均高于细菌性肠炎组及对照组(P < 0.05),而细菌性肠炎组小鼠结肠组织中ERK-1表达高于对照组(P < 0.05)。
经Pearson相关分析显示,结肠组织中ERK-1、sRAGE与DAI、HPS评分呈正相关(P < 0.05)。
结论结肠组织中ERK-1、sRAGE异常表达与溃疡性结肠炎的发生及病情进展有密切关系。
[关键词] 细胞外调节蛋白激酶-1;人可溶性晚期糖基化终末产物受体;溃疡性结肠炎[中图分类号] R574.62 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)11(c)-0008-04The expression of ERK-1, sRAGE in colon tissue of mice with ulcerative colitisYANG Jun CAO Yong WANG Dongxu PAN Di ZHANG Ying ZHENG ChangqingThe Second Department of Digestive Internal Medicine, Shengjing Hospital Affiliated to China Medical University, Liaoning Province, Shenyang 117004, China[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of extracellular signal-regulated kinase-1 (ERK-1), human soluble advanced glycation end product receptor (sRAGE) in colon tissue of mice with ulcerative colitis. Methods 90 healthy adult male BALB/c mice were selected and divided into ulcerative colitis group (n=30), bacterial enteritis group(n=30) and control group (n=30) according to random number table. The rats in the ulcerative colitis group were given dextran sulfate sodium sulfate (DSS), and the bacterial enteritis group was given E. coli bacteria liquid enema modeling. The control group had no dispose. The mice disease activity index (DAI), colonic histopathology score (HPS) of each groups after the modeling were observed. The levels of ERK-1, sRAGE expression in assay colon tissue were determined byimmunohistochemistry. Results The DAI, HPS scores of the ulcerative colitis group were higher than those of the bacterial enteritis group and the control group (P < 0.05), which of the bacterial enteritis group were higher than those of the control group (P < 0.05). The levels of ERK-1,sRAGE expression in colonic tissues of the ulcerative colitis group were higher than those of the bacterial enteritis group and the control group (P < 0.05), and ERK-1 expression in the colon tissue of bacterial enteritis group was higher than that of the control group (P < 0.05). The Pearson analysis showed that the levels of ERK-1, sRAGE expression were positively correlated with DAI,HPS scores (P < 0.05). Conclusion The abnormal expression of ERK-1 and sRAGE in colon tissue have a close relationship with the occurrence and progression of ulcerative colitis.[Key words] Extracellular regulated protein kinase-1; Human soluble advanced glycation end product receptor; Ulcerative colitis溃疡性结肠炎是临床上常见的胃肠疾病,目前发病机制尚不明确。
已有研究表明,炎症因子、遗传背景、结肠内微生态失衡及细胞内信号传导异常等因素均可能与溃疡性结肠炎的发生及病情进展有密切的关系[1-2]。
细胞外调节蛋白激酶-1(ERK-1)属于有丝分裂原激活蛋白激酶信号通路中关键信号蛋白,通过磷酸化发挥着开启及闭合信号通路的作用,从而起调控细胞因子表达的作用[3]。
有研究指出,ERK-1在溃疡性结肠炎中存在明显的磷酸化现象,可活化肿瘤细胞坏死因子及转移细胞因子[4]。
人可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)属于跨膜蛋白,是由晚期糖基化终末产物受体(RAGE)脱落而成,可作为慢性浸润性炎症疾病的标志物[5]。
当机体组织或外周血中sRAGE水平升高则提示机体处于炎症浸润状态。
本研究主要探讨ERK-1、sRAGE在溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及作用机制。
1 材料与方法1.1 实验动物选取90只健康成年雄性BALB/c小鼠,重量20~25 g,购于复旦大学上海医学院动物实验中心,合格证号:SCXK(沪)2014-0001。
所有动物于复旦大学上海医学院动物实验中心屏障环境饲养,动物使用合格证号:SYXK(沪)2014-0008。
根据随机数字表分为溃疡性结肠炎组(n=30)、细菌性肠炎组(n=30)及对照组(n=30),所有动物均行清洁级实验室饲养。
1.2 主要试剂及仪器葡聚糖硫酸钠(DSS)购于美国Sigma公司,大肠埃希菌菌株购于上海士锋生物科技有限公司;兔抗鼠ERK-1一抗(艾美捷科技有限公司);兔抗鼠sRAGE一抗(上海康朗生物科技有限公司);羊抗兔二抗(南京生兴生物技术有限公司);DAB显色剂(北京索莱宝科技有限公司);多聚甲醛(南京新化原化学有限公司);辣根过氧化酶[微蒙生物科技(上海)有限公司]。
超声波清洗仪(型号:SKE-5S,宁波科麦仪器有限公司);微量加样器(北京华仪三谱仪器有限责任公司);电子分析天平(型号:BT125D,赛多利斯仪器有限公司);紫外可见分光光度计(型号UV2600,杭州康纳科技有限公司)。
1.3 方法1.3.1 建立动物模型溃疡性结肠炎组:将5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶解于纯净水中,让小鼠自行服用进行造模,当小鼠持续有轻重不等的腹泻、间断血便、腹痛及全身症状,持续数周,其间可有急性发作则为建模成功;细菌性肠炎组给予大肠埃希菌菌液灌肠造模,每天灌肠1次,每次200 mL,当小鼠出现大量水样便,无脓血,无腹痛,伴有呕吐,容易发生脱水、出现电解质紊乱及酸中毒症状时则为造模成功;对照组不做处理。
造模后各组小鼠持续观察12 d,第12天后处死,取出结肠组织用于相关指标检测。
1.3.2 症状体征观察及评分建模过程中,观察各组小鼠便血、大便性状、体重变化,并参照Cooper经典评分系统[6],将小鼠每天便血、大便性状、隐血及体重下降等评分相加,作为疾病活动指数(DAI)。
1.3.3 组织病理学炎症损伤评分在距肛门2、6、10 cm处选取3段长约1 cm的小鼠结肠组织,石蜡包埋切片,行HE染色,采用盲法阅片,光镜下观察肠黏膜损伤情况,并根据Cooper 经典组织学损伤评分法进行结肠组织病理学评分(HPS)。
1.3.4 结肠组织中ERK-1、sRAGE表达测定造模成功后12 d随机从各组中选取10只小鼠,应用免疫组化法测定小鼠结肠组织中ERK-1、sRAGE表达水平。
各组小鼠处死前24 h于腹腔内注射Brd U,共注射3次,每6小时注射1次,注射完毕12 h后应用1.5%~2.5%异氟烷吸入麻醉,然后应用脊椎脱臼法处死小鼠,取出结肠组织,应用4%多聚甲醛固定过夜,石蜡包埋,行冠状位切片,切片后常温脱蜡加入3%甲醇溶液,常温下山羊血清封闭20 min,兔抗鼠ERK-1一抗、兔抗鼠sRAGE一抗,置湿盒4℃过夜,生物素标记二抗,室温下静置10 min,加入辣根过氧化酶,室温下静止10 min,滴入DAB显色剂,室温显色5~10 min,中性树脂封片。