微生物学实验

第1篇一、实验目的1. 了解细菌的基本形态结构。

2. 掌握细菌的分离、纯化和鉴定方法。

3. 学习细菌生理生化反应的检测原理和应用。

二、实验原理细菌是单细胞微生物，具有典型的原核细胞结构。

通过观察细菌的形态、染色和生理生化反应，可以鉴定细菌的种类。

三、实验材料与仪器1. 材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等纯菌株。

2. 仪器：显微镜、接种环、培养皿、酒精灯、无菌水、生理盐水、革兰氏染色液、生理生化试剂等。

四、实验方法1. 细菌形态观察- 将细菌涂布在载玻片上，进行革兰氏染色。

- 使用显微镜观察细菌的形态、大小、染色性等特征。

2. 细菌分离与纯化- 将纯菌株接种于琼脂平板，进行划线分离。

- 观察菌落特征，挑选单菌落进行纯化。

3. 细菌生理生化反应检测- 进行糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。

- 观察反应结果，判断细菌的生理生化特性。

五、实验结果与分析1. 细菌形态观察- 大肠杆菌：革兰氏阴性，呈杆状，两端钝圆。

- 金黄色葡萄球菌：革兰氏阳性，呈球形，呈葡萄串状排列。

- 肺炎克雷伯菌：革兰氏阴性，呈短杆状，两端钝圆。

2. 细菌分离与纯化- 划线分离后，观察到单菌落形成。

3. 细菌生理生化反应检测- 糖发酵试验：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均能发酵葡萄糖。

- 吲哚试验：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均呈阳性。

- 甲基红试验：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均呈阳性。

- V-P试验：金黄色葡萄球菌呈阳性，大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均呈阴性。

六、讨论与分析1. 通过观察细菌的形态、染色和生理生化反应，可以初步鉴定细菌的种类。

2. 细菌的生理生化反应具有特异性，可用于细菌的鉴定和分类。

3. 在实际应用中，细菌的分离、纯化和鉴定是微生物学研究和临床诊断的重要环节。

七、实验结论1. 通过本次实验，我们掌握了细菌的基本形态结构、分离、纯化和鉴定方法。

2. 我们学会了利用生理生化反应进行细菌的鉴定和分类。

3. 本实验有助于提高我们对微生物学基本理论的认识和应用能力。

实验一培养基的制备与灭菌实验步骤：（一）伊红美蓝培养基（EMB，用成品，分离大肠杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。

按成品说明称量、放入搪瓷杯，加水，加热完全溶化，倒入三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，作标记（培养基名称、批次组别、日期，下同），灭菌。

（二）营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨培养基，用成品，分离芽孢杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基，方法同上，灭菌。

（三）PDA培养基（即马铃薯蔗糖培养基，分离酵母菌、根霉用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。

培养基配方：马铃薯20%、蔗糖（白砂糖）2%、琼脂 2%，加水至所需体积，pH自然。

配制方法：马铃薯去皮，称量，切成小方块，放入搪瓷杯，加水适量，煮沸20 min，取汁液，补水至所需体积，加入蔗糖（白砂糖），加热溶化，最后加入琼脂（琼脂要预先单独用水浸泡，然后挤干再加入），加热至琼脂完全溶化，分装三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，灭菌。

培养基统一高压蒸汽灭菌（121℃25 min）。

（四）无菌平皿准备（下次实验倒平板用）每组10套，报纸包扎，高压蒸汽灭菌（121℃25 min）后，置干燥箱80℃烘干1 h。

（五）枯草样预处理及预培养（下次实验分离芽孢杆菌用）枯草样预处理：每组1瓶。

100 ml三角瓶＋自来水约50 ml，加5%可溶性淀粉，溶解。

枯草若干，剪短，浸入三角瓶水中，牛皮纸封口，包扎，置水浴中煮沸10 min，然后置培养箱30℃预培养3～7 d。

（六）葡萄样（或其它水果）酵母菌预培养（下次实验分离酵母菌用）每组1瓶。

葡萄（或其它水果）适量，捏碎，皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶（装量1/2～2/3），封口，置培养箱25℃预培养3～7 d，观察自然发酵过程。

实验二微生物的分离与纯化实验步骤：（一）污水中大肠杆菌的分离（稀释倒平板法）1）用三角瓶取污水样适量。

微生物学实验报告微生物学实验报告实验目的：观察和学习微生物在不同条件下的生长和繁殖特性。

实验原理：微生物是一类非常小型的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。

它们广泛存在于自然界中的土壤、水体和空气中。

微生物可以通过分裂、繁殖等方式进行增殖，并且受到温度、pH值、营养条件等环境因素的影响。

实验材料：培养皿、琼脂、试管、移液器、细菌液等。

实验步骤：1. 准备好所需的培养皿，将琼脂均匀地倒入各个培养皿中。

2. 将培养皿放入高压锅中进行高压灭菌处理，以杀死培养皿中的病原体。

3. 等待琼脂冷却固化后，将培养皿倒置放置。

4. 使用无菌手术针，从微生物液体中获取一定量的微生物液体。

5. 将微生物液体均匀地涂抹在琼脂培养皿上。

6. 使用无菌眼刷将一部分涂抹的微生物液体划线，以便观察微生物的生长情况。

7. 将培养皿放入恒温箱中进行培养，并设置不同的温度、pH 值、营养条件等。

8. 每隔一段时间，观察培养皿上微生物的生长情况，并记录下来。

实验结果和分析：根据观察和记录的结果，我们发现微生物在不同条件下的生长速度和繁殖能力是有差异的。

在适宜的温度、pH值和营养条件下，微生物的生长速度相对较快，生物量也相对较高。

而在不适宜的条件下，微生物的生长速度会减慢或停止，甚至会死亡。

实验结论：微生物的生长和繁殖特性与环境条件密切相关。

适宜的温度、pH值和营养条件可以促进微生物的生长和繁殖，而不适宜的条件会影响微生物的生长。

因此，在实际应用中，我们需要根据微生物的需求条件来选择合适的培养条件，以提高微生物的生长和繁殖能力。

实验总结：通过本次实验，我们进一步了解了微生物在不同条件下的生长和繁殖特性。

微生物的生长和繁殖受到温度、pH 值、营养等环境因素的影响，这是我们在环境控制和微生物培养中需要注意的因素。

掌握微生物的生长和繁殖特性，有利于我们更好地应用微生物技术，并解决一些与微生物相关的问题。

微生物学实验技术
微生物学实验技术是研究和发掘微生物的重要方法，也是一门多种实验技术和方法的
综合。

它既可以应用于生物体内，对微生物调查，可以使用培养基或特定介质进行鉴定，
也可以用来通过遗传工程分离、改造微生物，了解不同微生物的全部 trait 特性。

一、培养微生物
培养微生物是一种最常用的微生物实验技术，需要使用特定的培养基，通过控制温度、湿度等变量的变化来培养不同的微生物。

通过检测培养基中的微生物数量及某些代表性特征，可确定微生物的分类特征，来鉴定微生物的种类和形式。

二、基因组测序
基因组测序是一种实验技术，是分析一个微生物种类全部 genetic 的方法。

主要利
用高通量DNA测序技术，对样品中贮藏的 DNA 进行范围检测，得到 DNA 的测定序列，从
而确定微生物的遗传结构、物种种类，以及特定物种生态和功能特征。

三、共价法抗菌药敏试验
共价法抗菌药敏试验是研究微生物对一类药物或多类药物的抗性程度的重要方法之一。

通过检测药物剂量的不同，在药物浓度相同的情况下微生物在某种时间内生长情况不同，
来确定微生物对某种药物或多类药物的抗性情况。

四、特异性提取
特异性提取是一种以特定方法从微生物中提取出特定“ biomolecule ”，比如 DNA、蛋白质等，分离和纯化微生物某功能元件或特征分子的实验技术。

这种技术既可以提取大
量的基因片段，也可提取微量的特异性物质。

五、遗传修饰
遗传修饰是一种利用遗传工程改造或添加微生物特定遗传物质来改变微生物的特性的
实验技术，常用来进行分子育种和改良育种，以提高产品的质量和性能。

微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分：显微镜的使用一、目的要求1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。

2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。

3．了解各种显微镜的主要特征。

二、实验原理（一）光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。

1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。

2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。

（二）放大倍数标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。

总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。

物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。

显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。

分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。

因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。

R=0.61λ/N.A式中：R-----分辨距离；λ------作用光的波长；N.A------数值口径。

一些介质的折射率介质折射率空气水玻璃香柏油1 13 55 1.56三、实验内容（一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。

（二）方法：细菌很小，须使用油镜方可观察到。

油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。

2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。

在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。

然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。

实验一实验室和人体表面微生物的检查一实验目的1 证明实验室环境与体表存在微生物2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型3 体会无菌操作的重要性二实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分, 当取自不同来源的样品接种于培养基上, 在适宜温度下培养, 1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖, 形成一个可见的细胞群体的集落, 称为菌落。

每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点, 例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。

因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。

三、器材1.培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内）, 接种环, 试管架, 酒精灯, 记号笔, 废物缸。

四、操作步骤1.写标签任何一个实验, 在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等）, 字尽量小些, 写在皿底的一边, 不要写在当中, 以免影响观察结果。

注：培养皿的记号一般写在皿底上, 如果写在皿盖上, 同时观察两个以上培养皿的结果, 打开皿盖时容易混淆。

2.实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上, 移去皿盖, 使琼脂培养基表面暴露在空气中, 将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中, 移去皿盖, 1h后盖上两个皿盖。

（2）实验台①用记号笔在皿底外面中央画一直线, 再在此线中间处画一垂直线。

②取棉签左手拿含有棉签的试管, 在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞, 将其取出, 将管口很快地通过酒精灯的火焰, 烧灼管口；轻轻地倾斜试管, 用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。

放回棉塞, 并将空试管放在试管架上。

③弄湿棉签左手取灭菌水试管, 如上法拔出棉塞并烧灼管口, 将棉签插入水中, 再提出水面, 在管壁上挤压一下以除去过多的水分, 小心将棉签取出, 烧灼管口, 放回棉塞, 并将灭菌水试管放在试管架上。

实验一微生物的分离和纯化本实验以微生物的分离和纯化为主线，综合包括了培养基的配制、消毒灭菌、微生物的分离等内容,在给定的时间内由学生自主完成。

包括以下知识内容。

学生书写实验报告的时候,不能照抄袭原文，要用自己的语言，表述实验过程，在别人看完你的实验报告后,能够知道你是怎样做的，能够重复你的实验过程。

一、目的要求1．了解培养基的配制原理，掌握常用培养基的配制方法.2．掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。

3 学习、掌握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术.4 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。

5 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术,了解培养细菌、放线菌及霉等种类的微生物的培养条件.二、原理培养基是将微生物生长繁殖所需要各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。

其中除含有水分、碳水化合物、含氮化合物和无机盐类。

此外，微生物还必须在最合适的酸碱度范围的培养基上生长繁殖，因此，对不同种类的微生物，应将培养基调节到一定的PH值范围.根据研究目的不同,可将培养基制成固体、半固体和液体三种形式。

固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2％的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加入0.5～0.8％的琼脂.有时为了特殊目的，也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。

由于微生物营养类型不同，应提供不同种类的培养基。

在分离、培养异样微生物时，对一般细菌常用肉膏蛋白胨培养基，对放线菌常用高氏合成1号培养基，培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培养基，有时也常用马丁培养基分离霉菌。

马丁培养基除含有霉菌所含需的各种营养物外,还有孟加拉红染料，能抑制放线菌和细菌，链霉素可杀死或抑制细菌，但对霉菌均无害，所以这种培养基具有选择作用。

灭菌的方法很多，最常用的是加压蒸汽灭菌法。

此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。

在每平方厘米为一个大气压（即15磅/时2）的压力下，温度可达121℃，一般只要持续15～20分钟后，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子.由于加压蒸汽灭菌是通过提高蒸汽压力而使其升高温度以杀死微生物的，所以，该法只有当灭菌锅内的空气完全排尽后，才能达到最佳效果。