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常用DNA分子标记类型和特点DNA分子标记是一种广泛应用于生物学研究和诊断领域的技术，用于识别、检测和定量目标DNA序列。
常见的DNA分子标记类型包括荧光染料、酶和放射性同位素等。
每种标记类型都具有其独特的特点和应用场景。
荧光染料是DNA分子标记中最常用的类型之一、它们通过在DNA分子上附着荧光染料，使其在荧光显微镜下可见。
荧光染料具有多种颜色和化学性质，可用于多重标记和多个目标的同时检测。
其主要特点包括：1.高灵敏度：每个荧光染料分子都有较强的荧光信号，因此可以在微量样品中进行检测。
2.高选择性：荧光染料可以针对目标DNA序列进行选择性标记，从而实现目标分子的准确检测。
3.高兼容性：荧光染料可以与不同的DNA分析方法兼容，如凝胶电泳、荧光定量PCR等。
酶也是常用的DNA分子标记类型之一、通过将酶与DNA标记物结合，可以通过酶的催化反应产生可定量的信号。
常用的酶标记包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
其主要特点包括：1.高灵敏度：酶催化反应可以在大量酶底物的参与下放大信号，从而提高检测的灵敏度。
2.稳定性：酶标记的DNA可以在各种条件下稳定存在，并且可以长期保存。
3.可视性：酶催化反应可以产生可见的颜色或发光信号，从而直观地观察到标记物。
放射性同位素是DNA分子标记的传统方式之一、通过将放射性同位素与DNA标记物结合，可以通过放射性测量来定量目标DNA序列。
1.高灵敏度：放射性测量可以实现非常低浓度目标DNA的检测。
2.高特异性：放射性同位素标记DNA具有非常高的特异性，可以准确检测目标序列。
3.长期保存：放射性同位素标记的DNA可以长期保存，方便未来的回溯和再分析。
虽然放射性同位素标记具有较高的灵敏度和特异性，但其使用需要特殊的设备和技术，并且存在较高的辐射风险，因此在现代实验室中较少使用。
总结而言，DNA分子标记在生物学研究和诊断中起着至关重要的作用。
不同类型的DNA标记具有各自的特点和应用场景，研究人员可以根据实验需求选择合适的标记方式，以便实现高灵敏度、高特异性和可视化的目标DNA检测。
原核生物dna聚合酶的特点原核生物DNA聚合酶是一种在原核生物（包括细菌和古菌）中起着关键作用的酶，它具有以下特点：1. 高度专一性：原核生物DNA聚合酶能够识别和结合特定的DNA 模板，并在正确的位置上添加互补的核苷酸。
这种高度专一性使得DNA聚合酶能够准确地复制DNA，并保证基因信息的传递的准确性。
2. 高度过程性：DNA聚合酶能够在DNA模板上连续地添加核苷酸，形成一个新的DNA链。
它能够在DNA的3'端辨识和结合正确的核苷酸，并将其与模板DNA上的5'端进行连接，从而实现DNA链的延伸。
3. 快速速度：DNA聚合酶能够以非常快的速度进行DNA复制。
在细菌中，一种常见的DNA聚合酶称为DNA聚合酶Ⅲ，它能够在每秒钟合成大约1000个核苷酸。
这种高速合成的能力使得细菌能够在短时间内复制大量的DNA。
4. 高度稳定性：DNA聚合酶具有高度的稳定性，能够在高温、酸性和碱性环境中正常工作。
这种稳定性使得原核生物能够生存和繁殖在各种恶劣的环境条件下。
5. 多种功能：除了在DNA复制中起着核酸合成的作用外，DNA聚合酶还具有其他功能。
例如，一些DNA聚合酶具有修复DNA损伤的能力，它们能够识别和修复DNA链上的损伤位点。
此外，一些DNA聚合酶还能够参与DNA重组和基因转录等过程。
原核生物DNA聚合酶的特点使得它在细菌和古菌中起着至关重要的作用。
通过复制DNA，它能够确保基因信息的传递和细菌的遗传稳定性。
此外，DNA聚合酶的修复功能还能够修复DNA损伤，保护细菌免受环境因素的影响。
因此，对于研究原核生物的生物学过程以及开发新的抗菌药物，理解原核生物DNA聚合酶的特点是非常重要的。
第 4 期2023 年 8 月NO.4Aug .2023水利信息化Water Resources Informatization·他山之石·近年来，人类活动影响导致水生态系统遭到破坏，水生生物多样性锐减，水生态功能严重退化并影响人类健康。
而生物多样性是维持生态平衡的基础，因此，对水生生物进行监测是开展水生态环境管理和保护的前提。
目前，传统的水生态研究主要依赖形态学生物监测，以及通过直接观察、显微镜和生物声学收集数据。
然而传统形态学生物监测存在费时费力、成本高、物种分辨度低等诸多缺陷，无法在流域开展大规模、高频率的水生态监测。
因此，迫切需要更加便捷且准确可靠的水生态监测技术，对保护水生态环境生物多样性具有重要意义。
环境 DNA （eDNA ）技术是近年来国际生态学领域最重要的革命性技术，是一种基于分子的生物多样性高效监测手段，在生态环境修复和自然资源保护方面具有极大的应用潜力，已逐渐在欧美等发达国家快速推广。
1 eDNA 技术简介及优势eDNA 技术是指通过从环境介质（水、土壤、沉积物等）中提取 DNA ，对基因组的特定 DNA 片段进行PCR （聚合酶链式反应技术）扩增和高通量测序，从而对环境样品中多生物群落进行监测的技术。
该技术基本操作流程主要包括环境样品采集、DNA 提取、DNA 高通量测序、生物信息学和多样性分析等环节，基本操作流程图如图 1 所示。
与传统形态学生物监测方法相比，eDNA 生物监测具有采样简单、效率高、对生物和环境破坏性小、样本检测灵敏度高、成本低等核心优势，已广泛用于河流、湖泊、河口、湿地、海洋等各类生态系统的生物多样性调查中。
环境 DNA 技术及其应用2 eDNA 在生态与保护中的应用研究在基于 eDNA 技术的研究中，最受关注的技术是条形码和宏条形码技术，两者最大的区别在于条形码技术采用物种特异性检测环境样本中单个物种的 DNA 片段，而宏条形码技术是对 eDNA 特定区域进行扩增，并通过高通量测序同时实现对自然生态系统中数以万计的生物群落 DNA 序列的识别。
微卫星DNA微卫星DNA在种下分化及近缘种的鉴定中的应用农业昆虫与害虫防治姚远M071105摘要：微卫星DNA标记作为一种多态性和稳定性高、重复性好、呈共显性的分子遗传标记技术，目前已被广泛应用于昆虫学的研究中。
本文介绍了微卫星DNA标记的基本原理和特点，并综述了近年来该技术在昆虫种群遗传结构及分化、近缘种的鉴定、遗传图谱的构建、基因定位以及系统发生等领域中的应用。
关键词: 微卫星DNA标记；多态性；分化；种群早在1974 年，Skinger在蟹的DNA 中发现了一类短串联重复序列TAGG。
随后人们在人、动物和酵母的基因组中都发现了大量的简单重复序列，因为其比小卫星(10~25bp)短，每个重复单位仅1~6bp，重复数10~20次，是头尾相连的串联重复序列，故称微卫星(microsatellite)，又称为简单序列重复DNA(Simple Sequence Repeat，SSR)。
重复类型有两种单核苷酸如A/T、C/G；四种二核苷酸重复AT/TA、AC/TG、AG/TC、CG/GC 以及三、四核苷酸重复类型等，但研究发现较多的为AC/TG，约占57%，其它类型较少。
而且根据微卫星核心序列排列方式的不同，可分为完全(perfect)，不完全(imperfect)和复合型(compound)微卫星。
20世纪七八十年代以来，伴随着分子生物学的飞速发展，出现了多种多样的DNA分子标记[1]。
目前常用的DNA分子标记技术有限制性片段长度多态性( restriction fragment length polymorphism，RFLP) 、数量可变的串联重复序列(variable number of tandem repeat，VNTR) 、随机扩增多态性DNA ( random amp lified polymorphic DNA，RAPD) 、扩增片段长度多态性( amp lified fragment length polymorphism，AFLP) 、微卫星标记(microsatellite marker) 、简单重复序列间扩增( inter-simple sequence repeat，ISSR)和单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphysm，SNP) 。
微卫星ＤＮＡ标记在畜禽遗传选育中的应用摘要概述了微卫星DNA的结构、功能及形成机制，对其在分子标记方面的特点及在基因定位、基因图谱绘制、分析群体遗传结构、预测杂交优势等畜禽遗传选育方面的应用优势进行了分析。
关键词微卫星；分子标记；多样性；基因分析长期以来，对畜禽的遗传选育研究的准确性和敏感性始终受数量与环境影响，难以提高选育的效率和选育过程的预见性。
直到近年微卫星标记技术的出现，人类对畜禽品种遗传与选育的研究进度才明显加快。
微卫星标记在畜禽品种资源分类及遗传多态性评估和保存研究中，因为数量大、分布广且均匀、多态信息含量高、检测快速方便等优点，被公认为理想分子选择标记而在畜禽遗传选育中得到广泛应用。
1微卫星DNA的结构特点微卫星（microsatellite）一般以1～6个碱基为核心序列，首尾相连组成串联重复序列[1]。
这种序列存在于几乎所有真核生物的基因组中，均匀分布于基因的间隔区和内含子、外显子和调控区（如启动子、增强子）。
在染色体上，除着丝粒及端粒区域外，其他区域也广泛散在分布有微卫星位点（Winter，1992）[2]。
微卫星是一种多态标记，本身却无位点特异性，为了解决不同实验室用不同方式所做图谱的合并、融合问题，Beckmann等（1990）在序列示踪位点（Sequence Tagged Site，STS）的基础上提出以微卫星核心序列为中心，两侧各加上一段侧翼序列，这两段侧翼序列可以将包含于它中间的微卫星特异地定位于基因组的某一部位，构成可通过PCR技术从基因组中检测出来的序列示踪微卫星座位（Sequence Tagged Microsatellite Site，STMS）[3]，微卫星DNA由其核心序列和两侧的侧翼序列构成，侧翼序列使某一微卫星特异定位在染色体的一定位置，核心序列重复数的不同是构成微卫星多态性的基础。
因DNA在复制和修复过程中碱基的滑动、错配或减数分裂过程中姊妹染色单体的不均等交换。
DNA技术检测利什曼原虫的现场应用及其实用性Wilson SM;刘文琪
【期刊名称】《国外医学：寄生虫病分册》
【年(卷),期】1997(24)4
【摘要】本文综述了DNA技术检测利什曼原虫的方法、发展状况及优缺点,并展望了其在现场应用方面的前景。
【总页数】3页(P157-159)
【关键词】利什曼原虫;DNA探针;PCR
【作者】Wilson SM;刘文琪
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R382.22;R531.604
【相关文献】
1.“砌体强度现场检测技术实用性的统一鉴定评估”课题通过技术鉴定 [J],
2.利用PCR-ELISA和现场快速检测技术快速检测特异性旋盘尾丝虫DNA的PCR 产物 [J],
3.DNA技术检测什曼原虫的现场应用及其实用性 [J], Wils.,SM;刘文琪
4.072杜氏利什曼原虫:PCR分析技术和DNA测序显示苏丹分离株的种内多态性[J],
5.利用PCRELISA和现场快速检测技术快速检测特异性旋盘尾丝虫DNA的PCR 产物 [J], 杨松
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微卫星DNA分析技术在分子系统学中的应用随着科技的不断发展，微卫星DNA分析技术在分子系统学中的应用日益成熟和普及。
微卫星是指短重复序列，由不超过10个碱基组成，无编码功能，分布广泛且保守性低，因此非常适合用作物种间、种群间和个体间遗传结构的研究。
本文将就微卫星DNA分析技术在分子系统学中的应用，从分子系统学的基本概念、微卫星DNA分析技术及其优势、分子系统学在分类学、物种鉴定和种群遗传学等领域的应用方面进行介绍。
一、分子系统学的基本概念分子系统学是系统学的一个分支，研究物种进化关系及系统发育史。
随着分子生物学和生物信息学的发展，离子条件等发生了质的飞跃，其中微卫星DNA分析技术成为了分子系统学中重要的研究手段之一。
微卫星DNA指的是一种遗传物质，它的信息量非常大，能够对同一物种甚至不同物种间的遗传差异进行分析，是分子系统学中的重要分析手段。
二、微卫星DNA分析技术及其优势微卫星DNA分析技术是分子生态学/分子系统学的一项基础技术，其基本原理是利用PCR技术扩增目标微卫星位点，根据PCR 产物的大小和组合情况进行鉴定，再利用DNA测序技术将目标微卫星位点的序列进行分析，从而获得微卫星DNA遗传信息。
微卫星DNA分析技术有很多优势，如高度稳定、信息丰富、检测灵敏度高、重复性好、通用性强等，可以应用于物种间、种群间以及个体间的遗传关系研究，是当今分子生态学/分子系统学中受到广泛认可的重要技术。
三、微卫星DNA在分类学中的应用分类学是生物学的一个重要分支，它研究物种间的分类关系及其分类法则，而微卫星DNA技术在物种分类学中广泛应用。
通过微卫星DNA技术，可以对物种内部的遗传差异进行研究，从而了解物种间或种群间的遗传分化程度，进而了解物种的分布、迁移和形成历史，为物种的分类和系统发育等提供了重要的分子生物学依据。
四、微卫星DNA在物种鉴定中的应用物种鉴定是生态学和保护生物学中的一个重要研究内容。
微卫星DNA技术可以应用于物种鉴定研究中，特别是在对难以识别的物种进行鉴定上，如鱼类、昆虫、鸟类等。
AMOS-PCR方法在鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性观察发表时间：2018-01-18T15:01:39.743Z 来源：《健康世界》2017年24期作者：李慧[导读] AMOS-PCR方法在鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性较高，具有临床推广意义。
新疆福海县疾控中心 836400摘要：目的：探讨AMOS-PCR方法在临床鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。
方法：用常规方法以及AMOS-PCR方法对来自某医院临床诊断为布病的30份患者血样进行分型，以常规组方法布鲁氏菌种型分型标准为金标准，计算AMOS-PCR检测方法的灵敏度和特异度。
结果：两组检测方法分别符合理论研究值，符合率为100%。
对于羊种布鲁氏菌，AMOS-PCR检测诊断的灵敏度为100%，牛种布鲁氏菌的AMOS-PCR检测诊断的灵敏度为98%。
结论：AMOS-PCR方法在鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性较高，具有临床推广意义。
关键词：AMOS-PCR方法；灵敏度；特异度；布鲁氏菌种型布鲁氏菌病是有布鲁氏杆菌感染引起的一种人畜共患传染病，主要临床症状表现为波浪形发热，其主要传播途径为经皮肤粘膜，消化道，呼吸道传播。
据世界卫生组织报告，每年全球大约有50万新增布鲁氏菌病，同时，世界卫生组织指出，往往很多处于布鲁氏菌疾病急性期患者常常被误诊，每年的布鲁氏菌病的真实发病情况远远超过实际报告情况。
所以，布鲁氏菌病的及时准确诊断对于此病的防控具有积极意义。
布鲁氏菌病确诊的最佳方式是分离得到病原，所以布鲁氏病菌的准确鉴定和分离是控制治疗该病的重点。
布鲁氏病菌种型的鉴定主要集中在DNA同源性测定，DNA限制性内切酶图谱分析，血清学检测，PCR扩增等方法，本研究将探讨AMOS-PCR方法在临床鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。
1 资料与方法1.1 一般资料本研究采用的样品来自某医院2016年1月-2017年10月临床诊断的布鲁氏疾病患者血样30份，患者平均年龄为35.23±5.32岁，男性和女性患者各15例。
1.LR重组反应在LR克隆酶作用下,亲本质粒pEGFP-PP和pTPO-PP发生重组反应,形成微环DNA和微质粒(图1)。
LR重组反应体系为:亲本质粒200ng、10×TE缓冲溶液1μl、LR克隆酶2μl、加ddH2O至10μl。
反应条件:25℃,4h。
1.
2.4转染HeLa细胞将HeLa细胞消化传代至12孔板,于细胞汇合度为80%~90%时进行转染。
参照转染试剂GenJetPlus说明书进行。
主要步骤如下:移除培养液,以PBS冲洗细胞2遍,加入600μl无血清DMEM培养液。
然后配制转染复合物:在1.5mlEP管内加入DNA混合物,以无血清DMEM补足50μl,混匀。
实验组DNA 混合物为未纯化的LR重组体系10μl和4倍于微环DNA物质的量的pPGKPhiC31obpA质粒。
对照组DNA混合物为与微环DNA等物质的量的对照质粒和5倍于对照质粒物质的量的pPGKPhiC31obpA质粒。
因实验组LR重组产物中含有与微环DNA等物质的量的表达ΦC31整合酶的微质粒,故上述实验组及对照组DNA混合物中微环DNA及对照质粒的物质的量与ΦC31整合酶质粒物质的量比值均为1:5。
在另一1.5mlEP管中按照DNA(μg):转染试剂(μl)为1:3的比例加入GenJetPlus转染试剂,以无血清DMEM补足50μl,混匀。
将上述转染试剂稀释液加入DNA混合物中,轻轻吹打混匀,室温静置20min后,将100μl转染复合物逐滴加入12孔板中,轻轻摇匀。
另设不转染质粒的空白对照组。
转染12h后,换新鲜的含血清DMEM培养液继续培养。
2.LR重组效率测定以EcoRI酶切pEGFP-PP的LR重组产物来鉴定重组反应的发生:若发生重组,则微环DNA(pEGFP-MC)和微质粒分别被线性化,得到约2.0和5.3kb两条带;若未发生重组,则亲本质粒被切成约1.2和6.1kb两条带。
以PvuⅡ酶切验证pTPO-PP的LR重组:若发生重组,则能切出约2.7kb(pTPO-MC)和 5.3kb(微质粒)两条带;若未发生重组,则能切出约1.9和6.1kb两条带。
可通过观察电泳图中各条带亮度粗略判断LR重组效率。
此外,应用荧光定量PCR方法检测各质粒的拷贝数可较为精确地计算LR重组效率。
在亲本质粒λattR 两端设计引物MC-F和λattR-R(序列见表1)扩增该质粒的特有片段,检测亲本质粒的拷贝数;同时,设计引物MP-F和MP-R(序列见表1)扩增LR重组反应前后拷贝数不变的片段,作为定量PCR内参。
以ddH2O替代LR重组反应体系中的LR克隆酶作为LR重组反应前样品。
将两组亲本质粒pEGFP-PP和pTPO-PPLR重组反应前后样品分别稀释100倍和1000倍进行荧光定量PCR,通过标准曲线法进行绝对定量,比较LR重组反应前后亲本质粒的拷贝数,获得LR克隆酶的重组效率。
3结果
3.1LR重组效率鉴定结果酶切鉴定电泳结果显示,重组体系中微环DNA和微质粒的条带亮度明显高于亲本质粒(图2A),直观地表明LR重组效率较高。
荧光定量PCR检测结果可见,由两组亲本质粒pEGFP-PP和pTPO-PP的两个稀释梯度得出LR重组效率为82.56%±0.76%(表2)。
GFP阳性细胞克隆中LR重组片段PCR鉴定结果表明,随机挑选的27个GFP 阳性细胞单克隆中有23个为微环DNA整合(图2B、图2C),即LR克隆酶重组效率为85.19%(23/27),与荧光定量PCR结果一致。
3.2转染率的测定结果流式细胞分析结果显示,微环pEGFP-MC的转染率显着高于传统质粒pEGFP-C,为其3.66倍(2
4.80%±10.21%vs.6.77%±1.61%,P=0.039,3次独立实验,图3A)。
3.3整合率的测定结果转染2周后,克隆计数并计算外源基因在细胞基因组中的整合率。
结果显示,微环pEGFP-MC和传统质粒pEGFP-C的整合率分别为0.82%±0.11%和0.52%±0.07%(图3B)。
虽然微环DNA的整合率仅为传统质粒的1.58倍,但两者相比有显着统计学差异(P=0.014,3次独立实验)。
3.4蛋白表达水平的测定结果以流式细胞仪检测经PCR鉴定为微环DNA整合的23个细胞克隆以及对照组pEGFP-C整合的8个细胞克隆的GFP荧光强度,分别为(958.60±328.11)和(137.99±83.46)(图3C),前者为后者的6.95倍,有极显着统计学差异(P<0.001)。
此外,ELISA检测pTPO-MC和pTPO-C在转染后不同时期hTPO的表达水平,结果如图3D所示。
转染2、4.5、7、9.5d时,微环pTPO-MC 组hTPO蛋白表达水平均明显高于传统质粒组,前者为后者的4~12倍,有统计学差异(P<0.05,3次独立实验)。
然而,pTPO-MC转染组和pTPO-C转染组分别在转染后第14.5天和第12天收集的培养液上清中即无法检测到目的蛋白hTPO的表达。
4讨论ΦC31整合酶系统可介导含链霉菌attB位点及外源基因的质粒载体整合于哺乳动物基因组的假attP位点处。
序列特征分析表明,假attP位点与野生型attP位点有一定的序列相似性,且多位于基因间或内含子区域[13]。
因此,外源基因在假attP位点处的整合使得靶细胞基因组被破坏的风险明显低于随机整合,安全性有所提高。
此外,由于该系统介导的目的基因整合后具有较好的表达水平,因而在基因治疗领域得到了广泛的应用[14]。
但上述整合会将质粒载体上的细菌骨架序列也带入基因组,仍然存在安全隐患[2]。
微环DNA是由传统质粒在大肠杆菌内通过位点特异性重组将其抗性标记基因、复制原点等细菌序列删除而得到的一种小环超螺旋分子,具有较高的转基因表达水平和安全性[3]。
经典的微环DNA制备方法是以阿拉伯糖诱导重组酶的表达,重组酶介导其识别位点发生重组,形成含细菌骨架的微质粒和含目的基因表达盒的微环DNA,微环DNA必须与微质粒分离才能得到进一步的应用[3]。
近年来,微环DNA的制备方法得到了多种改进[9,15]。
与传统采用阿拉伯糖诱导方法不同的是,Tasic等[9]成功地利用LR克隆酶在体外反应中获得了微环DNA。
然而,经典的阿拉伯糖诱导方法[16]和采用LR克隆酶制备微环DNA时[9],为将微环DNA与微质粒分离,需要酶切消化微质粒和残留亲本质粒、纯化回收微环DNA等操作,微环DNA的产率很低。
虽然优化的阿拉伯糖诱导法的微环DNA产率有所提高[15],但其需要特定的工程菌株。
为避免上述问题,本文联合应用LR克隆酶和ΦC31整合酶系统,结合两个系统的优势,建立了一种获得位点特异整合型微环DNA的方法:借助LR克隆酶将细菌骨架序列删除后,利用ΦC31整合酶系统实现目的基因的位点特异性整合。
由于在利用ΦC31整合酶系统实现外源基因位点特异整合时,必须将含有attB位点和目的基因的质粒与表达ΦC31整合酶的质粒进行共转染[14],因此本文在构建亲本质粒时在微质粒部分连入了ΦC31整合酶表达盒,使该微质粒在后续的转染实验中可被有效利用,而无需与微环DNA分离。
该亲本质粒经LR重组后获得的微环DNA与表达ΦC31整合酶的微质粒的物质的量之比为1:1。
我们的研究表明,在含attB位点质粒物质的量固定的情况下,共转染表达ΦC31整合酶质粒的物质的量越高,整合效率越高(两者比例在1:1~1:50的范围内,未发表数据)。
因此,为保证实验中目的质粒有较高的整合效率,本文在将LR重组反应产物直接转染HeLa细胞的同时,额外加入4倍于微环DNA的表达ΦC31整合酶的质粒进行共转染,使含attB位点质粒与表达整合酶质粒的物质的量之比达到1:5(与对照组一致)。
实验表明,LR克隆酶可高效介导亲本质粒的LR重组,微环DNA的产率达到80%以上,产物中微环DNA与残留亲本质粒的物质的量之比为(4.38±0.44),是优化的阿拉伯糖诱导方法[15]的近3倍(4.38/1.51,P<0.001)。
且该LR 重组产物无需纯化,可直接转染HeLa细胞系,避免了回收过程中的损失,大大减少了实验操作步骤和时间。
未来可尝试对LR重组反应程序进行优化,如LR克隆酶分批加入、增加LR克隆酶用量以及延长反应时间等,尽可能提高微环DNA的产率,减少残留亲本质粒的含量。
ELISA 及流式细胞分析结果显示,与传统质粒相比,微环DNA转染组的目的蛋白GFP和hTPO均呈现明显的高表达状态,这可能与微环DNA具有较高的转染率以及不含细菌骨架序列有关[17]。
然而,微环pTPO-MC在转染后第14.5天收集的培养液上清中即无法检测到目的蛋白hTPO的表达。
这可能是由于微环DNA不含真核筛选基因,细胞在未加压传代生长过程中,整合外源基因的细胞逐渐被具有生长优势的未整合细胞淹没。
