体积排阻色谱柱对单克隆抗体检测的重现性图谱

重组蛋白表征目录1. 重组蛋白介绍重组蛋白治疗药物的生产 . ........................................................................04 ........................................................................04 从药物发现到药物开发 ............................................................................04 蛋白治疗药物的表征 ................................................................................05 执行关键的QA/QC 程序 . ......................................................................... 05 应对重组蛋白药物表征的挑战 (05)2. 生物过程监控 .........................................................................06 生物过程分析技术总结 ............................................................................08 安捷伦应用文献........................................................................................ 083. 完整蛋白质的鉴定、纯度和杂质分析完整蛋白质的鉴定、纯度和杂质分析技术汇总 . ................................09 ......................................11 安捷伦应用文献........................................................................................ 124. 糖基化分析糖链分析技术汇总 . .............................................................................13 . ................................................................................... 17 安捷伦应用文献........................................................................................ 185. 肽图分析肽图分析技术汇总 . .................................................................................19 . ................................................................................... 22 安捷伦应用文献........................................................................................ 226. 电荷异构体电荷异构体分析技术汇总 . ............................................................................ 23......................................................................... 25 安捷伦应用文献........................................................................................ 257. 聚集聚集体分析技术汇总 . ........................................................................................26 ................................................................................28 安捷伦应用文献........................................................................................ 288. 氧化氧化分析技术汇总 . .........................................................................................29 ....................................................................................31 安捷伦应用文献........................................................................................ 319. 氨基酸分析氨基酸分析技术汇总 .............................................................................32 . ....................................................... ........................ 34 安捷伦应用文献. (34)3重组蛋白治疗药物的生产从药物发现到药物开发4过去，大多数药物都是化学合成的小分子。

第五章色谱原理5.1色谱的原理和分类5.1.1色谱色基本原理色谱技术是一种重要的分离和分析技术，其用于物质的分离始于二十世纪初。

1903年，俄国植物学家Tswett向填充碳酸钙的柱中注入植物色素的石油醚冲洗，发现柱中出现数条相互分离的色带，色谱法的命名就是由此发现开始的。

随后色谱技术得到不断发展。

Martin于1952年因创立气－液色谱分离方法而荣获诺贝尔奖。

气相色谱的出现极大地鼓舞了世界各地的科学工作者，激发了人们对分析色谱技术进行放大，使之用于制备目的和工业生产的研究兴趣。

资料表明，在50和60年代，分析和生产规模的气相色谱分离技术的研究十分活跃。

到了70年代，尤其是在美国制糖工业采用酶法转化技术生产高果葡糖浆以后，液相色谱技术就变成了一个热门的研究领域。

色谱在英文中只有一个名词Chromatography），但在中文中却有色谱和层析的名称。

色谱的主要装置如图所示;图色谱的主要装置图色谱实际是色谱分离精度高，设备简单，操作方便，根据各种原理进行分离的色谱法不仅普遍应用于物质成分的定量分析与检测，而且应用于生物物质的制备分离和纯化，成为生物下游加工过程最重要的纯化技术之一。

5.1．2色谱的分类1)流动相与固定相色谱法根据流动相的相状态分气相色谱法、液相色谱法和超临界流体色谱法，而固定相有固体、液体和以固体为载体的液体薄层。

2)固定相的形状根据固定相或色谱装置形状的不同，液相色谱法又分为纸色谱法（Paper chromatography）、薄层色谱法（Thin－layer chromatography）和柱色谱法（Column chromatography）。

纸色谱法和薄层色谱法多用于分析目的，而柱色谱易于放大，适用于分离大量制备分离，是主要的色谱分离手段。

3)分离操作方式色谱法根据分离操作方式的不同可分为间隙色谱和连续色谱两大类。

间隙色谱技术通过合理选择固定相介质和冲洗剂可以得到广泛应用。

但是，在工业应用中更希望采用连续分离操作，尤其是分离过程必须与其他连续单元操作（如连续生化反应器）同时进行时更是如此。

毛细管电泳技术在单克隆抗体药物分析中的应用陈泓序;屈锋【摘要】单克隆抗体药物在生物制药行业占有重要地位,是生物医药领域发展的主要方向.因此,单克隆抗体药物的质量控制已成为全球生物制药企业及法规机构关注的热点,对单克隆抗体药物精确表征的需求日益增加.毛细管电泳技术具有分离效率高、分析速度快、分离模式多、样品用量少等特点,已成为单克隆抗体药物分析和质量控制的重要手段.该文对毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管区带电泳等模式在单克隆抗体药物的纯度分析、等电点测定、电荷异质性分析和 N-寡糖分析的应用进行综述,以期为国内单克隆抗体研究开发和生产的企事业单位提供技术参考.%Therapeutic monoclonal antibodies play an important role in biopharmaceuticals, and gradually become one of the main directions of the development of biological medicine. The quality control of monoclonal antibodies has also become the focus of global biopharma compa-nies and regulatory agencies. Capillary electrophoresis has become an important tool in the analysis of monoclonal antibodies with multi-modes and high resolution. In this paper,we reviewed the application of capillary gel electrophoresis,capillary isoelectric focusing and capil-lary zone electrophoresis on the analysis of purity,isoelectric point/charge heterogeneity and N-glycan profiling of therapeutic monoclonal antibodies.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2018(036)003【总页数】14页(P195-208)【关键词】毛细管电泳;毛细管凝胶电泳;毛细管区带电泳;毛细管等电聚焦;单克隆抗体药物;纯度;电荷异质性;N-寡糖;综述【作者】陈泓序;屈锋【作者单位】北京理工大学生命学院,北京100081;北京理工大学生命学院,北京100081【正文语种】中文【中图分类】O658随着单克隆抗体技术近40年的发展,其在生物医学研究和生物制药以及临床治疗中的应用发展迅速,已占有重要地位。

药物分析杂志Journal of Pharmaceutical Analysis药物分析杂志　线性关系考察　精密吸取混合对照品储备液、4、6、8、10 mL ，分别置10 mL 量瓶中，用70%甲醇水溶液定容至刻度，即得系列混合对照品溶液。

分别精密吸取上述系列混合对照品溶液10 μL ，按“2.1”项下色谱条件进样分析，测定峰面积。

以峰面积（Y ）葛根素（puerarin ）　2. 连翘酯苷A （forsythiaside A ）　3. 黄芩苷（baicalin 牛蒡苷（arctiin ）混合对照品（mixed reference substances ）　B. 样品（sample ）　C. 缺葛根阴性样品（negative sample of Puerariae Lobatae Radix ）　D. 缺连翘阴性样negative sample of Forsythiae Fructus ）　E. 缺黄芩阴性样品（negative sample of Scutellariae Radix ）　F. 缺炒牛蒡子阴性样品（negative sample ofArctii Fructus ）　小儿解表颗粒HPLC 色谱图　HPLC chromatograms of Xiao ’er Jiebiao granules表2　4个成分的线性回归方程、相关系数（r ）及线性范围Tab. 2　The regression equation ，correlation coefficients and linear ranges of 4 components成分（component ）回归方程（regression equation ）r线性范围（linear range ）/（μg ·mL -1）葛根素（puerarin ）Y =45.19X +7.5460.999 9 4.799~47.99连翘酯苷A forsythiaside A ）Y =16.61X +1.3590.999 93.968~39.68黄芩苷（baicalin ）Y =32.55X +13.430.999 916.76~167.6牛蒡苷（arctiin ）Y =5.843X +0.992 80.999 97.082~70.82药物分析杂志药物分析杂志药物分析杂志药物分析杂志。

体积排阻色谱(sec)柱用的仪器全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的色谱技术，也称为凝胶过滤色谱，它基于分子在流体中的尺寸和形状的差异，从而实现对分子的分离和分析。

而在SEC技术中，柱是至关重要的部分，体积排阻色谱柱是SEC技术中使用的一种特殊类型的柱，下面将详细介绍体积排阻色谱柱用的仪器。

1. 体积排阻色谱柱的特点体积排阻色谱柱是一种工程化的柱，与常规液相色谱柱有所不同。

它具有以下特点：（1）外围设计：体积排阻色谱柱通常采用不锈钢或者玻璃材质制成，外围设计均匀、结构合理，能够有效支持柱内填料，确保填料不会受到外力破坏。

（2）填料选择：体积排阻色谱柱的填料通常是粒径均匀的多孔球形颗粒，具有一定的孔径范围，能够较好地分离分子。

（3）稳定性：体积排阻色谱柱能够在一定的操作条件下保持较好的稳定性，不易受到外界影响而发生变形或损坏。

（4）易于连接：体积排阻色谱柱通常设计成易于连接的结构，可以与其他色谱设备灵活组装，便于操作和维护。

在体积排阻色谱实验中，除了色谱柱外，还需要配备一系列的仪器，以确保实验顺利进行。

主要的仪器包括：（1）色谱系统：用于将样品注入到色谱柱中，并控制流速、温度等操作参数。

色谱系统通常包括进样器、泵、检测器等部件。

（2）检测器：用于监测样品在色谱柱中的运动轨迹并进行信号采集和处理。

常见的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、光散射检测器等。

（3）设备连接：用于连接色谱柱和其他仪器，包括管道、接头、密封件等。

这些连接件需要具有良好的密封性能，以避免样品泄漏。

（4）温控设备：用于控制色谱柱和样品的温度，以确保实验在恒定的温度条件下进行。

在选择和使用体积排阻色谱柱时，需要注意以下几点：（1）填料选择：根据待分离的目标分子的分子量范围，选择合适的填料颗粒大小和孔径范围。

（2）流速控制：流速对于色谱分离效果至关重要，需要根据实验要求合理设置流速。

肝素钠与其类似物杂质的高效分析由于肝素钠在分子量分布和电荷差异上的异质性，对其进行有效分析一直是一个挑战。

而且，这些杂质通常具有与肝素钠相类似的特性，使得在使用分析方法时很难区分肝素钠与其杂质。

为了有效将肝素钠从杂质中（包括生产过程产生的杂质如硫酸皮肤素和非法添加的杂质如多硫酸软骨素）分离出来，美国药典（USP）颁布了一种采用离子交换色谱鉴定肝素钠及其杂质的色谱方法（注：中国药典对肝素钠的检测方法和USP相同）。

然而，目前市面上的离子交换色谱柱很少能够满足USP的分离度标准，因此，迫切需要有一种新型填料来对其进行改善。

赛分科技近日开发了一种离子交换色谱柱——Glycomix™ SAX，可对如肝素钠这样的带多电荷聚糖样品实现高效分离。

图1肝素钠、硫酸皮肤素和多硫酸软骨素在Glycomix™ SAX上的分离色谱图色谱条件Column: Glycomix™ SAX, 4.6 x 250 mmGuard column: Glycomix, 4.6 x 50 mmMobile phase:A: 0.04% NaH2PO4, pH 3.0B: 0.04% NaH2PO4+14% NaClO4, pH 3.0Flow rate: 0.22 mL/minGradient: 20% - 90% B in 60 minutesWavelength: 202 nmColumn temp: 25 ℃Injection volume: 10 mLPressures: 9.5 barSample: 20 mg/mL Heparin sodium1 mg/mL Dermatan sulfate (DS)1mg/mL Oversulfated chondroitin sulfate (OSCS) in H2O在Glycomix™ SAX柱上，肝素钠和硫酸皮肤素的分离度为3.8，肝素钠和多硫酸软骨素之间的分离度为5.8，远远超过USP所要求的1.0和1.5。

用SEC-MALS 测低分子量化合物
使用体积排阻色谱（SEC ）和多角光散射（MALS ）检测器结合，分析了双酚A 的二环氧甘油醚（DGEBA ，摩尔质量为340g/mol ）和4,4’-二羟基二苯甲烷（DHDPM 摩尔质量为200g/mol ）,目的在于检测30mw miniDAWN 检测器的灵敏度和检测下限。

DGEBA 和DHDPM 分别是环氧树脂和酚—甲醛缩合物的低聚体在科学上和实际上是重要的，它们从电子学到自动化的多种工业上得到应用。

图1和2分别表示DGEBA 和DHDPM 的MALS 和DRI 信号。

对两种化合物得到极好的信躁比，这表明在miniDAWN 中30mw GaAs 激光器的灵敏度用于这些极低摩尔质量化合物已足够了。

在低摩尔质量下的可重现性
注入 摩尔质量（g/mol ）
DGEBA DHDPM 1 374+4 212+2 2 370+3 215+2 3 368+3 216+2 各化合物三次注入所得摩尔质量列于上表。

使用Optilab 干涉折光仪在与miniDAWN 相同波长，测定比折光指数增量(dn/dc)。

上述数据证实：30mw 激光器（DAWN EOS 相同）是高度灵敏的，甚至对低于500g/mol 化合物得到极好的可重复性和好的准确度。

图1 尽管分子量比400g/mol 还小，30mW miniDAWN 对DGEBA 的反应信号仍很好。

图2尽管分子量比400g/mol 还小，30mW miniDAWN 对
DHDPM 的反应信号仍很好。

体积排阻色谱(sec)柱用的仪器概述说明以及解释1. 引言1.1 概述体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的分离和测定高聚物、生物大分子以及纳米材料的方法。

它基于溶剂流动时样品在柱填充物中的渗透性，通过这种渗透性差异来实现对不同大小分子的分离。

SEC在生命科学、化工、材料科学等领域具有广泛的应用前景。

本文旨在对体积排阻色谱所使用的仪器进行概述说明，并解释其工作原理和关键组件。

同时，我们将介绍体积排阻色谱柱的结构、选择和优化方法，以及对样品准备、流动相选择和优化、参数设置和调整等方面给出操作注意事项。

1.2 文章结构本文包括引言、体积排阻色谱(SEC)柱介绍、体积排阻色谱仪器装置及关键组件说明、体积排阻色谱分析方法和操作注意事项以及结论部分。

在引言中，我们将对文章内容进行概述说明，并明确文章结构。

接下来，我们将详细介绍SEC柱的原理、结构以及选择和优化方法。

然后，我们将对体积排阻色谱仪器装置中的压力控制系统、流速控制系统和柱温控制系统进行说明。

在接下来的部分，我们将介绍体积排阻色谱分析方法所涉及的样品准备与预处理要点、流动相选择和优化方法以及参数设置和调整技巧。

最后，我们通过结论对整篇文章进行总结。

1.3 目的本文的目标是全面介绍体积排阻色谱所使用的仪器，帮助读者了解仪器的工作原理和关键组件，并提供一些操作须知。

通过阅读本文，读者将对体积排阻色谱有更深入的了解，并能够在实验中正确选择和使用相关设备，从而更好地开展SEC 柱分析工作。

2. 体积排阻色谱(SEC)柱介绍:2.1 SEC柱原理:体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，简称SEC）是一种基于分子尺寸差异的色谱技术。

该技术利用特殊设计的SEC柱实现对溶液中分子的分离和纯化。

其原理是根据样品中溶质分子在柱填料孔隙中的扩散速度而进行分离。

大尺寸分子由于无法进入较小的孔隙而沿柱床快速流过，而小尺寸的分子则能进入较小孔隙并在其中被滞留更长时间，因此产生了不同尺寸分子之间的强迫排阻现象。