下载文档原格式
62原理：当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期(对于荧光素约持续 4纳秒)保持静止，发射光将位于同样的偏振平面。
如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。
如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强(发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关)。
如果分子很大，激发时发生的运动极小，发射光偏振程度较高。
如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化。
如图2.图2 荧光偏振检测原理任何物质都处于不断运动当中，液态环境中的荧光分子也不例外。
因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态例如旋转、翻转、相互结合、排斥、溶液的粘度、温度等这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。
对此进行分析比较，有可能揭开物质活动的内在规律，达到研究目的，“荧光偏振”。
近年来，以这种物理学现象为基础的技术在生命科学研究的多个领域中扮演着越来越重要的角色。
因此，我们可以看到，以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，以及分子与所处环境——“小”至核酸和蛋白结构，“大”至整个细胞——的相互作用。
相对于传统研究方法，荧光偏振技术在溶液中进行，可最大程度的模拟真实生命环境；利用它，可以实时跟踪监测分子间结合/分离的变化，并解决一直以来困扰荧光技术使用者们对于荧光无法定量的烦恼。
最为重要的是，相对于一直被人们使用的放射性同位素研究方法，它更为安全可靠，不会在实验过程中对研究者造成威胁，也不会产生难以处理的具有放射性的废弃物。
此外，荧光偏振所需的样品量少，灵敏度高，重复性好，操作简便。
概述光由微小的波构成，光波可以在任何一个平面上均匀的振动。
当其通过某些平面时，有可能因受到平面的作用将光波的能量分成不均匀的光束，振动平面也就发生了变化，可能在某一个方向的振动强或弱于其他平面，这种光称为偏振光。
62原理：当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期(对于荧光素约持续 4纳秒)保持静止，发射光将位于同样的偏振平面。
如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。
如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强(发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关)。
如果分子很大，激发时发生的运动极小，发射光偏振程度较高。
如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化。
如图2.图2 荧光偏振检测原理任何物质都处于不断运动当中，液态环境中的荧光分子也不例外。
因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态例如旋转、翻转、相互结合、排斥、溶液的粘度、温度等这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。
对此进行分析比较，有可能揭开物质活动的内在规律，达到研究目的，“荧光偏振”。
近年来，以这种物理学现象为基础的技术在生命科学研究的多个领域中扮演着越来越重要的角色。
因此，我们可以看到，以荧光偏振为基础发展的技术可用来研究生命科学中分子之间的相互作用，以及分子与所处环境——“小”至核酸和蛋白结构，“大”至整个细胞——的相互作用。
相对于传统研究方法，荧光偏振技术在溶液中进行，可最大程度的模拟真实生命环境；利用它，可以实时跟踪监测分子间结合/分离的变化，并解决一直以来困扰荧光技术使用者们对于荧光无法定量的烦恼。
最为重要的是，相对于一直被人们使用的放射性同位素研究方法，它更为安全可靠，不会在实验过程中对研究者造成威胁，也不会产生难以处理的具有放射性的废弃物。
此外，荧光偏振所需的样品量少，灵敏度高，重复性好，操作简便。
概述光由微小的波构成，光波可以在任何一个平面上均匀的振动。
当其通过某些平面时，有可能因受到平面的作用将光波的能量分成不均匀的光束，振动平面也就发生了变化，可能在某一个方向的振动强或弱于其他平面，这种光称为偏振光。
偏振荧光光谱原理偏振荧光光谱原理详解引言：偏振荧光光谱是一种重要的技术手段，广泛应用于化学、物理、生物学等多个领域。
通过对荧光信号的偏振特性进行测量和分析，可以揭示物质的结构、动态行为以及与周围环境的相互作用。
本文将为您详细介绍偏振荧光光谱的原理和分析步骤。
第一部分：偏振荧光的基础知识1. 光的偏振性光是一种电磁波，其电场分量在空间中垂直传播方向的方向不同，可分为无偏振光、线偏振光和圆偏振光。
线偏振光具有固定的电场振动方向，而圆偏振光的电场振动方向沿着垂直传播方向旋转。
2. 荧光光谱荧光是一种物质在受到能量激发后，从高能级跃迁到低能级时放出的光。
荧光光谱是荧光的波长分布，通常可由荧光光谱仪进行测量和记录。
第二部分：偏振荧光光谱的原理1. 偏振效应原理偏振荧光光谱的原理基于荧光分子在激发和发射过程中发生的偏振效应。
激发光通常是无偏振光，而发射光的偏振状态与激发光的偏振状态有关。
通过测量和分析荧光分子产生的线偏振光的偏振特性，可以获得物质的结构和动态信息。
2. 偏振荧光的产生机制荧光分子在受到激发后，电子从基态跃迁到激发态，并在激发态停留一段时间。
在这个过程中，荧光分子与周围环境（如溶液、固体等）的相互作用引起偏振效应。
这些相互作用包括取向效应、共振能量传输效应和旋转扭转效应。
3. 偏振荧光的测量与分析为了获得物质的结构和动态信息，我们需要通过测量荧光的偏振特性。
为此，我们可以使用偏振荧光光谱仪进行实验。
该仪器可以通过包括偏振片和分光器在内的光学元件，对荧光信号的偏振度进行测量和分析。
第三部分：偏振荧光光谱的应用1. 蛋白质结构分析偏振荧光光谱可用于研究蛋白质的构象和动态行为。
通过测量和分析荧光蛋白质的偏振特性，可以揭示其分子结构和溶剂化特性。
2. 荧光标记探针偏振荧光光谱可用于研究荧光标记探针和生物分子的相互作用。
通过测量和分析探针的偏振特性变化，可以揭示探针与靶分子之间的结合方式和状况。
3. 材料科学研究偏振荧光光谱在材料科学研究中也有重要应用。
荧光偏振免疫测定原理荧光偏振免疫测定是一种高灵敏度、高选择性的生物分析技术，被广泛应用于医学、生物学和环境监测等领域。
该技术的原理基于免疫反应和荧光偏振现象，通过对待测物体系中特定分子的选择性捕获和荧光信号检测，实现对目标物质的快速、准确测定。
荧光偏振免疫测定的原理可分为三个关键步骤：免疫反应、荧光标记和偏振信号检测。
首先，免疫反应是荧光偏振免疫测定的基础。
它依赖于抗原与抗体之间的高度特异性结合。
抗原是待测物体系中所含有的分析目标，抗体则是针对特定抗原的免疫分子。
在荧光偏振免疫测定中，抗原首先被固定在试验平台上，形成固相。
然后，待测样品中的抗原与试验平台上的抗体进行结合反应。
这种特异性结合反应仅发生在目标物质存在的情况下，因此可以使用免疫反应来筛选目标物质并排除其他干扰物质。
接下来，荧光标记是实现荧光信号检测的关键步骤。
它利用特定的荧光染料或荧光颗粒，将其标记在反应中与目标物质结合的抗体或其他特定分子上。
这些荧光标记物可以发射特定波长的荧光信号，并具有较长的发光寿命。
荧光标记物的选择应考虑到其荧光性能，例如荧光量子产率和发射波长尽可能远离样品中其他自发荧光的波长，以避免干扰信号。
荧光标记物的引入使得待测物体系具有荧光特性，从而可以通过检测荧光信号来实现分析和测定。
最后，偏振信号检测是荧光偏振免疫测定的核心。
它利用了光波振动方向的偏振特性。
在荧光偏振免疫测定中，通过选择适当的偏振器和荧光探测器，可以将荧光信号从样品中提取出来，并测量相对应的荧光偏振参数。
荧光偏振参数是由样品中荧光分子的取向、偏振或了解以及其与固相之间的相互作用所决定的。
这些参数可以提供关于待测物体系中分子间相互作用的信息，因此能够准确测定特定目标物质的含量。
总之，荧光偏振免疫测定通过免疫反应、荧光标记和偏振信号检测等关键步骤，实现对目标物质的高灵敏度、高选择性测定。
这种技术不仅具有广泛的应用前景，而且对于生物医学研究和临床诊断具有重要意义，能够帮助人们更好地理解分子间的相互作用以及其在生物体系中的功能和调控机制。
荧光偏振免疫测定的原理
荧光物质经单一平面的偏振光蓝光(波长485nm)照射后，可吸收光能跃入激发态;在恢复至基态时，释放能量并发出单一平面的偏振荧光(波长525nm)。
偏振荧光的强度与荧光物质受激发时分子转动的速度成反比。
大分子物质旋转慢，发出的偏振荧光强;小分子物质旋转快，其偏振荧光弱。
利用这一现象建立了荧光偏振免疫测定，用于小分子物质特别是药物的测定。
FPIA的试剂为荧光素标记的药物和抗药物的抗体，模式为均相竞争法，标本中的药物与荧光标记的药物与一定量的抗体竞争结合。
反应平衡后，与抗体结合的荧光标记药物的量与标本中药物浓度的量呈反比。
由于抗体的分子量远大于药物的分子量，游离的荧光标记药物与结合抗体的荧光标记药物所产生的偏振荧光强度相差甚远。
因此在F PIA中测定的偏振荧光强度与标本中药物的浓度呈反比。
