血糖含量的测定――邻甲苯胺法(O-toluidine boric,TB法)

葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法)产品编号 产品名称包装 S0201S 葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 200次 S0201M葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法)1000次产品简介：葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) (Glucose Assay Kit with O-toluidine)是一种基于葡萄糖与邻甲苯胺的显色反应，通过比色法超高灵敏度、超宽线性范围检测血清、血浆、尿液、细胞或组织裂解液、饮料等溶液中葡萄糖含量的试剂盒。

本试剂盒灵敏度高、线性范围极宽、使用便捷。

本试剂盒对于在5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)范围的葡萄糖内有良好线性，并且具有操作便捷、显色稳定、无需煮沸、成本低、适合高通量检测等优点。

本试剂盒检测下限可以达到5mg/dl (20µl 样品)，相当于50ng/ml 或278µM ；检测上限可以达到2000mg/dl (5µl 样品)或10,000mg/dl (1µl 样品)，相当于20mg/ml (约111mM)或100mg/ml (约555mM)。

本试剂盒既可以轻松检测正常血样中的葡萄糖浓度，也可以检测高血糖血样品。

市售常见血糖仪的葡萄糖浓度检测范围约为1-30mM ，相当于约20-600mg/dl ，在检测一些过高血糖或过低血糖样品时会存在困难，而本试剂盒提供了5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)极宽的葡萄糖浓度检测范围。

本试剂盒所需样品体积小。

本试剂盒推荐的样品用量为5-20µl ，也可以使用如1-2µl 或更小体积的样品。

本试剂盒特异性好。

与常用的葡萄糖氧化酶-过氧化酶偶联(GOD-POD)法相比，由于邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，且不受其它还原性物质的影响，本试剂盒非常适合血清、尿液等溶液中葡萄糖浓度的检测。

葡萄糖(glucose)，也被称为dextrose 或grape sugar ，被认为是自然界中分布最广且最为重要的一种单糖。

贵州早春鳝鱼血糖含量的2种测定方法比较研究摘要研究了早春黄鳝血糖含量的测定方法,并对2种不同测定方法进行比较。

结果表明:邻甲苯胺(o—TB)法血糖含量为(2.875±0.422)mmoL/L;葡萄糖氧化酶(GOD)法血糖含量为(2.439±0.248) mmoL/L。

统计分析表明,早春时节2种不同方法测定血糖含量均较低;且2种方法测定血糖含量的差异不显著(P>0.05)。

邻甲苯胺(o—TB)法变异较大,均数较葡萄糖氧化酶(GOD)法略偏高;葡萄糖氧化酶(GOD)法变异小,均数相对于前者略偏低。

其中邻甲苯胺(o—TB)法较为理想,而在人及其他普通试验动物中测定血糖含量普遍采用的葡萄糖氧化酶(GOD)法在鳝鱼血糖测定中没有表现出较好的统计结果。

关键词鳝鱼;早春;血糖;测定方法;贵州省为了测定贵州野生鳝鱼越冬至春季开食前血糖含量,并比较2种血糖测定方法在鳝鱼血糖测定中是否存在差异,笔者于谷雨前对当地野生鳝鱼采用邻甲苯胺(o—TB)法和葡萄糖氧化酶(GOD)法测定其血糖含量。

以期为在贵州地区开展鳝鱼养殖提供鳝鱼越冬至春季开食前生长情况及生化指标检测方法提供参考。

1材料与方法1.1试验材料试验用鳝鱼于4月下旬购自黔北市场。

选择规格体长为20~40 cm、年龄为l~2年、基本上性成熟的健康的黄鳝作为试验对象。

试验前将选择的黄鳝从泄殖孔后剪断尾部血管取血,血液样品制备按刘金等[1]方法进行。

本次测定采用非抗凝血离心分出的血清。

1.2邻甲苯胺法1.2.1o—TB试剂。

将1.5 g硫脲放于883.2 mL冰醋酸中,待充分溶解后加入76.8 mL邻甲苯胺混合,最后加入饱和硼酸溶液40 mL,并混匀置入棕色瓶内贮存备用。

该试剂于24 h后使用。

1.2.2葡萄糖标准应用液。

用量为5.0 mmoL/L。

1.2.3操作方法。

按表1分别于测定管、标准管和空白管中加入相应试剂,混匀后置沸水浴中加热15 min后取出,立即于冷水中冷却5 min。

邻甲苯胺法测定血糖实验报告
一、实验目的
实验旨在使用邻甲苯胺法测定血糖水平。

二、实验原理
邻甲苯胺法是一种常用的血糖测定方法，它是一种光敏催化方法，可以用来测定和分析人血液中的血糖含量。

在这个过程中，一种名为邻甲苯胺的特殊分子会实现光敏催化，将血液中的血糖原子转化为光，根据转换出的光强度可以确定血液中血糖的含量。

三、实验材料
（1）血液标本；
（2）50mL蒸馏水；
（3）邻甲苯胺；
（4）吸光度测量仪；
（5）20mL分离管。

四、实验步骤
（1）将20mL分离管中放入50mL蒸馏水，加热至100℃；
（2）在分离管内加入4mg邻甲苯胺，搅拌均匀；
（3）将血液标本以1:1的比例加入分离管中，然后搅拌均匀；
（4）将分离管中的混合液放入吸光度测量仪，在660nm波长下进行测定；
（5）根据测量出的光强度可以计算出血液中的血糖浓度。

五、实验结果
根据测量出的光强度，可以计算得出血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L。

六、实验结论
本次实验使用邻甲苯胺法测定血液中的血糖浓度，结果显示血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L，结果合理有效。

一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。

2. 了解血糖含量在人体健康中的重要性。

3. 培养实验操作技能，提高实验数据的准确性。

二、实验原理血糖含量测定是临床医学中常用的检测方法之一，主要采用葡萄糖氧化酶法（GOD-PAP法）进行测定。

该方法基于葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下与色原物质发生反应，产生蓝色化合物，其颜色深浅与血糖含量成正比。

三、实验材料1. 试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、过氧化物酶试剂盒、色原物质、蒸馏水、抗凝剂、标准葡萄糖溶液。

2. 仪器：血糖测定仪、移液器、比色皿、恒温水浴箱、试管等。

四、实验方法1. 标准曲线的绘制（1）取6支试管，分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml标准葡萄糖溶液，用蒸馏水定容至1ml。

（2）向各试管中加入0.5ml试剂A，混匀。

（3）将试管放入恒温水浴箱中，水浴5分钟。

（4）取出试管，加入0.5ml试剂B，混匀。

（5）用移液器取各试管上清液，分别加入比色皿中。

（6）在540nm波长下，用血糖测定仪测定各管吸光度。

（7）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血糖含量的测定（1）取2支试管，分别加入0.5ml待测血液和0.5ml试剂A，混匀。

（2）将试管放入恒温水浴箱中，水浴5分钟。

（3）取出试管，加入0.5ml试剂B，混匀。

（4）用移液器取各试管上清液，分别加入比色皿中。

（5）在540nm波长下，用血糖测定仪测定各管吸光度。

（6）根据标准曲线，计算待测血液的血糖含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制根据实验数据，绘制标准曲线，计算标准曲线的相关系数，得出相关系数R²=0.997，表明标准曲线拟合度良好。

2. 血糖含量的测定根据标准曲线，计算待测血液的血糖含量，结果如下：实验组1：血糖含量为4.5mmol/L实验组2：血糖含量为6.2mmol/L实验组3：血糖含量为8.0mmol/L实验组4：血糖含量为10.0mmol/L实验组5：血糖含量为12.0mmol/L实验组6：血糖含量为14.0mmol/L六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了血糖测定的原理和方法，了解了血糖含量在人体健康中的重要性。

生物化学--实验七邻甲苯胺法测定血糖实验七邻甲苯胺法测定血糖【目的要求】1.掌握邻甲苯胺血糖测定法的基本原理及操作方法。

2.熟悉邻甲苯胺血糖测定法的影响因素及控制方法。

3.了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用。

【实验原理】血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺(Schiff硷)。

血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。

将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在680nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。

邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9,5.6mmol / L (70,100mg %)。

CHOH——CHOH HC——CH 酸中? CHOH CHOH—CHO C C—CHOHOHC 2HOHC O 2 HO 2 己醛糖羟甲基糠醛CH3 CH 3HC———CHHN— 2 C C—CH ,N—HOHC O 2邻甲苯胺醛亚胺(兰色) 【实验准备】一、器材1. 721型分光光度计、沸水浴。

2. 5×15cm试管、刻度吸量管。

二、试剂1.邻甲苯胺试剂称取硫脲(AR)级2.5g,溶于750ml冰醋酸(AR级)中，将此溶液转移入1L容量瓶内，加入刚蒸馏过的邻甲苯胺150ml，2.4, 硼酸溶液100ml及冰醋酸至1000ml刻度，置棕色瓶中至少可用两个月。

2.葡萄糖标准储存液(10 mg / ml) 用0.25,苯甲酸溶液配制。

3.葡萄糖标准应用液(1mg / ml) 取贮存液10ml放入100ml容量瓶中，用0.25,苯甲酸溶液稀释至100ml。

【实验操作】1.采得待测血样(抗凝)后立即离心以分离血浆(3,000转离心15分钟)。

2.取干燥试管3支，分别标出号码，按下表添加试剂。

邻甲苯胺法测血糖操作表管别测定管标准管空白管试剂(ml)血清(浆) 0.20ml ?? ??葡萄糖标准液 ?? 0.20ml ??蒸馏水 ?? ?? 0.20ml邻甲苯胺试剂 6.0ml 6.0ml 6.0ml 3.混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却。

临床检验血糖适用方法及注意事项摘要】比较临床血糖浓度检测技术原理、优劣及注意事项，为临床生化血糖测定实验教学和临床检测血糖提供适用资料。

【关键词】糖尿病血糖生化检测无创检测随着糖尿病研究进展加快，临床血糖检测技术也正在走向方便、精确、无创、快捷，满足医生和患者的心理需求及临床诊断需求。

1 传统生化检测分析法生化检测分析法要抽取静脉血液，或刺破病人手指提取血样，进行生化分析，属于有创检测。

采集血液标本时注意：采血后应立即分离血浆或血清，置2～8℃冰箱保存，因全血标本室温下葡萄糖会分解代谢。

可以采用含氟化物或碘乙酸盐的抗凝管，或者用草酸钾-氟化钠作抗凝剂，其对邻甲苯胺法测血糖有明显的增色作用。

1.1邻甲苯胺法血糖检测传统方法常用邻甲苯胺法，操作简单，试剂成本低，目前在教学实验或规模较小的基层医院用于测定血糖。

其原理是葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色醛亚胺。

将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，680nm波长测定血糖浓度。

影响显色反应因素：一是水含量。

标准管和测定管含水量一定一致；二是温度。

要准确控制煮沸时间和温度。

邻甲苯胺试剂有致癌效应，浓酸及高温下有刺激性及腐蚀性，因此大医院和医学院校近年来已逐步淘汰。

1.2葡萄糖氧化酶（GOD）法葡萄糖氧化酶是目前临床应用检测血糖最普遍的一种方法，其特异性、准确度和精密度都比较高，操作简便。

葡萄糖氧化酶能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶作用下分解为水和氧，同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，其颜色深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，505nm波长处测定血糖浓度。

注意事项：葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，但葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应，采用终点法，保温15分钟达到完全自发变旋过程。

新配制的葡萄糖溶液放置2小时以上（最好过夜），待变旋后方可应用。

邻甲苯胺法测血糖的方法改进
Б.М.Винер;В.Л.Кисель;宿武林
【期刊名称】《人参研究》
【年(卷),期】1994(000)003
【摘要】邻甲苯胺法的改进必须与研究小鼠血糖水平密切相关,以及当筛选新的降血糖药物时,在5—6个动态范围内使之扩大实验的分析方法。

在反应剂中加入三丁醇(异丁醇)使邻甲苯胺同葡萄糖容易相互作用。

从而增强和提高了方法的灵敏度和精确度。

这样就可以采用微量血的分析方法(每次测试10—20微升)建议改进的方法,就其本法的精确度和可靠性,实际上不次于高价的发酵法。

实验结果表明可以采用改进的邻甲苯胺法。

对小的实验动物,在动态下进行葡萄糖水平的分析。

【总页数】3页(P46-48)
【作者】Б.М.Винер;В.Л.Кисель;宿武林
【作者单位】莫斯科科学研究中心;莫斯科科学研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R-331
【相关文献】
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3.葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验 [J], 农嵩
4.对邻甲苯胺测定血糖方法学评价 [J], 王晓滨;刘兴武
5.邻甲苯胺法与酶法检测血糖的比较分析 [J], 谭斯艺;黄霖庆
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血糖测定方法（邻甲苯胺法）一、原理：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸性与加热情况下脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，再与邻甲苯胺缩合成芳香族第一级胺青色的席弗氏碱。

二、试剂：1、邻甲苯胺试剂：取冰醋酸920ml，加入硫脲（Thiourea）1.5g，待其溶解，加邻甲苯胺（o-Toluidine）80ml，充分混合后，取此液960ml加入饱和硼酸溶液40ml，混匀，放置于棕色瓶中。

2、饱和硼酸溶液：称取硼酸6g，以蒸馏水溶解并稀释至100ml，放置一夜，过滤即可应用。

3、葡萄糖贮存标准液（1ml=5mg）：将少量无水葡萄糖，CP置于硫酸干燥器内一夜。

精确称取此葡萄糖500mg，以饱和苯甲酸溶液溶解并转移入100ml 容量瓶内，以饱和苯甲酸溶液加至刻度。

此液可长期保存。

4、葡萄糖应用标准液（1ml=0.05mg）：取葡萄糖贮存标准液1ml置于100ml 容量瓶内，加入饱和苯甲酸溶液至刻度。

5、饱和苯甲酸溶液：称取苯甲酸（Benzoicacid）2.5g，于800ml蒸馏水中，加热溶解，冷却后加蒸馏水至1000ml。

三、操作：放沸水煮沸8min，冷水冷却，用640nm或红色滤光板光电比色，用蒸馏水作空白，记录各读数。

计算：（测定-空白）/（标准-空白）*0.1*100/0.1=葡萄糖毫克%血清白蛋白测定（酚试剂法）一、原理：用硫酸钠将血清中球蛋白沉淀，所分离的白蛋白加酚试剂而呈蓝色，与含酪氨酸的标准管比色，求得白蛋白量。

血清总蛋白减去白蛋白即为球蛋白量。

白蛋白与球蛋白分离：球蛋白与白蛋白不同，具有易溶于稀盐溶液而不溶于浓盐溶液的特点。

故以23%硫酸钠或21%亚硫酸钠溶液沉淀球蛋白。

再利用乙醚将白蛋白与球蛋白分离。

二、试剂：1、酪氨酸标准液（1ml=0.2mg）：精确称取酪氨酸（Tyrosine）0.2g，置于1000ml容量瓶中，用0.1当量盐酸溶液稀释至刻度。

2、0.1当量盐酸溶液：取浓度为36.5%，浓度为11.9M的市售浓HCl加水配制成1L:取XL的上述浓盐酸,因为盐酸是1-1价的离子组成的酸,当量浓度等于MOL浓度,据配制前后溶质的MOL数相等,则有如下计算:(X*11.9)/0.1=1,X=0.0084L.将浓盐酸加入到1000ML的容量瓶中,再加水到1L 刻度为止即得0.1个当量的盐酸.3、23%硫酸钠溶液：称取无水硫酸钠230g，加蒸馏水至1000ml。

实验十血糖的测定实验十血糖的测定实验十血糖的测定实验十血糖的测量血液中的葡萄糖称血糖。

正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol／l～6．1mmol／l 之间。

血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。

其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。

因此，血糖的测量就是临床生化检验实验室的常规检测项目。

血糖测量按其发展过程及反应原理的相同，大致分后三类：水解还原法，变小合法（主要存有西南边甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。

下边了解两种方法供选择。

一、葡萄糖氧化酶法1.介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能够展开血糖测量的操作方式。

2.掌控血糖测量的临床意义。

【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，god)能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。

后者在过氧化物酶(peroxidase，pod)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即trinder反应。

其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。

反应式如下：葡萄糖+o2+2h2o2h2o22h2o2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物试管、液体、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1.0.1mol/l磷酸盐缓冲液（ph7.0）称取浓硫酸磷酸氢二钠8.67g及浓硫酸磷酸二氢钾5.3g溶800ml蒸馏水中，用1mol/l氢氧化钠（或1mol/l盐酸）调节ph至7.0，然后用蒸馏水吸收至1l。

2.酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/lnaoh调ph至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。

复置冰箱留存，4℃可以平衡3个月。

对邻甲苯胺测定血糖方法学评价
王晓滨;刘兴武
【期刊名称】《哈尔滨医药》
【年(卷),期】1993(013)003
【摘要】血糖测定,目前国内应用的方法主要有2种:一是应用酶法:有全酶法(已糖激酶法)和半酶法(氧化酶法),常用的是葡葡糖氧化酶法,此法测糖确实、干扰少、无害,可上机使用,但目前应用尚不普遍。

二是利用葡葡糖在加热的有机酸中能与某些芳香胺类,如苯胺、联苯胺、氨基联苯胺、邻甲苯胺等生成有色衍生物。

其优点是不用血滤液,特异性强,干扰少,简便快速。

【总页数】2页(P65-66)
【作者】王晓滨;刘兴武
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
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糖类测定操作规程
体液葡萄糖测定
1．葡萄糖氧化酶（GOD）法，波长505nm。

2．已糖激酶（HK）法，波长340nm。

3．邻甲苯胺（O—TB）法，波长630nm。

4．葡萄糖脱氢酶（GDH）法，波长340nm。

【试剂】
市售优质试剂。

【操作】
1．按试剂盒中的说明书手工操作，比色测定，如GOD 法，O~TB法；
2．按试剂及仪器的使用说明书设置程序，输入参数，用自动或半自动生化分析仪测定；
3．手工测定推荐GOD法，HK法宜用自动生化分析仪测定，该法为公认的参考方法。

【标本】
1．血清（一般空腹血为宜）或草酸钾—氟化钠抗凝血
浆，若暂不能测定，应即时分离出血清密封4~8℃保存；
2．脑脊液：宜用GOD、HK、O~TB法测定，暂不能测定应4~8℃保存；
3．尿液：收集24h尿，防腐，记录总量，以O—TB法及GOD氧电极法测定为宜。

葡萄糖耐量试验（OGTT）
【方法】
1．空腹抽血、留尿，送检空腹血糖及尿糖；
2．称取葡萄糖75克溶於200~300ml开水中，令受试者一次服下，记下开始服糖的时间；
3．服糖后每隔0.5h、 1h、2h、3h，各抽血留尿一次，送检血、尿糖；
4．将各次所测血糖和尿糖定性结果以数字或曲线报告。

受试者受试前三天可正常进食，但应停用胰岛素或其它降糖药；服糖后每次抽血应准时，时间误差应控制在±3分钟以内。