实验十血糖得测定血液中得葡萄糖称血糖。
正常人血糖浓度较恒定,维持在3.9mmol／L～6.1mmol／L之间。
血糖浓度得相对恒定就是机体进行正常生理活动得前提条件之一,有着双重实际意义:其一,维持稳定得能源供给,满足机体在各种生理状态下对能量得需求。
其二,保证机体不因进食致血糖浓度过高,导致糖得丢失。
因此,血糖得测定就是临床生化检验实验室得常规检测项目。
血糖测定按其发展过程及反应原理得不同,大致分三类:氧化还原法 ,缩合法(主要有邻甲苯胺法),酶法(主要有己糖激酶法与葡萄糖氧化酶法)。
下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法【目得】1、了解葡萄糖氧化酶法测定血糖得原理,能进行血糖测定得操作。
2、掌握血糖测定得临床意义。
【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase,GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸与过氧化氢。
后者在过氧化物酶 (peroxidase,POD)作用下,分解为水与氧得同时将无色得4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色得醌类化合物,即 Trinder 反应。
其颜色得深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比,在505nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血糖得浓度。
反应式如下:【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1、 0、1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7、0)称取无水磷酸氢二钠8、67g及无水磷酸二氢钾5、3g溶于800ml蒸馏水中,用1mol/L 氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调节pH至7、0,然后用蒸馏水稀释至1L。
2、酶试剂称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L NaOH调pH至7、0,加磷酸缓冲液至100ml。
置冰箱保存,4℃可稳定3个月。
3、酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中(酚在空气中易氧化成红色,可先配成500g/L得溶液,贮存于棕色瓶中,用时稀释),用棕色瓶贮存。
