利福霉素的发酵提炼合成

一种利福霉素钠的生产工艺-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述利福霉素钠是一种重要的抗生素药物，广泛应用于临床治疗中。

本文旨在介绍利福霉素钠的生产工艺，详细探讨关键工艺要点，以期为相关领域的研究和生产提供参考。

利福霉素钠是一种通过发酵生产的药物，其生产工艺涉及多个关键步骤和环节。

本文将从以下几个方面进行分析和介绍：原料的选择与处理、发酵过程的控制、药物的提取与纯化、最终的制剂制备等。

首先，在原料的选择与处理方面，生产过程中所使用的原料需要经过严格的筛选和处理。

其中，发酵菌株的选择至关重要，只有选用了优良菌株，才能确保产生高效的利福霉素钠。

此外，发酵培养基的组成和配比也需要精细调控，以提供菌株生长所需的养分和环境。

其次，发酵过程的控制是生产工艺中的关键步骤之一。

通过恰当地控制发酵温度、pH值、氧气供应以及搅拌速度等参数，可以有效提高利福霉素钠的产量和质量。

此外，对于发酵过程中的副产物或杂质的控制也需要进行相应的研究和优化。

再次，在药物的提取与纯化方面，常用的方法包括溶剂萃取、离子交换、凝胶过滤等。

这些方法需要综合考虑药物产率、纯度以及反应过程的可操作性等因素，在实践中进行合理选择。

最后，经过前期的工艺研究和实验验证，利福霉素钠的制剂制备阶段是将药物转化为可供临床使用的最终制品。

这其中，药物的配方设计、制剂工艺的优化以及生产工艺的规模化等都是需要充分考虑的。

综上所述，本文将对利福霉素钠的生产工艺进行详细阐述，重点介绍各个环节的关键要点与技术措施。

通过对这些关键问题的深入研究，有望进一步优化利福霉素钠的生产工艺，提高药物产量和质量，为临床治疗提供更好的药物资源。

文章结构部分的内容可以写成以下的形式：1.2 文章结构本文共分为引言、正文和结论三个部分。

每个部分的内容安排如下：引言部分包括概述、文章结构和目的。

在概述中，将对利福霉素钠的生产工艺进行简要介绍，提出该工艺的研究意义和应用前景。

文章结构部分即本节，将详细说明本文的组织结构和各个部分的内容安排。

提炼车间学习1、岗位主要内容或任务1）、生产管理：负责编写相关车间生产管理文件和审核生产操作和设备的操作、清洁的操作文件；监督检查车间员工对各自岗位的工作职责、操作规程的执行情况，以及当日岗位工作生产任务完成情况；负责初步审核已完成的批生产记录及批包装记录。

2）、生产培训：负责对各生产岗位员工的法规、管理文件及实际操作的培训工作。

3）、生产技术：会同有关部门进行相关生产设备的验证、生产工艺验证工作；4）、组织生产：按生产部下达的生产指令组织生产，按时完成生产任务并对产品质量负责。

5）、生产安全：负责生产现场的管理工作，按程序处理生产中的各种事故和偏差；及时发现事故、隐患，杜绝各类生产安全、质量事故的发生。

2、生产工艺利福霉素钠属安莎类抗生素，是半合成的利福霉素中的广谱抗生素，也是国内惟一供注射用的利福霉素类药物，对金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌有较强的杀菌作用。

是目前临床九大抗结核药物的首选药物。

由于利福霉素钠结构复杂、不稳定、容易产生降解杂质，主要杂质为利福霉素S 与利福霉素B，其含量测定法目前各国一般采用微生物检定法，但微生物检定法专属性较差，且操纵繁杂、费时。

利福霉素钠的HPLC含量测定方法未见相关文献报道。

作者建立了一种高效液相色谱法测定利福霉素钠的含量。

该方法简便、快速、精密、准确，并能同时测定其有关物质。

该HPLC方法测定有关物质时较《英国药典》方法简便，专属性强，能分离出更多的杂质，结果满意。

该方法亦可用于利福霉素钠制剂的测定。

1)、生产工艺生产涉及一种原料药物的生产工艺，特别是一种新的利福霉素钠的生产工艺。

利福霉素钠为利福霉素半合成品，目前的生产工艺落后，利福霉素钠收取率低。

本发明为了克服目前的生产工艺利福霉素钠收取率低和生产工艺过程不稳定问题，而提供一种新的生产工艺。

本发明是这样实现的，路线以利福霉素S为原料，经维生素C还原成利福霉素SV,再与碳酸氢钠成盐，制得利福霉素钠。

其工艺还原－取精－干燥－包装，以及废液、废渣处理工艺过程都进行了革新。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510682914.5(22)申请日 2015.10.21C07D 498/08(2006.01)(71)申请人沈阳抗生素厂地址110122 辽宁省沈阳市沈北新区虎石台镇建设北三路(72)发明人赵德明 李治发 张岩 李卓陈建华 张艳影 胡亚辉(74)专利代理机构沈阳科威专利代理有限责任公司 21101代理人刁佩德(54)发明名称利福霉素S 的制备方法(57)摘要一种利福霉素S 的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以利福霉素S-Na 为起始物，乙醇和浓硫酸为溶剂，在酸性条件下搅拌1.5~2h，点板，直至无利福霉素S-Na 斑点；2）将步骤1）所得的混合物降至5℃，停止搅拌，静置2h 以上，然后离心得到固体混合物以及母液，将利福霉素S 粗品打松，酸洗、水洗后得到利福霉素S 粗品；3）将步骤2）所得的利福霉素S 粗品精制，即得利福霉素S 精品；4）将步骤2）所得母液蒸馏回收乙醇用于步骤1）。

满足了生产工艺简单、低耗、可回收、三废少的要求。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 105237548 A 2016.01.13C N 105237548A1.一种利福霉素S的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以利福霉素S-Na为起始物，60~70vt%乙醇和95.0~98.0wt%浓硫酸为溶剂，在酸性条件下，40~50℃搅拌1.5~2h，搅拌过程中点板，直至无利福霉素S-Na斑点，反应结束；各物料质量比为利福霉素S-Na：乙醇：纯化水：硫酸=100:145~226: 120:8~9；2）将步骤1）所得的混合物按5℃/h降温速率，降至30℃，恒温20min，降至室温，然后按3℃/h降温速率，降至5℃，停止搅拌，静置2h以上，然后离心得到固体混合物以及母液，将利福霉素S粗品打松，酸洗、水洗后得到利福霉素S粗品；酸洗：用硫酸调节利福霉素S-Na体积50vt%乙醇的pH值至5.0，将利福霉素S粗品投入50vt%乙醇中浸泡、洗涤后，将料液放入离心机中甩干；水洗：用硫酸调节20%利福霉素S-Na体积纯化水的pH值至5.0，当离心机中的物料甩干后，将pH5.0的纯化水淋入离心机中甩滤直到甩干；3）将步骤2）所得的利福霉素S粗品精制，即得利福霉素S精品；精制：将利福霉素S粗品加入到粗品体积3~4倍的乙醇中，升温至40~50℃，搅拌溶解，缓慢降温至5℃结晶，静置后，将料液放入离心机中离心，甩干，即得利福霉素S精品；4）将步骤2）所得母液蒸馏回收乙醇，调整浓度至60~70vt%后用于步骤1）。

〔19〕中华人民共和国专利局〔12〕发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1045993A〔43〕公开日1990年10月10日[21]申请号89101893.X [22]申请日89.3.28[71]申请人五洲药厂地址上海市淮海西路176号[72]发明人史宝珠 曾长春 朱宝杰 [74]专利代理机构上海化工专利事务所代理人黄静 应云平[51]Int.CI 5C12P 17/18权利要求书 2 页 说明书 8 页 附图 1 页[54]发明名称一种利福霉素S钠盐的制备方法[57]摘要本发明公开了一种半合成利福霉素类抗菌药物的起始原料利福霉索S钠盐的制备方法，其中包括菌种培养、发酵、发酵液过滤、乙酸丁酯提取、氧化、洗涤等步骤，洗后液在温度为10—50℃、pH控制在8.5—10.5的条件下用氢氧化钠进行成盐反应，制得利福霉素S钠盐。

克服了现有技术中因经过浓缩步骤而引起的利福霉素S钠盐的纯度偏低、收率较差等缺陷，提高了产品的质量和产量。

89101893.X权 利 要 求 书第1/2页 1、一种具有如下结构式利福霉素S钠盐的制备方法，其中包括菌种培养、发酵、发酵液过滤，其特征在于： a、含有利福霉素SV的发酵滤液用乙酸丁酯溶剂提取，料液的PH控制在2.5-3.5，得到含有利福霉素S V的乙酸丁酯提取液；b、分离出的乙酸丁酯提取液用Fecl3溶液进行氧化，Fecl3的加入量与提取液中含利福霉素SV纯量之比为0.8∶1-1∶1(重量)，将利福霉素S V氧化成利福霉素S，得到含有利福霉素S的乙酸丁酯氧化液；c、分去水层，氧化液用PH为2.5的酸水第一次洗涤，然后用1%(重量)NaHCO3水溶液第二、第三次洗涤，再用PH为2.5的酸水第四次洗涤，得到含有利福霉素S的乙酸丁酯洗后液；d、不断搅拌下，在上述含有利福霉素S的乙酸丁酯洗后液中，加入2-4%(重量)NaHCO3水溶液，加入量为洗后液体积的20-60%，然后，在压力为常压，温度为10-50℃，不断搅拌下，加入NaOH溶液进行成盐反应，控制料液的PH值为8.5-10.5，89101893.X权 利 要 求 书 第2/2页继续搅拌3-4小时，得到利福霉素S钠盐结晶。

利福霉素S及SV萃取条件的优化利福霉素SV与利福霉素S是合成抗结核类药物的重要中间体,其提取多采用传统的溶媒萃取工艺。

工业上制备利福霉素及其钠盐通常经过发酵、过滤、氧化、萃取、破乳、洗涤、结晶、干燥等一系列步骤。

用有机溶剂萃取发酵液时会发生明显的乳化现象,静置分去酯层后还需要加入破乳剂对萃余液进行分离。

这会导致破乳静置的时间过长,乳浊液中夹带大量抗生素,使得产物收率下降、纯度降低。

此外,萃取时pH值在2-3之间,利福霉素在强酸性条件下不稳定,在长时间的静置过程中易分解,致使最终的收率降低。

为解决这一问题,本文提高萃取pH值,并采用多级快速萃取的提取工艺。

采用离心萃取机代替生产中的搪玻璃搅拌釜,在无氯环境中进行利福霉素萃取过程的研究。

考察了单级萃取下萃取pH、萃取温度、水酯相比和初始溶液浓度对利福霉素S及SV的分配系数和萃取收率的影响。

同时,采用多级逆流萃取利福霉素SV,利用单级分配平衡时水相浓度与分配系数的关系,结合多级逆流操作的物料守恒方程,模拟计算出多级逆流萃取结果。

研究表明:(1)利福霉素S与SV的分配系数在不同条件下的变化趋势相同,与萃取温度和水酯相比成正相关,与萃取pH和初始溶液浓度呈负相关。

(2)利福霉素S和SV的萃取收率均随着pH的增大而减小,在pH=4.2时萃取率分别为71.69%和83.25%。

温度与萃取率成正比,在45 ℃时两者萃取率最高,分别为61.21%和67.37%。

改变水酯相比对萃取收率的影响不大,两者的萃取率基本保持稳定。

利福霉素S和SV的萃取收率在初始溶液浓度为2004.09 μ/mL时达到最大,分别为49.36%、55.62%。

(3)萃取的级数越多,利福霉素SV的收率越高。

在pH=4.2、T=45℃、VA/VO=1时,二级和三级萃取实验的结果分别为98.50%、99.80%,对应的实验值是96.82%、98.07%,对比单级的实验结果有较大的提高。

本文通过离心萃取机对传统的溶媒萃取工艺条件进行优化,在溶液pH值较高的情况下,经过多级逆流萃取,利福霉素也可获得较高的萃取收率。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510669929.8(22)申请日 2015.10.13C12P 17/18(2006.01)(71)申请人湖北工业大学地址430068 湖北省武汉市武昌南湖李家墩1村特1号(72)发明人王志 陈雄 李冬生(74)专利代理机构武汉帅丞知识产权代理有限公司 42220代理人朱必武(54)发明名称一种提高利福霉素SV 发酵合成效率的方法(57)摘要本发明公开了一种提高利福霉素SV 发酵合成效率的方法。

将终浓度为5-20mg/L 的磷霉素钠和3-10g/L 的谷氨酸钠无菌补入发酵培养地中海拟无枝酸菌周期在40-60h 的三级发酵培养物内，培养结束时利福霉素SV 效价平均提高13.3%。

该新方法具有操作简单、利福霉素SV 增产效果稳定等特点。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 105331654 A 2016.02.17C N 105331654A1. 一种提高利福霉素SV发酵合成效率的方法，其特征在于：地中海拟无枝酸菌进行三级发酵培养，当三级发酵培养周期在40-60 h时无菌补入终浓度为5-20 mg/L的磷霉素钠、终浓度为3-10 g/L的谷氨酸钠。

一种提高利福霉素SV发酵合成效率的方法技术领域[0001] 本发明涉及一种提高利福霉素SV发酵合成效率的方法。

本发明属于生物制药发酵工程领域，特别是涉及一种通过调控微生物碳氮代谢流向、增强利福霉素SV前体(3-氨基-5-羟基苯甲酸)合成，促进前体均匀性供给，提高利福霉素SV合成效率的方法。

背景技术[0002] 做为结核病治疗的大宗抗生素原料药，提高利福霉素发酵合成效率一直备受生产企业和研究单位关注。

目前，国内外对提高利福霉素发酵效价的研究较多，包括：生产菌种的分子生物学信息特征、发酵培养基优化等方面，如对比文献1：在10L罐水平添加豆油和丙氨酸可提高利福霉素SV效价12.3％(食品与发酵工业，商纯良，2011，37(5)：56-60)；对比文献2：在50吨大罐水平添加豆油和乙二酸可使利福霉素SV发酵十亿提高5.4％(发明专利ZL201210176175.9)；对比文献3：添加丙氨酸、豆油和磷霉素钠/磷霉素氨丁三醇可使利福霉素SV效价平均提高17.0％(发明专利申请号201210176177.8)。