菌种保存方法：
一.菌种保藏方法大致可分为以下几种：
1．传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6
℃冰箱内保存。
2．液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖
灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进
入，以减弱代谢作用。
3．载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例
如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4．寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须
在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒
等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5．冷冻保藏法
可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）
等保藏法。常用的有甘油菌保存：取灭过菌的1.5mlEP管，按照60%—80%甘油的加入量，保存零下80度。例：取37°培养
过夜的菌液2-4ml甘油6-8ml，充分混匀后分装于1.5mlEP管中，置于-80°冰箱即可。
6．冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真
空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，
以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产
生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
二.常用的器材
所要保存的微生物；
肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，
河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；
灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100
菌种保存、传代、使用、销毁管 理规程-操作规程
菌种管理制度
1、 目的 建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管 理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准 确可靠。
2、 适用范围 本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销 毁等。
3、 定义
标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干 燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代 及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作 使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌 种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第 0代。
4、 职责
4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、 规程
5.1菌种的申购
部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流 程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传 代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。 5.2菌种的接收
菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性， 同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号
（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮 存于4〜8 C冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存
5.3.1工作用菌种的保存
工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充 分以后，转移至4〜8C冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其 污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而
参照菌种的传代与保藏记录
编号：JL0506（04）－2015/1
№:
菌种名称 鼠伤寒沙门氏菌 菌种来源 广州微生物研究所 菌种编号 CMCC50115
灭活时间 菌种代数 保藏形式 菌株用途
培养条件 传代日期 数量 保存条件 传代人
储备 工作
营养琼脂斜面
备注：
沙门氏菌参照菌种（标准菌种）确认试验表
编号：JL050605-（01）－2015/1
№:
菌种编号 菌种代数 菌种用途 方法依据 试验地点 试验日期
3 □储备 □工作 微生物实验室 2015.7.3
菌落特征 BS 菌落黑色有金属光泽
HE 菌落蓝绿色有黑色中心
常规
生化试验 TSI 斜面 底层 产气 H2S
K A + +
赖氨酸脱羧酶实验 +
血 清 学 试 验
生化试验 硫化氢 靛基质 PH7.2尿素 氰化钾
+ — — —
甘露醇 山梨醇 ONPG
+ + —
检验结果
备注 +阳性；—阴性
检测人： 校核人： 审核人： 日期：
菌种保存、传代、使用、销毁管 理规程-操作规程
菌种管理制度
1、 目的 建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管 理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准 确可靠。
2、 适用范围 本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销 毁等。
3、 定义
标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干 燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代 及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作 使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌 种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第 0代。
4、 职责
4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、 规程
5.1菌种的申购
部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流 程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传 代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。 5.2菌种的接收
菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性， 同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号
（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮 存于4〜8 C冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存
5.3.1工作用菌种的保存
工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充 分以后，转移至4〜8C冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其 污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而
