pUC质粒优点:
1.具有更小的分子,更高的拷数 2.适于组织化学检测重组体.
[C]、 pGEM-3Z质粒
含一个ampR基因和一个
lacZ’编码基因;
有多克隆位点(MCS);
正选择颜色标记 lacZ’;
Apr
有两个来自噬菌体的强启
动子PT7和PSP6,用于外源基 因的高效表达
lacZ’
PT7
MCS
1、宿主限制现象
病毒或噬菌体在宿主A细胞中生长良好,但在 宿主B细胞中生长很差,原因是它的DNA受 到宿主B的限制,这种现象是宿主控制性限 制 (restriction)与修饰(modification) ,简 称(R/M体系)。
细菌的R/M体系类似于免疫系统,能辨别 自身的DNA与外来的DNA,并能使后者降 解掉。
单链切割 连接
线性DNA (L型)
开环DNA
(oc型)
单链切割 连接
共价闭合环形DNA (SC型)
环形双链的质粒DNA分子具有三种不同构型
(3)质粒的分类
F质粒----可使宿主A的部分基因随着F质粒一起 转移到不存在该质粒的另一宿主B的体内。
R质粒----可编码宿主A的一种或者数种抗生素抗 性基因,并能够将它们带到不存在该质粒的另 一宿主B的体内,使得宿主B也获得同样的抗性。
2、作用----主要用于 (1)正常DNA的合成。 (2)损伤DNA的修复。
3、种类 (1)DNA-连接酶----广泛存在于生物细胞之中,主要取 自于大肠杆菌E.coli。 (2)T4-DNA连接酶----来自于经过T4-噬菌体感染的大 肠杆菌E.coli。 (3 T4-RNA连接酶----催化单链DNA或RNA的5‘磷酸与 另一单链DNA或RNA的3’羟基之间形成共价连接。