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HIV初筛实验室SOP文件[优质文档] HIVSOP科室: 检验科目录第一部分工作制度...................................................................... ...... - 2 -实验室工作制度 ..................................................................... ..... - 2 -HIV标本采集与接收登记制度 ..................................................... - 3 - 艾滋病实验室保密制度................................................................ - 3 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度.................................... - 4 -差错事故处理制度....................................................................... - 5 -报告单签发审核制度 ................................................................... - 6 -设备管理制度...................................................................... ........ - 7 -试剂管理制度...................................................................... ........ - 8 -艾滋病筛查实验室安全防护制度.................................................. - 9 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案 .............................................- 10 - 第二部分标准操作规程....................................................................- 13 -第二章样品采集与处理 .............................................................- 13 - 第二章标准操作程序 ................................................................- 14 -一、北京金豪...................................................................... - 14 -二、上海科华生物...............................................................- 15 -三、英科新创...................................................................... - 16 -第三章结果报告与注意事项 ......................................................- 18 - 第三部分设备SOP文件 ..................................................................-20 -一、多功能自动酶标仪DNM-9602 .............................................- 21 -二、DG3080洗板机 ...................................................................-23 -三、电热恒温水箱...................................................................... - 26 - 第四部分流程图 ..................................................................... .........- 27 -一、HIV抗体筛查流程图 ...........................................................- 27 -二、暴露级别的评估 ..................................................................- 29 - 附件:血清加样表...................................................................... .......- 30 -第一部分工作制度实验室工作制度1. 室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。
目录HIV筛查实验室的设置及人员情况 (3)HIV筛查实验室工作管理程序 (4)HIV筛查实验室工作流程图 (6)HIV筛查实验室规章制度 (7)一、实验室工作制度 (7)二、岗位责任制 (7)三、标本管理制度 (8)四、试剂管理制度 (11)五、污染区工作守则 (12)六、清洁区工作守则 (13)七、环境消毒隔离制度 (13)八、实验台消毒措施 (14)九、废弃物处置和实验室消毒 (15)十、消毒液的配置及使用措施 (16)十一、消防安全制度 (16)十二、生物安全防护制度 (16)十三、职业暴露的防护及处理措施 (17)十四、筛查检验程序 (18)十五、检测结果的判定方法 (25)十六、检测结果报告规程 (25)十七、检测结果的判定方法 (26)十八、检验结果的解释 (27)十九、检测数据的记录与保存 (28)二十、呈阳性反应标本的处理程序 (28)二十一、检测数据季报方案和程序 (29)二十二、感染追踪处理方案 (30)二十三、保密程序制度 (31)二十四、质量管理制度 (32)二十五、室内质控分析管理制 (33)二十六、外部质控血清的制备和保存 (34)二十七、仪器的使用维护 (35)人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） (36)程序HIV-抗体初筛试验标准操作（酶联免疫法） (37)人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） (38)人类免疫缺陷病毒抗体检测（胶体金法） (39)科华酶标仪的标准操作程序（SOP） (40)科华全自动洗板机标准操作规程 (40)加样器的维护保养程序 (41)加样枪校准记录 (41)生物安全柜的标准操作程序（SOP） (42)离心机操作维护规程 (47)室内质量控制的标准操作程序 (48)室间质量评价的标准操作程序（EQA） (55)实验室意外和事故处理 (58)艾滋病的职业暴露后预防 (60)附表1 HIV抗体筛查报告 (61)附表2 HIV抗体复检检测单 (62)附表3 HIV抗体检测数季报表 (65)附表4 艾滋病职业暴露个案登记表 (66)附表5 艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表 (70)HIV筛查实验室的设置及人员情况为了更好发挥艾滋病检测在艾滋病防治工作中的作用，根据《全国艾滋病检测技术规范》对于艾滋病的检测要求，我院检验科设置了独立的HIV筛查实验室。
标准操作程序（SOP）艾滋病筛查实验室宾县人民医院艾滋病实验室标准操作程序（SOP）目录BXYY_AIDS_SOP001 抽血标准操作程序BXYY_AIDS_SOP002 酒精棉球的制备BXYY_AIDS_SOP003 样品接收登记处理程序BXYY_AIDS_SOP004 检测结果报告程序BXYY_AIDS_SOP005 HIV抗体筛查检测程序BXYY_AIDS_SOP006 废弃物处置和实验室消毒程序BXYY_AIDS_SOP007 检测数据的记录与保存程序BXYY_AIDS_SOP008 ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）BXYY_AIDS_SOP009 仪器保养维护校准程序BXYY_AIDS_SOP010 微量可调移液器标准操作程序BXYY_AIDS_SOP011 实验室的消毒和处理程序BXYY_AIDS_SOP012 实验室质量控制程序BXYY_AIDS_SOP013 保密程序BXYY_AIDS_SOP014 实验室意外和事故处理程序BXYY_AIDS_SOP015 实验室安全防护程序BXYY_AIDS_SOP016 ELISA法HIV抗体检测操作程序（上海科华）BXYY_AIDS_SOP017 酶标仪标准操作程序（Anthos 2010）BXYY_AIDS_SOP018 自动洗板机标准操作程序（Anthos Fluido）BXYY_AIDS_SOP019 生物安全柜标准操作程序（Biobase BSC-1500ⅡA2）BXYY_AIDS_SOP020人类免疫缺陷病毒抗体操作程序(胶体金法)说明：1、《艾滋病实验室标准操作程序（SOP）》由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并定期修订。
2、修订应该在实验室主任领导下进行，每年至少修订1次。
3、日常工作中，工作人员有义务随时发现并报告SOP文件中的不足和错误，实验室主任组织调查核实后负责修订。
4、所有实验室各岗位工作人员要在SOP文件上签名，表示已经阅读并掌握了有关内容。
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书一、目的：规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序，确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。
三、临床意义人类免疫缺陷病毒（俗称艾滋病病毒，英文名称是Human Immunodeficiency Virus，缩写为HIV）是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。
HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞），这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞大量死亡，使人体内T4淋巴细胞明显减少，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷，降低或失去对各种致病因素的抵抗能力，临床表现为各种机会性感染与肿瘤[1]。
有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。
最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。
四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。
以HIV 抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
目录HIV筛查实验室的设置及人员情况 (3)HIV筛查实验室工作管理程序 (4)HIV筛查实验室工作流程图 (6)HIV筛查实验室规章制度 (7)一、实验室工作制度 (7)二、岗位责任制 (7)三、标本管理制度 (8)四、试剂管理制度 (11)五、污染区工作守则 (12)六、清洁区工作守则 (13)七、环境消毒隔离制度 (13)八、实验台消毒措施 (14)九、废弃物处置和实验室消毒 (15)十、消毒液的配置及使用措施 (16)十一、消防安全制度 (16)十二、生物安全防护制度 (16)十三、职业暴露的防护及处理措施17十四、筛查检验程序18十五、检测结果的判定方法25十六、检测结果报告规程 (25)十七、检测结果的判定方法 (26)十八、检验结果的解释 (27)十九、检测数据的记录与保存 (28)二十、呈阳性反应标本的处理程序 (28)二十一、检测数据季报方案和程序 (29)二十二、感染追踪处理方案30二十三、保密程序制度31二十四、质量管理制度32二十五、室内质控分析管理制………………………………………………………33二十六、外部质控血清的制备和保存………………………………………………34二十七、仪器的使用维护……………………………………………………………35人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）36程序HIV-抗体初筛实验标准操作（酶联免疫法） (37)人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） (38)人类免疫缺陷病毒抗体检测（胶体金法） (39)科华酶标仪的标准操作程序（SOP）40科华全自动洗板机标准操作规程 (40)加样器的维护保养程序 (41)加样枪校准记录 (41)生物安全柜的标准操作程序（SOP） (42)离心机操作维护规程 (47)室内质量控制的标准操作程序 (48)室间质量评价的标准操作程序（EQA） (55)实验室意外和事故处理 (58)艾滋病的职业暴露后预防60附表1 HIV抗体筛查报告 (61)附表2 HIV抗体复检检测单 (62)附表3 HIV抗体检测数季报表 (65)附表4 艾滋病职业暴露个案登记表 (66)附表5 艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表70HIV筛查实验室的设置及人员情况为了更好发挥艾滋病检测在艾滋病防治工作中的作用，根据《全国艾滋病检测技术规范》对于艾滋病的检测要求，我院检验科设置了独立的HIV筛查实验室。
3.4.2检查并记录冰箱、温箱温度。
3.4.3按照试剂盒要求，严格按HIV快速检测（胶体金法）操作规程进行操作，并做好记录、整个实验过程中每一步操作都要在原始记录表上详细登记。
3.5 结果登记和报告阴性结果出具HIV抗体筛查阴性报告单，阳性结果报告为“HIV抗体待复检”并填写HIV抗体初筛阳性送检单。
3.6 标本留存转送阴性标本收集血清冷冻保存一年，并填写阴性血清保存记录表。
阳性标本收集血清封口包好，连同HIV抗体初筛阳性送检单，冷藏运送到上一级实验室。
80-2型离心机标准操作规程一、目的为保障标本分离间80-2型离心机的安全正常运转，特制作本规程。
二、范围适用80-2型离心机离心操作和日常保养。
三、责任实验室工作人员严格按80-2型离心机操作规程执行。
四、工作原理将装有等量试液的离心容器对称放置转头四周的孔内，启动机器后。
电动机带动转头高速运转所产生的相对离心力（RCF）使试液分离，相对离心力的大小取决于试样所处的位置至轴心的水平距离即旋转半径r和转速n,计算公式如下： RCF=1.118×10¯5n2r×g n--转速（转/分） r--转速半径（厘米）五、技术指标六、操作程序1：操作程序（1）把需要分离的物质定量（不超过5ml为宜）放入离心管；每支离心管所加物质重量基本相等。
（2）把离心管均匀分布插入离心头孔中，合上盖板。
（3）如根据需要选择合适的离心速度，调速开关指到“1”时，离心速度大约是1000转/分，指到“2”时，离心速度大约是2000转/分，余“3”“4”时类推。
（4）根据需要选择定时时间，把定时旋钮刻度线拨到所选定的定时时间位置，例如定时选10分钟，则把旋钮刻度线拨到10处。
（5）接通电源，电源开关拨到“开”一边，电源指示灯亮，电机开始旋转，样品开始离心分离，直到定时时间到，离心机分离结束。
（6）关闭电源，停止转动后打开离心机上盖，取出离心管，至此本次离心操作结束。
HIV初筛实验室管理制度1.目的为加强本实验室艾滋病初筛检测工作的规范化管理，提高检测工作，根据《全国艾滋病检测工作管理办法》（2020年修订版），特制定本实验室的管理制度。
2.范围适用于艾滋病初筛实验室。
3.人员组成本实验室人员均参加过省疾病控制中心HIV初筛检测技术培训，并获得培训证书，实验室负责人为副主任检验师及以上，且有2年以上临床免疫工作经验：认可的授权签字人为主管检验师，且从事申请认可授权签字领域专业技术工作3年以上，符合相关要求。
4.安全等级HIV初筛实验室为二级生物安全实验室。
5. 管理制度5.1 热爱本职工作，遵守医务人员服务守则与工作原则；5.2 坚持不歧视原则，与服务对象建立良好关系，关心他人；5.3 做好合格和规范的预防艾滋病传播的宣传工作；5.4 严格执行《全国艾滋病检测工作管理办法》（2020年修订版），遵照本实验室的相关SOP文件工作；5.5 严格执行实验室生物安全通用要求，工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术；5.6 不得在实验室内喝饮料，抽烟，吃食物和化妆等，不得在实验室会客；5.7 实验室用品（包括工作服）不得用作其他用途，不可将私人用品和无关用品带入实验室；5.8 工作时，要戴手套，穿工作服，操作时手套破损应立即丢弃，洗手并戴上新手套；5.9 不要用戴手套的手触摸暴露皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等；5.10 尽量避免使用尖锐物品和器具，宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物品；5.11 工作认真负责。
严格执行本实验室的质量管理控制程序规则；做好室间质评和室内质控工作；保证检测结果准确无误，杜绝差错事故的发生；5.12 工作结束后，要对工作台面消毒，如用消毒液清洁后要干燥20分钟以上；操作时要有标本，检测试剂外溅时，应及时消毒；平时要保持环境整洁；5.13 工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作服，用消毒洗手液和流动水洗手；5.14 遇到意外事故，应立即处理并报告上级，妥善处理。
HIV抗体初筛实验室SOP文件科室：检验科目录第一部分工作制度 ................................................................................................................... - 2 -实验室工作制度.................................................................................................................. - 2 - HIV标本采集与接收登记制度.......................................................................................... - 3 - 艾滋病实验室保密制度...................................................................................................... - 3 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度...................................................................... - 4 - 差错事故处理制度.............................................................................................................. - 5 - 报告单签发审核制度.......................................................................................................... - 6 - 设备管理制度...................................................................................................................... - 7 - 试剂管理制度...................................................................................................................... - 8 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度...................................................................................... - 9 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案................................................................................ - 10 -第二部分标准操作规程.......................................................................................................... - 13 -第二章样品采集与处理.................................................................................................. - 13 - 第二章标准操作程序...................................................................................................... - 14 -一、北京金豪............................................................................................................ - 14 -二、上海科华生物.................................................................................................... - 15 -三、英科新创............................................................................................................ - 16 -第三章结果报告与注意事项.......................................................................................... - 18 - 第三部分设备SOP文件........................................................................................................ - 20 -一、多功能自动酶标仪DNM-9602 ................................................................................ - 20 -二、DG3080洗板机......................................................................................................... - 22 -三、电热恒温水箱............................................................................................................ - 25 - 第四部分流程图 ..................................................................................................................... - 26 -一、HIV抗体筛查流程图................................................................................................ - 26 -二、暴露级别的评估........................................................................................................ - 27 - 附件：血清加样表 ................................................................................................................... - 28 -第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。
人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统标准操作程序1. 目的：规超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（HIV-I RNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 检测方法和原理
2.1 检测方法：TaqMan探针荧光定量PCR法。
2.2 检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-I RNA。
该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-I RNA；（2）靶RNA的逆转录形成互补DNA（cDNA）；（3）靶（cDNA）的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。
3. 标本要求
3.1 标本类型：血浆（EDTA抗凝）。
3.2 标本的采集与处理
3.2.1 标本采集量：采集患者静脉血6 mL（EDTA抗凝真空采血管）。
3.2.2 标本处理：标本采集后应在2小时送至实验室，实验室收到标本后在1小时处理标本。
3.2.2.1签收：门诊、住院以及CDC标本签收条码，并做好相关登记工作。
3.2.2.2编号：对标本进行唯一编号，容如下：“年月日6位数字+标本号3位数字”，例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为：“180101401”。
3.2.2.3离心：800-1600g,20min离心标本。
3.2.2.4标本保存：血浆在室温（25-30℃）最多存储1天；2-8℃最多存储6天；-20℃—-80℃可存储6周。
将待检血浆以2管每管1200 uL量存储于2.0mL戴螺旋盖的无菌聚丙烯管，在管壁编写如3.2.2.2的编号。
未检标本放置于专用样本盒中，冻存于-80 ℃冰箱。
已检血浆置-80ºC冰箱保存2个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。
4.仪器和试剂
4.2 试剂：（配套封闭试剂）
4.2.1 试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分）保存于2-8℃环境下，有效期22个月。
4.2.3试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过72小时；2-8℃条件下不超过30天。
4.2.4 主要组成成份：
5.标准操作
5.1 COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 的配置如下：
6.2. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48上使用试剂及耗材的保存及注意事项：
1). 所有试剂（HIV-I test试剂）2-8℃保存，即拿即用；
2). 试剂启用后，可保存28 days (2-8℃)；
3). 试剂启用后，在Cobas Ampliprep上累计使用时间最多64 hrs；
4). CTM(-)阴性质控、L(+)弱阳性质控、H(+)强阳性质控，使用后的废弃；
5). 洗液2-30℃保存，打开后可使用28 days；
6). 耗材（S-tube/样本条码/K-tip/K-tube/SPU）常温保存。
6.3. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48上使用样本的保存及注意事项：1). 需要的样本为血浆；
2). 血样在2～25 ℃下运输，24hrs (HIV RNA)收集出血浆(室温800-1600g离心20分钟)；
3). HIV RNA检测：血浆可在室温下(25-30℃)保存最多1天，在2～8℃最多保存6天，或者-20~-80℃下长期保存，至少6周；
4). 血浆建议倒取1100-1200 μL进行保存；
5). 血浆冷冻时，最多冻融5次不损失HIV RNA。
D4 & D5 在生物安全柜中进行样本准备
涡旋混匀样本及质控3-5秒，将1000 µl 样本及质控品转移到相应的样本管
S-tube中；避免将颗粒或凝块状物质转移到样本管S-tube中
装有样本及质控的样本管放到样本架相应的位置（与创建好的命令工作表中的位置一致）；确保质控条码上的lot 与质控的lot 一致；确保相应的质控使用正确的质控条码夹；避免样本或质控污染样本管S-tube的上部
D6 加载带有样本管的样本架于COBAS AmpliPrep 仪器的F, G 或H 位置E 开始运行COBAS AmpliPrep 仪器
E1 在AMPLILINK 软件上启动运行COBAS AmpliPrep
检查Status 界面下，确保没有样本、质控或试剂被锁住
确保所有的样本和耗材都已加载到COBAS AmpliPrep中，点击Start 按钮
F COBAS AmpliPrep 仪器运行结束后，手工转移提取好的样本到COBAS TaqMan48中，应避免将所有提取好的样本及质控直接放置于日光或光源下
F1 检查AMPLILINK 软件中可能显示的标记flags及错误信息
F2 在COBAS AmpliPrep处理好的样本及质控必须在120 分钟转移到COBAS TaqMan 48 中开始反应，不要冷冻或在2-8°C储存处理好的样本及质控。
F3 丢弃COBAS AmpliPrep 仪器中的废物G 加载处理好的样本及质控
G1 加载处理好的样本及质控到COBAS TaqMan 48 中–通过K-carrier 转移工具，手工转移带有K-carrier 的K-carrier 架到COBAS TaqMan 48 中
7.质量控制
7.1 阴性质控品：必须产生“没有检测到目标”的结果。
如果有标记标为无效，那么整个批次都是无效的。
7.2 阳性质控品：阳性质控品的检测值应该落在其指定的围，如果一个或两个质控品标记表示无效，那么整个批次无效。
8.结果报告
对于有效批次，检查每个样品是否在结果打印中出现标记或注释。
结果解释如下：有效批次可能包括有效和无效样品的结果，这取决于每个样品是否得到标记和/或注释。
样品结果解释如下：
9.性能参数
9.1 最低检出限及定量限：试剂最低检出限浓度为20 cp/mL。
9.2 精密度：检测高浓度（1.00E+07 cp/mL），低浓度（2.00E+01 cp/mL）HIV样本，批及批间的检测浓度对数值的变异系数（CV%）均小于5%。
9.3 线性围：本试剂盒的线性围为20 cp/mL～1.00E+07 cp/mL之间呈线性。
以高浓度的
HIV定值样本，梯度稀释12个浓度为待检样本，分析理论值与检测值呈现良好的线性相关，相关系为0.989。
9.4 对不同基因型的覆盖：本试剂盒对HIV-I M组的8个亚型，均可在最低检出限浓度检出为阳性。
9.5 分析特异性：
9.5.1 临床特异性：对临床HIV-RNA阴性样本进行检测，结果均为阴性。
10.临床意义：本检测方法旨在与临床表征以及疾病进展中的其他实验室标记物相结合，用于HIV-I M组与O组感染病人的临床管理。
通过测定HIV-I RNA的基线水平，可评价患者预后；或者抗病毒治疗过程过测定EDTA处理的血浆中HIV-I RNA水平的变化，监测抗病毒治疗的效果。
11.安全防护措施
11.1 为了避免样本中任何潜在的生物危险，试剂盒中阳性质控品、参考品和检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜，故而实验操作过程中必须戴一次性乳胶手套；样本的处理必须在可防止气雾外流的生物安全柜中操作。
11.2 样本制备区所用过的试管、吸头需打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；样本操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
11.3实验完毕用10%次氯酸或75%酒精处理工作台和移液器，然后用紫外线灯照射30分钟。
12.引用文件
《全自动核酸提取及扩增分析系统使用说明书》（罗氏公司）
《HIV-I病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光法）》说明书（罗氏公司）。
