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【例1】 下图为动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化 曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养),据图回答下列问题。
(1)OA段的培养称为 培养,AB段可能发生了 现象,需要用 酶处理使组织细胞分散开来。 (2)动物细胞培养和植物组织培养过程中,就细胞增殖、分化来说, 动植物细胞都要进行 ,不同的是植物细胞还要进 行 。
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(1)比较制备单克隆抗体中的几种细胞
细胞 B 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 特点 能产生单一抗体,但不能无限增殖 能无限增殖,但不能产生抗体 既能产生抗体,又能无限增殖
(2)制备单克隆抗体的两次筛选 第一次筛选:由于细胞融合是随机的,因此细胞混合物中融合细胞将 以多种形式出现,因此必须从中筛选出既能分泌抗体同时又能大量 增殖的杂交瘤细胞。 第二次筛选:从杂交瘤细胞群中选出能产生专一抗体的特异性杂交 瘤细胞。
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概念 原理 动物细胞融合 条件 动物细胞融合 与单克隆抗体 单克隆抗体 过程 意义 制备原理 制备过程 优点 应用
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1.误认为动物细胞融合与受精作用完全相同 (1)受精作用是在同种生物之间进行的,精子与卵子的融合是有性 生殖细胞的融合,不需要任何诱导剂就能形成受精卵,受精卵内具 备同种生物的两个亲本的遗传物质。(2)动物细胞融合是在不同物 种间进行的细胞融合,由于物种间存在着生殖隔离,所以自然条件 下不能融合成杂交细胞,必须有诱导剂作用才能融合。形成的杂交 细胞具备两个亲本细胞的遗传物质,从而体现两个亲本的遗传特性。
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【例2】 利用下列细胞工程技术培养出的新个体中,只具有一个 亲本遗传性状的是( ) ①植物组织培养 ②细胞融合 ③转基因技术 ④克隆技术 A.①③ B.②③④ C.① D.②④
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解析①植物组织培养是由一个细胞分裂分化形成新个体,属无性 生殖,因而新个体只有一种亲本的遗传性状,①正确;②细胞融合是 由两个细胞融合到一起,融合后的细胞同时具有原来两个细胞的遗 传物质,②错误;③转基因技术是将一种生物的基因或基因组在体 外进行加工或重新组合后,再转移到另一种生物中去,从而创造出 新型生物,转基因生物的目的基因来自外源生物,其余来自受体细 胞,③错误;④克隆技术是指把一细胞的细胞核分离出来移植到另 一个去核的卵母细胞中,由重组细胞发育成的新个体的技术,获得 的新个体的基因主要来自供体细胞的细胞核,也有少数基因来自卵 母细胞线粒体中的DNA,④错误。 答案C
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(1)病原体注入小鼠体内后,要经过 细胞处理后形成抗 原—MHC复合体,才能被免疫细胞识别。 (2)制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞一般从脾中采集,然后以 作诱导剂,使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养, 获得的杂交瘤细胞具有 的特点。 (3)单克隆抗体的特点是 。 根据上图写出应用杂交瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方 法: 。
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某小鼠生活过程中被多种病原体感染过,科学家却能够以该小鼠 为实验材料,通过细胞工程技术获得抗某种病原体的高纯度单克隆 抗体,这是因为( ) A.小鼠体内只有一种抗体 B.小鼠体内只有一种B淋巴细胞 C.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后只产生一种杂交瘤细胞 D.可以通过克隆培养法和抗体检测筛选出能产生特定抗体的杂 交瘤细胞 解析高等动物时刻都在接触各种抗原,因而通常体内有多种B淋 巴细胞,每种B淋巴细胞都能产生一种特异性的抗体。因而将小鼠 的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合将获得多种杂交瘤细胞。 答案D
二、单克隆抗体 1.原理:每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,B淋巴细胞在 体外不能无限增殖,而肿瘤细胞具有无限增殖的特点,将单个B淋巴 细胞与骨髓瘤细胞融合,可以使杂种细胞具有两个亲本的遗传特性, 既能无限增殖又能产生专一抗体。 2.单克隆抗体的制备 (1)过程: 将已免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,经过筛 选后得到杂交瘤细胞,这种细胞能产生特定抗体。将这样的细胞群 在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,从细胞培 养液或小鼠腹水中,就可以提取出大量的单克隆抗体。 (2)杂交瘤细胞的特点:既能迅速大量繁殖,又能产生专一的抗体。
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(1)杂交细胞是通过什么途径得到的?依据的原理是什么? 提示细胞融合。原理是细胞膜具有一定的流动性。 (2)诱导动物细胞融合与植物细胞融合有什么不同? 提示动物细胞融合时特有的生物融合剂是灭活的病毒。
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(3)为制备单克隆抗体,需将 注射到小鼠体内,以此获 取相应的B淋巴细胞,同时可选取图中 点以后的细胞与该 细胞融合形成杂交细胞。这种杂交细胞的特点 是 。 (4)在制备单克隆抗体的过程中,需要经过两次筛选,第一次是诱 导融合之后筛选出 ,第二次是筛选出 能 。
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二、单克隆抗体 1.技术手段 动物细胞培养、动物细胞融合。 2.制备流程
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【例2】 1975年科学家首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单 克隆抗体。请据图回答下列问题。
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2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
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1.记住动物细胞融合的原理、过程、应用。 2.单克隆抗体的原理、过程。 3.说出动物细胞融合和单克隆抗体的应用。
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一、动物细胞融合 1.概念:指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2.特点:融合后形成的杂交细胞是具有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞。 3.原理:膜的流动性。 4.方法:与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙 二醇、灭活的病毒、电激等。 5.意义:细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成 为可能。 6.用途:最重要的用途是制备单克隆抗体。
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解析(1)人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养,分 瓶后的培养称为传代培养;当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增殖,即会发生接触抑制现象;用胰蛋白酶可使 组织细胞分散开来。(2)动物细胞培养和植物组织培养过程中,就细 胞增殖、分化来说,二者除了都需要增殖外,植物细胞不同于动物 细胞的是还要进行脱分化和再分化。(3)为制备单克隆抗体,需将特 定抗原注射到小鼠体内,以此获取B淋巴细胞,同时可选取图中D点 的细胞与该B淋巴细胞融合形成杂交细胞。这种杂交细胞同时具 有癌细胞和B淋巴细胞的特点,既能迅速大量繁殖,又能产生专一的 抗体。(4)为筛选能够产生单克隆抗体的杂交瘤细胞,至少需要经过 2次筛选才能达到目的。第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
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3.单克隆抗体的应用 (1)单克隆抗体的主要优点:特异性强,灵敏度高,能大量制备。 (2)作为诊断试剂:准确地识别各种抗原物质的细微差异,并跟一 定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。 (3)用于治疗疾病和运载药物:主要用于癌症治疗,可制成“生物导 弹”,也有少量用于治疗其他疾病。
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【例1】 下列关于动物细胞融合的叙述,不正确的是 ( ) A.动物细胞融合时需人工诱导 B.动物细胞融合时应先用纤维素酶处理 C.动物细胞融合时存在细胞核的融合 D.动物细胞融合最主要的用途是制备单克隆抗体 解析动物细胞融合时需要人工诱导完成;在融合过程中,既有细 胞膜的融合,又有细胞核的融合;动物细胞融合的主要用途是制备 单克隆抗体。动物细胞融合时不需用纤维素酶处理,而是用胰蛋白 酶或胶原蛋白酶处理。 答案B
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植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
植物体细胞杂交 原理 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 酶解法去掉细胞壁后 ,诱导原生质体融 步骤 合 ,形成杂种体细胞 ,再经过植物组织培 养形成杂种植株 诱导 物理方法、化学方法 方法 结果 形成杂种植株 动物细胞融合 细胞膜的流动性 分散成单个细胞 后诱导细胞融合 物理方法、化学 方法、灭活病毒 形成杂种细胞
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答案(1)原代 接触抑制 胰蛋白 (2)增殖(或分裂) 脱分化和再分化(或细胞分化) (3)抗原 D 既能迅速大量繁殖,又能产生专一的抗体 (4)杂交瘤细胞 产生专一(或特异性)抗体的杂交瘤细胞
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2.混淆生物工程技术中产生后代个体的遗传物质(或基因)来源 不同的生物工程技术产生后代个体的遗传物质来源不同。(1)转 基因生物:除目的基因来自外源生物,绝大多数基因来自受体细胞。 (2)杂种植株:遗传物质来自融合的两个亲本细胞。(3)经细胞培养 获得的动物细胞:遗传物质只来自一个亲本。(4)动物细胞融合形 成的杂交细胞:遗传物质来自融合的两个亲本细胞。(5)克隆动物: 细胞核中的遗传物质来自供体动物,细胞质中的遗传物质来自提供 卵母细胞的动物个体。