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猪常见细菌性病原菌的分离鉴定及药敏实验研究作者：方勤来源：《农业开发与装备》 2018年第2期摘要：课题试图通过对重庆涪陵区两规模化猪场送检的病死猪病料进行细菌分离鉴定，掌握川渝地区猪场常见的致病性细菌种类，主要有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌。
通过对分离的纯化菌进行生化试验和药敏试验，查出耐药，减少治疗错误，并了解其敏感抗生素种类，便于猪场选择治疗方案、节省费用。
利用耐药检测结果控制抗菌药物的应用，减少耐药菌株的出现，选择高效合理的抗菌药物，对于指导临床用药具有重要作用。
在更有效的防治细菌性疾病的同时，能够最大化提高养殖业的经济效益。
关键词：耐药性；抗生素；分离；鉴定1材料与方法1.1材料1.1.1试剂。
普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、营养肉汤培养基、SS琼脂平板和各种微量生化鉴定管。
1.1.2仪器。
LDZX-40B1高压灭菌锅（中国.上海）、电子天平、锥形瓶、灭菌培养皿、生化培养箱、超净工作台。
1.1.3培养基的制备。
营养肉汤：称取12.5g溶于500mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压蒸汽灭菌20min，置于4℃保存备用；营养琼脂：称取33g于1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压蒸汽灭菌20min，置于4℃保存备用；麦康凯琼脂：称取55g溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压蒸汽灭菌20min，置于4℃保存备用。
1.1.4病料。
无菌采取A、B两猪场病死猪心、肺、淋巴等脏器，置于4℃冰箱待检验。
1.1.5抗菌药物。
药敏实验采用的抗生素类药物有TET（四环素）、NT（呋喃妥因）、KAN （卡纳霉素）、GEN（庆大霉素）、VAN（万古霉素）、CIP（环丙沙星）、SXT（复方新诺明）、EM（红霉素）、OFX（氧氟沙星）、CEP（头孢噻吩）。
1.2方法1.2.1分离培养及纯化。
将病料无菌划线接种于普通营养琼脂平板，置于37℃恒温培养箱中培养18～24h，然后用接种环无菌挑取单个完整的菌落，接种于普通琼脂培养基，进行纯化培养得到纯培养物。
规模化猪场仔猪黄白痢大肠杆菌的分离鉴定规模化猪场仔猪黄白痢大肠杆菌的分离鉴定仔猪黄白痢又称新生仔猪腹泻，是仔猪黄痢和白痢的总称，很大一部分是由致病性大肠杆菌引起的一种高致病性的传染病，以排出白色或黄色稀粪和迅速死亡为特征。
由于大肠杆菌血清型众多，且不同年龄的猪感染大肠埃希菌的主要血清型不同，因而疫苗的使用保护性差，且由于耐药性的产生，都给本病的防治造成一定的难度。
本试验对某猪场发生仔猪黄白痢的病原菌进行分离鉴定，旨在为该养猪场制定有效的防制措施提供依据。
1材料与方法1．1病料与试剂来源于镇江地区某规模化猪场11窝30日龄内发生黄白痢的仔猪，用灭菌棉拭子从腹泻仔猪直肠采集粪便55份，进行细菌的分离鉴定。
营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂、SS培养基、三糖铁培养基；生化鉴定培养基购自杭州天和微生物试剂公司；药敏纸片购自杭州天和微生物试剂公司；大肠杆菌O抗原定型血清购自中国兽医药品卫生监察所。
1．2试验动物体重20-25 g健康小白鼠90只，雌雄各半，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。
1．3细菌分离中国猪网网友建议用棉拭子采集发生黄白痢的仔猪的肛门粪便，混悬于装有灭菌生理盐水的灭菌离心管中，摇动离心管彻底洗涤拭子粪便于管中，并靠壁旋动拭子，挤出液体。
用接种环取上述大便悬液1—3环，接种于麦康凯琼脂培养基平板，置37℃培养24 h后观察培养特性。
将以上麦康凯培养基中的红色菌落，再接种于SS培养基、麦康凯培养基中，置37℃培养24 h后进行纯化培养，观察菌落的生长情况，并取麦康凯培养基上的单个菌落进行涂片，革兰氏染色、镜检。
1．4生化特性试验按文献方法进行。
取纯培养细菌接种于营养肉汤中，37℃培养24 h后，接种到各微量发酵管及种生化培养基中，置37℃培养24 h后，观察记录结果。
1．5致病性试验将接种细菌后的营养肉汤37℃培养24 h后，分别腹腔接种体重20 g左右的小白鼠，每株接种10只，每只0．2 mL(含菌量约为8．0×108CFU／mL)，同时用10只小白鼠接种无菌肉汤作对照。
死亡仔猪脏器中致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验奎军;简莹娜;张学勇;李秀萍;王戈平;李海基;马利青【期刊名称】《青海畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2017(047)005【摘要】从送检的死亡猪组织病料中分离到1株病原菌,经病原菌的分离、生化试验、动物致死试验、药物敏感性试验和PCR扩增及测序,对该菌株进行了鉴定.结果表明:该病原菌为致病性大肠杆菌;药敏试验表明在检测的17种抗生素中该菌株仅对阿奇霉素和克林霉素药物敏感;对强力霉素、多粘菌素B药物中敏;对杆菌肽、氯霉素和多粘附素E等耐药.说明该猪死亡前感染了耐药性较强的致病性大肠杆菌.【总页数】4页(P23-26)【作者】奎军;简莹娜;张学勇;李秀萍;王戈平;李海基;马利青【作者单位】青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016;青海省湟中县畜牧兽医站,西宁,811600;青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016;青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016;青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016;青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016;青海省湟中县畜牧兽医站,西宁,811600【正文语种】中文【中图分类】S852.61+2【相关文献】1.仔猪致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验 [J], 赵美盈2.死亡牦牛脏器中病原菌的分离鉴定及药敏试验 [J], 李稳欣;简莹娜;张学勇;才山;阿日雅;徐龙;马利青3.仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 [J], 杨莉;杨胜坤;刘运平;袁廷明;贾惠珺;余波;杨茂生;徐景峨;李刚;陈远晟;唐远江;龙玲;史开志4.一例仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验 [J], 祖立闯;谢金文;姚春阳;孟霞;齐继红;赵家磊;李峰;沈志强5.仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验 [J], 景波; 吕程因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪病的病理剖检诊断一．尸体剖检的概念★是适用病理解剖学的知识，通过检查尸体的病理变化，获得诊断疾病的依据。
1．特点：（1）方便快速，直接客观。
有的疾病通过病理剖检可一目了然予以确诊。
（2）可验证病死猪生前的临床诊断与治疗的正确性。
2．要求（1）具备病理生理，病理解剖，传染病及微生物等学科的知识。
（2）剖检时应做到全面客观地观察、描述并详细记录。
（3）防止病原的扩散和人为的传播，做好环境的消毒和尸体的无害化处理。
3．相关概念（1）尸冷：猪死后由于体内产热过程停止，尸体温度逐渐降至外界环境温度水平。
（2）尸僵：猪死后几个小时（3-6小时），从头部开始各部位的肌肉因痉挛性收缩而变得僵硬，各关节不能屈伸，尸体固定成一定的姿态。
该过程在10-24小时内完成，24-48小时尸僵按原来顺序开始消失，肌肉变质。
（3）尸斑：猪死亡后由于心脏和大动脉管的临终收缩及尸僵的发生将血液排挤到静脉内，并由于重力作用，血液流向尸体的底下部，组织呈暗红色，死后1-1.5小时出现，24小时左右发生溶血，组织染成污红色。
（4）血液凝固：猪死后不久，在心脏和大血管内的血液即凝固成血凝块。
（5）尸体自溶：指体内组织受到酶的作用而引起自体消化的过程。
如：胃肠道粘膜脱落。
（6）尸体腐败：指尸体组织蛋白由于细菌的作用而发生腐败分解现象，表现为腹围膨大、尸绿、尸臭。
二．尸体剖检的注意事项1．选择的场地应便于消毒和防止病原体扩散，最好在专设的解剖室内进行。
2．剖检人员应配备工作服、胶鞋、工作帽、一次性塑料手套和相应的器械。
3．病猪死亡后若需剖检应尽快进行以防尸体腐败。
4．为防病原扩散，可将尸体装入塑料袋内，也可用浸透消毒液的棉花球堵塞尸体的天然孔，并用消毒药液喷尸体表面各部。
5．剖检完毕，把尸体、垫料和被污染的土层一起放入坑内，撒上生石灰或喷洒消毒液后用土掩埋，有条件的也可焚烧。
6．运送尸体的车辆和绳索等用后要严格消毒。
三．尸体剖检的顺序及检查方法1．尸体剖检顺序为了全面而系统地检查尸体内外所呈现的病理变化，避免遗漏，尸体剖检应按照一定的顺序进行。
猪大肠杆菌病的主要临床症状是腹泻，并且排便颜色以黄色、白色居多，通常患有大肠杆菌的病猪，还伴随着水肿的出现。
这些症状主要是由大肠埃希氏菌破坏消化系统所导致。
出现此症状会严重影响养殖猪的生长速度，严重的甚至会导致病猪死亡。
对大肠杆菌进行鉴定分离，需要采集病猪的病毒标本和大肠杆菌血清。
1分离鉴定1.1材料进行猪大肠杆菌病的检定分离，需要采集病猪的病毒标本，为了保证标本的全面性，需要对多个养殖场中的病猪进行病毒标本采集。
另外还需要病毒因子血清、培养基、试验动物以及药敏纸片。
材料要保证质量，尤其是病毒标本，一旦原始数据出现问题，整个试验就会失败。
1.2分离鉴定方法分离大肠杆菌病毒试验，将分离出的病毒存放入温箱内培育，箱内温度调至37℃。
病毒分离并且存活20h将病毒植入试验动物内。
48h后，试验动物完全感染大肠杆菌，开始对试验动物进行抗病毒试验，并且做详细记录。
1.3试验结果猪大肠杆菌病对仔猪特别是哺乳期的仔猪，比较敏感。
仔猪一旦感染该病毒，会发生黄痢疾现象。
成年养殖猪患病几率较小，而且病毒对养殖猪的消化系统破坏较小。
诺氟沙星、环丙沙星、氯霉素和庆大霉素有较好的抑菌效果，但均有个别菌株不敏感；新霉素、强力霉素虽普遍有效，但多为低敏或中敏；以往常用的磺胺药物（复方新诺明）对多数菌株无效，可能与滥用有关。
因此，一旦发生仔猪黄、白痢，应分离细菌并进行药敏试验，筛选出最佳抗菌药物，切忌盲目给药。
2防治2.1疫苗接种大肠杆菌病对仔猪的影响较大，影响仔猪的存活率，因此，大肠杆菌疫苗的接种，要在仔猪时期进行，避免大肠杆菌病毒感染到仔猪。
大肠杆菌疫苗的接种需要分批完成，第1次接种后的1个月和2个月后，要进行强化接种，保证疫苗的有效性。
2.2卫生管理加强猪舍的卫生管理，保证猪舍内的粪便等其他排泄物及时清理；还要加强猪舍内部的通风，保证空气循环；猪舍周围的卫生也要加强管理，及时清理养殖过程中的废料；定期杀毒，消毒液为84稀释液。
仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定作者：刘泽文袁芳艳刘威高婷周丹娜杨克礼段正赢郭锐梁婉田永祥来源：《湖北农业科学》2019年第23期摘要：湖北省红安县某猪场新生仔猪发生一种以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病，经病原分离、革兰氏染色、PCR鉴定、生化试验和血清型鉴定，确定新生仔猪病是由大肠杆菌感染引起。
经血清型鉴定，该分离菌株属于纤毛抗原987P型，该菌株对头孢曲松、头孢噻肟较敏感。
关键词：仔猪黄痢;大肠杆菌;分离鉴定中图分类号：S828;S855.1; ; ; ; ;文献标识码：A文章编号：0439-8114（2019）23-0142-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2019.23.034; ; ; ; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Isolation and identification of Escherichia coli from yellow diarrhea in pigletsLIU Ze-wen，YUAN Fang-yan，LIU Wei，GAO Ting，ZHOU Dan-na，YANG Ke-li，DUAN Zheng-ying，GUO Rui，LIANG Wan，TIAN Yong-xiang（Institute of Animal Husbandry and Veterinary，Hubei Academy of Agricultural Science/Key Laboratory of Prevention and Control Agents for Animal Bacteriocins，Ministry of Agriculture and Aural Affairs，Wuhan 430064，China）Abstract： In a pig farm in Hong'an county， Hubei province， newborn piglets developed a disease characterized by severe diarrhea， discharge of yellow feces and rapid dehydration; afterpathogen isolation， Gram staining， PCR identification， biochemical tests and serotype identification， E. coli infection in newborn piglets was determined. According to the serotype identification， the isolated strain belongs to the cilia antigen 987P type， and the strain is sensitive to ceftriaxone and cefotaxime.Key words： piglet scutellaria; Escherichia coli; isolation and identification2018年上半年，湖北红安县某猪场1～3日龄的新生仔猪出现拉黄色水样稀粪，内含凝乳小片，病仔猪消瘦、脱水，最后因衰竭而死亡。
仔猪腹泻病原菌的分离与鉴定摘要2017年7月，45日龄仔猪出现了食欲减退、消瘦、严重腹泻，个别发病仔猪出现死亡。
为了确定引起仔猪腹泻死亡的病原，通过胶体金试纸条检测猪瘟、伪狂犬、圆环、蓝耳抗原为阴性。
无菌采集病死仔猪的肝脏、心血、肺脏等病料组织中分离得到了2株病原菌，分别命名为XJ-1株和XJ-2株，通过培养特性、形态学观察、生化特性检测、等等方法对分离到的2株病原菌进行鉴定，结果显示，1株为沙门氏菌，另1株为大肠杆菌。
对2株病原菌用口服方式攻毒小白鼠验证其致病性，结果显示，对2株病原菌均有很强的致病性。
用K-B药敏纸片法对2株病原菌进行药敏试验分析其耐药性，结果表明，2株病原菌均对恩诺沙星、阿米卡星、头孢克肟、头孢曲松、氟苯尼考4种药物敏感，对其他的药物存在不同程度的耐药性。
关键词仔猪；腹泻；致病性大肠杆菌；沙门氏菌；药敏试验随着我国畜牧业的发展，猪的养殖数量越来越多，逐渐形成了规模化、集约化养殖模式，猪的健康养殖越来越来越受到养殖户的重视。
在养猪的过程中，仔猪的腹泻病越来越严重，猪瘟、伪狂犬、圆环、蓝耳病、致病性大肠杆菌病、沙门氏菌、绿脓杆杆菌多种病毒性和细菌性疾病均能能引起仔猪的严重腹泻，其中，致病性大肠杆菌和鸡沙门氏菌引起仔猪腹泻为临床多发，成为临床上仔猪常见病，感染率和死亡率均较高，严重影响养猪业的发展[1-2]。
仔猪大肠杆菌病是由某些特定血清型的致病性大肠杆菌所引起的仔猪以腹泻为主传染性疾病，主要包括仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病3种疾病，其中，仔猪大肠杆菌病在临床上以仔猪白痢和仔猪黄痢较为常见，危害仔猪最为严重[3]。
仔猪沙门菌病是由沙门菌属的猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等不同血清型的沙门氏菌株引起的一种仔猪的高热传染病，1～4月龄的仔猪多发，急性为败血症，慢性为坏死性肠炎[4-6]。
近年来，致病性大肠杆菌和沙门氏菌混合感染引起仔猪腹泻问题日益严重，尤其当混合感染时，发病率和死亡率都较高，不易控制，在治疗时，应进行药敏试验分析耐药性，合理用药。
仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定仔猪黄痢病是出生仔猪常发的急性、致死性肠道传染病，多在仔猪出生后几天内发病，发病率高、死亡率高。
临床症状主要以腹泻、排黄色稀粪、急性死亡为主要特征，剖检有肠炎和败血症变化，是危害哺乳仔猪的重要传染病之一，严重影响仔猪的生长发育，对养猪业危害极大。
2015年3月，北京顺义某猪场突发仔猪腹泻，排黄白色或黄色水样稀便，根据流行病学、临床症状和病理剖检，并结合细菌病原分离、生化鉴定，致病性试验，药敏试验，确诊为仔猪黄痢大肠杆菌病。
对分离的菌株进行了药敏试验，筛选出了3种敏感药物，根据诊断及药敏试验结果采取了相应的控制措施，效果显著经治疗，病情得到了有效控制。
现报告如下。
1 发病情况北京顺义某猪场于2015年3月，5日龄仔猪突然发病，仔猪腹泻不止，患猪粪便呈黄白色或黄色水样，仔猪迅速消瘦、全身衰弱，很快死亡。
2 临诊症状患猪腹泻黄色水样、顺肛门流下。
精神沉郁，停止吃乳，脱水，迅速消瘦。
3 病理变化心包增厚，心包膜外面覆盖纤维素性渗出物，心外膜小点出血。
肝表面覆盖一层灰黄色纤维素膜，肝肿大呈土黄色，表面有细小的灰白色坏死点。
脾肿大出血。
十二指肠出血。
4 实验室诊断4.1 细菌分离培养将采集的2份肝脏组织分别接种马丁琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，观察菌落形态。
挑取可疑菌落涂片、革兰氏染色、镜检、纯培养。
4.2 生化试验参照BioMerieux VITEK32全自动细菌鉴定及药敏仪鉴定操作说明进行。
取纯化的单菌落接于0.45% NaCL基物安培管，用比浊仪制备混浊度相当于1个麦氏单位的菌悬液，接种于VITEK革兰氏阴性菌鉴定卡（GNI+），放入读数器中鉴定读取结果。
4.3致病性试验将上述生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的菌株，分别取纯化的单菌落接种普通营养肉汤，37℃培养24h，将每个菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠各2只，每只注射0.2mL，同时用无菌肉汤以同样途径接种2只小白鼠作为对照，观察、记录试验结果。
猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪黄白痢和水肿病。
随着养猪业规模化发展，该病呈上升趋势，致使仔猪成活率和断乳窝重降低，严重影响了养猪业的发展。
由于致病性大肠杆菌存在广泛的耐药性，而且血清型多，抗原复杂，给防治带来了极大的困难。
针对某猪场提供的腹泻严重的仔猪黄白痢病料，我们进行了细菌分离鉴定和药敏试验，以期为仔猪大肠杆菌病的有效防治提供一些技术参考资料。
1、具体方法（1）病原菌的分离培养：无菌采集具有黄痢、白痢症状的仔猪粪便，接种于麦康凯培养基上，37℃温箱中培养24 小时。
挑取红色中等大小光滑菌落，接种于普通肉汤增菌，置37℃温箱培养16～18小时，然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，24 小时后挑取平板上可疑菌落抹片染色镜检，后将疑似菌落少许再接种于普通肉汤，供以后试验用。
（2）生化试验：糖发酵、M．R、硫化氢、V-P、吲哚试验等。
③药敏试验：利用庆大霉素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟、链霉素、环丙沙星、恩若沙星、红霉素等8种药物按常规纸片法进行。
2、观察结果（1）病原菌的形态：观察到6个疑似菌株在麦康凯琼脂培养16 小时后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养16小时后均为紫黑色带金属光泽的中等大小圆形菌落，革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。
（2）生化鉴定：分离的6株细菌都能发酵葡萄糖、麦芽糖和乳糖，并产酸产气；部分菌株不分解蔗糖，不产生硫化氢，吲哚和甲基红试验(M．R)均为阳性，V-P试验为阴性，由此可判定分离菌株为大肠杆菌。
（3）药敏试验：所有分离菌均对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、恩若沙星敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。
3、结论分析从猪场分离的6株细菌，经培养特性、形态及生化试验试验鉴定，表明均为致病性大肠杆菌。
药敏试验结果表明6株大肠杆菌对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、恩若沙星敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。
