实验六标本中病原菌的分离培养与鉴定

病原菌分离实验报告一、实验目的本次实验旨在从临床样本中分离和鉴定病原菌，为疾病的诊断和治疗提供准确的病原学依据。

通过实验，掌握病原菌分离的基本方法和技术，熟悉常见病原菌的形态特征和培养特性。

二、实验材料1、临床样本：包括血液、尿液、痰液、粪便等。

2、培养基：血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板等。

3、试剂：革兰氏染色液、氧化酶试剂、触酶试剂等。

4、仪器设备：显微镜、培养箱、接种环、酒精灯等。

三、实验方法1、样本采集与处理血液样本：采集患者静脉血，注入血培养瓶中，立即送实验室进行培养。

尿液样本：收集中段尿，离心后取沉淀进行培养。

痰液样本：患者清晨深部咳痰，经生理盐水洗涤后，制成均匀的混悬液进行培养。

粪便样本：挑取脓血或黏液部分，制成混悬液进行培养。

2、接种培养用接种环取处理后的样本，分别划线接种于不同的培养基上。

将接种后的培养基放入 35℃培养箱中培养 18 24 小时。

3、观察菌落形态培养结束后，观察培养基上菌落的形态、大小、颜色、边缘、质地等特征。

4、涂片染色镜检挑取可疑菌落，制作涂片，进行革兰氏染色。

在显微镜下观察细菌的形态、排列方式等。

5、生化鉴定根据细菌的染色结果和形态特征，选择相应的生化试验进行鉴定。

如氧化酶试验、触酶试验、糖发酵试验等。

四、实验结果1、血液样本培养结果：在血琼脂平板上生长出圆形、凸起、表面光滑、湿润的菌落，有溶血现象。

染色镜检：革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

生化鉴定：触酶阳性，能发酵葡萄糖、麦芽糖，初步鉴定为金黄色葡萄球菌。

2、尿液样本培养结果：在麦康凯琼脂平板上生长出粉红色、光滑、湿润的菌落。

染色镜检：革兰氏阴性杆菌，短杆菌。

生化鉴定：氧化酶阴性，能发酵乳糖，初步鉴定为大肠埃希菌。

3、痰液样本培养结果：在血琼脂平板上生长出扁平、干燥、表面粗糙的菌落。

染色镜检：革兰氏阳性杆菌，有分枝。

生化鉴定：触酶阴性，能分解尿素，初步鉴定为结核分枝杆菌。

4、粪便样本培养结果：在麦康凯琼脂平板上生长出无色、半透明、圆形的菌落。

细菌分离鉴定细菌分离鉴定[细菌分离鉴定]细菌分离鉴定目的要求：熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法，细菌分离鉴定。

实验内容：一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定(一)标本采集1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。

2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。

3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。

4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。

5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。

6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。

(二)分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。

常见的致病性球菌检查程序如下。

直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→涂片、染色、镜检↑挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定↓药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检(三)常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。

材料(1) 标本：脓拭子(2) 培养基：血琼脂平板(3) 兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片方法脓汁→革兰染色→镜检↓↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况↓致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)，鉴定材料《细菌分离鉴定》()。

实训8植物病害病原物的分离培养和鉴定实训8 植物病害病原物的分离培养和鉴定1(实训目标通过对植物病原物分离培养方法的学习和实际操作，掌握病原物分离培养的基本原理和基本方法，为植物病原物的鉴定及病害的正确诊断提供依据;了解各种病原物的形态和生物学特性，为植物病害的有效防治打下基础。

2(实训材料(1)材料新采集的植物真菌、细菌、线虫病害的典型症状植株、PDA培养基、牛汁胨平板培养基等。

(2)仪器用具超净工作台、显微镜、解剖镜、恒温箱、三角瓶、灭菌培养皿、解剖剪、小镊子、移植环、酒精灯、70%酒精、95%酒精、0.1%升汞水或7%漂白粉消毒液、5%来苏尔、灭菌水、滤纸、蜡笔、标签、胶水、火柴、玻璃漏斗(直径10,15cm)、铁架台、橡皮管、弹簧夹、尖嘴玻璃管、网筛、挑针、竹针或毛针、凹穴玻片等。

3(实训内容(1)植物病原真菌的分离培养;(2)植物病原细菌的的分离培养;(3)植物病原线虫的分离培养。

4(操作步骤与方法1)植物病原真菌的分离培养对植物病原真菌通常采用的是组织分离法。

此方法的基本原理是:创造一个适合真菌生长的无菌营养环境，促使染病植物组织中的病原真菌在人工培养基上大量生长、繁殖，使其成为纯菌种，以便为病原鉴定和病害诊断提供实物依据。

(1)分离材料的选择及处理选择新鲜的典型症状植株、器官或组织，洗净，晾干，取新鲜病斑病健交界部分，切成,5mm见方小块用作分离材料。

将分离材料置于灭菌的小容器中，先用70%酒精漂洗约2,33s，迅速倒去，以避免材料表面产生气泡;然后用0.1%升汞溶液消毒1~2min(消毒时间因材料厚度不同而异;消毒剂也可根据不同情况选用漂白粉、次氯酸钠等)，再经无菌水漂洗3,4次，最后用灭菌的滤纸吸干材料上的水。

(2)工具的消毒、灭菌先打开超净工作台通风20min以上，用70%酒精擦拭手、台面和工作台出风口进行消毒;分离用的容器和镊子用95%酒精擦洗后经火焰灼烧灭菌。

分离也可在没有尘土而空气相对静止的室内进行，方法是擦净工作台，在台面上铺一块湿毛巾，地面洒水，然后在室内喷洒5%来苏尔熏蒸灭菌2~3h即可。

实验六平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。

一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。

通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。

实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。

平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。

具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。

由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。

鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。

这样的培养基称之为鉴别培养基。

例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。

（参考GB47838-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。

伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。

在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。

肺结核的结核病原菌分离与培养技术肺结核是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，它是全球范围内的重要公共卫生问题。

为了诊断和治疗肺结核，必须准确地分离和鉴定病原菌，这在临床实践中起着重要作用。

本文将介绍肺结核的结核病原菌分离与培养技术。

一、分离技术肺结核的结核病原菌主要通过痰液传播，因此，分离病原菌的第一步是收集患者痰液样本。

通常情况下，患者需要在早晨醒来后的连续两至三天采集新鲜的痰液样本。

采集后，样本应迅速送至实验室。

在实验室中，常用的分离技术是培养法。

首先，将痰液进行稀释，然后使用不同的培养基进行涂布。

最常用的培养基是Löwenstein—Jensen培养基和Middlebrook 7H10/7H11培养基。

这些培养基含有适合结核菌生长和分离的营养成分。

涂布后，将培养皿放置在37℃的培养箱中进行培养。

结核菌的生长速度相对较慢，通常需要2至6周的时间才能看到可见的菌落。

在观察期间，必须定期观察并记录培养皿上的菌落特征，如形状、颜色和大小等。

二、培养技术结核菌的培养技术有多种方法，常用的包括固体培养和液体培养。

固体培养是将此菌接种到含有琼脂的培养基上。

固体培养的主要优点是便于观察，菌落特征清晰可见。

但缺点是病原菌增殖速度较慢，且只能得到纯培养物。

液体培养是将结核菌接种到液体培养基中进行培养。

液体培养的主要优点是菌落生长速度快，可以提高结核菌的密度。

此外，液体培养还可以应用于抗生素敏感性测试等其他实验。

无论使用何种培养技术，都要注意环境条件和操作规范以避免交叉污染。

通风良好的实验室环境、洁净的培养仪器和消毒的试剂是保证培养过程成功的关键。

三、分离鉴定培养得到的菌落需要进行进一步的分离鉴定。

传统的鉴定方法包括酸忍受试验、抗酸染色和结核菌分枝杆菌分离物抗原检测等。

这些方法能够鉴定结核分枝杆菌的特殊细胞壁结构和抗原特征。

近年来，随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链反应）和核酸杂交等方法也被广泛应用于结核菌的鉴定。

病原菌实验报告实验目的本实验旨在通过分离、培养和鉴定病原菌，探究其特性及对人类健康的潜在威胁。

实验原理病原菌是引起疾病的微生物，能够侵入宿主并繁殖，引起免疫系统的反应。

通过实验，我们可以采集病原菌样本并在合适的培养基上培养和观察它们的生长特性。

同时，鉴定病原菌的种类对于有效的治疗和预防疾病非常重要。

实验材料与方法实验材料：- 无菌采样棉签- 无菌培养基（如琼脂培养基）- 培养皿- 无菌培养瓶- 显微镜与镜片实验步骤：1. 使用无菌采样棉签采集病人体内分泌物、分泌物或皮肤创伤等潜在病原菌样本。

2. 将采样棉签轻轻滚动在无菌培养基上，确保将病原菌样本均匀地涂抹在培养基表面上。

3. 使用无菌技术将培养基放入无菌培养皿中，密封密实并倒扣。

4. 在恒温培养箱中以适当的温度（通常为37C）进行培养。

5. 培养24小时后，观察培养皿中是否有菌落的形成。

6. 使用无菌技术将菌落转接到新的培养皿中，继续培养。

7. 观察菌落的形态、颜色、大小以及其他特征，并记录下来。

8. 取一个菌落进行革兰染色和镜检，观察菌的结构特征。

9. 可参照鉴定手册或使用进一步鉴定技术来确定病原菌的种类。

实验结果与数据分析经过培养和观察，我们发现培养皿中出现了菌落的形成。

通过进一步的观察和鉴定，我们确定了该菌落为革兰氏阴性细菌，且菌落为白色，大小较小。

在镜检下，我们观察到该菌细胞呈杆状，具有纤毛结构。

根据鉴定手册的数据，结合我们观察到的特征，我们初步推测该病原菌可能属于大肠杆菌属。

结论与讨论通过本实验，我们成功地分离、培养和鉴定了一株病原菌。

病原菌的准确鉴定对于疾病的治疗和预防具有重要的意义。

在今后的实验中，我们可以进一步探究该菌株的生理特性、耐受性以及对人体的致病机制，以更好地了解和应对潜在的疾病威胁。

然而，本实验只是初步鉴定，还需要进一步的验证和精确的鉴定技术来确认该菌株的种属。

此外，由于实验条件的限制，实验过程中出现的污染可能对结果产生一定的影响。

竭诚为您提供优质文档/双击可除病原菌的分离鉴定篇一：常见病原菌采样分离过程金黄色葡萄球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）奶样的采集：采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后Lh、右前RF、右后Rh编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。

（2）乳房皮肤拭子用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。

拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。

（3）鼻腔拭子用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。

菌种的初步分离首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（bhI）肉汤35℃培养18小时左右。

需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。

2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。

3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。

肠球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。

（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。

第1篇一、引言植物病理学是一门研究植物病害的发生、发展和防治的学科。

随着我国农业现代化进程的加快，植物病害对农业生产的影响日益严重。

为了提高学生的植物病理学理论知识和实践能力，我校于近期组织了一次植物病理学教学实践活动。

本文将总结本次实践活动的经验和体会，为今后的教学提供参考。

二、实践背景1. 植物病害问题日益严重近年来，我国农业生产中植物病害问题日益严重，严重影响着农作物的产量和品质。

据统计，我国每年因植物病害造成的经济损失高达数百亿元。

2. 植物病理学教学现状目前，我国高校植物病理学教学主要以课堂讲授为主，实践环节相对较少。

这使得学生在掌握理论知识的同时，缺乏实际操作能力和病害诊断能力。

3. 实践教学的重要性实践教学是提高学生综合素质、培养创新人才的重要途径。

通过植物病理学教学实践活动，可以让学生深入了解病害发生规律，提高病害诊断和防治能力。

三、实践内容1. 病害标本采集与鉴定在实践活动中，我们组织学生到田间采集病害标本。

学生通过观察病害症状、采集病样，初步了解病害种类和发生规律。

随后，指导教师带领学生进行病害标本的鉴定，使学生掌握病害鉴定方法。

2. 病原菌分离与培养在实验室，学生学习了病原菌分离和纯化的方法。

通过操作，学生掌握了病原菌的分离纯化技术，为后续的病害研究奠定了基础。

3. 病害诊断与防治在实践活动中，学生学习了病害诊断的基本方法，包括症状观察、病原菌鉴定等。

同时，指导教师结合实际案例，向学生介绍了病害的防治措施，如生物防治、化学防治等。

4. 病害调查与监测学生分组进行田间病害调查，了解病害发生规律、危害程度等。

通过调查，学生掌握了病害监测的基本方法，为农业生产提供科学依据。

四、实践体会1. 提高了学生的实践能力通过本次实践活动，学生掌握了植物病理学的基本操作技能，提高了病害诊断和防治能力。

2. 培养了学生的团队合作精神在实践活动中，学生分组进行病害调查和监测，培养了他们的团队合作精神。

平板划线分离实验六平板划线法分离菌种实验六平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，熟练掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得截叶菌落的方法。

一般是将在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，已经形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互的多个单菌落。

通常认为这种单菌落病原体就是某微生物的“纯种”。

实际上同种微生物数个细胞在一起通过一百多个繁殖也可已经形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种马。

平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的接合多采用稀释分离法进行菌种的纯化。

具体的划线为形式有多种，这里仅介绍某种经过长期实践并证明方法获得良好实验效果的可：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离变形虫的菌源区，B和C区为经一般说来初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。

由此可知，这4个区的面积安排理应做到D>C>B>A。

鉴别培养基是在培养基中会加入某种试剂或化学药品，刻苦钻研使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。

这样的培养基称之为鉴别培养基。

例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种鉴别常用的鉴别性质培养基。

（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检测大肠埃希氏菌计数）其配方中成份乳糖、伊红和美蓝，用以比对肠道病原菌及其他杂菌。

伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于霉菌带正电荷，所以被伊红着色。

在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。