孕马血清促性腺激素的生物学测定
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PMSG 或实验三、孕马血清促性腺激素效价的生物学测定(FSH的生物测定法)一、实验目的测定PMS(或FSH的活性,掌握该激素的简易效价测定方法。
二、实验原理FSH为垂体促性腺激素,作用于即将达到性成熟年龄的雌性小白鼠,可促进卵巢上的卵泡发育,分泌雌激素。
在雌激素的作用下,又可促进子宫、卵巢及整个生殖器官的发育、增大。
PMSC 因为也含有FSH,因此具有与FSH相同的生物学作用,也能促进性成熟前的小白鼠子宫发育增大。
PMSC在机体内的作用期比FSH长,因此在测试效价过程中,PMS刮作一次注射,而FSH 需经多次注射。
三、实验材料1实验动物健康无伤残的18-23日龄(即将达到性成熟日龄)、体重9-13g的同源雌性小白鼠。
各测试组实验鼠出生日龄相差不得越过三天,体重相差不得超过2g。
2、测定样品PMSG(或FSH、生理盐水。
3、测定器具1ml注射器、4号针头、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管、吸耳球、酒精棉球、剪刀、镊子、搪瓷盘、解剖板、鼠罐和青霉素瓶(稀释瓶)。
四、测试方法1、测试组的确定为了测得精确效价,应先将各测试样品浓度组距加大进行粗测,从而确定样品的大致效价范围,再将测试样品浓度组距减少,以测得样品较为精确的效价,可按下表选择确定测试组。
①PMSG测试组的确定每0.1mlPMSG按下表加入不同量的生理盐水,稀释成不同浓度作为各测试组。
PMSGe释浓度换算小白鼠单位每mIPMSG中加入生理盐水量稀释液中PMSG^度PMSGJ、白鼠单位(Mu/ml)111/1260151/1680191/20100231/24120271/28140311/32160351/36180391/4020047 1/48 2401 / 343 1/44 2202 / 3②FSH 测试组的确定FSH 是瓶装粉剂,故在配制不同浓度的测试组之前,需用一定量的生理盐水稀释成溶液, 测出每ml 溶液中的效价值后,即可换算出该瓶装内FSH 的效价值。
母猪早期妊娠诊断的方法作者:暂无来源:《江西饲料》 2017年第5期妊娠诊断是母猪繁殖管理上的一项重要内容。
配种后,越早确定妊娠对生产越有利,可以及时补配,防止空怀。
这对于保胎,缩短胎次间隔,提高繁殖力和经济效益具有重要意义。
一般情况下,母猪妊娠后性情温驯,喜安静、贪睡、食量增加、容易上膘,皮毛光亮和阴户收缩。
一般来说母猪配种后,过一个发情周期没有发情表现说明已妊娠,到第二个发情期仍不发情就能确定是妊娠了。
近年来较成熟、简便,并具有实际应用价值的早期妊娠诊断技术主要有以下几个:1 母猪早期妊娠诊断方法1.1 超声诊断法超声诊断法是利用超声波的物理特性,将其和动物组织结构的声学特点密切结合的一种物理学诊断法。
其原理是利用孕体对超声波的反射来探知胚胎的存在、胎动、胎儿心音和胎儿脉搏等情况来进行妊娠诊断。
目前用于妊娠诊断的超声诊断仪主要有A型、B型和D型。
1.1.1 B型超声诊断仪B型超声诊断仪可通过探查胎体、胎水、胎心搏动及胎盘等来判断妊娠阶段、胎儿数、胎儿性别及胎儿状态等。
具有时间早、速度快、准确率高等优点,但价格昂贵、体积大,只适用于大型猪场定期检查。
1.1.2 多普勒超声诊断仪(D型)该仪器可通过测定胎儿和母体血流量、胎动等做较早期诊断。
有实验证明,利用北京产SCD-Ⅱ型兽用超声多普勒仪对配种后15~60d母猪检测,认为51~60d准确率可达100%。
1.1.3 A型超声诊断仪这种仪器体积较小,如手电筒大,操作简便,几秒钟便可得出结果,适合基层猪场使用。
据报道,这种仪器准确率在75%~80%。
试验表明,用美国产PREG-TONEⅡPLUS仪对177头次母猪进行检测,结果表明,母猪配种后,随着妊娠时间增长,诊断准确率逐渐提高,18~20d时,总准确率和阳性准确率分别为61.54%和62.50%,而在30d时分别提高到82.5%和80.00%,75d 时都达到95.65%。
1.2 激素反应观察法1.2.1 孕马血清促性腺激素(PMSG)法母猪妊娠后有许多功能性黄体,抑制卵巢上卵泡发育。
北京华越洋生物提供 QQ:1733351176孕马血清促性腺激素(PMSG )PMSG 也是一种糖蛋白激素,其特点是含糖量高,约占41~45%,而且唾液酸含量多,因而形成了PMSG 的酸性特点,故在血液中的半衰期可长达40—120小时。
PMSG 分子与垂体促性腺激素一样,也是由α和β亚单位组成,而β亚单位是表现其活性的主要部分。
其分子量为53000。
由于分子不够稳定,高温、酸、碱条件都易引起失效,同时对它的分离提纯工作也较其他糖蛋白激素困难,但是目前通过研究其肽链的编码DNA ,已经推出其α、β两亚基的氨基酸顺序。
1.PMSG 具有类似FSH 和LH 的双重活性,但以FSH 的作用为主,因此有着明显的促卵泡发育的作用,同时有一定的促排卵和黄体形成的功能。
2.对雄性动物具有促使精细管发育和性细胞分化的功能。
关于PMSG 对妊娠母马本身的确切功能和生物学特性.至今还了解不够,尚待深入研究论证。
(四)孕马血清促性腺激素的应用PMSG 是一种经济实用的促性腺激素。
在生产上常用以代替较昂贵的FSH 而广泛应用于动物的诱发发情、超数排卵或增加排卵率(如提高双羔率);对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也都可收到一定疗效。
其应用方法和常用剂量列于表2—4。
应该提出的是,在实践中进行诱发发情或超数排卵处理时,发现动物个体对PMSG 的反应性差异很大,有的个体甚至没有反应。
其原因比较复杂,是否与个体生理状态不同,或者不同个体产生不同程度的免疫性反应所致,尚有待进一步探讨。
关于PMSG 与PG 或hCG 等其他激素合用,在胚胎移植中作超排处理的方法、剂量详见有关章节。
(五)孕马全血、孕马血清制备或提取孕马血清促性腺激素的方法编码 品名 规格 单位 北京华越洋生物WX01-1000 孕马血清促性腺激素(PMSG )1000IU 瓶 北京华越洋生物WX01-5000孕马血清促性腺激素(PMSG ) 5000IU 瓶北京华越洋生物提供QQ:17333511761.孕马全血的制备取500ml玻璃瓶,加入硼砂10g、硫代硫酸钠5g及蒸馏水30ml,在蒸锅中灭菌。
动物繁殖学相关复习内容名词解释1___睾丸下降:指家畜等哺乳动物雄性个体在出生前后,睾丸从腹腔内经腹股沟管降入阴囊内的生理过程。
2___适配年龄:指种畜适于开始配种繁殖的年龄。
3___母畜的诱发发情:利用外源性生殖激素使不发情或发情不正常的母畜出现正常发情,也叫催情。
4___同期发情:让一群母畜同步发情5___超数排卵:使母畜在一次发情中超常规地发育更多的卵泡,增加排卵数——提高多胎率、生产用于移植的胚胎6___精子发生:指精子在睾丸内产生的全过程,也叫精子生成。
7___精子发生周期:指精细管上皮细胞出现的精子发生序列,即由A1型精原细胞分裂开始,直至精子细胞变成精子这一过程所需的时间。
8enter精细管上皮周期:在曲精细管同一部位或横断面上出现两次相同细胞群的时间间隔。
9___精细管上皮波:精细管上皮波是指在同一时间内生精细胞群沿着曲精细管的纵长排列的状态。
10___射精量:是指公畜一次射出精液的多少,以毫升数表示。
11___精子密度:指单位容积的精液内所含有的精子数目,通常用亿/ml表示。
12___精子活力:指精子运动的能力。
13___精子活率:指在显微镜视野内呈直线前进运动的精子数占精子总数的百分比,但有时也可与“精子活力”通用。
14___精子的“冷休克”(cold shock):是指精子在缺乏抗冷保护的条件下,受到急剧降温造成的低温打击后,不可逆地丧失正常活动力或生活力的现象。
15___自发性排卵指发育成熟的卵泡自然地发生破裂而排出卵子的哺乳动物排卵类型。
16___诱发性排卵(也称刺激性排卵)指只有受到交配刺激或外源性排卵激素的刺激才发生排卵的哺乳动物排卵类型。
17___发情周期:从一次发情的开始(或结束)到下一次发情的开始(或结束)所间隔的时间。
18___液态精液:指未经冷冻而处于液体状态的精液,包括原精液(新采出的未经稀释的精液)、常温保存的稀释精液和低温保存的稀释精液。
19___冷冻精液:是在超低温条件下进行冻结和保存的固态精液。
孕马血清促性腺激素PMSG的主要作用和功能孕马血清促性腺激素PMSG也称为马绒毛膜促性腺激素。
主要来自妊娠母马子宫内膜杯状细胞。
主要存在于血清中,妊娠后40天左右开始出现,60天达高峰,维持到120天后逐步下降,170天全部消失。
孕马血清促性腺激素PMSG已知在妊娠马属动物(驴、斑马等)都有产生,所以有人称为马属动物绒毛膜促性腺激素(eCG)。
PMSG激素在马以外的物种中有大约4天的生物活性半衰期。
延长的生物活性可以引起卵巢刺激和排卵。
然而,单独使用PMSG通常会导致囊性卵巢疾病,因为不受限制的卵巢刺激和糖分子降低激素的清除率。
由于循环半衰期延长,PMSG比其他垂体激素更有可能被使用。
PMSG仅具有促黄体生成激素样活性,但在其他动物类中,PMSG具有FSH和LH样活性。
孕马血清促性腺激素(PMSG)品种间差异较大。
孕马血清为糖蛋白激素,主要作用和功能有:1、具有与FSH相似的生理功能,促进卵泡发育和黄体形成,可引起母畜超数排卵。
2、对公畜,PMSG促使睾丸的精细管发育和性细胞分化。
在动物繁殖生产和临床上,PMSG常用做FSH的代替品,用于治疗母畜卵巢静止、机能衰退,还可用于超数排卵。
猪的诱导发情常用剂量为750~1000单位;对公畜可治疗性欲不强和生精机能减退。
生产中多与人绒毛膜促性腺激素(hCG)配合使用。
艾美捷代理的孕马血清促性腺激素PMSG是一个复杂的糖蛋白,是从怀孕母马的血清中获得。
这个大小为43-63kDa的蛋白能够补充和替代雄性和雌性体内的促卵泡激素和脑垂体前叶的间隙细胞刺激素。
因此,PMSG –Intervet能刺激雌性卵泡的发育。
实验五孕马血清促性腺激素的生物学测定
一.实验特点
实验类型:设计型实验实验类别:专业基础课
计划学时:4学时每组人数:4~5人
二.实验目的要求
生物学测定法是根据一些动物的靶器官和靶组织对激素反应程度来测定激素含量的方法,是最早应用于激素测定的经典方法,能够直接反应激素的生物活性,也称作激素的生物学效价,其它的测定方法往往以此种方法加以验证。
要求学生通过孕马血清促性腺激素的活性测定,掌握激素的生物学测定方法。
三.实验原理
PMSG的生物学测定法是以即将达到性成熟或摘除垂体的小鼠或大鼠,注射含有待测激素样品后,观察其子宫或卵巢增重及卵泡发育等变化。
凡是引起确定的生理变化的最低有效剂量,即相当于一个效价单位(如小鼠单位或大鼠单位)。
母马在妊娠的40天,PMSG开始出现,增长至70天达到顶峰,持续到120天,每升血液中可达7万国际单位以上,然后开始下降,大约在170天时降到几乎测不出的程度。
PMSG能促进动物卵巢机能,进而引起子宫增生和生长的变化。
以性未成熟的小白鼠子宫增大程度为测定活性的根据,来测定该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低浓度,来进行计算预测定的PMSG样品的活性。
即为能引起未成熟的小白鼠子宫增大一倍PMSG的量称之一个小白鼠单位。
四.实验动物和器材
1.同品系20~21日龄,体重10~12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只(每一实验教学组)。
2.含PMSG血清样品或稀释的PMSG和灭菌生理盐水。
3.5ml注射器5只,5号小针头5只,试管架1个,1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支,吸
耳球一个,10ml试管5支,20ml试管二支,剪子,镊子。
五.实验内容步骤
1.将25只小白鼠随机分为5组,每组5只,其中4组为实验组,另一组做为对照组。
2.取灭菌后的试管4支,分别加人生理盐水11、2、4、6ml,吸取1ml样品血清或
PMSG稀释液加人到第一支试管中,充分混匀。
再取此试管的稀释血清在其他三支试管中各加入2ml,混匀后其血清浓度分别为1/12,1/24,1/36和1/48。
3.用4种浓度的稀释血清各注射小白鼠5只,每只小白鼠腹部皮下注射0.2ml。
要求注射
部位准确,不得外漏,各组小鼠不得混串。
4.另外5只小白鼠按相同剂量注射生理盐水,作为对照组。
5.注射后按常规饲养,待72小时后剖检,并与对照组相比较观察子宫增大情况,每组若
有3只或3只以上的小白鼠子宫呈阳性反应(增大一倍以上),则认为该组浓度为阳性组。
6.将最低的有效浓度血清分母乘5,所得的数值即为每ml血清样品中含有促性腺激素的
小白鼠单位。
六.实验结果
1.所有实验组均为阴性
2.所有实验组均为阳性
第一种情况说明稀释倍数低了,第二种情况稀释倍数高了。
剖检后小白鼠子宫变化记录
七.实验报告要求
认真完成实验报告,写出实验过程和所测得的实验结果并加以分析。