分子生物学实验室常用试剂的配制

分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217)(1) PBS (217)(2) 胰酶Trypin (217)(3) Tris-NH4Cl (217)(4) Running buffer (218)(5) Washing buffer (218)(6) 湿转液 (218)(7) LB培养基 (218)(8) LB培养板 (218)PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。

主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。

配置方法：NaCl : 320g 优级纯Na2HPO4. 12H2O 61.44gKCl 8gKH2PO4 8g三蒸水4L烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。

胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。

细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。

Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。

配置方法：2L 体系：NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O3L体系NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2ORunning buffer: 4L （5X）Tris: 60.6gGly: 288.3gSDS: 20gddH2O 3.78LWashing buffer: 4L (10X)Tris : 48.6gNaCl : 116.9gTween 20 : 40mLddH2O: 3.9L湿转液：4L (10X)Tris: 121.4gGly: 576.6gddH2O 3.57LLB液体培养基：名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤，应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。

试剂配制：1、1 M Tris-HCl (pH 8.0): 称取Tris-Base 121g, 加入约800 ml 水在磁力搅拌器上搅拌，使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000 ml. 灭菌后于室温保存。

2、0.5 M EDTA (pH 8.0): 称取EDTA-Na2盐187 g 加入约800 ml水，在磁力搅拌器上边搅拌边加入固体NaOH，当EDTA和NaOH均完全溶解，溶液变清时其pH值刚好达到8.0左右，再用pH试纸略加调整即可, 灭菌后于室温保存。

3、5.0 M NaCl:称取NaCl 300 g, 加入蒸馏水约800 ml 于磁力搅拌器上充分搅拌，约5分钟后停止搅拌，静止2~3分钟，倒出上清液，再加入100 ml蒸馏水重复前面的步骤，直到NaCl充分溶解后定溶至1000 ml., 灭菌后于室温保存。

4、DNA Buffer的配制：1 M Tris-HCl (pH 8.0) 100 ml0.5 M EDTA (pH 8.0): 100 ml5.0 M NaCl: 300 mlH2O 500 ml灭菌后于室温下保存3个月左右，用时按往Buffer中加入15g CTAB，10g PVP在电炉上烧开；在通风橱里加入1%的巯基乙醇( 现配现用)。

5、5 X TBE溶液配制：约800 ml蒸馏水中加入Tris-base 54 g，硼酸27.5 g，充分溶解后加入0.5 M EDTA（pH: 8.0）定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用，于室温下短期存放。

使用时配制成1×TBE或0.5×TBE稀释缓冲液。

6、1XTE10ml 1M Tris-HCl (pH 8.0)，2ml 0.5M EDTA (pH 8.0)定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用。

分子生物学常用试剂配制与保存一 . 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。

分装成小份贮存于 -20℃。

1mol/L精胺(Spermine :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。

分装成小份贮存于 -20℃。

10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白 (BSA :加 100mg 的牛血清蛋白 (组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于 -20℃。

8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml 。

3mol/L乙酸钠(sodium acetate:溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml 。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。

或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L 。

1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。

25mg/ml IPTG:溶解 250mg 的 IPTG (异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷于 10ml 水中, 分成小份贮存于 -20℃。

100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中, 定容到 10ml 。

LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4（8mM/L ）1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG （1mM/L ）1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp （50-100ug/ml ）10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠（20mm ） 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA （0.5mM ）0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl （100mM ） 5.844g 咪唑（10mM ）0.68g Tris （50mM ） 6.06g 尿素（8M ）484.8g TritonX-100（1%）10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ，离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl （100mM ） 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris （50mM ） 6.06g甘油（5-10%）50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH （2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用，以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1：9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液（2mM/L ）H2SO43705ZZL浓硫酸（98%）21.7ml酸入水中！ddWater 178.3ml。

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.离心管清洗液配制方法：将500mL蒸馏水加入500mL乙醇中配制而成。

2.TE缓冲液配制方法：将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

3.LB培养基配制方法：将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨加入1L蒸馏水中，调整pH至7.0-7.5、将溶液加热，搅拌溶解，然后使用纸滤器滤过，装入含有取10g搅拌均匀的琼脂糖的培养皿中。

灭菌后冷却到45°C左右，然后再倒入培养皿中。

4. 蒸馏水（Milli-Q水）配制方法：使用商用蒸馏水设备如 Milli-Q等，生成去离子水，再通过0.22 μm的滤器进行过滤，获得蒸馏水。

5. LB/Agar培养基配制方法：将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨、15g/L 琼脂加入1L蒸馏水中，调整pH至7.0-7.5、将溶液加热，搅拌溶解，然后使用纸滤器滤过。

将过滤后的溶液倒入培养皿中，灭菌后冷却到45°C 左右。

1.TBE缓冲液配制方法：将1 M Tris-Borate 溶液、0.1 M EDTA 溶液、10% (w/v) Boric acid 溶液按5:19:75的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

2.TAE缓冲液配制方法：将40 mM Tris、20 mM 醋酸和1 mM EDTA 按1:0.5:0.1的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

3. Tris-HCl缓冲液配制方法：将1 M Tris-HCl 溶液加入蒸馏水，调整pH值至所需范围。

4.PBS缓冲液配制方法：将0.2g/LKH2PO4、0.2g/LNa2HPO4、8.5g/LNaCl和0.2g/LKCl加入1L蒸馏水中，调整pH值至7.45. Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）配制方法：将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

分子生物学常用药品配方/data/2007/0513/article_39530.htm一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH 至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

<<分子生物学>>实验课需要的主要试剂序号名称数量价格备注1 无水乙醇500mL×102 醋酸钠500g3 冰乙酸500mL4 氯仿500mL×25 氢氧化钠100g6 异丙醇500mL×27 异戊醇500mL8 氯化钠100g9 葡萄糖100g10 盐酸10mL11 EDTA 200g12 SDS 100g13 胰蛋白胨500g 320.0014 酵母粉500g 170.0015 Tris 200g16 饱和酚250mL×2 110.0017 Amp 1g 20.018 Xgal 200mg 240.0019 IPTG 1g 50.0020 EB 250mg21 琼脂糖100g22 琼脂23 连接酶24 限制酶25 离心管（1.5ml、0.5ml、0.2ml）26 枪头（1ml、100ul、20ul）27 一次性手套28 液氮29需配置的试剂：1.Tris母液：称取Tris（三羟甲基氨基甲烷，分子量121.1）60.55克。

加重蒸水400毫升，加热搅拌溶解，称为Tris母液。

2.10mol/L NaOH溶液称取氢氧化钠（分子量40）20克，先用40毫升重蒸水搅拌溶解后，再加重蒸水定容至50毫升。

3.500mmol/L EDTA（pH8.0）溶液称取EDTA－Ｎa2（乙二胺四乙酸二钠，分子量372.24）18.6克，先用60毫升重蒸水，加10毫升10mol/L NaOH溶液，加热搅拌溶解后，再用10mol/L NaOH溶液调pH至8.0，加重蒸水定容至100毫升，103.4kPa灭菌20分钟。

4.20％SDS溶液称取固体SDS（十二烷基硫酸钠，分子量288.44）20克，加70毫升重蒸水于42℃水溶解，加重蒸水定容至100毫升。

5.3mol/L NaAc溶液称取无水乙酸钠（分子量82.03）24.6克(或称取3H2O·CH3COONa 40.82克)，先加入重蒸水80毫升，加热搅拌溶解，再加重蒸水定容至100毫升，103.4kPa灭菌20分钟。

实验室常用生化试剂配方实验室中常用的生化试剂有很多种，下面是一些常见的生化试剂及其配方的介绍：1.磷酸缓冲液（PBS）PBS是一种常用的缓冲液，用于洗涤细胞和组织，以及稀释试剂等。

它的配方通常包括：-NaCl：8g-KCl：0.2g-Na2HPO4：1.44g-KH2PO4：0.24g将以上试剂溶解于1L去离子水中，调节pH至7.42. Tris缓冲液Tris缓冲液用于调节溶液的pH值，常用于分子生物学实验。

其配方为：- Tris-HCl：12.11 g将Tris-HCl溶解于1L去离子水中，调节pH至所需值。

3.氢氧化钠（NaOH）溶液NaOH是一种常用的碱试剂，可用于调节pH、溶解蛋白质等。

其常见配方为：-NaOH：4g将NaOH溶解于1L去离子水中。

4.氯仿／异丙醇提取液氯仿／异丙醇提取液常用于分离DNA或RNA。

其配方为：-氯仿：24mL-异丙醇：25mL-TE缓冲液：1mL将以上试剂混合，并轻轻摇匀。

5.碳酸氢钠（NaHCO3）缓冲液NaHCO3是一种常用的缓冲液，可用于调节溶液的pH值。

其配方为：-NaHCO3：8.4g将NaHCO3溶解于1L去离子水中，调节pH至所需值。

6.绿色荧光蛋白（GFP）提取液GFP提取液用于提取含有GFP标记的蛋白质。

其配方为：- Tris-HCl（pH 7.5）：50 mM-NaCl：150mM-EDTA：1mM- Triton X-100：1%将以上试剂混合，并用PBS稀释至所需浓度。

7.锌离子（Zn2+）溶液锌离子溶液可用于一些酶活性实验。

其配方为：-ZnSO4·7H2O：2.19g将ZnSO4·7H2O溶解于1L去离子水中。

8.溶血液溶血液常用于红细胞计数等实验。

其配方为：-生理盐水：9mL-甲苯：1mL将以上试剂混合，即可得到溶血液。

这只是一小部分生化试剂配方的介绍，实验室中常用的试剂配方非常多，根据具体实验的需要，需要选择合适的试剂及其配方。

分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方）组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。

2、10*PBS（pH7.2～7.4，分子克隆推荐配方）组分浓度：NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L，KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。

用盐酸调节pH 至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。

3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl 调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。

4、10*Tris-甘氨酸转膜液（pH约8.3）1 L组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。

使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6）组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。

分子生物学实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、 1M Tris-HCl □ 组份浓度 1 M Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0 □ 配制量 1L□ 配制方法 1. 称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中。

2. 加入约 800mL 的去离子水, 充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。

pH值浓 HCl7.4 约 70mL7.6 约 60mL8.0 约 42mL4. 将溶解定容至 1L 。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大, 温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低 0.03个单位。

2、 1.5 M Tris-HCl □ 组份浓度 1.5 M Tris-HCl(pH8.8 □ 配制量 1L□ 配制方法 1. 称取 181.7gTris 置于 1L 烧杯中。

2. 加入约 800mL 的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调 pH 值至 8.8。

4. 将溶液定容至 1L 。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低 0.03个单位。

3、10×TE Buffer □ 组份浓度 100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA(pH 7.4, 7.6, 8.0 □ 配制量 1L□ 配制方法 1. 量取下列溶液,置于 1L 烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0 100mL500 mM EDTA(pH8.0 20mL2. 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水,均匀混合。

3. 将溶液定至 1L 后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、 3 M醋酸钠□ 组份浓度 3 M 醋酸钠(pH5.2 □ 配制量 100mL□ 配制方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O 置于 100~200mL 烧杯中,加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解。

分子生物学实验常用实验试剂配制（一）溶液I（TEG缓冲液）：使用浓度为（25mmol/L Tris-HCl, 10mmol/L EDTA, 50mmol/L葡萄糖，pH8.0）。

1、先称取0.3g Tris加入0.1mol/L HCl溶液14.6mL，配制成pH8.0 Tris-HCl 缓冲液100mL；（1mol/L HCl溶液：即取8.6毫升36%的盐酸加水、搅拌、定容至100毫升即可；或37% 的HCL相当于约12mol/L，即稀释12倍）2、再加入0.37g EDTA·Na2·2H2O和[0.99g（Glucose.H2O，分子量198.17）或0.9g Glucose，分子量180.1572]葡萄糖，灭菌后4℃保存备用。

（二）溶液II （碱裂解液）：使用浓度为（0.2 mmol/L NaOH, 1% SDS）。

配制母液：0.4M NaOH 称1.6g NaOH 定溶于100 mL蒸馏水；2% SDS 称2 g定溶于100 mL蒸馏水。

常温保存，使用时等体积混合。

（三）溶液III（乙酸钾溶液）：使用浓度（pH8.0, [K +]=3mol/L, [Ac -]=5mol/L）。

1、先配制60mL 5 mol/L KAc；称g KAc 定容至60 mL。

2、再加入11.5mL冰乙酸和28.5mL蒸馏水。

4℃保存备用。

（四）LB培养基配制：LB（液体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，加水50ml。

LB（固体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，0.75g琼脂粉，加水50ml。

（五）琼脂糖凝胶：琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。

1.称量：我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的TBE缓冲液的体积（mL）即胶的浓度。

缓冲液的体积根据胶板的大小而定。

分子生物学常用试剂配制抗生素溶液配制分子生物学常用试剂配制方法庆大霉素盐酸壮观霉素1．称取1g粉末置于10ml塑料离心管中。

2．加入9ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至10ml。

3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

100ml培养基加100ul。

（在培养基中浓度为100ug/ml）Ampicillin(氨苄青霉素)﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法1．称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

100ml培养基加100ul。

（Amp在培养基中浓度为100ug/ml）Kanamycin（卡那霉素）﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

100ml培养基加100ul。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)﹡组分浓度 24mg/ml IPTG﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．用0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．小份分装（1ml一管）后，置于-20℃避光保存。

RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A﹡配制量 50ml﹡配制方法 1．取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。

实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500 mM EDTA（pH8.0）20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。

(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。

(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。

(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。

将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。

凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。

(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。

(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。

分子实验室细胞实验室常用配方CKBOOD was revised in the early morning of December 17, 2020.（一）WB相关试剂及常用缓冲液●RIPA（100mI）（最后要调pH为）●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度）AP粉末 1gddH20 10ml●10％SDS（十二烷基硫酸钠）：SDS粉末 10gddH20定容到 100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡●6X蛋白质sample bufferTris-HCl(1M, 30mLSDS 10g甘油 30mLDTT（）溴酚蓝dd H20 定容至100mL●10XPBS缓冲液的配制：NaCl 80gKCl 2gNa2HPO4（十二水合36g）KH2PO4加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到，调好pH再定容到1升。

配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度●PBST(1X)PBS(1X) 500mlTween 20 500μl●50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量● Tris粉末 242g冰醋酸Na2EDTA·2H2O 37.2gddH20定容到 1L●封闭液脱脂奶粉 5g叠氮钠 (现配现用时可不加)PBS 定容到100mL●染色液(室温)●脱色液：(室温)甲醇 165mL乙酸 50 mLH20 785 mL●:（调pH至,4度保存）● Buffer: （调pH至,4度保存）●10Х)TBS: （常温保存）NaClTris粉末0 定容至1LddH2●TBST(1X)TBS(1X) 500mlTween 20 500μl●Stripping buffer(可反复利用)温老师组配方10%SDS 10mlΒ-巯基乙醇 350 lTris-HCI（）（加到50mL水）加入ddH2O 至50mLStripping buffer(可反复利用)郭老师给配方甘氨酸 15gSDS 1gTween20 1mlO 1Ldd ddH2作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。