通过对LB培养基的配制

发酵用lb培养基的配置方法一、前言发酵是一种生物技术，广泛应用于食品、医药、化工等领域。

而发酵过程中所需的培养基是至关重要的。

本文将介绍一种常用的发酵用LB 培养基的配置方法。

二、材料准备1. 水：去离子水或蒸馏水。

2. Tryptone：来源于胰蛋白。

3. Yeast extract：来源于酵母。

4. NaCl：纯度在99%以上。

5. pH试纸或pH计。

三、步骤1. 称量所需材料按照以下比例称取所需材料：Tryptone: 10 g/LYeast extract: 5 g/LNaCl: 10 g/L2. 加入水中将称好的Tryptone、Yeast extract和NaCl加入到水中，搅拌均匀。

3. 调节pH值使用pH试纸或pH计检测溶液的pH值，如果不符合要求，则需要进行调节。

LB培养基的pH值应该在7.0左右。

可以使用NaOH或HCl 来调节溶液的pH值，每次加入少量，并且搅拌均匀后再次检测pH值，直到达到目标值。

4. 加水至定容将溶液加水至定容，搅拌均匀。

5. 灭菌将制备好的LB培养基装入培养瓶中，使用高压灭菌器或自动灭菌器进行灭菌。

也可以使用滤器过滤法进行灭菌。

四、注意事项1. 材料的纯度要求较高，以保证培养基的质量。

2. 操作时要注意卫生和无菌操作，以防止污染。

3. 在制备LB培养基时要严格控制pH值，以保证发酵效果。

4. 制备好的LB培养基应该在4℃下保存，并在一个月内使用完毕。

五、总结本文介绍了一种常用的发酵用LB培养基的配置方法。

通过严格控制材料比例和pH值，可以得到高质量的LB培养基。

在实际应用中，还需要注意卫生和无菌操作，以保证发酵效果。

实验室常用培养基的配制方法在实验室中，培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础，正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。

不同的微生物对营养物质的需求有所不同，因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基，并掌握正确的配制方法。

接下来，我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。

一、LB 培养基（LuriaBertani 培养基）LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基，其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。

配制 1L 的 LB 培养基，所需材料如下：胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤：1、称取上述成分，将其放入一个干净的 1L 烧杯中。

2、加入约800ml 的去离子水，用玻璃棒搅拌，直至溶质完全溶解。

3、用去离子水将溶液定容至 1L。

4、调节 pH 值至 70（通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节）。

5、将培养基分装到锥形瓶中，每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。

6、盖上瓶塞，用报纸或牛皮纸包扎瓶口。

7、放入高压灭菌锅中，在 121℃下灭菌 20 分钟。

二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，适用于多种细菌的培养。

配制 1L 该培养基，需要准备以下材料：牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下：1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入干净的烧杯中。

2、加入适量的去离子水，搅拌溶解。

3、定容至 1L，搅拌均匀。

4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。

5、分装、包扎、灭菌，方法同上。

三、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）PDA 培养基常用于培养真菌，尤其是霉菌。

配制 1L 的 PDA 培养基，材料如下：马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程：1、将马铃薯去皮，切成小块，称取 200g，放入锅中，加入约1000ml 去离子水，煮沸 20 30 分钟，直到马铃薯块变软。

1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。

若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。

若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。

4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。

5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。

若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。

发酵用lb培养基的配置方法
1. 准备材料：
- 水：用纯净水或去离子水，约100 mL
- Trypton(胰蛋白胨)：10 g
- 酵母提取物：5 g
- NaCl：10 g
- pH试纸或pH计
- 高压灭菌器或离心机
2. 在水中加入Trypton (10 g)，酵母提取物 (5 g) 和NaCl (10 g)，搅拌至完全溶解。

3. 调节pH值：使用pH试纸或pH计检测溶液的pH值，将其
调整为7.0。

通常使用氢氧化钠（NaOH）或盐酸（HCl）进
行调节。

4. 将培养基分装到高压灭菌器或离心机中，并进行高温高压灭菌处理，约121°C下压力15磅，大约20-30分钟。

5. 培养基冷却后，可分装入无菌瓶中，并储存在4°C下可达
数月之久，即可使用。

以上便是发酵用lb培养基的简单步骤。

特别提示，实验室操
作过程中务必遵守实验室操作安全规定。

lb培养基简介lb培养基是一种常用的微生物培养基，被广泛应用于实验室中的细菌培养和研究工作中。

它以兰伯特(Luria)和贝斯特好(Bertani)的姓氏命名，常用于培养大肠杆菌和其他革兰氏阴性菌。

该培养基提供了微生物所需的营养物质和条件，使得细菌能够生长和繁殖。

组成lb培养基的基本组成包括以下成分：•蛋白胨：提供氮源和碳源，促进细菌生长；•酵母提取物：富含维生素和氨基酸，提供细菌生长所需的维生素和营养物质；•氯化钠：调节溶液的渗透压，维持细胞内外的平衡；•磷酸二氢钾：提供磷源，促进生物体新陈代谢的正常进行；•葡萄糖：提供碳源，供细菌进行能量代谢和生长。

除了上述基本成分，lb培养基还可根据实验需要添加其他物质，如抗生素、色素等。

制备方法以下是lb培养基的制备方法：1.准备所需材料和设备，包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、纯水、容量瓶、搅拌棒等。

2.根据需要测量和称量上述成分的适量，按照以下比例加入容量瓶中：–蛋白胨：10克/升–酵母提取物：5克/升–氯化钠：5克/升–磷酸二氢钾：2.5克/升–葡萄糖：1克/升3.加入适量的纯水，使溶液充分溶解。

4.使用搅拌棒充分搅拌混合，确保溶液均匀。

5.将溶液倒入无菌培养瓶或试管中，根据需要分装不同体积的培养基。

6.对培养瓶或试管进行高温高压灭菌，消除培养基中的细菌和其他微生物。

7.灭菌后的培养基可在低温条件下储存，以备后续实验使用。

应用lb培养基在微生物学实验中有广泛的应用，主要用于以下方面：1.细菌培养：lb培养基提供了细菌生长所需的营养物质和条件，促进细菌的生长和繁殖。

它常被用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌，用于基因转化、蛋白表达等实验。

2.细菌存储：lb培养基也可用于细菌的长期储存。

培养出的细菌可通过分装到含有20%-40%甘油的lb培养基中，并冷冻保存在-80°C的低温条件下，可长期保存细菌种。

3.抗生素筛选：lb培养基可作为筛选培养基，用于检测细菌对不同抗生素的敏感性。

LB培养基：10 g牛肉膏蛋白胨，5 g酵母浸膏，2 g氯化钠(NaCl)，0.1 g 葡萄糖(C6H12O6)，5 g乳酸钠(C3H5NaO3)溶于1 L水，自然pH值；固体培养基中加入2.5%的琼脂。

取制得的土壤样品用于分离筛选重金属抗性菌株，称取10 g晒干的土壤样品于150 ml已灭菌的锥形瓶中，加入10 ml灭菌培养基，于30 ℃培养箱中培养4 d，在火焰旁放入装有100mL无菌水的锥形瓶中，震荡10min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，制成稀释度为10-1的土壤悬液。

另取6支装有9ml无菌水试管，用特种铅笔编写10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，放在试管架上。

让制好的10-1土壤悬液静止0.5min，取1支无菌移液管，从移液管包装纸上半段（近吸管口）撕口，将包装纸分成上下两段，去上段包装纸，左手持锥形瓶底，以右手掌及小指、无名指夹住锥形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞（棉塞夹在手上，不得放在桌面上），去下段包装纸，将移液管吸液端伸进锥形瓶内，吸取1ml土壤悬液（常用嘴巴吸取，也可用定量移液器或自动移液器吸取），右手将棉塞插回锥形瓶上，左手放下锥形瓶，换持编号为10-2的无菌水试管，在火焰旁拔出棉塞（试管塞），将移液管伸进无菌水试管内，放入土壤悬液，并在试管内反复吹吸3次，使之充分混匀，制成10-2土壤稀释液，取出移液管，插回棉塞（试管盖）。

接着换一支无菌移液管，按照前面的方法从编号为10-2的试管中吸取1mL稀释液，加入编号为10-3的无菌水试管中，混匀后制成10-3土壤稀释液。

继续上述操作，一次制成10-4、10-5、10-6土壤稀释液。

本次实验共取样6份，随机抽取两份土样，按照上述方法制备土壤稀释液Ⅰ组和Ⅱ组，待下面实验备用。

用移液枪从第Ⅰ组和第Ⅱ组的10-4、10-5和10-6稀释液中分别取0.1 ml 接种于含有重金属的LB固体培养基上(0，0.005,0.01,0.02,0.05,0.1g/L)，编号分别为A、B、C、D、E、F，轻轻转动平板，将菌液用三角棒涂布于培养基上，将平板倒置于30℃培养箱中培养5 d，观察菌落的形态，采用常规平板划线法分离纯化，并用相机拍照。

LB 【2 】造就基如何配制LB一般被说明为Luria-Bertani,然而依据其创造人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字起源于英语lysogeny broth,即溶菌肉汤.LB造就基是近年来用于造就基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用造就基之一.LB造就基是一种运用最普遍和最通俗的细菌基本造就基,有时又称通俗造就基,含有酵母提取物.胰化蛋白胨和NaCl.酵母提取物：酵母经破壁后将个中蛋白质.核酸.维生素等抽提,再经生物酶解的富含小分子的氨基酸.肽.核苷酸.维生素等自然活性成分的淡黄色粉末,个中氨基酸含量30%以上,总蛋白50%以上,核苷酸10%以上,普遍用作生物造就基和食物调味品制作原料.胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨,是以新颖牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩湿润而成的白色粉末,含有丰硕的氮源.氨基酸等.酵母提取物为微生物供给碳源.能源.磷酸盐.发展因子.维生素等;蛋白胨重要供给氮源;NaCl重要供给微生物发展情况(如渗入渗出压),其次是供给无机盐.在配制固体造就基时还要参加必定量琼脂作凝固剂.琼脂在常用浓度下96℃时熔解,一般现实运用时在滚水浴中或垫以石棉网直接煮沸熔解.琼脂在40℃时凝固,平日不被微生物分化运用.固体造就基中琼脂的含量依据琼脂的质量和蔼温的不同而有所不同.因为这种造就基多用于造就细菌,是以,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的发展滋生.LB造就基配方(每升)酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0,121℃.20min高压灭菌.LB固体造就基LB造就基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0,121℃.20min高压灭菌.有时需在造就基中添加抗生素,琼脂凝固点为40℃,所以添加抗生素最好在50～55℃.LB造就基用处：用于一般细菌造就,特殊用于分子生物学实验中大肠杆菌的保存和造就.LB造就基运用道理：蛋白胨.酵母膏粉供给氮源.维生素和发展因子;氯化钠保持平衡的渗入渗出压;葡萄糖供给碳源;琼脂是造就基的凝固剂.LB造就基配制办法配制每升造就基,应当在950 ml去液态lb造就基离子水中参加：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 动摇容器直至溶质消融.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.1.LB固体造就基1L和液体一样,加15g琼脂粉,必定要在温度降下之前加好抗固态LB造就基生素,并且倒好板.LB固体造就基倒板1.配制：100mlLB造就基参加1.5g琼脂粉2.抗生素的参加：高压灭菌后,将熔化的LB固体造就基置与55℃的水浴中,待造就基温度降到55℃时(手可触摸)参加抗生素,以免温渡过高导致抗生素掉效,并充分摇匀.3.倒板：一般10ml倒1个板子.造就基倒入造就皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟.4.保存：用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内运用. 配400ml的话成分按比例削减就行了,pH照样要按划定的.。

如对您有帮助，请购买打赏，谢谢您！1．称量：准确称取各成分。

蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。

配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。

2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。

配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。

4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。

将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。

5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。

向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。

否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。

三、灭菌和消毒1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。

3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

lb培养基配制实验报告Title: LB Agar Medium Preparation Experiment ReportIntroduction:LB (Lysogeny Broth) agar medium is a commonly used nutrient-rich medium for the growth of bacteria in laboratory settings. It contains essential nutrients such as peptides, amino acids, and vitamins, making it an ideal medium for the cultivation of a wide range of bacterial species. In this experiment, we aimed to prepare LB agar medium and assess its effectiveness in supporting bacterial growth.Materials and Methods:1. Weighing scale2. Erlenmeyer flask3. Distilled water4. LB agar powder5. Autoclave6. Petri dishes7. Inoculating loop8. Bacterial cultureProcedure:1. Weigh 25g of LB agar powder and add it to 1L of distilled water in an Erlenmeyer flask.2. Mix the solution thoroughly to ensure the agar powder is completelydissolved.3. Place the flask in an autoclave and sterilize the LB agar medium at 121°C for 15 minutes.4. After sterilization, allow the medium to cool to around 50°C before pouring it into petri dishes.5. Once the agar has solidified in the petri dishes, inoculate them with a bacterial culture using an inoculating loop.6. Incubate the petri dishes at the appropriate temperature for the growth of the specific bacterial species used in the experiment.Results:The LB agar medium prepared in this experiment successfully supported the growth of the bacterial culture. Colonies of the bacteria were observed on the petri dishes after incubation, indicating that the medium provided the necessary nutrients for bacterial growth.Discussion:The successful preparation of LB agar medium is essential for the study of bacterial biology and genetics. The nutrient-rich composition of LB agar allows for the robust growth of bacteria, making it a valuable tool for microbiological research. By providing a suitable environment for bacterial growth, LB agar medium enables the isolation and characterization of bacterial strains, as well as the study of bacterial physiology and metabolism.Conclusion:In conclusion, the preparation of LB agar medium is a fundamental skill in microbiology. This experiment demonstrated the successful preparation of LB agar medium and its effectiveness in supporting bacterial growth. The use of LB agar medium is essential for the study of bacterial biology and is a valuable tool for researchers in the field of microbiology.。

实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种，包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。

下面以常用的LB培养基和M9培养基为例，介绍它们的配制方法。

1. LB培养基（Luria-Bertani agar）LB培养基是一种通用培养基，适用于许多不同类型的细菌。

它由三种主要成分组成：蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。

配方如下：-蛋白胨：10克-酵母提取物：5克-NaCl：10克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。

2)加入适量的精制水，搅拌溶解。

3) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。

4)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。

2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基，常用于细菌的生长和培养。

它的配方相对简单，由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。

配方如下：-Na2HPO4：6克-KH2PO4：3克-NaCl：0.5克-NH4Cl：1克-葡萄糖：0.4克-维生素B1：0.1克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。

2)加入一部分的精制水，搅拌溶解。

3)加入葡萄糖和维生素B1，搅拌均匀。

4) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。

5)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。

以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。

当然，实验室中还有很多其他种类的培养基，它们的配制方法也各有不同，需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。

在培养基配制过程中，应当注意严格按照配方比例配制，保持清洁卫生，避免污染，并注意高压灭菌的操作安全。

LB培养基是一种近年来用于培养基因工程受体菌（大肠杆菌）的常用培养基。

LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。

LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。

其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基的配方如下：酵母提取物 5g蛋白胨 10gNaCl 5g琼脂 15～20g水 1000mLpH 7.4～7.6三、器材酵母提取物，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。

另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。

如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。

LB培养基LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增,达到使用要求。

培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。

通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。

成分表(1L溶液中)：Tryptone(胰蛋白胨)：10gYeast Extract(酵母提取物)：5gNaCl(氯化钠)：10g若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)，切记琼脂直接加入瓶子中，因为它很黏很难冲洗下来。

若配制低盐培养基，则全部减半。

液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种 E.coli的生长）。

用去离子水定容至1L。

121℃高压灭菌20min。

高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 分装100mg/ml，使用浓度100μg/ml在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液）。

瓶盖用封口膜封好，4℃保存。

固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉。

高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液），并且倒好培养皿（大约1/3高度）。

1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：121℃高压灭菌20min。

高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

3.倒板：一般10ml倒1个板子。

培养基倒入培养皿后，打开盖子，紫外照射10-15分钟。

LB平板制备：Amp终浓度为100μg/ml（1）配制LB液体培养基（无Amp）按25g/l 称取6.25 g LB powder ，加入250 ml 锥形瓶中，再加入250 ml dd H2O，用双层铝箔封口121℃，20 min，灭菌。

（2）配制LB固体培养基（含有Amp）1）按15 g/l称取3.75 g Agar加入已有6.25 g LB powder 的250 ml锥形瓶中，加入250 ml ddH2O，双层铝箔封口。

121℃，20 min，高温高压灭菌。

2）带培养基冷却至55 ℃左右时，按1：1000 加入250μl Amp stock（100mg/ml）使终浓度为100μg/ml，即工作浓度。

摇匀，同时避免产生气泡。

3）趁热倒平板，每个表面皿约25 ml左右，冷却成形后，倒置，用保鲜膜，5个一组封装，防止变干，于4℃保存。

（3）分装1）将LB液体培养基1ml/EP管分装，于-20℃保存2）将灭菌水1 ml/EP管分装，于-20℃保存3）将A mp stock 按1 ml/EP管分装，用封口膜封口，-20℃保存（4）80%甘油灭菌分装1）按1：4将灭菌水与甘油充分混合，得80%甘油2）每EP管分装250μl，121℃，20 min高温高压灭菌，-20℃保存50*TAE buffer：242 gTris，57.1 ml 冰醋酸100 ml，0.5 mol/l EDTA （PH8.0），定容至1 LTBE buffer：Tris ,Boric acid ,EDTA.16.87g TBE Powder溶于1L ddH2O10*PBS: NaCl 80g,KCl 2g,Na2HPO4 6.1g,KH2PO4 1.9g 加ddH2O定容至1L,调PH 为7.350*TE Buffer: 500μl 1M Tris-HCl 和100μl 0.5M EDTA于50ml ddH2O中DEPC水：按0.1%比例将1 mlDEPC加入1L ddH2O中，摇匀，37℃温育至少12 h。