培养基配制及消毒与灭菌及LB培养基制备资料讲解

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

培养基配置和灭菌的注意事项一、培养基配置1.选用适当的培养基组成：根据实验的需要选择适当的培养基成分，包括碳源、氮源、矿质盐、维生素等。

根据不同微生物的要求，可以选择不同的培养基，如富集培养基、选择性培养基等。

2.正确计量和混合培养基成分：根据实验需要和比例，精确地称取和混合培养基成分。

注意避免污染和交叉污染，使用干燥器、称重纸和清洁器具等进行操作。

3.正确调节培养基的pH值：根据不同微生物的偏好，调节培养基的pH值。

使用pH计和相应的酸碱溶液进行调节，确保培养基的pH值符合微生物的需求。

4.加热溶解和固化培养基：将培养基成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌溶解，然后分装到培养皿或试管中。

对于固化培养基，需要加入适量的琼脂或琼脂糖，在混合均匀后加热至溶解，然后分装到培养皿或试管中。

二、培养基灭菌1.选择合适的灭菌方法：有常见的三种灭菌方法，包括热处理（如蒸汽灭菌、热风灭菌）、化学灭菌和滤器灭菌。

根据实验需求和培养基的性质选择合适的灭菌方法。

2.准备合适的灭菌器具：根据实验需求和培养基的量，选择合适的灭菌器具，如蒸馏锅、高压灭菌器、紫外线灭菌箱等。

3.正确操作灭菌设备：根据灭菌设备的说明和操作指南，正确操作和调节灭菌设备。

4.合理选择灭菌时间和温度：根据不同培养基的特性和实验需求，合理选择灭菌时间和温度。

通常情况下，蒸汽灭菌的时间为15-30分钟，温度为121摄氏度；热风灭菌的时间为1-2小时，温度为160摄氏度。

5.注意灭菌后的处理：在灭菌后，及时关闭灭菌设备，避免灭菌后的污染。

将培养基冷却后，进行温度验证，然后保存在合适的温度和条件下。

实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。

下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。

1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。

其配方如下：- Tryptone：10g/L- Yeast extract：5g/L-NaCl：10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。

用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。

其配方如下：- Peptone：10g/L- Dextrose：40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）DMEM培养基常用于细胞系的培养。

其配方如下：-DMEM粉：每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。

调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。

其配方如下：-Na2HPO4：6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。

培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。

本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。

一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。

常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。

1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。

首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。

随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。

最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。

二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。

灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。

2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。

高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。

化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。

紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。

2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。

培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。

器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。

工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。

结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。

正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。

通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。

参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。

培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。

其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。

以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法：1. LB培养基（Luria-Bertani）LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基，其配方包括：- 1% 蛋白胨（tryptone）: 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉（yeast extract）: 提供维生素和生长因子-1%NaCl（氯化钠）:调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入1.5%的琼脂。

2. YPD培养基（Yeast extract-Peptone-Dextrose）YPD培养基常用于酵母菌的培养，其配方包括：- 1% 酵母提取物（yeast extract）: 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨（peptone）: 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖（dextrose）: 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入2%的琼脂。

3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基，其配方包括：-10%胎牛血清（FBS）:提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液（Penicillin-Streptomycin Solution）: 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺（L-Glutamine）: 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水：使混合液体稀释至所需体积配制方法：将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中，调整pH值至7.4，混合均匀即可。

培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，保证培养基无菌，为微生物实验提供良好的生长条件。

一、培养基的制备。

1.1 培养基的组成。

培养基是微生物生长和繁殖的营养物质，通常包括碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。

根据不同微生物的需求，培养基的组成也有所不同。

1.2 制备步骤。

（1）称取适量的葡萄糖、蛋白胨、氯化钠等原料；（2）加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（3）调节pH值，通常为7.0-7.2；（4）分装至试管或培养皿中，加入琼脂（如需要固体培养基）；（5）高压蒸汽灭菌15分钟。

二、培养基的灭菌实验。

2.1 灭菌方法。

培养基的灭菌是为了保证培养基中无菌，通常采用高压蒸汽灭菌法。

在高压下，微生物及其孢子、病毒等能够被有效杀灭。

2.2 实验步骤。

（1）将制备好的培养基分装至试管或培养皿中；（2）密封好容器，放入高压灭菌锅中；（3）加水至适当高度，密封锅盖；（4）加热至121摄氏度，压力达到1.05kg/cm2后开始计时，持续15分钟；（5）关火，等待冷却后取出培养基。

实验结果，经过高压蒸汽灭菌处理后，培养基中无任何微生物生长。

证明培养基已达到无菌状态，可以用于微生物的培养和实验。

结论，通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物实验提供了良好的条件。

同时，也加深了对无菌技术的理解和应用。

参考文献：[1] 陈华. 微生物学实验指导. 北京，高等教育出版社, 2015.[2] 王明. 实验室微生物学. 上海，上海科学技术出版社, 2018.以上为培养基的制备与灭菌实验报告。

（文档结束）。

培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。

培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。

就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。

按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。

固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。

⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。

此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。

培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。

灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。

物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。

消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。

(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。

配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。

(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。

.培育基的配制及灭菌一．实验目的1.三角瓶，培育皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的冲洗。

2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培育皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装与灭菌。

3.高温蒸汽灭菌原理的学习。

4.LB 和 MacConkey培育基的制作与灭菌。

二．实验原理1.高温灭菌的原理：因为培育基配置过程中并不是是无菌操作，所以要经过立刻灭菌来防备配制过程中混入的杂菌利用培育基中的营养物质进行生殖进而损坏培育基的性能。

高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，成效最好的一种湿热灭菌法。

在密闭的蒸锅内，此中的蒸汽不可以外溢，压力不停上涨，使水的沸点不停提升，进而锅内温度也随之增添。

在 0.1MPa的压力下，锅内温度达 121℃。

在此蒸汽温度下，能够很快杀死各样细菌及其高度耐热的芽孢。

注意：①使用高压蒸汽灭菌前必定要完好清除锅内空气，使锅内所有是水蒸气，灭菌才能完全。

不然在同一压力下，锅内实质温度和理想温度就会有差距，不可以达到最好灭菌成效。

②在使用灭菌锅前切勿忘掉加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而惹起炸裂事故。

③使用完后要等到压力降为零再翻开锅盖，不然会因为锅内外压力不均衡而致使棉塞蹦出造成污染，也简单损害到操作者。

2.培育基的配置原理：微生物的生长依靠于可利用的营养物质和适合的生长环境。

培育基是用于培育，转移，储存微生物的固体，半固体或液体的营养物质。

培育基中含有微生物所需的所有营养物质，包含碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。

适合的 pH对微生物的生长是必不行少的。

培育基的物理状态有三种：液体、半固体和固体。

这些培育基的主要差别是在固体和半固体培育基里面加了固化剂------琼脂。

当将琼脂加入溶液中时，在98℃能消融成有必定粘性的液体。

并在42℃凝结。

琼脂拥有的特征有：不易被微生物降解；靠近无色等。

关于固体培育基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%，半固体培育基加入约 0.6%~0.8%。

培育基在配制过程中简单遇到污染，所以一定进行灭菌，同时不可以将培育基中的营养物质损坏。

实验3 培养基的配制及消毒灭菌第一讲、培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。

内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。

2．高氏1号培养基的配制。

3．马丁氏培养基的配制。

二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。

试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。

三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。

其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。

牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

2．加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。

若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。

3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。

若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。

pH的调节通常放在加琼脂之前。

应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。

但是供一般使用的培养基，这步可省略。

5．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。