Interlab G26碱性血红蛋白电泳

实验汇报实验名称：血红蛋白电泳项目名称：两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果实验时间：2018年9月17日实验室：龙泉驿区妇幼保健院检验科实验人员：杨松报告单位：成都温伦科技有限公司一、实验目的：1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法3、掌握电泳仪实验的操作4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同二、实验原理：血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术，在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。

三、实验方法：琼脂糖电泳法四、实验器械：样品：10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品试剂：0.9%生理盐水500ml，四氯化碳500ml，界面液250ml，美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒器材：移液枪，一次性移液枪头若干，EDTA抗凝管10个，玻璃试管10个设备：美国Helena Spife3000 全自动电泳仪五、实验步骤：1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个，编号为1，2,3......10。

2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中，编号为1-1,2-1,3-1,.....10-1。

3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理，处理方法如下：-用0.9%生理盐水混匀，3500 rpm离心10分钟.-吸走弃去清液。

-以上步骤连续进行三次。

-完全吸走弃去上清液。

-20ul制作后的样本+80ul溶血素，混匀。

-取溶血后的样本17ul加入样品孔。

4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理，处理方法如下：-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。

-3000rpm离心5分钟。

-弃去上清液，只留下红细胞。

-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。

-加入300ul 的四氯化碳，混合均匀，3000rpm离心5分钟。

Microgel与Interlab G26碱性血红蛋白电泳程序（试剂盒：SRE604K）█ 用途Microgel/Interlab G26碱性血红蛋白电泳试验试剂盒用于采用琼脂糖凝胶(agarose gel)分离正常血红蛋白(A1、A2及F）与某些异常或变异血红蛋白(S或D和C或E)的体外诊断。

为了区分血红蛋白S与D或C与E，必需一种相互确证试验，如酸性血红蛋白电泳。

本电泳试验在碱性p H条件下进行，并提供有价值的血红蛋白电泳图扫描方法。

电泳图的光密度测量可对血红蛋白条带的相对定量。

试剂盒SRE604K设计用于全自动仪器Microgel/Interlab G26。

█ 概述血红蛋白(Hb)是在红细胞中发现的一种蛋白质，其作为氧气（O2）载体而扮演重要角色，氧气在肺部与血红蛋白结合，并释放到组织和器官中以维持细胞的生命力。

血红蛋白分子是一种含有2种不同类型蛋白质（称为珠蛋白）成对组配而成的四聚体。

α型珠蛋白总是存在于各种正常血红蛋白中，其他类型的珠蛋白(称为β、δ、γ等）决定不同的血红蛋白分子，并决定其生物学功能。

每条珠蛋白链中含有一个亚铁血红素(其中有1个铁原子）。

正常成人红细胞中存在3种不同类型的血红蛋白，HbA是主要类型，同时还在少量的HbA2及HbF。

这些血红蛋白是由以下珠蛋白链组合成分的1、2：血红蛋白的合成受基因控制。

α珠蛋白链有4个编码基因，而β珠蛋白链只有2个编码基因。

在胎儿期，有2个附加基因负责γ链的合成。

尽管基因数不同，但α和β链的蛋白质合成产生等数量的多肽链，这些肽链在成熟中的红细胞中装配成血红蛋白。

这些基因的核苷酸顺序可能由于经历一个称为突变的过程而发生偶然性改变，突变最终导致多肽链上的氨基酸替代，产生一种修改的血红蛋白分子。

这些突变血红蛋白(mutant hemoglobin)也称为变异血红蛋白(variant hemoglobin），其分子结构可能显示最终引起病理状况的质变，这些病理状况称为血红蛋白病1、2、5。

血红蛋白电泳操作规程一．项目名称血红蛋白电泳（HYDRAGEL HEMOGLOBIN）二．检验方法名称琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。

氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。

血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。

血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。

实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。

四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。

五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约45个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约半小时4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）试剂盒HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：70测试/150测试（3）货号：PN4106/ PN41262．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540(4) 成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．生理盐水（二）配套品血红蛋白质控（1）商标：SEBIA(2) 包装规格：Pack for 1×1ml(3) 货号：PN4791七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。

碱性血红蛋白电泳说明书意大利Interlab公司Via Rina Manti,26-00155 Roma +39-06-227.54.350用途：此碱性血红蛋白电泳试剂的包装是用于696PC系统的电泳试剂，此试剂可对人类的正常血红蛋白如H-A,H-A2和H-F通过琼脂糖凝胶的方法进行定性和定量的分离，以及可检测出异常的血红蛋白如S,C,D,E等概述血红蛋白合成受遗传基因的控制，并且异常血红蛋白的出现会引起红细胞形态和功能的变性。

血红蛋白是由珠蛋白肽链和含有铁的原卟啉组成。

正常的血红蛋白结构相似，分子量在67000道尔顿左右，由两对珠蛋白肽链和1个亚铁血红素组成。

HbA: 多肽链 2α和2βHbA2: 多肽链 2α和2δHbF: 多肽链 2α和2γ正常成人血红蛋白中，HbA占总蛋白浓度的98％，HbA2和HbF相对数量少些。

珠蛋白肽链中某一氨基酸被其他氨基酸所取代会导致Hb变异即可出现血红蛋白病。

目前可鉴定出600多种变异的血红蛋白即结构变异的血红蛋白（S 、C、 E、 D、G、 H、 I 、Lepore等）。

在异常的血红蛋白中约有60％血红蛋白会有电荷差异，这样可用电泳的方法对这些血红蛋白进行鉴定。

HbC和HbS是两种常见的变异的血红蛋白。

HbA伴随有S,C,E等变异的血红蛋白出现称为杂合子血红蛋白病如AS或AC等。

只有一种变异的血红蛋白的出现称其为纯合子血红蛋白病如HbS病、HbC病等。

这些变异的血红蛋白一般可导致地中海贫血。

纯合子型血红蛋白病可引起一系列的临床症状。

碱性血红蛋白电泳主要用于分离正常血红蛋白如HbA、HbA2和异常或变异的血红蛋白（HbS、“快速”血红蛋白和D、C、E）。

然而，在碱性Hb电泳中，一些正常的和异常的血红蛋白有相同的迁移率即这些蛋白质在同一位点（如HbA2与HbC，HbS与HbD）琼脂糖酸性血红蛋白电泳可确定HbS或HbC。

原理：根据蛋白质亚结构的电荷分布，在一定的PH值条件下，蛋白质分子可表现出有极性或非极性。

血红蛋白电泳的原理血红蛋白电泳是一种常用的实验方法，用于研究血红蛋白的组成和性质。

它基于电泳原理，通过将血红蛋白样品置于电场中，并利用血红蛋白的电荷和大小差异，将其分离成不同的带状图谱。

血红蛋白是红细胞中的重要成分，负责携带氧气和二氧化碳。

血红蛋白由四个亚基组成，每个亚基都含有一个被铁离子结合的血红素分子。

不同类型的血红蛋白亚基组合形成了不同种类的血红蛋白。

血红蛋白电泳通过分离这些不同种类的血红蛋白，可以提供有关血红蛋白结构和功能的重要信息。

血红蛋白电泳的原理是利用电场对血红蛋白的电荷和大小进行分离。

在电泳过程中，血红蛋白样品被置于一个凝胶或纸张上，然后通过施加电场，使血红蛋白在凝胶或纸张中移动。

由于血红蛋白的电荷和大小不同，它们在电场中以不同的速率移动，从而分离开来。

血红蛋白电泳有两种常用的方法：直接测定和间接测定。

直接测定是将血红蛋白样品与凝胶或纸张直接接触，然后施加电场进行分离。

间接测定则是将血红蛋白样品与某种荧光标记物结合，再将其与凝胶或纸张接触，通过荧光信号来分析血红蛋白的分离情况。

血红蛋白电泳可以根据血红蛋白的电荷和大小差异，将其分离成不同的带状图谱。

这些图谱可以通过染色或荧光标记等方法进行可视化，以便进一步分析和研究。

通过观察这些图谱，可以确定不同类型的血红蛋白的存在，并评估它们在某些疾病或异常情况下的变化。

血红蛋白电泳在临床诊断和研究中具有广泛的应用。

它可以用于检测血红蛋白病和其他血液疾病，如地中海贫血和镰状细胞贫血。

通过分析血红蛋白的分离情况，可以确定疾病的类型和严重程度，并指导治疗方案的选择。

血红蛋白电泳还可以用于研究血红蛋白的结构和功能。

通过比较不同血红蛋白的分离图谱，可以揭示其结构差异和功能特性。

这对于深入了解血红蛋白的生物学过程和疾病机制非常重要。

血红蛋白电泳是一种重要的实验技术，通过利用电泳原理，将血红蛋白样品分离成不同的带状图谱。

它在临床诊断和研究中具有广泛的应用，可以提供有关血红蛋白结构和功能的重要信息。

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢什么是血红蛋白电泳检查
导语：也许有一些朋友会听说过血红蛋白电泳检查，但是真正了解血红蛋白电泳检查的人肯定是不多的，毕竟血红蛋白电泳检查并不是常规的一种检查，但
也许有一些朋友会听说过血红蛋白电泳检查，但是真正了解血红蛋白电泳检查的人肯定是不多的，毕竟血红蛋白电泳检查并不是常规的一种检查，但是由于血红蛋白电泳检查在临床上面有着非常重大的意义，所以我们还是有必要多了解一些关于血红蛋白电泳检查的知识，下文我们给大家介绍一下什么是血红蛋白电泳检查。

血红蛋白电泳珠蛋白生成障碍性贫血是世界上最常见和发病率最高的一种单基因遗传病，常见有两类，即α和β海洋性贫血(以往称地中海贫血)，是由于基因突变引起存在于红细胞内的几种血红蛋白(Hb)合成异常。

此项化验可用于检验异常Hb，进一步诊断一些相关疾病。

HbA：96%-98%HbA2：1%--3%HbF：1%～2%
(1)HbA2增高是轻型β—海洋性贫血最重要的诊断依据;
(2)HbS病、β链异常的不稳定Hb病及某些巨幼细胞性贫血患者HbA2也可增高;
(3)缺铁性贫血时，HbA2常降低，可与轻型β—海洋性贫血鉴别;
(4)正常人Hb电泳后，一般只见两条区带(HbA和HbA2)，若出现新的区带，则可能为异常Hb，应进一步检查。

用肝素或EDTA抗凝血。

在上面的文章里面我们介绍了临床意义非常大的一种检查方式，那就是血红蛋白电泳检查了，血红蛋白电泳检查是用来检查贫血的，相信大家现在都已经了解了什么是血红蛋白电泳检查了吧。

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3.1 全菌蛋白的制备将细菌接种于DMEM培养基，置于28℃培养箱培养18h。

参照Coelho 等（Coelho et al. 2004）的方法，略有改动。

用Wash buffer（10mmol/L TrisCl pH8.0，5mmol/L 醋酸镁）清洗细胞3次。

离心，细胞沉淀在Lysis Buffer( 7mol/L 尿素，2mol/L硫尿，1% IPG Buffer pH3-10或pH4-7，4% CHAPS，1% DTT，1%蛋白酶抑制剂，1%核酶抑制剂)中悬浮，使其浓度范围在5~10mg/mL。

置于冰上裂解2h。

13000r/min离心1h取上清，-80℃保存。

用2-D clean-up Kit 纯化蛋白，再用2-D Quant Kit测定样本中蛋白浓度。

3. 2 2-D Clean-Up Kit的使用方法（全程小心）蛋白质样本在1.5mL微型离心管中处理，所有步骤均在冰上进行。

1）将体积100μL的蛋白质样本（含1~100μg蛋白质）置于1.5mL微型离心管中。

加入300μL沉淀剂。

振荡或倒置搅匀。

冰浴中（4~5℃）培育15min。

2）加入300μL共沉淀剂，简单振荡混合一下，12000r/min离心5min。

3）将上清液尽量多地倾析或吸出，不要搅散沉淀。

保持沉淀不变，在其上面加入一层40μL共沉淀剂，冰上培育5min。

后离心5min，去上清。

4）往沉淀加入25μL蒸馏水或去离子水。

将管振荡5~10s，这时沉淀应散开，但并未溶解于水中。

在管中加入1mL洗涤缓冲液（在-20℃下至少预冷1h）和5μL洗涤添加剂，振荡直至沉淀完全散开。

-20℃下培育至少30min，每10min振荡20~30s。

5）将离心管以最大速度（至少12000r/min）离心5min。

小心地将上清液移走弃去。

此时应可见白色沉淀，将沉淀简单风干一下（不要超过5min）。

6）用裂解液溶解沉淀，以备第一向IEF电泳。

振荡管子至少30s，在室温下孵育，振荡或用移液管抽吸使之完全溶解。

血红蛋白电泳简易操作流程样本的制备：1）洗涤红细胞。

取400μL血细胞加4mL生理盐水，上下颠倒5次或吹打混匀。

2）用3000转速的离心机离心全血5分钟并弃去浮在表面上的悬浮液3）重复1）和2）步骤，尽量吸走红细胞表面多余的生理盐水。

6) 取40l RBC于一试管中，加150l裂解液7) 充分混匀，放置15-20分钟。

说明：RBC及裂解液比例浓度可据标本情况调整。

注意：1、每次洗涤需要充分混匀。

2、吸取40l RBC时，需要枪头深入至压积红细胞内部或底部，完全吸取40l 之后再提起枪头，避免吸到生理盐水，保证RBC的量。

3、裂解时间最少15分钟，以保证裂解充分。

电泳前准备：1. 打开电脑以及电泳仪器右侧的主开关。

2. 试剂检查及准备：每次在开始新的电泳前，应检查如下内容：染色液是否在Min-Max标记线之间，染色液用过10次染色循环后不能再使用；脱色液及蒸馏水是否过少；点样器是否放置在准确的位置中；废液是否清空。

3. 放置海绵条：用干净的镊子把海绵条插入电泳槽的两侧电极中，轻轻压平。

注意：请勿将海绵条插入到中间的电极中。

4. 样本装载：从仪器中抽出样盘托，取开吸磁铁片，将一次性载样盘放置样盘托中，盖好铁片，然后按1-13号顺序每孔加入30ul裂解后的样本，并将其插入仪器相应位置中。

5. 胶片准备：取胶片一块用配套滤纸沿同一方向将多余的缓冲液吸走，应保证滤纸完全贴在胶片的表面，然后快速移走滤纸。

将胶片装在胶片架上，装胶片时抓住胶片有条形码侧的一角，将有凝胶面向上，箭头向胶片架上方，沿上下卡口轻轻插入，然后将胶片架放回电泳仪对应位置。

注：滤纸在胶片上约5s就必须要移走，防止胶片脱水。

6. 检查各项准备情况，完全准备好后切记要合上仪器盖。

电泳分析软件操作：1. 双击电脑桌面上的电泳扫描图标（Elfolab）→ 数据库（Database）→ 打开数据库（Open Database）→ 数据库（Database）→ 工作数据库（Working Database）→ 新的工作数据库（New working Database）→ 在胶片1中选择血红蛋白→ OK。

Interlab碱性血红蛋白电泳操作规程（供SRE157K、SRE205K、SRE143K、SRE176K、SRE188K参考）（英国）用途Interlab碱性血红蛋白电泳试验系统采取聚酯薄膜®上的醋酸纤维素，用于正常与异常或变异血红蛋白（variant hemoglobin）的定性和半定量测定。

本电泳试验在碱性pH条件下进行，并为血红蛋白图谱提供有价值的扫描方法。

试剂盒结合自动化仪器Microtech 672PC、Microtech 648ISO、Microtech 648PC、及Genio 一起使用。

概述血红蛋白（也写成Hb）是在红细胞中发现的一种蛋白质，其主要作用是运输氧气(O2)和二氧化碳(CO2）。

血红蛋白从肺获得氧气形成氧合血红蛋白，氧合血红蛋白在组织和器官中释放氧气并结合二氧化碳。

结合了二氧化碳的血红蛋白称为碳酸血红蛋白，并将二氧化碳运送到肺。

在正常成人红细胞中存在3种类型的血红蛋白，HbA是主要类型，还有少量HbA2与HbF。

碱性pH醋酸纤维素电泳对分离正常与变异血红蛋白是简单、有效的方法，这种电泳方法也用于不同类型血红蛋白异常(Hemoglobin anomalies)的定性鉴定和定量测定。

已鉴定的人类变异血红蛋白已达400多种，这些异常血红蛋白大约1/4可以通过诸如碱性或酸性缓冲液电泳的分类分析方法予以鉴别，其他类型血红蛋白的研究需要高精细的实验室技术。

血红蛋白病(Hemoglobinopathies)和地中海贫血(thalassemia）包含大量导致不同类型血红蛋白正常浓度显著失衡的血红蛋白结构定性改变(modificative)或定量变异(variations)的遗传性疾病。

最常见的2种变异血红蛋白(mutant hemoglobin)为HbS和HbC。

Hb Lepore、HbE、HbG-Philadelphia、HbE-Los Angeles及HbO-Arab较少见。

血红蛋白电泳实验简易操作步骤1. 洗涤红细胞：取离心后的红细胞200ul，10倍体积的0.9%的生理盐水洗涤，3000转/5分钟，离心后去掉上层。

洗涤2-3次。

2. 溶血：130ul溶血素+10ul洗涤后的红细胞3. 加样：加样梳每孔中加溶血后的液体10ul后放入保湿盒中4. 选择7/15Hb程序，在黑色方框的中下1/3处加入200ul（15人份）蒸馏水、130ul（7人份）蒸馏水，放上已经吸水后的琼脂板（注意放入黑色方框内）和缓冲条，并将加样梳从保湿盒中取出放在4号位（加样梳有字的一面朝向自己）5. 开始电泳，20多分钟后听到“嘣”的一声电泳结束，弃去加样梳和缓冲条6. 选择Hb程序进行染色，取出琼脂板放在染色架上进行染色，30分钟后取出琼脂板进行扫描7. 点击胶片扫描图标, 启动扫描程序。

9. 在软件操作界面上, 选择进入工作单界面。

10. 在每个即将扫描的标本的信息, 都可以在这一界面下进行录入.11. 在扫描仪上, 放入胶片。

将胶片的正面朝下, 放于扫描仪上。

12. 将胶片放置于胶片支架内, 根据支架内胶片类型和规格, 选择扫描程序。

13. 关闭扫描仪机盖，点击开始扫描键。

（提示: 如果多次扫描胶片, 请更改扫描程序中的开始扫描的样品编号, 否则, 后面的扫描结果, 会覆盖上一次的扫描结果. 如果一次同时扫描多个胶片, 软件会自动分配样品编号.）14. 检查扫描的居中范围线，仔细察看居中线是否对齐, 具体操作请查阅仪器使用手册.15. 编辑曲线，电泳胶片扫描结束后, 关闭窗口, 然后点击“编辑曲线”键进入曲线编辑模式进行曲线编辑, 添加病例的IF 图片和注释。

16. 曲线编辑完成后, 就可以进行结果报告。

所有的报告单必须有相关负责人员的签名及日期, 同时, 遵守医院的相关程序进行数据保管。

血红蛋白电泳‎检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由‎两对多肽链组‎成的复杂分子‎。

每一条链含有‎血红素和络合‎铁原子的卜啉‎。

所有血红蛋白‎的血红素部分‎都是相同的。

所测定的血红‎蛋白的蛋白部‎分称之为珠蛋‎白。

正常人血红蛋‎白多肽链包括‎α、β、δ和γ。

血红蛋白的结‎构、分子特性取决‎于形成其肽链‎的氨基酸顺序‎和性状。

氨基酸不同可‎形成不同的血‎红蛋白，其表面电荷不‎同，在电场中的泳‎动率不同。

本实验在碱性‎（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶‎电泳的方法进‎行，对红细胞洗涤‎后造成溶血，电泳分离血红‎蛋白后以氨基‎黑染色。

多余的染色液‎用酸性液体洗‎去。

待琼脂糖凝胶‎板干燥后，肉眼可直接判‎别有无电泳条‎带异常。

运用光密度扫‎描仪检测准确‎定量分析电泳‎条带异常情况‎。

血红蛋白异常‎有二种类型：血红蛋白性质‎或结构的异常‎称之为血红蛋‎白病。

血红蛋白中的‎一条链合成减‎少引起血红蛋‎白性质异常，称之为地中海‎贫血。

2. 标本采集2.1 标本采集前病‎人准备：受检者应空腹‎。

2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用E‎D TA，柠檬酸或肝素‎均可，避免碘乙酸。

常规静脉采血‎1.8ml，加入含有10‎9mmol/L枸橼酸钠溶‎液0.2ml的干燥‎。

清洁试管中，充分混匀。

3. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。

4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶‎或泡沫箱密封‎运输。

5. 标本拒收标准‎：细菌污染、溶血或脂血标‎本不能作测定‎。

6. 试剂6.1 试剂名称：血红蛋白电泳‎检查试剂6.2 试剂生产厂家‎：法国Sebi‎a公司6.3 包装规格：150tes‎t s6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块溶血素 1瓶缓冲液条带 10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸‎ 10条×1盒6.5 试剂储存条件‎及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。

血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。

每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。

所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。

所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。

正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。

血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。

氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。

本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。

多余的染色液用酸性液体洗去。

待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。

运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。

血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。

血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。

2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。

2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。

常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。

清洁试管中，充分混匀。

4. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。

5. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。

6. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。

7. 试剂7.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂7.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司7.3 包装规格：150tests7.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒7.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。

有效期两年。

8. 仪器设备8.1 仪器名称：SEBIA电泳仪8.2 仪器厂家：法国Sebia公司8.3 仪器型号：HYDRASYS9. 操作步骤9.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。

血红蛋白的测定方法血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。

血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。

1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除了SHb以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成HiCN，其最大的吸收峰为540nm波长，可经比色测定。

此法为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。

2）十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠（SLS）作用，生成SLS-Hb棕红色化合物。

SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。

本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。

但SDS质量差异较大，并且SDS可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。

3）叠氮高铁血红蛋白（HiN3）测定法：与HiCN法相似，但仍然有公害问题。

4）碱羟血红蛋白（AHD 575nm）测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析仪的使用。

5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测Hb和白细胞。

缺点是对Hb测定结果的准确度和精密度较低。

近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使Hb测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成Hb的衍生物不同医`学教育网搜集整理。

某些溶血剂形成的衍生物稳定性较差，因此要严格控制溶血剂加入量及溶血时间，特别是半自动血细胞分析仪应严格控制实验条件。