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薄层扫描法薄层扫描法一、定义薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。
回顾薄层色谱法（TLC)1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等）2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样）3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm)4、检视(在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪的组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。
每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。
（1）分光器及测量范围大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。
（2）光源及检测器光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。
操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置；检测器一般为光电倍增管。
表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、TLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。
1. 薄层吸收扫描法的基本原理薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A—L 成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。
曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。
由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。
该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。
定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。
薄层色谱鉴别介绍薄层色谱（TLC）是一种常用的分离技术，可用于鉴别化合物的混合物。
它是一种简单易用、经济实惠、快速高效的分析方法，常用于药物分析、天然产物分析、农药残留分析等领域。
下面我将对TLC的原理、操作步骤和应用进行介绍。
一、TLC的原理TLC的原理基于色谱分离原理，利用物质在不同固定相上的亲疏性差异，通过毛细作用和扩散作用，使化合物被分离。
TLC的分析基质是通过固定相涂覆在玻璃、铝或塑料基质上，样品通过毛细作用在固定相上上升，而不同成分在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
TLC工作原理示意图如下：[示意图]二、TLC的操作步骤1.准备试剂和设备：准备TLC板、玻璃容器、色谱溶剂和样品溶液。
2.准备试样：将待测试物溶解在合适的溶剂中，得到试样溶液。
3.均匀涂布试样：将试样溶液均匀地涂布在TLC板上的出发线上。
4.选择合适的溶剂系统：根据待测试物的性质和分离要求，选择合适的色谱溶剂系统，如正己烷/乙醇（9:1）。
5. 开始分析：将TLC板放入玻璃容器中，添加色谱溶剂至约2cm高度，但不能触及TLC板。
盖上容器盖，让试剂与固定相接触，溶液会开始上升。
6. 结束分析：当溶剂上升到离TLC板顶端1-2cm时，将TLC板取出，迅速标记出相应的上升高度。
然后将TLC板晾干并进行显色。
最后使用UV灯或显色剂对TLC板进行观察和分析。
7.数据分析：根据显色结果，通过测量上升的高度和各样品的Rf值（Rf值=色谱前移距/色谱跑液的前行距离），得到鉴别结果。
三、TLC的应用1.鉴别混合物的成分：通过TLC的分离作用，可以鉴别混合物中的各个成分，可以用于检测药物中的杂质和控制药物的质量。
2.分析天然产品：可以用于从天然草药、植物中提取的混合物中分离和鉴定活性物质。
3.农药残留分析：TLC可以用于农产品中农药残留的快速筛查和定量分析，具有操作简单、快速、灵敏等优点。
4.食品和环境监测：可用于鉴别食品和环境样品中的各种组分，如食品中的添加剂和环境中的有机物。
色谱分析薄层色谱法薄层色谱是一种微量、迅速和容易的色谱办法。
它可用于分别混合物，鉴定和精制化合物，是近代有机分析化学中用于定性和定量的一种重要手段。
它兼有柱色谱和纸色谱的优点，它绽开时光短，分别效率高（可达到300一4000块理论塔板数），需要样品少（数微克）。
假如把吸附层加厚，试样点成一条线时，又可用作制备色谱，用以精制样品。
薄层色谱特殊适用于挥发性小的化合物，以及那些在高温下易发生变幻、不宜用气相色谱分析的化合物。
薄层色谱的原理和柱色谱类同，属于固--液吸附色谱。
样品在涂于玻璃板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间举行分别。
常用的吸附剂是和。
各种化合物的吸附能力各不相同，在绽开剂上移时，它们举行不同程度的解吸，从而达到分别的目的。
假如采纳和为支撑剂，则其原理为分配。
薄层色谱的操作办法（如点样、绽开、显色等）都和纸色谱基本相同。
显色剂除能用法纸色谱的显色剂外，还可采纳腐蚀性的显色剂，如浓、浓等。
斑点位置亦以比移值表示。
(1)吸附剂薄层色谱的吸附剂最常用的是和，其颗粒大小普通为260目以上。
颗粒太大，绽开时溶剂移动速度快，分别效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不抱负。
国产硅胶有：(含有煅石膏作黏合剂）、(不含煅石膏，用法时需加入少量、等作黏合剂）和硅胶F254（含有荧光物质），后者用法之后可在紫外光下观看，有机化合物在亮的荧光板上呈暗色斑点。
硅胶常用于湿法铺层。
(2)铺层试验室常用20cmx5cm、20cmx10cm,20cmx20cm的玻璃板来铺层。
玻璃板要预先洗净擦干。
铺层分湿法和干法两种。
湿法铺层：先将吸附剂调成糊状，例如，称取硅胶G20一50g，放入研钵中，加入水40一50ml，调成糊状。
此糊大约可涂5cmx20cm的板20块左右，涂层厚0.25mm。
注重，糊易凝聚，所以必需现用现配，不宜久放。
为了得到厚度匀称的涂层，可以用涂布器铺层。
将洗净的玻璃板在涂布器中间摆好，夹紧，在涂布槽中倒入糊状物，将涂布器自左至右快速推动，糊状物就匀称涂于玻璃板上（图2.34)。
薄层色谱方法总结1.方法原理(1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- （诱导）- 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
2.溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇）。
其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。
一、溶剂选择规则：1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。
2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。
4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。
5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
二、展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；③不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
三、溶剂极性参数表环已烷:-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
薄层色谱薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。
是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。
它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。
因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
此外，在进行化学反应时，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
一、基本原理色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。
薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。
由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。
化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。
在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物，薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。
特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。
二、实验基本流程铺板点样展开显色计算Rf值铺板取7.5x2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL，调成均匀的糊状，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好的硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h 后取出，稍冷后置于干燥器中备用。
薄层色谱法的5个步骤薄层色谱法是一种常用的色谱分析方法，它可以将样品中的各个组分分离出来，并且可以用于定性定量分析。
下面是薄层色谱法的五个步骤：1.分离薄层色谱法的第一步是分离。
这一步是通过将样品溶液点样在薄层板上，然后将其放入色谱缸中，加入流动相，使流动相在薄层板上行走，将样品中的各个组分分离出来。
分离的效果取决于流动相的性质、点样量、流动相的流速和薄层板的性质等因素。
2.涂层在薄层色谱法中，涂层是非常重要的一步。
涂层可以防止样品中的各个组分在分离过程中扩散，同时也可以提高分离的效果。
常用的涂层材料有硅胶、纤维素和聚酰胺等。
涂层的厚度和均匀度都会影响分离的效果。
3.喷洒喷洒是指在分离之后，将固定相喷洒在薄层板上，使固定相与薄层板结合。
这样可以提高分离效果，并且可以使薄层板更加稳定。
常用的固定相有硅胶、纤维素和聚酰胺等。
4.显色在薄层色谱法中，显色是非常重要的一步。
通过显色可以清楚地观察到样品中的各个组分的分离情况。
常用的显色方法有物理显色和化学显色两种。
物理显色是基于不同物质对光的反射和吸收能力的不同来实现的；化学显色则是基于物质之间的化学反应来实现的。
5.识别在薄层色谱法中，识别是非常重要的一步。
通过识别可以确定样品中的各个组分。
常用的识别方法有观察颜色、测量Rf值和比较标准品等方法。
观察颜色可以初步判断组分的性质；测量Rf值可以确定组分的移动距离；比较标准品可以确定组分的具体种类。
以上就是薄层色谱法的五个步骤：分离、涂层、喷洒、显色和识别。
在实际操作中，可以根据不同的需求和目的进行相应的调整和优化。
