对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP12的研究

１ ０ ． ９ ｋ Ｄ ａ ． 转 录 时相 分析 表 明 ｗ ｓ ｖ Ｏ ０ ９属 于早 期基 因． 本研 究通过 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增 获得 了该 全长基 因 ， 成功
构 建 了重组 质粒 ｐ Ｅ Ｔ — Ｈ ｉ ｓ ． ｖ ｐ ｌ ２ ． 将 该 质粒 转化 到 Ｅ ． ｃ ｏ ｌ ｉ Ｂ Ｌ ２ １中表 达 并 纯化 了重组 Ｖ Ｐ １ ２蛋 白 ， 用该
中 图分 类 号 ： Ｐ ７ ３ ５
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： ２ ０ ９ ５ ４９ － ７ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４ － ０ ５ １ ７ － ０ ７
对 虾 白斑 综 合 症 病 毒 （ ｗ ｈ ｉ ｔ ｅ ｓ ｐ ｏ ｔ ｓ ｙ ｎ ｄ ｒ ｏ ｍ ｅ ｖ ｉ —
（ ２ ０ ０ ９ ） 利 用酵 母 双 杂 交 和 Ｆ ａ ｒ — Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ等 方 法 发 现
离心 ， 仅用 几 步普 通 的差 速 离 心 便 可 以 获得 大 量 的
病 粒子囊 膜 结 构 均完 整 ． 在此 基础 上 ， 通 过广 泛应用 蛋 白质组 学
该病 毒 是 一 种 纺 锤 状 ， 不 形 成 包 涵 体 的 环 状 双 链 Ｄ Ｎ Ａ病 毒 ． 该 病 毒 的基 因组 约 ３ ０ ５ ｋ ｂ ＿ ３ ， 具有 潜 在 的５ ３ １个 Ｏ Ｒ Ｆ ， 其中 １ ８ １个 Ｏ Ｒ Ｆ可能 具备 编 码功 能 蛋 白的功 能 ． 本实验 室 于 ２ ０ ０ ５年报 道 了一种 简单 有 效 的从感 染螯 虾 的组织 中提 取 大量完 整病 毒粒 子 的 方法 ＿ ６ Ｊ ． 此 方法 过程 中不包 括 复 杂 的 密 度梯 度 超 速
Ｃ 一 末端 能 够 与 Ｖ Ｐ ２ ４ 发 生 相 互 作 用 １ ｏ ｌ ； Ｘ ｉ ｅ等 （ ２ ０ ０ ５ ） 发现 Ｖ Ｐ ２ ６能 够 与 宿 主 细 胞 的 ａ ｃ ｔ ｉ ｎ相 互 作 用， 并且利用免疫共沉淀和 Ｆ ａ ｒ － Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ发 现 Ｖ Ｐ ２ ８ 能够 分 别 与 Ｖ Ｐ ２ ６和 Ｖ Ｐ ２ ４有 相 互 作 用 ， 并 且 认 为
重组蛋 白制备 了特异 性 鼠抗血 清． 纯化 的病毒 粒子 经 ０ ． ５ ％ Ｔ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎ Ｘ － １ ０ ０处理后 ， Ｖ Ｐ １ ２被 发 现 存在 于病毒 ＷＳ Ｓ Ｖ 的 囊膜部 分 ， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 杂 交 实验 和免 疫 电镜 实验 也证 实该 结果 ． 对Ｖ Ｐ １ ２的 深入研
ｒ ｕ ｓ ， ＷＳ Ｓ Ｖ） 于上 世 纪 ９ ０年 代 初 在 日本 首先 爆 发 并 迅速传 播 开 来． 作 为 对 虾 的 最 主 要 病 毒 病 原 之
一
结构 蛋 白的研究 ， 主要在体 外进 行 ． 通 过在 体外 克隆
表达 病毒 的各个 结 构 蛋 白， 利用 蛋 白质 之 间相 互 作 用 的方法 来 研 究 不 同病 毒 结 构 蛋 白之 间 的 相 互 作
了 ４种病 毒 的膜蛋 白之 间 的相互作 用 １ ３ ］ ； Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ等 （ ２ ０ ０ ８ ， ２ ０ １ ０ ） 等 通 过研 究 发 现 并 总结 了 Ｖ Ｐ ５ １ Ｎ、
第 ３ ２卷
第 ４期
应 用 海 洋 学 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｅ ｄ Ｏｃ ｅ ａ ｎ Ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ
Ｖｏ １ ． ３ ２． Ｎｏ ． ４ ＮＯ Ｖ ．。 ２０１ ３
２ ０ １ ３年 １ １月
对 虾 白斑 综 合 症 病 毒 结 构 蛋 白质 Ｖ Ｐ １ ２的研 究
究将有 助 于 了解 病毒 的感 染和 包装 的机 制 ， 为病毒 的诊 断和控 制提 供科 学依 据．
关键词： 海 洋生物 学 ； 对虾 白斑 综合症 病毒 ； Ｖ Ｐ １ ２ ； 表达 ； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ杂 交； 免 疫 电镜
ＤＯｌ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ Ｊ ． Ｉ Ｓ Ｓ Ｎ． ２ ０ ９ ５ － ４ ９ ７ ２ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ４ ． ０ ０ ９
高， 难 防治 的特点 ． 近 年来 ， 该 病 毒虽无 大 规模爆 发 ，
但是 局部 范 围发病 的消 息 仍 时 有报 道 ， 且 发病 时死 亡 率极 高 ， 给 对虾 养殖 业造 成严 重 的经济 损失 ， 是海 水养 殖病 害 的研究 重 点之一 ． 之 前 的研 究 已经证 实 ，
李建 波 ， 邬君 君 ， 杨 丰
（ １ ． 厦 门大学海洋与地球学院 ， 福建 厦门 ３ ６ １ ０ ０ ５ ； ２ ． 国家海洋局第 三海洋研究所 ， 福建 厦门 ３ ６ １ ０ ０ ５ ）
摘要 ： Ｖ Ｐ １ ２是 对虾 白斑综合 症 病 毒 的 一种 结构 蛋 白 ， 该 蛋 白质 由病 毒基 因 ｗ ｓ ｖ Ｏ ０ ９编码 ， 分 子 量 为
Ｖ Ｐ ２ ６能够 与 核衣壳 上 的蛋 白相互作 用 Ｊ ． 在此 基础 上， Ｗａ ｎ等 （ ２ ０ ０ ８ ） 用 Ｆ ａ ｒ — Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ和 生 物 素 标 记 转
移 的方 法发 现 Ｖ Ｐ ２ ６能 够 与 核 衣壳 蛋 白 Ｖ Ｐ ５ １发 生 相 互作 用 ， 这也是 第 一 次 发现 病 毒 的膜蛋 白与 核 衣 壳 蛋 白的相 互 作用 Ｉ Ｉ Ｉ ； Ｃ ｈ ｅ ｎ等 （ ２ ０ ０ ７ ） 发 现 病 毒 膜 蛋白 ｗ ｓ ｖ Ｏ ｌ Ｏ能 够 与 Ｖ Ｐ ２ ４相 互 作 用 ¨ ； Ｚ ｈ ｏ ｕ等
用， 进 一步 阐述 病毒 的包装 、 成 熟机制 ． 如Ｊ ｉ ｅ （ ２ ０ ０ ８ ） 利用 Ｇ Ｓ Ｔ － Ｐ ｕ ｌ ｌ － Ｄ ｏ ｗ ｎ和 Ｆ ａ ｒ — Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ发 现 Ｖ Ｐ ３ ８通 过
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，
ＷＳ Ｓ Ｖ具有宿 主范 围广 ， 传 染力 强， 致 死 率