藏药印度獐牙菜中总三萜和齐墩果酸的含量测定

重要药用植物印度獐牙菜主要成分的定量分析1.前言印度獐牙菜是一种重要的药用植物，在印度的喜马拉雅地区尼泊尔和不丹一带生长。

印度獐牙菜被发现生长在1200-3000米高度之间的温带森林潮湿的山坡上，可以在它的野生生长地任意的采摘用于贸易和本地生产使用。

它被广泛应用在东方传统药物如印度草药学和尤纳尼医学，也是中国传统藏药以及在尼泊尔局部应用。

尼泊尔是印度药用原料植物的主要供应商之一，（1）尼泊尔是印度原料药用植物的主要供应商之一，印度獐牙菜是最重要的出口药用植物，在尼泊尔药用植物出口中排名前5，几乎占尼泊尔总药用植物的贸易的5 0%（2）印度獐牙菜有很多药用用途，其中最著名的是抗糖尿病，抗疟疾，血液净化和肝的保护性能。

也可用于中药，可治疗慢性发热，疟疾，贫血，支气管哮喘，肝脏疾病，肝炎，胃炎，消化不良，便秘，皮肤病，寄生虫，癫痫，溃疡，尿少，高血压，抑郁症和某些类型的精神紊乱，分泌胆汁，血液净化和糖尿病（3-8）。

在印度草医学的记载中，印度獐牙菜味苦，凉性药物，可促进消化，治疗咳嗽。

（9）是许多草药保健品、营养补充品的重要原料，还可用于制成抗糖尿病和抗肿瘤制剂、肝脏滋补品、护肤品、肥皂、甚至发油。

首次被介绍是在1839版的爱丁堡药典上，据报告在英国和美国药典被用作输液或酊剂。

在尼泊尔，印度獐牙菜用于本地治疗糖尿病，高血压，慢性疟疾，发烧和驱虫剂。

印度獐牙菜属龙胆科植物，含有的许多苦味素可以影响它的治疗特性如苦杏仁苷苦，环烯醚萜苷是已知最苦的化合物（10）。

印度獐牙菜也富含黄酮类化合物，萜类化合物，酮，环烯醚萜类和环烯醚萜苷（11）。

在尼泊尔当地，印度獐牙菜通过研磨并泡入水中一整夜的方法制成可输入身体的液体。

直到现在都还没有比较野生和栽培植物印度獐牙菜的报告。

在印度獐牙菜不同部位之间潜在的化学成分变化的知识缺乏。

尽管全部的印度獐牙菜都在被交易，任有一部分药用植物的相互矛盾的信息最有效。

因此本研究的目的是分析从尼泊尔不同地区收集的印度獐牙菜在不同的植物部分在水和12%乙醇中制备，，这些化学物质可能存在的差异（茎，根和花序和叶片的混合物）。

三萜的检测方法
1、实验原理：
食品中三萜类物质经氯仿萃取后在香草醛-浓硫酸的作用下，生成橙色物质，其颜色深浅与三萜含量成正比。

2、试剂与材料
香草醛、氯仿、甲醇、浓硫酸均为分析纯试剂；
硫酸溶液：在100ml量筒中取水28ml，加浓硫酸至100ml，按硫酸稀释方法，小心进行。

香草醛溶液：香草醛8g加甲醇溶解定溶至100ml。

3、标准物质
齐墩果酸SIGMA 纯度≥97％
4、仪器
水浴锅、分光光度计
5、绘制标准曲线：
标准溶液：精密量取齐墩果酸标准品10mg，以氯仿定溶至100ml。

标准曲线：吸取标准溶液0.0，0.10，0.20，0.50, 1.00，1.50ml加热挥去溶剂，加入香草醛0.5ml，硫酸溶液5ml混匀后，于60度水浴中保温30分钟。

取出后冰水放置15分钟,于1cm比色皿中，以标准液0.0管为参比调节零点,于波长550±2nm处测定吸光值，求直线回归方程。

6、样品处理
固体样品：精密吸取样品0.2000-0.5000g，加氯仿约25.0ml，超声1小时，
冷却后，用氯仿定溶25.0m1，过滤：滤液备用。

液体样品直接用氯仿萃取，取氯仿层备用。

7，测定
精密移取样品制备液0.1-1.0m1于玻璃试管中，加热挥发掉溶剂加入香草醛0.5ml，硫酸溶液5.0ml混匀后，于60度水浴中保温30分钟。

于lcm色皿中，以试剂空白液为参比调节零点，于波长550±2nm处测定吸光值，按下列公式计算.
8、计算公式
cv1
W（%）= ————
mv2。

牛蒡的染色体数目相同为2n =36,牛蒡的染色体核型为“2B ”与前人报道一致[11]。

毛头牛蒡的染色体核型亦为“2B ”为首次报道。

二者亲缘关系较近,同科同属,药用价值相似,均含有较高的牛蒡苷,是天然产物牛蒡苷的重要药用资源。

在中药牛蒡子使用中,毛头牛蒡的果实是其常见的伪品之一,从染色体核型来看二者均为“2B ”型,但毛头牛蒡的核型不对称系数为62.01比牛蒡的62.62略小,更接近50,毛头牛蒡的核型稍原始。

毛头牛蒡的染色体总长和长臂总长比牛蒡略大,而染色体体积比牛蒡的大5.03μm 3,毛头牛蒡18对染色体中m 型有10对,占55.56%,s m 型有8对,占44.44%,而牛蒡18对染色体中m 型有9对,占50%,s m 型有9对占50%。

这些染色体的长度、体积、核型不对称系数等指标可以作为牛蒡与毛头牛蒡细胞学染色体鉴别的重要依据,为牛蒡的正确使用,品种鉴别提供参考。

R E F E R E N C E S[1]　T h e C h i n e s e A c a d e m y o f S c i e n c e s F o l r ao f C h i n aE d i t o r i a l C o m -m i t t e e .F l o r ao f C h i n a (中国植物志)[M].V o l 78,B e i j i n g :S c i -e n c e P r e s s ,1987:57-58.[2]　C h i n a N a t i o n a l G r o u pC o r p .o f T r a d i t i o n a l a n dH e r b a l M e d i c i n e .C o m p e n d i u mo f C h i n e s e M e d i c i n a l M a t e r i a l R e s o u r c e s (中国中药资源志要)[M].B e i j i n g :S c i e n c e P r e s s ,1994:1247.[3]　X UL ,D O UDQ ,WA N GB ,e t a l .A n a l y s i s c h r o m o s o m e o f a r c t i -u mi nC h i n a [J ].J C h i n M e dM a t e r (中药材),2009,32(3):337-339.[4]　WA N GB ,L I N ,G UXJ ,e t a l .K a r y p t y p e a n a l y s i s o f D o e l l i n g e -r i a s c a b e r c h r o m o s o m e [J ].C h i nP h a r m J (中国药学杂志),2006,41(10):732-734.[5]　Z H UW.P l a n t C h r o m o s o m ea n dT e c h n o l o g y (植物染色体及染色体技术)[M].B e i j i n g :S c i e n c e P r e s s ,1982:42-92.[6]　L E V A NA ,F R E D G AK ,S A N D B E R G AA .N o m e n c l a c t u r e f o r c e n t r o m e r i cp o s i t i o no nc h r o m o s o m e [J ].H e r e d i t a s ,1964,52(2):201-220.[7]　K U O SR ,W A N G TT ,H U A N G TC .K a r y o t y p ea n a l y s i so f s o m e f o r m o s a ng y m n o s p e r m s [J ].T a i w a n i a ,1972,17(1):66-80.[8]　S T E B B I N SGL .C h r o m o s o m e E v o l u t i o ni nH i g h e r P l a n t s [M].L o n d o n :E d w a r dA r o n l d ,1971:88-105.[9]　A R A N OH .C y t o l o g i c a l s t u d i e s i ns u b f a m i l yc a r d u o i d e a e(c o m -p o s i t a e )o f J a p a nI X [J ].B o t M a g ,1963,76(1):32-39.[10]　D E -V E S C O V I M A ,S Z I K L AO .C a m p a r t i v e k a r y o t y p ea n a l y s i s o f D o u g l a s f i r [J ].S i l v a e G e n e t ,1975,24(2-3):48.[11]　L I L ,L I UD ,Y A N GJ M ,e t a l .S t u d y o nc h r o m o s o m e o f A r c t i -u ml a p p a [J ].JS h a n g d o n gC o l l T r a d i t C h i n M e d(山东中医学院学报),1996,20(3):208-210.(收稿日期:2009-05-08)基金项目:国家药典委员会课题(Y S -200)作者简介:肖远灿,男,硕士 研究方向:药物分析与植物化学 ＊通讯作者:魏立新,男,博士 研究方向:藏药成分及药理作用研究 T e l :(0971)6143668 E -m a i l :l x w e i @n w i p b .a c .c n 藏药材印度獐牙菜质量标准研究肖远灿1,魏立新1＊,杨红霞1,2,杜玉枝1(1.中国科学院西北高原生物研究所,青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室,西宁810008;2.中国科学院研究生院,北京100049)摘要:目的　建立印度獐牙菜药材的质量标准。

藏药“甲蒂（印度獐牙菜）”中龙胆苦苷和獐牙菜苷等10种成分的含量测定与质量评价目的：建立印度獐牙菜中龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷等10种成分的含量测定方法，确定其含量测定指标成分及其限量标准。

方法：用Welch materials AQ-C18色谱柱；以甲醇和0.4%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱；柱温30 ℃，流速1.0 mL·min-1，检测波长254 nm。

结果：线性关系良好，精密度高，重复性好，回收率均在97%～103%；市场商品中各成分含量变异较大。

结论：该方法简便、灵敏、重复性好，适用于印度獐牙菜中各主要成分的含量测定；建议以獐牙菜苷和芒果苷作为“甲蒂（印度獐牙菜）”的含量测定指标成分，其含量限量分别为不得低于0.1%，0.3%。

标签：藏药；甲蒂；印度獐牙菜；HPLC；含量测定；含量限量“蒂达”（俗称“藏茵陈”）为藏医临床上主要用于肝胆疾病的一类常用药材，具有清肝利胆、利尿、续筋骨、止血等多种功效，临床广泛用于急性黄疸性肝炎、病毒性肝炎、胆囊炎、赤巴病、流行性感冒等多种疾病的治疗，约有10%的经典和现代藏药制剂，如二十五味珊瑚丸、二十五味獐芽菜丸、甘露灵丸、八味獐芽菜丸、五味獐芽菜散等中均使用有“蒂达”类药材。

藏医根据”蒂达”的来源、产地、功效等的差异，将“蒂达”分为“甲蒂”、“松蒂”、“桑蒂”、“机合蒂”等多个品种，其基原涉及到龙胆科、虎耳草科等的多属多种植物，其中“甲蒂”是藏医传统使用的“蒂达”类药材的代表性品种之一，来源于龙胆科植物印度獐牙菜Swertia chirayita （Roxb.ex Flemi）Karsten，以全草入药，目前药材主要从尼泊尔、印度等进口[1-3]。

关于“蒂达”类药材的质量标准，目前《中国药典》（2010年版）[4]、《部颁标准·藏药》（第一册）[5]、《藏药标准》[6]及《青海省药品标准》[7]中分别收载有唐古特虎耳草Saxifraga tangutica Engl.（迭达）[4]、印度獐牙菜S. chirayita（甲蒂）[5]、川西獐牙菜S. mussotii Franch.（桑蒂、藏茵陈）[5，7]、抱茎獐牙菜S. franchetiana S. Smith.（藏茵陈）[7]、普兰獐牙菜S. purpurascens Wall.（蒂达）[6]、椭圆叶花锚Halenia elliptica D.Don.（甲地然果）[5-7]、湿生扁蕾Gentianopsis paludosa（Mum.）Ma（加蒂那布）[5，7]、伞梗虎耳草S. pasumensis Marq. et Shaw、聚叶虎耳草S. confetifolia Engl.、虎耳草S. candelabrum Franch.（松蒂）[6]，但上述标准中均无成分对照的【鉴别】和【含量测定】项规定，标准不完善。