超声波-超低温冻融处理对灵芝孢子粉多糖提取的影响

表３超声波处理灵芝孢子粉不同时间的多糖含量变化
超声处理后，其多糖含量较未破壁的灵芝孢子粉多糖 含量增加１１％一４６％。这是由于超声波物理场的作用，当 超声波的频率和功率达到一定水平时．会激发悬浊液里的 孢子剧烈振动，从而使孢壁开裂、破碎，有利于多糖的释 放１６１。在超声处理２０ｍｉｎ时．达到提取最大值．而后随超卢 时｜’日Ｊ延长．多糖提取率有所下降．原【大ｌ可能是南于超声波 具有较强的机械蚵切作用，长时间作用会使多糖结构被破 坏，从而在后处理的过程中损失增人而影响多糖的含量。
吴映明等：超声波一超低温冻融处理对灵芝孢子粉多糖提取的影响
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纶布打包，进行冻结一解冻处理，方法同（１）。 ２结果与分析
对经上述３种方法处理的样品测定多糖含量，结果列 于表２、表３、表４中。并绘制变化ｊ｝｝Ｉ线（图２）。
表２超低温冻融处理灵芝孢子粉不同循环次数的多糖含量变化
表４超低温冻融处理与超声波一超低温冻融处理的灵芝孢子多糖含 ■，％比较
（３）称取３９灵芝孢子粉，按料液比１：１５加入８５％乙 醇。经过超声波处理２０ｍｉｎ后．将溶液离心３次，烘干至 恒重，再精确称取５份灵芝孢予粉０－３９，分别用１００％涤
作者简介：吴映明（１９６３一），男，高级实验师，学士，广东揭阳人，研究方向：食用菌约理。 收稿日期：２００８—０３—０２
万方数据
第２７卷 第３期
另外，超声时问过长，细胞进一步破碎，杂质溶出，这也 是多糖提取率有所下降的原因之一川。
实验中我们将超声波法和超低温冻融法二者结合起 来．获得了满意的效果．其多糖释放晕较未破壁的灵芝多 糖含量分别增加了６１．４５４％，６４．８２６％，６７．１１８％， ７０．５５６％，５６．９１８％。多糖含量较两种单一方法也有提高， 较超低温冻融法增加３％～８％左右．较超声波法增加１５％～ ４５％。这种方法将超声波的功效和超低温冻融的作用充分 发挥出来，其破壁效果更佳，内容物释放量也更多。同 时，从图２中我们可以发现，破壁率随冻结一解冻循环次 数的增加旱先快后慢的上升趋势．冻融７次后多糖含量开 始降低，这可能是由于解冻时间延长，多糖结构被破坏， 所以进行冻融次数以５次～７次为宜。
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｇｏｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ｓｐｏｒｅ ｐｏｗｄｅｒ；Ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ；Ｔｈａｗｉｎｇ ａｎｄ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｏｆ ｕｌｔｒａ—ｌｏｗ ｔｅｒｎ
ｐｅｒｔｕｒｅ；Ｕｈｒａｓｏｎｉｅ
万方数据
（２）称取５份灵芝孢子粉３９，用８５％乙醇在１：１５的 料液比条件下进行浸提。然后置于超声波细胞破碎仪中分 别振荡处理ｌＯｍｉｎ、１５ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、２５ｒａｉｎ、３０ｒａｉｎ。将溶 液离心３次．烘干至恒重，冉精确称取灵芝孢子粉０．２５９ 定容，沸水浴，离心，显色，测定吸光度（操作同１．３．２）。
行灵芝孢子粉破壁均具有效果好、成本低及操作简便等特点；增加冻结一解冻循环次数在一定程度上能提高多糖含量，
循环次数以５次。７次为宜；将超声波处理法和超低温冻融法很好地结合起来，其多糖释放更高，效果更佳，此方法更
具实用价值。
关键词：灵芝孢子粉；灵芝多糖；超低温冻融；超声波
中图分类号：Ｓ６４６．９
文献标识码：Ａ文章编号：１００３—８３１０（２００８）０３—００３４－０２
１．２主要仪器 Ｕ４１０ Ｐｒｅｍｉｕｍ型超低温冰箱（美困ＮＢＳ公司）；Ｓｏｎ
ｐｕｌｓ ＨＤ２０７０超声波细胞破碎仪（德国Ｂａｎｄｅｌｉｎ公司）； Ｇａｌａｎｚ ＷＰ７００型微波炉。 １．３实验方法 １．３．１葡萄糖标准曲线制备：苯酚一硫酸法【４１
精确称取葡萄糖ｌＯＯｍｇ．置１００ｍ１．容量瓶中定容。准 确吸取标准溶液０．０２ｍＬ、０，０４ｍＬ、０．０６ｍＬ、０．０８ｍＬ、 ０．１０ｍＬ、０．１２ｍＬ，分置于试管中，各加蒸馏水使体积为 ２．０ｍＬ．再各加５％的苯酚１．０ｍＬ，摇匀，迅速滴加浓硫酸 ５．ＯｍＬ，摇匀后于２５℃条件下显色２０ｍｉｎ。另取蒸馏水 ２．０ｍＬ．同上操作加苯酚和硫酸进行显色反应，作为空白 对照。于４９０ｈｍ波长处测定吸光度。具体结果见表ｌ。
【７１胡斌杰，陈金锋，王宫南．超声波法与传统热水法提取灵芝多糖 的比较研究Ｕ】．食品工ｑｋ科技，２００７，２８（２）：１９０—１９２．
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｉｓｔｉｌｌ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ Ｓｐｏｒｅ Ｐｏｗｄｅｒ Ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ａｎｄ Ｔｈａｗｉｎｇ ａｎｄ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｔｅｓｔ ｏｆ Ｕｌｔｒａ—－ｌｏｗ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
中国食用菌２００８，２７（３）：３４—３５ ＥＤＩＢＩ．Ｅ ＦＵＮＧｌ ０Ｆ ＣＨＩＮＡ
ＣＮ５３—１０５４／Ｑ ＩＳＳＮ １００３－８３１０
超声波一超低温冻融处理对灵芝孢子粉多糖提取的影响
Hale Waihona Puke 吴映明，陈爱葵，彭锦红，梁美玲
（广东教育学院生物系，广１州５１０３０３）
摘要：利用苯酚一硫酸法对破壁处理后的灵芝袍子粉多糖含量进行测定，结果表明采用超低温冻融处理和超声波处理进
ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｉｔ ｉｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ，ｅｃｏｎｏｍｉｃ ａｎｄ ｆａｃｉｌｅ ｗａｙ ｔｏ ｂｒｅａｋ ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｗａｌｌ ｗｉｔｈ ｔｈａｗｉｎｇ ａｎｄ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｏｆ ｕｌｔｒａ—ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅ ｏｒ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈａｗｉｎｇ ａｎｄ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｃａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｄｅｇｒｅｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｇ—
由表２可知．用超低温冻融处理灵芝孢子粉，其多糖 释放量显著提高，较未经处理的多糖含量增加５１％一６５％。 这种破壁现象实质上是冻结一解冻过程中产生的冲击热应 力造成的断裂现象。由于构成孢壁的纤维素导热系数一般 很小御，孢壁内表面温度变化比外表面温度变化要迟得多． 使壁２侧产生很大的温差，从而产生了热应力，引发孢子 壁断裂．多糖含量显著增加。此外，我们用微波炉取代沸 水浴解冻灵芝孢ｆ粉．不仅可以减少溶出多糖的损失量． 还能够降低成本，节省时间，比沸水浴更具实用价值。
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表ｌ 葡萄糖标准液吸光度的测定量
Ｏ９ Ｏ８ ＯＴ Ｏ６ ＯＳ Ｏｔ ＯＳ Ｏ２ Ｏｌ
Ｏ Ｏ
０．０２ ０．Ｏｔ ｏ．０６ ｏ．∞ ｏ．Ｉ 浓度，ｍｇ·ｍ１．１
图ｌ标准曲线
ｏ．１２
。
ｏ．埘
度：样品葡萄糖浓度＝（吸光度＋０．００２２）／６．６６７１。再按下 式求出样品中多糖含量：多糖含量（％）＝（样品葡萄糖 浓度×样品稀释倍数／样品干重）Ｘ１００。 １．３．３样品处理１５１
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为了充分利用灵芝孢子内的有效物质。必须对孢子粉 进行破壁。本实验以多糖为指标，采用超低温冻融、超声 波、超声波一超低温冻融３种方法对灵芝孢子粉进行破壁 实验。考察处理后其多糖释放的效果，并比较分析这３种 破壁方法。 ｌ实验材料与方法 １．１材料
灵芝孢予粉购自广东省科学院微生物研究所广东粤微
食用 芮技术有限公司。
ＷＵ Ｙｉｎｇ－ｍｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ａｉ－ｋｕｉ，ＰＥＮＧ Ｊｉｎ－ｈｏｎｇ，ＬＩＡＮＧ Ｍｅｉ－ｌｉｎｇ
（Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３０３）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｓｐｏｒｏｄｅｒｍ—ｂｒｏｋｅｎ ｓｐｏｒｅ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｈｅｎｏｌ—ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ．Ｔｈｅ
ｇｅｓｔｅｄ ｎｕｍｂｅｒ ｉｓ ５－７．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｗｉｔｈ ｔｈａｗｉｎｇ ａｎｄ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｏｆ ｕｌｔｒａ—ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅ ｃｏｍｍｅｎｄａｂｌｙ ｃａｎ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｆ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｈｉｇｈｅｒ ａｎｄ ｂｅ ｏｆ ｍｏｒｅ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｖａｌｕｅ．
（１）精确称取５份灵芝孢子粉０．３９，分别用１００％涤 纶俪打包，置于超低温冰箱（一７６０Ｃ）里快速冷冻６ｍｉｎ后 迅速取出投入微波炉巾解冻２ｍｉｎ．如此冻结一解冻循环 次数分另Ｉｊ为１次．３次。５次，７次，９次。处理后，再精 确称取灵芝孢子粉０．２５９定容，沸水浴，离心，显色，测 定吸光度（操作同１．３．２）。
以葡萄糖浓度为横坐标．吸光度值为纵坐标，绘制标 准曲线。并计算标准曲线回归方程（图１）。 １．３．２灵芝孢子粉多糖含量的测定
称取样品０．２５９．用８５％乙醇１５ｍＬ于６０ｑＣ浸取３０ｍｉｎ 后离心处理（３０００ｒ·ｍｉｎ—ｌｘｌ５ｍｉｎ），重复２次。以除去单 糖、双糖、低聚糖等十扰性成分。预处理后的菌粉定容于 ５０ｍＬ的容量瓶中，经过沸水浴ｌｈ后，从中吸取５．０ｍＬ放 入离心管中，离心分离３次．吸取上清液２．ＯｒａＬ移至试管 中，经苯酚一硫酸法在２５℃的条件下显色２０ｒａｉｎ，４９０ｎｍ 波长处测定吸光度，按回归方程求｝ｎ样品溶液中葡萄糖浓