YB_1对乳腺癌MCF_7细胞C_省略_4表达和细胞侵袭及成球能力的影响_吴晓君 (1)

Numb基因不同亚型对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响苏杭;王保垒;李华顺;朱晨光【摘要】[目的]探讨Numb基因的4种不同亚型对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响. [方法]应用转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)技术敲除乳腺癌细胞MCF-7中Numb基因,分别将p65, p66, p71和p72这4种Numb亚型的表达载体转染进Numb-KO MCF-7细胞,应用CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测Numb基因及其4种亚型对MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响. [结果]利用TALEN技术可以有效敲除MCF-7细胞中Numb基因, Numb-KO MCF-7组细胞的增殖和侵袭能力明显高于正常MCF-7细胞, Numb亚型p72对Numb-KO MCF-7细胞的增殖有明显的抑制作用, Numb亚型p65, p66, p71和p72均对Numb-KO MCF-7细胞的迁移有明显抑制作用.%[Objective] This study explores the role of Numb isoforms in proliferation and migration of breast cancer cells. [Methods] TALEN technology was used to knock out Numb gene in MCF-7 cells, and then transfected p65, p66, p71 and p72 expression vec-tors into these Numb-KO MCF-7 cells. On this occasion, CCK-8 proliferation assay and wound scratch assay were used to detect MCF-7 cell proliferation and migration. [Results] The results show that transcription activator-like effector nuclease (TALEN) is effective in knocking out Numb gene. Compared with normal MCF-7 cells, proliferation and migration abilities of Numb-KO MCF-7 cells are significantly enhanced. Numb isoform p72inhibits proliferation of Numb-KO MCF-7 cells, and Numb isoforms p65,p66, p71 and p72 inhibit migration of Numb-KO MCF-7 cells.【期刊名称】《上海大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(024)003【总页数】10页(P476-485)【关键词】乳腺癌;Numb基因;亚型;增殖;迁移【作者】苏杭;王保垒;李华顺;朱晨光【作者单位】上海大学生命科学学院,上海200444;中国科学院上海高等研究院干细胞与纳米医学研究中心,上海201210;同济大学附属东方医院转化医学高等研究院,上海200085;中国科学院上海高等研究院干细胞与纳米医学研究中心,上海201210;同济大学附属东方医院转化医学高等研究院,上海200085;上海大学生命科学学院,上海200444【正文语种】中文【中图分类】R73Numb作为细胞不对称性分裂的决定分子,最早被发现参与神经系统的不对称分裂,近年来被发现与肿瘤的恶性程度密切相关[1].Numb的缺陷会导致肿瘤的恶性程度增大,Numb在抑制上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)中的作用也较受关注[2].然而Numb表达缺陷导致肿瘤恶性程度增大的机制尚不清楚.研究表明,Numb能够阻滞抑癌蛋白p53被泛素化和降解的过程,并且与Notch,Hedgehog等重要信号通路密切相关;同时,Numb还是一种调节细胞内吞的因子[3-8].据报道Numb有6种剪切形式,但是最为广泛关注的剪切体有4种,分别为膜联形式(p66和p72)和胞质形式(p65和p71),其分子及细胞内定位的多样性使研究Numb的功能机制变得更为复杂[9-12].过去的一项研究对321例乳腺癌样本Numb进行免疫组化分析,发现Numb阳性率越低,乳腺癌的恶性程度就会越大[5].但是,很多研究仅仅通过Numb表达的总量来对肿瘤恶性程度进行分类,很少有研究涉及到Numb蛋白不同亚型在肿瘤细胞中的作用,而Numb的不同蛋白亚型之间,不论是在发育的时空表达方面,还是在功能方面,都有明显差异.研究Numb的不同亚型在肿瘤中的表达和功能,是一项亟待解决的问题.区分Numb不同形式的拼接分子的不同功能,对进一步了解Numb的功能及其调控机制极为必要.基于前期的研究结果,本工作研究Numb在乳腺癌细胞发生过程中的作用,并着重探讨不同拼接形式的Numb亚型对乳腺癌细胞的作用及机制,尝试以Numb的不同亚型表达高低作为肿瘤恶性程度分型的标志,为癌症个性化治疗提供指导.1 材料与方法1.1 材料DMEM(dulbeceo’s modif i ed eagle medium)培养液(高糖)、胎牛血清、磷酸盐缓冲盐溶液(phosphate buあer saline,PBS)(Hyclone公司);胰蛋白酶-乙二胺四乙醇(ethylendiaminetetraacetic acid)(Life Technologies公司);转染试剂Megatran1.0(Origene公司);细胞系筛选抗生素嘌呤霉素(Puromycin)(Sigma公司);放射免疫沉淀实验(radio immunoprecipitation assay,RIPA)裂解液(强)(碧云天公司);蛋白酶抑制剂coctail(Roche公司);质粒小量提取试剂(Omega公司);质粒中量提取试剂(MN公司);基因组提取试剂(天根生物公司);转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like eあector nuclease,TALEN)试剂(斯丹赛公司);各种限制性内切酶BamHⅠ和PstⅠ(NEB公司);细胞增殖与活性检测试剂CCK-8(同仁化学公司);人乳腺细胞系MCF-7细胞和人胚肾上皮细胞系293T细胞(中国科学院上海生命科学院细胞库);兔抗人Numb多克隆抗体(Cell Signaling Technology 公司);大鼠抗小鼠E-cadherin抗体(Takara公司);小鼠来源β-actin内参抗体(金斯瑞公司);山羊抗兔IgG(H&L)Antibody IRDye800CW抗体和山羊抗小鼠IgG(H&L)Antibody IRDye800CW抗体(Rockland Immunochemicals公司);Numb剪切体表达载体p65,p66,p71和p72(同济大学附属东方医院王保垒老师构建).1.2 细胞培养乳腺癌细胞MCF-7和人胚肾上皮细胞系293T细胞均采用含10%胎牛血清高糖DMEM培养液,置于37°C、CO2体积分数为5%的培养箱中培养.1.3 TALEN打靶载体构建及验证人体Numb基因有23个转录本,选取23个转录本中共同的编程序列(coding sequencce,CDS)区TCCAGAGGCCAGTCGTCCACATCAGTGGCAGACAGATGAAGAAGGCGTTCGC 设计打靶位点组合.TALEN打靶载体的构建及验证参照斯丹赛公司提供的TALEN 试剂盒使用说明书.1.4 Numb敲除的MCF-7细胞系构建在成功构建Numb基因TALEN打靶载体后,利用细胞转染试剂Megatran 1.0按标准方法将载体转入MCF-7细胞,Megatran 1.0与载体比例为3µL:1µg.24 h后换成含2µg/mL Puromycin的筛选培养基,筛选培养3 d,3 d后去上清,用PBS洗3次,消化细胞并计数,利用有限稀释法接种在96孔板中,待单克隆细胞团长起,消化细胞,提取基因组,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增Numb 基因片段,送测序.Numb基因PCR引物序列(5’-3’):AGAGGTAGATGGGTAGGCAGA,CACTCCCTCAGCTTCACCAG.Numb 基因测序引物序列(5’-3’):GTTAGTATGGTAAT-CCAAAG.选取Numb基因发生突变的细胞系,经Western blot检测Numb蛋白表达情况,选取不表达蛋白的细胞系,作为Numb-KO稳定细胞系.1.5 Western blot实验Numb基因敲除和正常MCF-7细胞用胰酶消化,收集细胞,用冷的PBS洗3次,然后用蛋白裂解液RIPA(强)冰上裂解30 min,4°C 13 000 g离心15 min,取上清即为提取的总蛋白悬液;二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测量蛋白质量百分比,加入SDS上样缓冲液100°C煮5 min,冰上放置5 min,即可进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(polyacrylamide gel electroph-oresis,PAGE)电泳;完成电泳后转印到聚偏二氟乙烯(polyvinylidene f l uoride,PVDF)膜上,294 mA,1 h;用含5%脱脂奶粉的PBS封闭1 h;4°C一抗(1:1 000)过夜,然后用PBS洗3次,每次5 min;二抗(1:10 000)室温孵育1 h,然后用PBS洗3次,每次5 min,利用Odyssey双色红外荧光成像系统成像.1.6 Numb各亚型瞬时表达细胞系构建将p65,p66,p71,p72和EGPF这5种质粒表达载体转染进Numb-KO MCF-7细胞中,分别命名为p65组,p66组,p71组,p72组和增强绿色荧光蛋白(enhanced green f l uorescent protein,EGFP)组(阴性对照).使用的转染试剂为Megaran 1.0,于转染后24 h更换培养基,各瞬时表达细胞系用于以后的实验.1.7 细胞增殖曲线测定收集细胞,加细胞悬液100µL(5 000个细胞)到96孔板(边缘孔用无菌水或PBS填充).设置空白孔(有培养基,无细胞)和对照孔(正常MCF-7细胞),每组设定5个复孔.置37°C,5%CO2孵育过夜,倒置于显微镜下观察.每孔加入10µL CCK-8溶液,37°C 孵育1 h.测定450 nm各孔的吸光值.将各测试孔的光密度值(optical density,OD)值减去空白孔OD值,即为相对吸光度.1.8 细胞划痕实验测定迁移能力将Numb-KO MCF-7组、MCF-7组细胞接种于6孔板中(5×104个细胞/孔),待细胞呈现单层紧密贴壁生长时用黄色移液器吸头划痕,用PBS洗去悬浮细胞,用含2%胎牛血清的高糖DMEM培养基继续培养细胞.分别于划痕后0,24,48 h在光学显微镜下观察并拍照,并应用Image-Pro Plus 6.0软件测量划痕间的距离,计算细胞迁移率.1.9 PI染色检测细胞周期计数细胞,在流式管中加入1×106个细胞,用PBS洗涤1次(300 g离心5 min).用多聚甲醛固定细胞:去上清,加入500µL冷PBS,轻柔混匀.加入500µL的4°C的2%多聚甲醛,再次混匀.4°C孵育1 h.乙醇破膜:300 g离心5 min,去上清,再次用3 mL 冷PBS洗涤1次.逐滴加入1 mL 70%的乙醇(−20°C),边加边振荡混匀,4°C孵育过夜.PI染色:300 g离心5 min,去上清,加入RNAse工作液1 mL,室温放置30 min,300 g离心,去上清加入1 mL碘化丙啶(propidium iodide,PI)工作液,37°C避光孵育30 min,用40或70µm的滤网过滤掉团块.上机分析.1.10 流式细胞术检测细胞表面蛋白将单细胞悬液加入离心管中,离心,300 g,5 min,弃上清液.以冷PBS 1 mL离心洗涤,弃上清液.用PBS稀释的第一抗体200µL,对照管中加入对应于一抗的动物IgG,轻轻吹打混匀,4°C或置冰上孵育1.5～2.0 h.离心,弃上清.PBS 1 mL离心洗涤2次,以去除多余的未结合的特异性抗体.PBS适当稀释的荧光素标记的第二抗体200µL,吹打混匀,4°C或置冰上孵育30 min,避光.PBS 1 mL离心洗涤2次.将细胞重新悬浮于0.5 mL的PBS中,混匀,置流式管中,避光,4°C冰箱保存,4 h内上机检测.1.11 统计学方法本工作中的各项实验均重复3次.采用SPSS 18.0软件进行数据分析,用Student’s t-test分析2组间的差异,以p＜0.05表示差异具有统计学意义.2 结果2.1 利用TALEN技术建立Numb基因敲除体外模型构建的TALEN敲除载体转染MCF-7细胞后,经Puromycin抗性筛选,单克隆挑取,PCR扩增Numb靶点DNA序列,测序验证,选取Numb基因发生突变的单克隆细胞扩大培养.测序结果显示,Numb-KO MCF-7细胞Numb基因发生缺失7个碱基的突变(见图1).经Western blot检测,检测不到Numb蛋白的表达,故Numb敲除细胞模型成功建立(见图2).2.2 Numb基因敲除促进MCF-7细胞增殖CCK-8检测细胞增殖结果显示,从培养第3天起,Numb-KO MCF-7的细胞增殖速度明显高于对照组正常MCF-7细胞,说明Numb基因敲除能够明显促进MCF-7的增殖,提示Numb对乳腺癌发生发展具有抑制作用(见图3).PI染色检测细胞周期结果显示,在敲除Numb基因后,G0G1期细胞比例降低了9.28%,G2M期细胞比例增加了4.36%,S期细胞比例增加了4.92%,说明Numb可以抑制MCF7细胞由G0G1期往G2M期和S期转化,对MCF-7细胞的增殖起到抑制作用(见表1).图1 Numb-KO MCF-7细胞Numb基因测序结果(红框内:缺失的碱基)Fig.1 DNA sequencing of Numb in Numb-KO MCF-7 cells(Red box:deleted bases) 图2 MCF-7细胞和Numb-KO MCF-7细胞Numb表达Fig.2 Expression of Numb protein in MCF-7 and Numb-KO MCF-7 cells图3 CCK-8检测MCF-7细胞增殖Fig.3 MCF-7 cell proliferation assessed by CCK-8表1 PI染色及流式细胞术检测MCF-7和Numb-KO MCF-7的细胞周期Table 1 Detection for cell cycle of MCF-7 and Numb-KO MCF-7 cells by staining with PI and f l ow cytometry %类目 G0G1期 G2M期 S期MCF-767.43±0.26 6.71±0.23 25.85±0.16 Numb-KO MCF7 58.15±0.2411.07±0.57 30.77±0.402.3 Numb基因敲除促进MCF-7细胞迁移采用细胞划痕实验检测正常MCF-7细胞和Numb敲除后MCF-7细胞迁移能力的结果显示,在细胞划痕48 h后,Numb-KO MCF-7细胞迁移率比阴性对照组正常MCF-7细胞迁移率高出22%,提示Numb对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用(见图4).流式细胞术检测上皮细胞表面钙粘蛋白(E-cadherin)结果显示,Numb敲除后的MCF-7细胞细胞表面E-cadherin的表达量(平均荧光强度(median f l uoresence intensity,MFI))降低了20.28%,说明Numb敲除后MCF-7细胞间黏附能力减弱,细胞迁移能力增强(见图5).2.4 Numb基因各亚型转染效率观察Numb基因各亚型转染Numb-KO MCF-7细胞24 h后,在荧光显微镜下观察可见载体质粒上的绿色荧光蛋白表达,细胞发出绿色荧光,转染效率大于90%,说明载体基因得到充分表达(见图6).图6中,第1行图为在相差显微镜明场下观察,第2行图为暗场观察绿色荧光.图4 划痕实验检测细胞迁移能力Fig.4 Detection for the abilities of migration of MCF-7 cells by wound scratch assay图5 流式细胞术检测E-cadherin表达水平Fig.5 E-cadherin expression level detected by f l ow cytometry图6 Numb-KO MCF-7转染后荧光显微镜观察Fig.6 Fluorescent microscope observation of Numb-KO MCF-7 cells2.5 Numb基因的4个亚型对MCF-7细胞增殖的影响采用CCK-8细胞增殖实验结果绘制细胞增殖曲线(见图7(a)),发现在培养的第3天时,与阴性对照组(EGFP)相比,Numb基因的亚型P72转染组细胞增殖能力明显减弱.当培养第3天时各组细胞增殖情况可由图7(b)直观地看出.相对吸光值p72组比EGFP组降低16%,提示p72可以抑制Numb-KO MCF-7细胞的增殖.其他3种亚型p65,p66,p71对Numb-KO MCF-7细胞增殖无明显抑制作用(见图7).通过PI检测细胞周期实验结果发现,对Numb-KO MCF-7细胞增殖抑制最明显的仍为p72,p72转染后可将G0G1期细胞比例提高17.75%,S期细胞比例降低18.2%,对G2M期细胞比例没有影响,说明p72可以抑制细胞由G0G1往S期的转变,从而抑制细胞增殖(见表2).图7 CCK-8检测个亚型转染后Numb-KO MCF-7细胞增殖能力Fig.7 Numb-KO MCF-7 cell proliferation assessed by CCK-8 after transfection with Numb isoforms表2 PI染色及流式细胞术检测各亚型转染后Numb-KO MCF-7的细胞周期Table 2 Detection for cell cycle of Numb-KO MCF-7 cells after p65,p66,p71 and p72 expression vector transfecting by staining with PI and f l ow cytometry %类目 G0G1期 G2M期 S期EGFP 58.15±0.24 11.07±0.57 30.77±0.40 p65 61.5±0.54 5.38±0.31 33.03±0.23 p66 58.81±0.3710.03±0.25 31.16±0.41 p71 47.00±0.66 15.89±0.10 37.11±0.19 p72 75.9±0.39 11.53±0.46 12.57±0.112.6 Numb基因的4个亚型对MCF-7细胞侵袭能力的影响细胞划痕后于含2%FBS的高糖DMEM培养基中培养24 h,结果显示各亚型转染组迁移率与阴性对照EGFP组相比,迁移比率降低程度分别为p65组8.29%,p66组7.95%,p71组8.95%和p72组8.49%,这说明4种亚型均对Numb-KO MCF-7细胞迁移能力有抑制作用,但是抑制能力没有差异(见图8).用流式细胞术检测各亚型转染后Numb-KO MCF-7细胞表面E-cadherin的表达情况后发现,4种亚型转染组与EGFP(阴性对照)组相比,E-cadherin表达量(MFI)均有所提高,提高程度分别为p65组23.65%,p66组39.78%,p71组24.73%和p72组44.80%,说明4种亚型均对Numb-KO MCF7细胞的迁移能力起到抑制作用(见表3).图8 划痕实验检测Numb各亚型对Numb-KO MCF-7细胞迁移能力的影响Fig.8 Dection for the abilities of migration of Numb-KO MCF-7 cells by wound scratch assay表3 流式细胞术检测各亚型转染后Numb-KO MCF-7细胞表面E-cadherin表达水平Table 3 E-cadherin expression levels of Numb-KO MCF-7 cells after p65,p66,p71,p72 expression vector transfecting by f l ow cytometry类目EGFP p65 p66 p71 p72 MFI 279±13 345±7 390±11 348±19 404±63 讨论为探讨Numb不同亚型在乳腺癌发生中的作用,本工作利用TALEN技术构建了Numb敲除的MCF-7稳定细胞系Numb-KO MCF-7.首先,在Numb基因敲除后,MCF-7细胞增殖和迁移能力明显增强,进一步研究发现,Numb基因敲除后的MCF-7细胞S期和G2M期的比例增大,说明Numb可以阻滞MCF-7细胞由G0G1期往S期和G2M的转变,从而抑制MCF-7细胞的分裂.E-cadherin是一类介导同源细胞间粘附的钙离子依赖性跨膜糖蛋白,主要存在于人和动物上皮细胞中,对于维持上皮细胞形态和组织完整性发挥重要作用,同时抑制肿瘤的侵袭转移,影响原发肿瘤的早期生长和继发肿瘤的增殖生长.Numb敲除后的MCF-7细胞表面E-cadherin表达量降低,可能是肿瘤迁移能力增强的一个标志[13].Numb基因对MCF-7细胞的增殖和迁移的抑制,原因可能是由于Notch、Hedgehog等信号通路失去Numb蛋白的抑制从而被增强,p53稳定性和细胞内吞稳态平衡也可能受到影响,这与以往Numb基因在其他肿瘤细胞中的研究结果相吻合[14].Numb基因的4种亚型的产生,是由于哺乳动物Numb基因存在转录后的选择性剪切,在磷酸酪氨酸结合(phosphotyrosine-binding,PTB)和富含脯氨酸域(proline-rich region,PRR)结构域分别插入11个氨基酸(ERKFFKGFFGK)或48个氨基酸(ANGTDSAFHVLAKPAHTALAPVA MPVRETNPWAHAPDAANKEIAATCS),由此产生PTBSPRRS(p65),PTBLPRRS(p66),PTBSPRRL(p71)和PTBLPRRL(p72)[9-10,15]4种蛋白亚型.本工作通过4种Numb表达质粒载体p65,p66,p71和p72分别转染Numb-KO MCF-7细胞,发现PTBLPRRL(p72)能够将Numb-KO MCF-7细胞的细胞周期阻滞在G0G1期,从而对细胞的增殖有明显的抑制作用,4种Numb基因亚型均对Numb-KO MCF-7细胞迁移能力有抑制作用,而且这4种亚型转染后,均能提高Numb-KO MCF-7细胞表面E-cadherin的表达量.过去曾有学者在不同的系统中对Numb各亚型进行研究,发现在原代培养的小鼠神经前体细胞中,过表达PRRL将促进增殖,同时将不影响或抑制分化,而过表达PRRS 则促进分化,同时抑制或不影响增殖[16];在P19细胞系中,PRRS能促进分化,而PRRL则不能;在视黄酸的诱导下,PRRL将促进P19细胞的增殖,而PRRS则不能[9];在果蝇外视原基中,h-PTBSPRRL(h表示来自人)能促进神经上皮细胞增殖,同时不影响分化,h-PTBSPRRS则能促进神经上皮分化而抑制其增殖[17].本研究结果与之前的一些报道有些不同,究其原因可能是研究系统有差异,因为在不同的组织细胞中,不同的Numb蛋白亚型具有不同功能,这是Numb的一个主要特点.Numb蛋白发挥作用主要是通过PTB和PRR 2个结构域,这2个结构域使得Numb能够介导其他蛋白的连接,从而发挥多种生理功能[18-20].Numb蛋白亚型p72与其他亚型相比,最主要的特点是在PTB和PRR 2个结构域中都有插入序列.Numb蛋白亚型p72对乳腺癌细胞增殖能力的抑制,可能是发挥维持Notch,Hedgehog和TP53等信号通路平衡的作用,而这一作用可能需要PTB和PRR结构域中的2个插入序列.而p65,p66,p71和p72这4种亚型均对MCF-7细胞迁移起到抑制作用,与Numb 参与的细胞黏附、细胞迁移的功能有关[21],这一功能的发挥可能不需要PTB和PRR结构域中的2个插入序列.Numb基因的不同蛋白亚型之间,不论是在发育时空的表达上,还是在功能方面,都有明显的差异,这使得Numb蛋白的亚型研究非常复杂.在过去10多年里得到了一些有价值的结果,但由于各种研究采用的系统不同,无法得出一个统一的结论[22].这是由Numb蛋白本身的特点决定的:Numb作为一个衔接蛋白,能够介导不同蛋白之间的连接,这使得Numb细胞选择命运的一个工具在不同的发育时空背景下被反复使用.因此,对Numb蛋白不同亚型的研究,要精确到特定的发育阶段和细胞类型.本工作对乳腺癌细胞系MCF-7中的Numb亚型作用进行了初步研究,但Numb亚型在肿瘤中的表达情况及生物学功能、各个亚型与Notch,Hedgehog等信号通路是如何作用的,都还值得在今后作进一步研究.参考文献:[1]PECE S,CONFALONIERI S,RR P,et al.Numb-ing down cancer by more than just a Notch[J].Biochimica et Biophysica Acta,2011,1815(1):26-43. 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复旦学报(医学版)Fudan Univ J Med Sci 2011Jan,38(1)Corresponding author E mail:w ang.yanhong@z s h 肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤血管生成和转移的研究进展徐 建(综述) 王艳红(审校)(复旦大学附属中山医院肝癌研究所 上海 200032)摘要 巨噬细胞起源于血液单核细胞,在不同的刺激因素作用下,巨噬细胞可分化为经典激活的巨噬细胞(M 1型)和选择性激活的巨噬细胞(M 2型)。

现在认为,肿瘤相关巨噬细胞(tumo r associated macrophages,T A M )具有M 2型巨噬细胞表型。

T A M 在肿瘤中大量浸润被认为是肿瘤患者预后不良的重要标志。

T A M 通过多种分子机制促进肿瘤血管生成和转移。

本文就T A M 促进肿瘤血管生成和转移的相关分子机制作一综述。

关键词 肿瘤相关巨噬细胞; 肿瘤血管生成; 肿瘤转移中图分类号 R 730.2 文献标志码 B doi:10.3969/j.issn.1672 8467.2011.01.016Tumor associated macrophages as promoters oftumor angiogenesis and metastasisXU Jian,WAN G Yan hong(Institute of L iver Cancer,Zhongshan H ospital,Fudan Univ ersity ,S hanghai 200032,China)Ab stract Macro pahges originate fro m blood mono cytes and can differentiate into classically activated macrop hages (M 1)and alternatively activated macrophages (M 2)under d ifferent stim ulus.As far as we know,tumo r associated macrophages (TAM)was tho ught to resemble M 2 po larized m acrop hages.The tumo r patients whose tu mor tissues were infiltrated b y lo ts of TAM were believed to have p oor pro gnosis ,and TAM can prom ote tu mor angio genesis and m etastasis by diverse m olecular m echanisms.Here,we review the m olecular m echanisms that TAM prom ote tum or angiogenesis and metastasis. Key words tu mor assciated m acrop hage; angiogenesis ; metastasis巨噬细胞是一个异质的细胞群,起源于血液单核细胞并分化为M 1型(经典激活)和M 2型(选择性激活)巨噬细胞。

慢性缺氧应激可能通过EMT增强乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为陈坚;何咏竟;汪思应;胡敏【摘要】目的:探讨慢性缺氧应激对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响及可能机制.方法:将人乳腺癌MCF-7细胞分为缺氧组(1%O2、5%CO2和94%N2)和正常对照组(常氧)进行培养.利用MTT法、CCK-8实验、细胞直接计数法及细胞侵袭和迁移实验对MCF-7细胞活力、增殖及侵袭和迁移能力进行检测;用软琼脂集落形成实验及Matrigel 3D培养技术检测MCF-7细胞非锚定生长能力及极性改变情况;利用MCF-7细胞构建裸鼠皮下种植瘤模型,检测慢性缺氧应激对体内肿瘤生长及肺转移的影响;利用倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;Western blot检测低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)和磷酸化的糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在缺氧环境下表达水平的改变,以及E-钙黏连蛋白(E-cadherin)、N-钙黏连蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、MMP-9等上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果:与正常对照组相比较,慢性缺氧组MCF-7细胞活力、增殖能力及侵袭迁移能力增强,细胞非锚定生长能力提高且在3D培养系统更容易发生极性改变,呈现侵袭样生长,体内生长及转移能力增强;除了HIF-1被缺氧诱导表达升高外,GSK-3β呈现活化趋势,且上皮样标志物E-cadherin蛋白表达水平明显下降,而间充质样标志物N-cadherin、vimentin、MMP-3和MMP-9蛋白表达水平明显升高.结论:慢性缺氧应激促进了乳腺癌细胞恶性生物学行为,且其机制可能与EMT有关.%AIM:To investigate the effects of chronic hypoxia on the aggressiveness of MCF-7, a human breast cancer cell line , and the underlying mechanisms .METHODS: MCF-7 cellswere cultured under hypoxia ( 1% O2 , 5%CO2 and 94%N2 ) or control (95%O2 and 5%CO2 ) condition.The viability, proliferation, and invasion and migration abilities of the MCF-7 cells were determined by MTT assay , CCK-8 assay, cell counting, and cell invasion and migrationassays.Anchorage-independent growth and the alteration of cellular polarization of the MCF-7 cells were tested by soft agar colony formation assay and Matrigel-3D culture assay, respectively.The effects of chronic hypoxia on the growth and metas-tasis of MCF-7 cells in vivo were investigated by xenograft in nude mice .The morphological changes of the MCF-7 cells were observed under an inverted microscope .Hypoxia-induced alterations in the levels of hypoxia inducible factor-1 ( HIF-1 ) and phosphorylated glycogen synthase kinase-3β( p-GSK-3β) as well as epithelial-mesenchymal transition ( EMT) mol-ecules, such as E-cadherin, N-cadherin, vimentin, matrix metalloproteinase ( MMP)-3 and MMP-9, were determined by Western blot .RESULTS:Chronic hypoxia significantly increased the viability , proliferation , and invasion and migration abilities of MCF-7 cells in vitro, enhanced the anchorage-independent growth , facilitated cellular polarization alteration in Matrigel-3D culture, and promoted cancer metastasis in vivo.Hypoxia up-regulated HIF-1, activated GSK-3β, down-regu-lated E-cadherin and increased the protein levels of N-cadherin, vimentin, MMP-3 and MMP-9.CONCLUSION:Chronic hypoxia enhances the aggressiveness of breast cancer cells probably through EMT .【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(033)010【总页数】6页(P1831-1836)【关键词】乳腺癌;缺氧;肿瘤转移;肿瘤微环境;上皮-间充质转化【作者】陈坚;何咏竟;汪思应;胡敏【作者单位】安徽中医药大学,安徽合肥230038;厦门大学第一附属医院超声科,福建厦门361001;安徽医科大学,安徽合肥230032;安徽医科大学,安徽合肥230032;安徽中医药大学,安徽合肥230038【正文语种】中文【中图分类】R363.1;R737.9乳腺癌发病率在经济发达地区居于女性恶性肿瘤的首位[1]，以手术为主的综合治疗虽然取得较好的临床疗效，但浸润和转移仍旧是影响患者生存率和死亡率的主要因素[2]。

第 49 卷第 5 期2023年 9 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.5Sep.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230517沉默CDKL1基因通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的抑制作用赵月生, 李祖彬, 刘海鸥, 陶昆麟, 赵齐海, 李娜（齐齐哈尔医学院附属第三医院乳腺外科,黑龙江齐齐哈尔161000）［摘要］目的目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1（CDKL1）基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和转移的影响，并阐明其可能的作用机制。

方法方法：选择乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象，采用小干扰RNA技术（siRNA）沉默CDKL1基因表达。

采用1 μmol·L－1磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）抑制剂BpV或10 μmol·L－1蛋白激酶B（Akt）激动剂SC79进行干预。

取对数生长期MCF-7细胞，分为空白对照组（MCF-7细胞不作任何处理）、转染对照（siRNA-NC）组（MCF-7细胞转染siRNA-NC质粒）、siRNA-CDKL1组（MCF-7细胞转染siRNA-CDKL1质粒）、siRNA-CDKL1+ PTEN抑制剂BpV（siRNA-CDKL1+BpV）组（转染siRNA-CDKL1的MCF-7细胞，再采用1 μmol·L－1PTEN抑制剂BpV处理2 h）和siRNA-CDKL1+Akt激动剂SC79（siRNA-CDKL1+SC79）组（转染siRNA CDKL1的MCF-7细胞，再采用10 μmol·L－1 Akt激动剂SC79处理2 h）。

采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表达水平，CCK-8法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性，EdU法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中EdU阳性细胞率，细胞划痕愈合实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞划痕愈合率，Transwell小室实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭细胞数，Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、PTEN、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化Akt（p-Akt）和磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平。

CPD4对人乳腺癌细胞株MCF-7光动力抑制作用及
机制研究的开题报告
研究题目：CPD4对人乳腺癌细胞株MCF-7光动力抑制作用及机制研究
研究背景：乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其治疗方案包括手术、化疗、放疗等综合治疗，但这些方法都存在一定的副作用。

近年来，光动力治疗作为一种新型的治疗方法受到越来越多的关注和研究。

其中，光敏剂是光动力治疗中的重要组成部分，因此寻找具有良好光敏剂性质的化合物对于乳腺癌治疗具有重要意义。

研究目的：本研究旨在探究一种新型光敏剂CPD4对人乳腺癌细胞株MCF-7的光动力抑制作用及其机制，为光动力治疗乳腺癌提供新的理论和实验依据。

研究内容和步骤：本研究将从以下方面进行：
1.实验室制备CPD4光敏剂；
2.建立MCF-7细胞株，并进行体外细胞实验，观察CPD4对MCF-7细胞的抑制作用；
3.对比不同光照强度下，CPD4对MCF-7细胞的抑制效果；
4.测定CPD4诱导MCF-7细胞凋亡的程度；
5.研究CPD4影响MCF-7细胞胞内ROS的生成机制；
6.研究CPD4对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响。

研究意义：本研究将搭建一个全新的研究桥梁，对CPD4光动力治疗乳腺癌进行探讨，为进一步提高光动力治疗的疗效奠定基础。

同时，本研究将为其他领域提供研究思路和探索方向。

低氧环境下人乳腺癌细胞系MCF-7转录调节因子-1表达变化及其机制刘颖,乔如丽，尚里，张锋军,焦扬驰，胡思畅,赵庆丽中国人民解放军联勤保障部队第九四O医院，兰州730050摘要：目的观察人乳腺癌细胞系MCF-7E26转录特异性序列-1(Ets-1)表达变化,并探讨其机制。

方法取对数生长期MCF-7细胞，使用氯化钻(CoCl2/诱导的化学性低氧培养环境以及缺氧小室培养环境模拟肿瘤细胞低氧微环境，通过过表达和敲降缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)研究Ets-1基因的表达情况,通过荧光定量PCR(q-PCR)和蛋白印记实验(Westernblot)方法分别研究低氧环境下Ets-1mRNA和蛋白表达情况，使用免疫共沉淀(Co-IP)和免疫荧光染色(IF)方法研究不同情况下蛋白互作,使用免疫沉淀法研究Ets-1蛋白翻译过程中的乙酰化、泛素化和磷酸化。

结果低氧刺激下，乳腺癌细胞系中Ets-1蛋白水平显著上升;低氧环境下Ets-1mRNA相对表达量升高；过表达HIF-1a导致乙酰基转移酶p300活性增强;并且p300与Ets-1在细胞质中共定位;低氧刺激下,Ets-1的乙酰化水平升高,Ets-1乙酰化后与E3泛素连接酶COP-1相互作用减弱;300抑制剂C646处理MCF-7细胞降低Ets-1蛋白水平，并增强其与COP-1相互作用。

结论低氧微环境下培养的MCF-7细胞中Ets-1蛋白和mRNA表达升高,Ets-1表达升高的调控机制可能为低氧促进了Ets-1转录，同时HIF-1a使乙酰基转移酶p300活性增强，引起Ets-1乙酰化水平升高，乙酰化Ets-1与E3泛素连接酶COP-1相互作用受阻，进而降低其降解。

关键词：低氧环境;乳腺癌;MCF-7细胞；E26转录特异性序列-1doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2020.24.011中图分类号:R341 文献标志码:A文章编号：1002-266X(2020)24-0045-05ETS-1expression changes in breast cancer MCF-7cells induced by hypoxiaand its mechanismLIU Ying,QIAO Ruli,SHANG Li,ZHANG Fengjun,JIAO Yangchi,HU Sichang,ZHAO QingliNo.940Hospital of Joint Logistics Support Force of People's Liberation Army,Lanzhou730050,China Abstract:Objective To observe the expression changes of E26transformation specific sequence1(Ets-1/in human breast cancer cell line MCF-7under hypoxia and to explore the mechanism.Methods MCF-7cells in the logarithmic phase were cultured in CoCl2-induced chemical hypoxia environment and hypoxia chamber culture environment to simulate the hypoxic microenvironment of tumor cells.The expression of Ets-1gene was studied by overexpression and knockdown of hypoxia inducible factor-1a(HIF-1a).Fluorescence quantitative PCR(Q-PCR)and Western blotting were used to de­tect the expression of Ets-1mRNA and protein in hypoxic environment.Immunoprecipitation(co IP)and immunofluores­cence staining(If)were used to determine the protein interaction in different conditions.Co IP was used to study the acety­lation,ubiquitination and phosphorylation of Ets-1protein.Results Ets-1protein and level in breast cancer cell line MCF-7increased significantly under hypoxia.Overexpression of HIF-1a resulted in the increase of acetyltransferase p300 activity;p300and Ets-1were co-localized in cytoplasm;the acetylation level of Ets-1increased under hypoxia stimulation, and the interaction between Ets-1and E3ubiquitin ligase COP-1was weakened;c646,a p300inhibitor,decreased Ets-1 protein level and enhanced its interaction with COP-1.Conclusions The expression of Ets-1protein and mRNA increa­ses in MCF-7cells cultured in hypoxia microenvironment.The regulation mechanism of increased Ets-1expression may be that hypoxia promotes Ets-1transcription,meanwhile,HIF-1a increases the activity of acetyltransferase p300,which leads to the increase of Ets-1acetylation level;the interaction between acetylated Ets-1and E3ubiquitin ligase Cop-1is blocked, and the degradation of Ets-1is reduced.Key words:hypoxia environment；breast carcinoma；MCF-7cells;E26transformation specific sequence1基金项目：甘肃省自然科学基金(160RJZA170)；甘肃省卫计委课题(GSWSKY2017-50)通信作者:赵庆丽(E-mail:1320861509@)45乳腺癌是女性中发病率和病死率都最咼的一-种恶性肿瘤，严重威胁女性身心健康［1］0癌症是多种内外因素不协调相互作用导致的结果，其中低氧微环境既可促进癌症的发展，也是癌细胞增殖过程中导致的结果之一⑵。

胰岛素通过Erk通路促进人乳腺癌细胞MCF—7增殖和迁移目的观察胰岛素对人乳腺癌细胞MCF-7中Erk信号通路的影响及其对MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响。

方法分别采用0、50、100和200nM不同剂量的胰岛素处理MCF7细胞0、24、48和72h，采用Western blot方法检测MCF-7细胞中Erk信号通路的磷酸化活化情况，采用MTT方法检测MCF-7细胞的增殖情况。

通过伤口愈合实验和Boyden小室检测200nM胰岛素处理72h对MCF-7细胞侵袭和迁移能力的影响。

采用Erk信号通路抑制剂预处理MCF-7细胞，观察Erk信号通路在胰岛素促MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力中的作用。

结果同0nM胰岛素处理组相比，不同剂量的胰岛素均可显著上调Erk的磷酸化水平，加强MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05），且这种作用具有计量依赖性。

同对照组相比，200nM胰岛素处理72h后，MCF-7细胞侵袭和迁移能力均显著增强（f=188.000、95.640，P＜0.05）。

采用Erk信號通路阻断剂U0126阻断MCF-7细胞中的Erk信号通路后，胰岛素促MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的能力显著降低（P＜0.05）。

结论胰岛素可通过激活MCF-7细胞中的Erk信号通路，增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

标签：胰岛素；乳腺癌；MCF-7；增殖；迁移[文献标识码]B胰岛素可与胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）和胰岛素受体（insulin receptor，IR）及向下游传递活化信号，进而促进细胞的有丝分裂，胰岛素的这一作用促使研究者们猜想其与肿瘤的发生发展是密不可分的。

研究结果证实，高胰岛素血症、2型糖尿病以及肥胖等代谢相关性疾病可导致肿瘤的发病风险显著升高。

目前女性乳腺癌的发病率已成为女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，而胰岛素作为一种生长因子，其在女性乳腺癌发病中的作用也得到相关文献的证实。

- 172 -*基金项目：国家自然科学基金青年项目（81903119）；中山大学高校基本科研业务费青年教师培育项目（20ykpy52）①中山大学附属第一医院　广东　广州　510080通信作者：毕月乳腺癌放疗抵抗机制的研究进展*毕月① 【摘要】　放疗是鼻咽癌、乳腺癌及直肠癌等多种恶性肿瘤的重要治疗手段，不过部分患者会出现放疗抵抗的现象，造成转移及复发，从而降低患者生存率。

乳腺癌患者放疗抵抗的发生与多种因素有关，如肿瘤干细胞及肿瘤微环境等。

乳腺癌放疗患者的治疗效果与放疗抵抗密切相关，对放疗抵抗的产生机制进行研究有助于减少或者抑制放疗抵抗，提高放疗效果，改善患者预后。

本文从肿瘤干细胞、自噬性调节及DNA 损伤修复等多个方面做一综述，旨在为随后研究提供思路。

【关键词】　乳腺癌　放疗抵抗　肿瘤干细胞　自噬性调节　细胞周期调控　上皮间充质转化　DNA 损伤修复 Research Progress on the Mechanism of Radiotherapy Resistance in Breast Cancer/BI Yue. //Medical Innovation of China, 2023, 20(30): 172-176 [Abstract]　Radiotherapy is an important treatment method for nasopharyngeal carcinoma, breast cancer, rectal cancer and other malignant tumors. However, some patients may experience resistance to radiotherapy, which may cause metastasis and recurrence, thus reducing the survival rate of patients. The occurrence of radiotherapy resistance in breast cancer patients is related to many factors, such as cancer stem cell and tumor microenvironment. The therapeutic effect of breast cancer patients undergoing radiotherapy is closely related to their resistance to radiotherapy. Studying the mechanism of resistance to radiotherapy can help reduce or inhibit resistance to radiotherapy, improve the effect of radiotherapy, and improve the prognosis of patients. This article reviews cancer stem cell, autophagy regulation, DNA damage repair and other aspects in order to provide ideas for subsequent research. [Key words]　Breast cancer　Radiotherapy resistance　Cancer stem cell　Autophagy regulation　Cell cycle regulation　Epithelial mesenchymal transformation　DNA damage repair First-author's address: First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.30.040 乳腺癌是严重危害女性身心健康的一种恶性肿瘤。

地特胰岛素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞生长的影响研究汤喻;张晓娟;王守俊【摘要】目的探讨地特胰岛素对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞生长的影响及涉及的信号通路.方法地特胰岛素不同浓度、时间作用MCF-7和MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞数目,Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化程度,流式细胞仪检测细胞周期.结果与正常对照相比,地特胰岛素1 U/L的地特胰岛素作用24 h,抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖不明显,1、10、100、1 000 U/L的地特胰岛素作用48 h和1 U/L 的地特胰岛素作用48、72、96 h,促进两种细胞增殖的作用不明显,差异均无统计学意义(P＞0.05).10 U/L地特胰岛素作用MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h细胞周期变化,Erk1/2和Akt磷酸化程度较正常对照组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论地特胰岛素对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖作用不明显,Erk1/2 和Akt 的磷酸化程度无明显升高.【期刊名称】《中国全科医学》【年(卷),期】2012(015)018【总页数】4页(P2045-2048)【关键词】地特胰岛素;乳腺肿瘤;丝裂原活化蛋白激酶;蛋白激酶B【作者】汤喻;张晓娟;王守俊【作者单位】450052,河南省郑州市,郑州大学第一附属医院内分泌科;450052,河南省郑州市,郑州大学第一附属医院内分泌科;450052,河南省郑州市,郑州大学第一附属医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】R737.9糖尿病治疗药物人胰岛素通过激活胰岛素受体 (insulin receptor，IR)、胰岛素样生长因子－1受体 (insulin－like growth factor－1 receptor，IGF－1R)及下游信号通路，发挥促有丝分裂作用，引发了人们对于胰岛素及其类似物与肿瘤风险的关注［1］。

CAV1基因沉默增强MCF-7多细胞球对多柔比星的敏感性顾栋桦;平金良;董吉顺;朱荣;陈琦【摘要】背景与目的:肿瘤细胞形成多细胞球后,对许多化疗药物的耐受性明显增强,这种现象被称为“多细胞耐药”.其发生机制可能与细胞黏附引起的信号通路活性的改变有关.细胞质膜微囊蛋白-1 (caveolin-1,CAV1)是一个细胞膜蛋白,在细胞膜信号通路的调节中发挥重要作用.本研究旨在探讨CAV1基因沉默是否能增强MCF-7多细胞球对多柔比星的敏感性,并初步探讨其机制.方法:用liquid overlay 技术培养获得MCF-7多细胞球,用脂质体转染法把特异针对CAV1基因的双链小RNA干扰片段导入MCF-7细胞中,采用台盼蓝拒染法检测多柔比星对MCF-7的细胞抑制率,分别用RT-PCR和免疫印迹法检测CAV1 mRNA水平及蛋白水平,用免疫印迹法检测细胞总黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)及磷酸化FAK (p-FAK)蛋白水平.结果:与单层细胞相比,多细胞球组的多柔比星细胞抑制率明显降低,FAK相对磷酸化水平增加2.64倍(t=7.32,P＜0.01)；CAV1基因沉默后,MCF-7多细胞球生长缓慢,球体较松散,与未转染组相比,干扰组多细胞球多柔比星(1 μ mol/L)的细胞抑制率增加了1.07倍(t=5.77,P＜0.01),FAK相对磷酸化水平下降68.7％(t=6.57,P＜0.01).结论:多细胞球的形成可以增强MCF-7细胞对多柔比星的耐受性；CAV1基因沉默能逆转MCF-7多细胞球对多柔比星的耐药现象,FAK相对磷酸化水平的下调可能是其重要机制.%Background and purpose: Tumor spheroids exhibit decreased sensitivity to anticancer drugs compared with monolayer cells, which is known as multicellular resistance (MCR). Its mechanism underlying the phenomenon is unknown, but the signal transduction modified by cell-cell adhesion may be important in this procedure. Caveolin-l(CAVl) is a membrane protein which can regulate cellsignal transduction. This study aimed to investigate the role oiCAVl gene expression on drug resistance of multicellular spheroids (MCS) of breast carcinoma to adriamycin (ADM) through the use of the RNA interfering technique. Methods: MCF-7 MCS were obtained from liquid overlay technique culture, and CAV1 -targeted small interfering double-stranded RNAs (siRNA) were introduced into MCF-7 cells by Lipofectamine?2000. ADM resistance was detected with trypan blue exclusion testing. CAV1 mRNA and protein levels were determined by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot. The relative phosphorylation level of focal adhesion kinase (FAK) was assessed by Western blot. Results: Compared with monolayer cells, MCS showed lower cell inhibitory rate after ADM exposure for 24 h, and the relative phosphorylation level of FAK was elevated in MCS by 2.64-fold. CAVl-targeted RNA interference markedly inhibited the expression of CAV1 gene and suppressed formation of MCF-7 MCS. Cell inhibitory rate of ADM was enhanced by 1.07-fold and the relative phosphorylation level of FAK was reduced by 68.7% by CAV1 gene silencing in MCF-7 MCS. Conclusion: MCS cultures induce MCF-7 resistance to ADM. RNA interference to target CAV1 gene can restore sensitivity to ADMin MCS, and down-regulation of FAK phosphorylation may be involved in its mechanism.【期刊名称】《中国癌症杂志》【年(卷),期】2011(021)009【总页数】5页(P661-665)【关键词】质膜微囊蛋白;黏着斑激酶;球形体;细胞;抗药性【作者】顾栋桦;平金良;董吉顺;朱荣;陈琦【作者单位】浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;浙江省湖州市中心医院病理科,浙江湖州313000;复旦大学上海医学院病理学系,上海200032;复旦大学上海医学院病理学系,上海200032【正文语种】中文【中图分类】R73-36+1肿瘤化疗耐药是导致肿瘤治疗失败的重要原因，因此深入了解肿瘤耐药的机制是提高肿瘤临床化疗疗效的重要基础。

YB－1蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用常林林(综述);安云婷(审校)【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】3页(P943-945)【关键词】YB-1蛋白;恶性肿瘤;发生发展;作用【作者】常林林(综述);安云婷(审校)【作者单位】330006南昌大学研究生院医学部;330006 江西省妇幼保健院肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R730.5Y盒结合蛋白1(YB－1)普遍存在于原核和真核生物细胞中，是一种DNA/RNA结合蛋白，结构上包含一个高度保守的冷休克结构域(cold shock domain，CSD)，能够与目的基因启动子和增强子内部的Y－box序列(CTGAT TGG CCA A)特异性结合［1］。

近年来，人们对YB－1蛋白在恶性肿瘤发生发展及预后中的研究越来越深入，已成为恶性肿瘤研究中的热点之一。

研究已证实YB－1在前列腺癌［2］、非小细胞肺癌［3］、关节滑膜肉瘤［4］、乳腺癌［5］、卵巢癌［6］等多种恶性肿瘤中出现异常表达或核移位现象，而YB－1蛋白核定位则被认为是恶性肿瘤疾病诊断中的一种新的标志物［7］，因此有望成为恶性肿瘤诊断和治疗的理想靶点。

YB－1蛋白由YBX1基因编码，分子量约为42 kDa，其基因定位在染色体1p34(25，26)，共跨越19 KB染色体DNA，包含8个外显子［8］。

YB－1蛋白包含3个结构域［9］:可变NH2－端结构域，因富含丙氨酸和脯氨酸，也被称为A/P区域;中间为在进化上高度保守的冷休克结构域(CSD)，该区域作为核酸结合区特异性或非特异性地与DNA或RNA相互作用［10］;亲水性COOH－端结构域(CTD)可以与核酸以及包括YB－1自身在内的许多不同蛋白结合。

Didier等［11］最早发现YB－1可以特异性结合人类MHC ClassⅡ基因启动子区内含有反向CCAAT序列的顺式作用元件Y－box序列，抑制MHC ClassⅡ的转录活性，因此最初被认为是一种负调控转录因子。

厚朴酚葡萄糖苷对人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响苗健;马涛;李楠;张松松;霍强;吴成柱【摘要】目的:探索联苯型新木脂素类化合物厚朴酚葡萄糖苷(magnolol-2-O-β-D-glucopyranoside,Mag-glu)对人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,并对其可能机制进行研究.方法:MTT法检测化合物对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的影响;细胞划痕实验和Transwell小室法检测化合物对人乳腺癌细胞运动、侵袭和迁移能力的影响;Western blotting法检测化合物对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和环氧化酶2(COX-2)蛋白表达的影响.结果:Mag-glu具有抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的作用,且呈现浓度和时间依赖性.划痕实验结果表明,经过不同浓度的Mag-glu处理MDA-MB-231细胞24 h后,细胞水平运动运动能力明显下降(P<0.01).Transwell结果显示,经过不同浓度的Mag-glu处理细胞24 h和48 h后,细胞迁移和侵袭能力显著下降.Western blotting结果显示,随着Mag-glu浓度的增加,HIF-1α、MMP-9、COX-2的表达均下调.结论:Mag-glu在体外能够抑制人乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能是抑制了HIF-1α 信号途径,导致其下游顾客蛋白COX-2和MMP-9的表达下调有关.【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2018(043)005【总页数】6页(P567-572)【关键词】厚朴酚葡萄糖苷;乳腺癌细胞;增殖;侵袭;迁移【作者】苗健;马涛;李楠;张松松;霍强;吴成柱【作者单位】蚌埠医学院药学院,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院药学院,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院药学院,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院药学院,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院药学院,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院药学院,安徽蚌埠233030【正文语种】中文【中图分类】R285乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率呈现逐年增高的趋势，严重威胁着女性的健康，侵袭和转移是乳腺癌病人治疗失败和死亡的主要原因[1-4]。

中药对乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制研究进展吴聪冲;陆一丹;吴青青;马芳笑;毛丹漪;刘晓谷【摘要】[目的]综述近5年来中药对乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制的研究进展.[方法]通过中国知网、万方、PubMed等数据库检索近5年来国内外关于乳腺癌MCF-7细胞的中药实验研究文献,总结近年来干预乳腺癌MCF-7细胞作用明显的多种中药对乳腺癌MCF-7作用机制研究概况.[结果]多种中药单体及复方可以通过:①调节生长周期蛋白抑制MCF-7细胞生长;②通过死亡受体及线粒体介导的两条经典凋亡路径促进其凋亡;③通过抑制EGFR信号通路及新生血管的形成抑制其转移;④通过下调P-gp蛋白表达逆转其耐药等途径作用于乳腺癌MCF-7细胞.[结论]中药复方及单体能多靶点、多方面作用于乳腺癌MCF-7细胞,作用显著.但目前仍缺乏对复方各组分的深入研究,有待于进一步的拓展,为传统中医治疗乳腺癌提供实验依据.%[Objective] Summarizing the research progress of traditional Chinese medicine in effect on breast cancer cell MCF-7 in recent five years.[Methods] By querying the nearly five years of the domestic and foreign literature about the effect of traditional Chinese medicine on breast cancer MCF-7 cells from CNKI,Wang Fang data,PubMed, etc, summarizing the advances in studies on various traditional Chinese medicine effective prevention and treatment for breast cancer MCF-7.[Results] Traditional Chinese medicine monomer and compound through the same or different ways play a role in breast cancer MCF-7 cells, for example, (1)adjusting the growth cycle protein to inhibit the growth of MCF-7 cells, (2)promoting the apoptosis through two classic pathways mediated by death receptor and mitochondrion, (3)inhibiting theformation of angiogenesis and the EGFR pathway, (4)reversing the multidrug resistance by reducing the expression of P-gp.[Conclusion] The traditional Chinese medicine monomer and compound play a significant role in breast cancer MCF-7 cells in many ways with the multi-target. However, there is still lack of in-depth studies on the components of the compound, which needs further expansion to provide an experimental basis for traditional Chinese medicine treatment of breast cancer.【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2017(041)005【总页数】4页(P437-440)【关键词】乳腺癌;MCF-7细胞;中药;机制;综述【作者】吴聪冲;陆一丹;吴青青;马芳笑;毛丹漪;刘晓谷【作者单位】浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学第二临床医学院杭州 310053;浙江中医药大学基础医学院;浙江中医药大学基础医学院【正文语种】中文【中图分类】R273乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据世界卫生组织下属的国际癌症研究所（IARC）发布的2012年全球癌症报告（Globocan 2012）数据显示：全球每年新发乳腺癌病例约167.1万，每年约52.2万死于乳腺癌[1]。

乳腺癌细胞株整理（二）引言：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，也是世界范围内死亡率最高的癌症之一。

研究乳腺癌细胞株对于深入了解乳腺癌的发生机制、预防和治疗具有重要意义。

在之前的文档《乳腺癌细胞株整理（一）》中，我们介绍了一部分常用的乳腺癌细胞株。

而本文将继续介绍一些其他有代表性的乳腺癌细胞株并对其特点进行概述。

正文：1. 非侵袭性乳腺癌细胞株：- MCF-7细胞株：MCF-7细胞株是一种常用的非侵袭性乳腺癌细胞系，其来源于人类乳腺癌的原发灶。

这种细胞株生长速度较慢，呈悬浮状态，对雌激素敏感，可用于乳腺癌治疗药物的筛选和雌激素受体相关研究。

- T47D细胞株：T47D细胞株也是一种常用的非侵袭性乳腺癌细胞系，它是从人类乳腺癌的转移灶中建立的。

这种细胞株对雌激素敏感，并且表达雌激素受体。

T47D细胞株可用于研究乳腺癌细胞的增殖、分化以及基因表达调控等。

2. 侵袭性乳腺癌细胞株：- MDA-MB-231细胞株：MDA-MB-231细胞株是一种高度侵袭性的乳腺癌细胞系，可模拟乳腺癌的转移和侵袭过程。

这种细胞株生长迅速，可以形成肿瘤，在体内可产生肺和骨转移。

MDA-MB-231细胞株广泛应用于研究乳腺癌的转移机制、肿瘤微环境以及疗效评估。

- BT-474细胞株：BT-474细胞株是一种来源于人类乳腺癌的转移灶中的细胞株。

这种细胞株表达人类表皮生长因子受体2（HER2）的过度表达。

BT-474细胞株对药物的敏感性较高，可用于研究HER2信号通路的调控及其在乳腺癌中的作用。

3. 耐药性乳腺癌细胞株：- MCF-7/ADR细胞株：MCF-7/ADR细胞株是已知的耐药性乳腺癌细胞株之一。

这种细胞株对化疗药物多药耐药性发生，可用于研究药物耐药机制以及开发新的治疗策略。

- MCF-7/TAM细胞株：MCF-7/TAM细胞株是一种对于抗雌激素药物铁曲红素（TAM）耐药的细胞系。

该细胞株经长期的体内暴露于TAM药物而产生耐药性，可用于研究抗雌激素治疗耐药机制。