MCF-7人乳腺癌细胞HE染色

乳腺癌细胞株整理（二）引言：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，也是世界范围内死亡率最高的癌症之一。

研究乳腺癌细胞株对于深入了解乳腺癌的发生机制、预防和治疗具有重要意义。

在之前的文档《乳腺癌细胞株整理（一）》中，我们介绍了一部分常用的乳腺癌细胞株。

而本文将继续介绍一些其他有代表性的乳腺癌细胞株并对其特点进行概述。

正文：1. 非侵袭性乳腺癌细胞株：- MCF-7细胞株：MCF-7细胞株是一种常用的非侵袭性乳腺癌细胞系，其来源于人类乳腺癌的原发灶。

这种细胞株生长速度较慢，呈悬浮状态，对雌激素敏感，可用于乳腺癌治疗药物的筛选和雌激素受体相关研究。

- T47D细胞株：T47D细胞株也是一种常用的非侵袭性乳腺癌细胞系，它是从人类乳腺癌的转移灶中建立的。

这种细胞株对雌激素敏感，并且表达雌激素受体。

T47D细胞株可用于研究乳腺癌细胞的增殖、分化以及基因表达调控等。

2. 侵袭性乳腺癌细胞株：- MDA-MB-231细胞株：MDA-MB-231细胞株是一种高度侵袭性的乳腺癌细胞系，可模拟乳腺癌的转移和侵袭过程。

这种细胞株生长迅速，可以形成肿瘤，在体内可产生肺和骨转移。

MDA-MB-231细胞株广泛应用于研究乳腺癌的转移机制、肿瘤微环境以及疗效评估。

- BT-474细胞株：BT-474细胞株是一种来源于人类乳腺癌的转移灶中的细胞株。

这种细胞株表达人类表皮生长因子受体2（HER2）的过度表达。

BT-474细胞株对药物的敏感性较高，可用于研究HER2信号通路的调控及其在乳腺癌中的作用。

3. 耐药性乳腺癌细胞株：- MCF-7/ADR细胞株：MCF-7/ADR细胞株是已知的耐药性乳腺癌细胞株之一。

这种细胞株对化疗药物多药耐药性发生，可用于研究药物耐药机制以及开发新的治疗策略。

- MCF-7/TAM细胞株：MCF-7/TAM细胞株是一种对于抗雌激素药物铁曲红素（TAM）耐药的细胞系。

该细胞株经长期的体内暴露于TAM药物而产生耐药性，可用于研究抗雌激素治疗耐药机制。

普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。

它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。

一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。

例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。

清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。

如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。

二、染色的作用1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。

酸性染料中有染色作用的为阴离子，碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。

在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。

2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。

由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。

一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。

但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。

三、染色方法及步骤1．人工苏木素-伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。

(4)100%酒精1min。

(5)95%酒精1min。

HE染色实验步骤及常见问题解析一、HE染色HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理学染色技术。

一张质上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。

HE染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的常规染色方法。

切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。

因此，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的技术之一。

二、染色原理1.细胞核染色原理：苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。

细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。

苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2.细胞浆染色原理：细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。

当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。

因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

3.分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。

在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。

经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

he染色评分标准
HE染色评分标准通常用于评估组织或细胞的病理学样本质量，以及在某些情况下，用于量化病变的严重程度。

具体评分标准可能因应用场景和实验室而异，但以下是一个通用的HE染色评分标准，仅供参考：
1. 组织结构：观察组织样本的结构是否清晰，细胞排列是否整齐。

根据组织的完整性，可以给予0-5分的评分，其中0分表示组织结构完全破坏，5分表示组织结构完整且清晰。

2. 细胞核染色：观察细胞核的染色情况，包括染色质分布、核膜清晰度以及核仁是否清晰。

根据染色质量，可以给予0-5分的评分，其中0分表示染色质量极差，5分表示染色质量非常好。

3. 细胞质染色：观察细胞质的染色情况，包括质膜和细胞质的染色质量。

根据染色质量，可以给予0-5分的评分，其中0分表示染色质量极差，5分表示染色质量非常好。

4. 细胞活性：观察细胞的活性状态，包括细胞的代谢活性、增殖能力和形态特征。

根据细胞的活性，可以给予0-5分的评分，其中0分表示细胞活性极差，5分表示细胞活性非常好。

综合以上四个方面，可以对HE染色样本进行全面的评分。

总分为0-20分，其中0分表示样本质量极差，20分表示样本质量非常好。

在病理学诊断中，可以根据实际需要和实验室标准对HE染色评分标准进行调整和优化。

HE染色实验步骤染色实验是生物学中常用的染色技术，用于观察细胞结构、细胞器和染色体等生物学特征。

在这个实验中，我们将使用HE染色法来染色细胞和组织切片。

HE染色法是最常用的组织染色方法之一，用于观察组织结构和组织细胞的形态。

以下是HE染色实验的步骤：1.准备组织标本在进行染色实验之前，首先需要准备好需要染色的组织标本。

组织标本可以是新鲜的组织样本，也可以是已固定和包埋的组织切片。

在准备组织标本时，需要确保组织标本的质量和完整性，以保证染色结果的准确性。

2.制备切片将组织标本切割成薄片，通常厚度在5-10微米之间。

为了获得更好的染色效果，切片应该尽可能薄且均匀。

切片可以使用切片刀或者切片机进行切割。

切片完成后，将切片放在载玻片上，待干燥。

3.脱脂和脱水将切片放入甲醇中脱脂，去除切片中的脂肪物质。

脱脂时间一般为1-2分钟。

脱脂完成后，将切片依次浸入95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中进行脱水处理，时间每次均为1-2分钟。

脱水处理的目的是去除切片中的水分，以便后续染色。

4.染色处理将脱水后的切片依次浸入hematoxylin染料、蒸馏水、酸性洗涤剂和eosin染料中进行染色处理。

hematoxylin染料用于染色细胞核，eosin染料用于染色胞质。

染色时间根据实验需要，通常为1-10分钟。

染色完成后，将切片洗净并进行脱水处理。

5.脱水和封片将染色后的切片依次浸入70%乙醇、95%乙醇和透明剂中进行脱水处理。

脱水完成后，将切片放入透明剂中进行透明化处理，以使组织切片更加透明。

最后，将切片放入显微镜载玻片上，加入透明胶封片，并静置干燥。

6.观察和记录将封片好的切片放入显微镜中，用适当的倍数镜头观察组织结构和细胞形态。

观察时，可以记录下细胞核的形态、胞质的颜色和组织结构等信息。

通过观察和记录，可以得到关于组织和细胞的详细信息，为后续研究和分析提供参考。

7.结果分析根据观察和记录的结果，对染色切片进行分析和比较。

免疫组化HE染色步骤免疫组化和HE染色是在病理学中常用的技术，用于对组织样本进行分析和诊断。

下面将详细介绍免疫组化和HE染色的步骤。

免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过使用抗体来检测组织样本中特定抗原的技术。

它可以用于确定细胞或组织中特定蛋白质的位置和表达水平。

免疫组化主要包含以下步骤：1.取得组织样本：首先需要从患者的切除组织或活检组织中获取样本。

样本通常以固定和包埋的形式保存在蜡块中。

2. 切片：将蜡块切割成非常薄的切片（通常为4-5um）。

这些切片通常被放置在载玻片上。

3.去蜡和脱水：跳过这一步，因为该步主要是用于从蜡中去除组织样本。

已经固定在切片上的组织样本无需这一步。

4.抗原检出：在这一步中，需要使用一种抗体来标记想要检测的抗原。

这个抗体会与目标蛋白质结合，并形成一种可以用来检测的复合物。

5.清洗：使用缓冲液对切片上的抗体复合物进行清洗，以去除未结合的抗体。

6.显色：在这一步中，需要使用一种可独特识别的物质来标记已结合的抗体。

典型的显色素有DAB、VIP等。

7.顶气及封片：使用适当的溶剂和覆盖剂对切片进行顶气和封片，以保护其结构并使其可供观察。

通过观察组织样本中的抗原的显色情况，可以确定抗原在组织中的分布和表达水平。

免疫组化广泛应用于病理学诊断中，可以帮助医生进行肿瘤分类、病理分级以及预后评估等。

HE染色（Hematoxylin and Eosin staining）是一种常用的组织染色技术，主要用于病理学的初步观察和诊断。

HE染色主要包含以下步骤：1.取得组织样本：与免疫组化相同，首先需要从患者的切除组织或活检组织中获取样本。

样本通常以固定和包埋的形式保存在蜡块中。

2. 切片：将蜡块切割成非常薄的切片（通常为4-5um）。

这些切片通常被放置在载玻片上。

3.去蜡和脱水：类似于免疫组化，这一步主要用于从蜡中去除组织样本。

4.染色：在这一步中，使用两种染色剂：血红素和紫杉醇。

蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体的制备及体外对肿瘤细胞的选择性蜂毒是工蜂毒腺和附腺分泌出的具有芳香气味的一种透明毒液，贮存在毒囊中，蛰刺时由蛰针排出。

其化学成分比较复杂，包括多肽类、酶类和非肽类物质。

主要有效成分是蜂毒素、蜂毒神经肽、磷脂酶A、透明质酸酶、多巴胺和组织胺等。

其中，蜂毒素足蜜蜂毒的主要成分，约占蜂毒千重的50％。

蜂毒素具有很高的生物活性，现代药理研究表明它具有抗炎、镇痛、抑制血小板凝集、抗艾滋病及抗肿瘤等多种作用。

近年来，有关蜂毒的抗肿瘤作用及其潜在的临床应用价值日益引起人们的重视。

1抗肿瘤作用机制1.1 直接杀伤肿瘤细胞张氏等应用胡蜂毒素对小鼠肿瘤模型( S ) 进行肿瘤杀伤作用和治疗作用的实验研究，发现胡蜂毒对小鼠肿瘤细胞有直接杀伤作用和一定的治疗作用。

蜂毒主要活性成分蜂毒素体外对多种实验性肿瘤有具杀伤作用，并且l/μmol/L浓度的蜂毒素，阻止肿瘤细胞的增生，而不抑制正常细胞的生长和克隆率。

通常认为蜂毒素使细胞线粒体膜溶解，使细胞的正常呼吸受到抑制，因而肿瘤组织氧化磷酸化的过程受到抑制，氧化功能被破坏，导致目肿瘤组织生长抑制。

1.2 免疫调节作用1909年，Paulehrlich提出了免疫反应是机体对抗肿瘤的主要机制的概念。

一般来说，人体免疫系统主要有三方面的功能，即防御病原微生物感染的防护功能、消除体内“杂质”的自我稳定功能和对自身或受外界刺激所产生的各类变异细胞进行识别和杀灭的免疫监管功能。

要实现上述功能，就必须使免疫系统处于相对平衡的稳定状态，一旦平衡破坏，就可能导致疾病发生。

其中，免疫监管功能与肿瘤的发生和发展有着密切的关系。

国外早有研究报道蜂毒素参与抗肿瘤T细胞应答。

朱氏等的研究表明，蜂毒0.32、0．63 mg/kg能增加加s 肉瘤鼠T淋巴细胞酯酶阳性染色率，表明具有增强T淋巴细胞功能的作用。

蜂毒0．32mg/kg 能增强s肉瘤鼠网状内皮系统(RES对碳粒廓清能力，具有增强RES单核巨噬细胞的吞噬功能作用。

mcf7分子分型
MCF7是一种乳腺癌细胞系，属于ER阳性乳腺癌。

MCF7细胞系是乳腺癌
细胞系中较为常见的一个，它是雌激素受体阳性（ER+）的细胞系，这意味着它对雌激素具有较高的亲和力和依赖性。

MCF7细胞系的分子分型有多种，常见的包括：
1. Luminal A型：这种类型的乳腺癌细胞通常表达高水平的ER和PR（孕
激素受体），但HER2基因扩增和蛋白表达较低。

这种类型的乳腺癌对激素治疗和内分泌治疗敏感，预后相对较好。

2. Luminal B型：这种类型的乳腺癌细胞也表达高水平的ER和PR，但HER2基因扩增和蛋白表达较高。

这种类型的乳腺癌对激素治疗和内分泌治疗有一定敏感性，但可能对化疗和靶向治疗更敏感。

3. HER2过表达型：这种类型的乳腺癌细胞HER2基因扩增和蛋白表达较高，ER和PR表达较低。

这种类型的乳腺癌对化疗、靶向治疗和曲妥珠单抗治疗敏感，但可能对激素治疗不敏感。

4. 三阴性乳腺癌：这种类型的乳腺癌细胞ER、PR和HER2基因表达均为阴性。

这种类型的乳腺癌对激素治疗、内分泌治疗和靶向治疗不敏感，通常需要采用化疗等治疗方案。

需要注意的是，MCF7细胞系的分子分型并不是绝对的，不同的实验条件和研究结果可能会有所不同。

因此，在实际的实验设计和研究中，需要根据具体情况进行分子分型分析和验证。

HE染色操作常规流程1.实验前准备：1.1收集待染色的样本（如组织切片、细胞涂片等），确保样本保存完整和无污染。

1.2准备好所需的染色试剂：包括有水洗试剂（如去离子水）、染色试剂（如伊红、伊红酒精和亚甲蓝）、染色剂工作液（如伊红酒精和亚甲蓝溶液）等。

2.试片处理：2.1将组织切片或细胞涂片分别放入热腺管或玻璃片上。

2.2连续经过苯酚甲酸苯酯脱脂、乙醇梯度洗脱等步骤，去除样本中的脂肪和碱性物质，以减少后续染色的干扰。

2.3用去离子水洗涤样本，使其充分湿润，除去残存的试剂。

3.染色操作：3.1把处理好的样本放入腺管或玻璃片，倒入伊红酒精溶液中，用大约15-30分钟染色，使细胞和组织成为红色。

3.2轻轻用清水漂洗试品，去掉多余染色液。

3.3加入亚甲蓝液，使样本转为蓝色，使细胞核染色成深蓝色，时间为1-2分钟。

3.4再次用清水将试品漂洗干净。

4.固定和封片：4.1用醋酸纤维素或氯仿等溶剂固定染色后的试片，使试样中的颜色得以固定。

4.2在试片上加一滴封片剂（如封片胶）。

4.3将盖玻片缓慢地放在试片上，使封片剂均匀地覆盖整个样本。

4.4将封片剂封住，使细胞和组织样本能够在显微镜下观察。

5.显微镜观察：5.1将染色好的试片放在显微镜下，调整镜头，适当调节光线强度和聚焦位置，以便观察样本的细节。

5.2观察细胞和组织的形态、染色强度和细胞核的染色情况，并进行必要的记录和照片拍摄。

以上就是HE染色操作的常规流程。

通过此流程，我们可以对细胞和组织样本进行染色，从而得到对染色体分辨和鉴定的结果。

这一技术使我们能够更好地了解细胞和组织样本中的结构和功能，对于生物学和遗传学的研究具有重要意义。

HE染色，全称为苏木精-伊红染色（Hematoxylin and Eosin Staining），是生物学和医学领域中常用的一种细胞和组织染色方法。

它主要用于观察细胞核的形态结构、染色体的分布以及细胞质的成分。

HE染色方法简单、结果清晰，因此在病理学、细胞学和遗传学等领域得到了广泛的应用。

HE染色的原理是通过化学反应使细胞和组织中的特定成分着色，从而呈现出不同的颜色。

在HE染色过程中，首先使用苏木精（Hematoxylin）对细胞核进行染色，使其呈现出深蓝色或紫蓝色；然后使用伊红（Eosin）对细胞质进行染色，使其呈现出粉红色或红色。

通过对比两种颜色的分布，可以清晰地观察到细胞核和细胞质的结构。

HE染色的主要步骤如下：1. 切片制备：将组织切成薄片，通常厚度为4-10微米。

切片的质量直接影响到染色结果的准确性和清晰度。

2. 固定：将切片放入固定液中，使细胞内的蛋白质凝固，防止后续染色过程中细胞结构的破坏。

3. 脱水：将固定后的切片依次放入不同浓度的酒精溶液中，使水分逐渐减少，有利于染料的渗透。

4. 渗透：将切片放入含有苏木精的染液中，使染料渗透到细胞内。

此时，细胞核内的DNA 与苏木精结合，呈现出深蓝色或紫蓝色。

5. 清洗：将切片从染液中取出，用清水冲洗，去除多余的染料。

6. 分化：将切片放入含有酸性溶液的染液中，使细胞核内的苏木精与酸性溶液反应，呈现出不同的深浅程度。

这一步骤有助于区分细胞核的不同区域。

7. 清洗：将切片从染液中取出，用清水冲洗，去除多余的酸性溶液。

8. 脱水：将切片依次放入不同浓度的酒精溶液中，使水分逐渐减少，有利于染料的渗透。

9. 渗透：将切片放入含有伊红的染液中，使染料渗透到细胞质中。

此时，细胞质内的蛋白质与伊红结合，呈现出粉红色或红色。

10. 清洗：将切片从染液中取出，用清水冲洗，去除多余的染料。

11. 透明：将切片放入透明剂中，使切片透明化，便于观察。

12. 封片：将透明后的切片放在载玻片上，用封片胶封住，避免水分蒸发和污染。