蚕用抗微生物药药效评价试验技术指导原则

药品微生物检验替代方法验证指导原则本指导原则是为所采用的试验方法能否替代药典规定的方法用于药品微生物的检验提供指导。

随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：（1)基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；(2)直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞技术法、流式细胞计数法等；（3)基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。

这些方法与传统检查方法比较，或简便快速，或具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。

在控制药品微生物质量中，微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法（即替代方法）时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。

微生物检验的类型及验证参数药品微生物检验方法主要分两种类型：定性试验和定量试验。

定性试验就是测定样品中是否存在活的微生物，如无菌检查及控制菌检査。

定量试验就是测定样品中存在的微生物数量，如菌落计数试验。

由于生物试验的特殊性，如微生物检验方法中的抽样误差、稀释误差、操作误差、培养误差和计数误差都会对检验结果造成影响，因此，药品质量标准分析方法验证指导原则（附录XIX A)不完全适宜于微生物替代方法的验证。

药品微生物检验替代方法的验证参数见表1。

表1 不同微生物检验类型验证参数注：尽管替代方法的验证参数与药品质量标准分析方法验证参数有相似之处，但是其具体的内容是依据微生物检验特点而设立的。

替代方法验证的实验结果需进行统计分析，当替代方法属于定性检验时，一般采用非参数的统计技术；当替代方法属于定量检验时，需要采用参数统计技术。

进行微生物替代方法的验证时，若替代方法只是针对药典方法中的某一环节进行技术修改，此时，需要验证的对象仅是该项替代技术而不是整个检验方法。

抗菌药物药代动力学/药效学研究技术指导原则目录一、概述 (1)（一）抗菌药物作用特点及临床试验要求 (1)（二）抗菌药物PK/PD研究意义及分类 (1)（三）依据PK/PD研究确定给药方案的基本原则 (3)（四）抗菌药物PK/PD研究的特点 (4)（五）抗菌药物PK/PD研究策略 (4)（六）本指导原则的目的及应用范围 (5)二、非临床阶段的PK/PD研究 (6)（一）体外研究 (6)（二）体内研究 (10)（三）感染动物PK/PD研究 (12)三、临床阶段的PK/PD研究 (13)（一）PK研究 (13)（二）PD研究 (17)（三）临床PK/PD关系建立 (17)四、PK/PD研究的应用 (22)（一）PK/PD研究应用于研发决策 (22)（二）PK/PD研究应用于I期临床试验 (22)（三）PK/PD研究应用于探索性临床试验 (23)（四）PK/PD研究应用于确证性临床试验 (24)（五）上市后研究 (27)（六）PK/PD在制定细菌敏感性折点中的应用 (27)（七）PK/PD在制订β-内酰胺酶抑制剂合剂给药方案中的应用 (28)五、PK/PD研究注意事项 (30)（一）PK/PD研究局限性 (30)（二）PK/PD研究报告格式及要求 (34)六、名词解释 (36)附件：抗菌药物PK/PD研究流程 (40)抗菌药物药代动力学/药效学研究技术指导原则一、概述（一）抗菌药物作用特点及临床试验要求抗菌药物作用特点是杀灭或抑制入侵到机体内的外来病原菌而发挥药理效应，其疗效取决于抗菌药物、病原菌和机体三者相互作用的结果。

病原菌种类复杂，致病力不同并可能存在不同的耐药机制，是致病关键因素；机体自身免疫功能可防御病原菌入侵，其功能正常或缺陷与否可影响抗菌治疗的效果。

有效抗菌治疗方案需能够保证抗菌药物在机体的感染灶中达到足以杀灭或抑制病原菌的有效浓度并维持一定的时间，能够清除感染灶内的病原菌以实现治愈感染的目的，能够遏制细菌耐药性的产生，并能够同时尽可能降低抗菌药物对机体产生的不良反应。

的无酸化生产研究，取得可喜进展。

微生物药物的抗菌药效评价游雪甫（中国医学科学院医药生物技术研究所）微生物药物(抗生素)一直是临床抗感染治疗的主要药物，40-70年代抗菌素的巨大成功，降低了对抗菌药物研发的重视和投入，近40年来全球抗耐药菌抗结核药物研发缓慢，世界大制药公司纷纷放弃，新化学骨架和新机理新靶点药物推出极少，已知有效药物（或衍生物）不断多年的重复使用/滥用，药效下降，耐药产生。

随着抗生素的广泛应用，细菌耐药问题越来越严重，耐药病原菌感染已经成为临床医生棘手的问题，严重危害人类生命健康,突出表现在：①耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）医院内感染率增高，北京、上海在60%以上，并且在社区内传播，MRSA在美国已经成为感染性疾病的首位致死原因，号称“超级杀手”；②耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)的出现；③耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)/表皮葡萄球菌(MRSE)引起感染增多，临床不易治疗；④耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)在世界范围，包括许多国家和地区传播；⑤出现耐万古霉素肠球菌(VRE)包括耐万古霉素粪肠球菌和屎肠球菌感染；⑥产β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)等耐药细菌不断变异，产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌超过30%，产AMEs CR耐药株出现，特别是超级细菌NDM-1出现；⑦多重耐药铜绿假单胞菌(MDR-PA)超过30%, 泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-AB)超过15%；耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌感染在我国二级以上医院广泛流行(40-50%)；⑧氟康唑等唑类抗真菌药耐药真菌菌株的出现；⑨结核卷土重来，耐药TB(MDR-TB、XDR-TB)出现,发病率与死亡率明显回升。

近年来，超级细菌NDM-1的暴发和流行，引起全球高度关注。

因此，抗耐药菌/超级细菌药物的研究形势紧迫，急需解决。

西方主要发达国家每年用于抗感染药物研究的经费高达几百亿美金，2004年起美国比尔盖茨基金与NIH联合发起了“全球重大卫生挑战计划（GCGH）”，再次投入巨资组织全球优秀科学家研究重要传染病的防控，近几年在西方有10多个高效抗菌新药上市，20多个抗菌新药、10个抗TB药物进入临床。

药品微生物检验替代方法验证指导原则本指导原则是为所采用的试验方法能否替代药典规定的方法用于药品微生物的检验提供指导。

随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：（1)基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；(2)直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞技术法、流式细胞计数法等；（3)基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。

这些方法与传统检查方法比较，或简便快速，或具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。

在控制药品微生物质量中，微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法（即替代方法）时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。

微生物检验的类型及验证参数药品微生物检验方法主要分两种类型：定性试验和定量试验。

定性试验就是测定样品中是否存在活的微生物，如无菌检查及控制菌检査。

定量试验就是测定样品中存在的微生物数量，如菌落计数试验。

由于生物试验的特殊性，如微生物检验方法中的抽样误差、稀释误差、操作误差、培养误差和计数误差都会对检验结果造成影响，因此，药品质量标准分析方法验证指导原则（附录XIX A)不完全适宜于微生物替代方法的验证。

药品微生物检验替代方法的验证参数见表1。

表1 不同微生物检验类型验证参数注：尽管替代方法的验证参数与药品质量标准分析方法验证参数有相似之处，但是其具体的内容是依据微生物检验特点而设立的。

替代方法验证的实验结果需进行统计分析，当替代方法属于定性检验时，一般采用非参数的统计技术；当替代方法属于定量检验时，需要采用参数统计技术。

进行微生物替代方法的验证时，若替代方法只是针对药典方法中的某一环节进行技术修改，此时，需要验证的对象仅是该项替代技术而不是整个检验方法。

抗菌药物II、III期临床药效评价试验指导原则II期临床试验初步评价兽药对靶动物目标适应症的防治作用和安全线，确定合理的给药剂量方案。

试验设计如下（一）试验动物1.品种：应与受试药物的拟推荐应用范围相一致，靶动物的种类、品系、体重和年龄相一致。

不同靶动物和不同适应症应分别进行临床试验。

2.来源：应从有试验动物资质证明的饲养单位购买，如果没有资质证明动物，应来源清楚，并经检疫合格后才能用于试验。

如果没有实验动物并且试验条件能得到有效控制，也可使用自然感染的动物。

3.每组动物数人工攻毒病例：小动物不能低于30只，中动物不能低于10头，大动物不能低于6头；自然感染病例：小动物不能低于50只，中动物不能低于30头，大动物不能低于15头；（二）试验材料1.受试药物及来源：受试药物应与拟上市的制剂完全一致、同一剂型，有完整的产品质量标准，有合乎规定格式的说明书。

受试药物应来源于同一批号，由申报单位自行研制并在GMP验收合格的车间生产的样品，并提供产品检验合格报告。

2.对照药物及来源：对照药物应当是已经在我国批准上市，与受试药物作用相似、适应症相同的药物。

来源可以从市场购买或者由申报单位提供，并提供产品检验合格报告。

3.菌（毒）种及实验室检查：应采用国家鉴定的菌（毒）种，如果采用自然病例分离的菌（毒）株，应详细记录其来源，并应经国家权威部门鉴定方可用于试验。

对攻毒用菌（毒）株以及临床分离到的致病菌（毒）株，需要采集中进行MIC测定。

如需要证明试验药物是否为耐酶抗菌药物或酶抑制剂，还应同时对所有分离菌（毒）株作产酶鉴定。

必要时测定攻菌（毒）种或自然分离菌（毒）株对受试药物和对照药物的MBC。

（三）试验分组临床试验的组数取决于抗菌药物的类型和疾病的特性，也取决于评价防治结果的方法和是否要进行有效剂量的筛选，但均应采用随机原则分组。

具体要求如下：1.人工诱发感染试验：根据受试药物的药物动力学和体外抑菌试验结果初步确定给药剂量，至少设高、中、低三个剂量组；药物对照组（阳性对照组）的剂量应为临床推荐剂量；并设感染不给药对照组（阴性对照组）和不感染不给药对照组（健康对照组）。

抗菌药物临床试验技术指导原则（二）附件2抗菌药物临床试验技术指导原则4．评价要求4.1疗效评价感染性疾病的治疗反应表现为临床症状和体征部分或完全恢复，影像学和实验室检查等非微生物学指标部分或完全恢复或改善，以及病原菌部分或完全清除。

疗效评价标准将取决于治疗的特定疾病及其临床和微生物学特征，一般应从临床疗效、微生物学疗效和综合疗效评定三个方面分别进行，并综合考虑。

在某些情况下，根据感染疾病和细菌的特征，可以仅对某一个或/和两个方面进行评价。

4.1.1临床疗效临床疗效是指在治疗后访视时对患者临床治疗反应结果的最终判断，是基于比较患者用药前和治疗结束后访视时的症状、体征及非微生物学检查指标的基础上做出的。

临床疗效评价的时间点依据临床试验的目标适应证病种而定。

一般而言，对急性细菌性感染的治愈评价时间点在治疗结束访视(End-of-Therapy，EOT)时初步评价，继而在治疗结束后访视（After-therapy visit）时最终进行治愈评价。

治疗结束后访视一般在治疗结束后7～14天，但具体的评价时间点需分别参照各目标适应证临床试验指南。

如对社区获得性细菌性肺炎病人的治疗结束后访视在治疗结束后5～10天，并需评价病人入组后28天的全因病死率。

对临床疗效的判定具体如下：4.1.1.1临床治愈患者在治疗结束后访视时所有入选时的症状、体征均已消失或完全恢复正常，且影像学和实验室检查等非微生物学指标均已恢复正常；实际情况下，在某些适应证中，治疗结束后访视时可能仍会观察到一些临床症状或体征，或仍存在一些非微生物学指标的异常。

如果上述情况是生理状态下存在的，或其仅提示感染后状态或基础疾病，而不是提示活动的感染，则也可认为是临床治愈。

4.1.1.2临床无效患者在治疗结束后访视时所有入选时的症状、体征持续或不完全消失或恶化；或者出现了这一疾病的新的症状或体征和/或使用了其他的针对这一疾病的抗菌治疗措施。

需要注意的是，临床治疗反应虽然可分为临床治愈（clinical cure）、临床改善(clinical improve)、临床无效(clinical failure)和临床复发(clinical relapse)四种，但对于药物治疗结束后访视时最终疗效结果的判定，一般仍分为临床治愈和临床无效两种。

评论 实验室使用者的评论对于达成共识时必不可少的，任何人都可以提交一份评论意见，而编写文件的 委员会按照达成共识的原则，对所有评论意见加以考虑。有些评论使得文件在下一次一致评论水平 出版时有所变动，其他评论并没有导致文件发生变化，但对所有这些评论，委员会都会在文件后以 附录形式作出回应。我们肯切希望读者在任何时间以任何形式对 CLSI 的任何文件提出评论意见。评 论可发往 CLSI 行政办公室，940 West Valley Road, Suite 1400. Wayne, Pennsylvania 19087,USA。
摘要
本文件提供的补充信息适用于临床实验室标准化协会（CLSI）已批准标准中的抗微生物药物敏感试 验程序，这些标准包括：M2-A9-抗微生物药物敏感试验纸片法执行标准；已批准的标准------第九版； M7-A7-为空气条件下可生长细菌设计的稀释法抗微生物药物敏感试验；已批准的标准------第七版。 这些标准包括了需氧菌纸片法（M2）和稀释法（M7）的试验步骤。 临床医生在治疗重症患者时常依赖临床微生物学实验室提供信息。药敏试验的临床重要性要求试验 必须在最适条件下进行，并且要求实验室有能力提供最新抗微生物药的结果。 本增刊提供的表格信息代表了应用 M2 和 M7 标准化的步骤所得到的关于选药、结果解释和质量控制 的最新信息。使用者应该用这些新表格替换以往出版的表格（在表中自最近版以来的变化以黑体字 表示）。 临床实验室标准化协会. 抗微生物药物敏感试验的执行标准；第十六版信息增刊. CLSI 文件 M100-S16(ISBN 1-56238-556-7). CLSI，940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2006。

桑蚕农药中毒防控技术规程1 范围本文件规定了桑蚕农药中毒防控的技术的术语和定义、诊断、处理方法、预防要求。

本文件适用于广西行政区域内桑蚕农药中毒的防控。

2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

DB51/T 1665-2013 桑叶农药残毒生物鉴定技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1农药pesticides农业上用于防治病虫害及调节植物生长的化学药剂。

3.2桑蚕农药中毒 Pesticide poisoning of silkworm桑蚕食下含有农药残留的桑叶或体表接触到农药成分引起生理病害的现象。

3.3农药残留检测 Pesticide residue detection样品中残留农药成分种类和含量的测定。

3.4生物试验 Biological test通过给桑蚕添食一定量的桑叶，观察桑蚕食下桑叶后的症状，判断残留在桑叶上的农药是否对桑蚕具有毒性作用。

4 诊断4.1 中毒症状桑蚕有拒食、爬边不动、头胸肿大、身体扭曲、狂燥乱爬、摆头吐液、死亡、不结茧或只结薄皮茧等中毒症状之一，并与健康蚕有明显不同症状。

4.2 初诊调查中毒蚕的品种名称、蚕种及小蚕来源、桑园及周边作物农药使用情况等。

测定桑叶、桑园周边作物及土壤等样品中农药残留的种类和含量，初步判定桑蚕农药中毒的源头。

4.3 确诊将农药残留检测的结果与生物试验相结合，将检测到的农药配置成相应浓度的溶液，将桑叶浸泡其中10s，取出自然晾干，添食于桑蚕，观察桑蚕的症状，如症状和生产中出现的中毒症状一致，则判定为该农药引起的桑蚕中毒。

5 处理方法在蚕座上撒一层新鲜石灰粉，隔离蚕和桑叶，加网除沙；打开门窗通风，保持空气新鲜；停止喂饲原桑叶，改用新鲜无毒桑叶喂饲。

6 预防6.1用叶前生物试验6.1.1 抽样养蚕用叶前3 d，对计划用叶的桑园进行抽样。

菌进行最低抑菌浓度测定。

2)实验程序试验方案应当列出标本采集、运送、分离、鉴定、药敏试验、保存、运输和质量控制等的要求，具体如下：标本采集的时限方案中应当确定研究药物给药前和给药后多长时间采集标本。

标本的采集和运送应根据不同的的感染部位选用相应的标本采集方法。

对于不易到达的部位或预期含有正常菌群的部位的感染，应当制定具体的统一的标准，这一点非常重要。

标本应当尽快运送到实验室，应当确定标准的保存条件和运送方法。

应严格遵守临床标本采集和统一的临床微生物实验室操作程序，以保证质量。

细菌分离鉴定一般而言，细菌应当常规鉴定到种水平。

细菌分离和鉴定方法及操作程序应符合规定要求，所使用的试剂等符合试验要求。

血清学诊断和直接免疫或分子检测方法如需要采用血清学诊断和直接免疫或分子检测方法进行细菌分型或病源学诊断时，其灵敏度和特异性需要确认和验证。

菌株的保存与运输临床试验中分离的北认为属于病原菌的菌株应当选用相应的条件保存和运输。

（6）药物敏感性试验药物敏感性试验操作应当标准化，应按相关规定进行试验，并应包括质控菌株。

这种标准化应该与临床前药理学研究的试验方法相一致。

药物敏感试验常用的测定方法如下：①纸片法纸片法的操作必须遵循标准化的指南。

对于临床试验，应当递交详细的方案，记录抑菌圈直径。

②稀释法应当按照标准的稀释步骤。

整个稀释范围都应当测定，以便得到读数范围内（而不是读数范围外）的终点。

临床试验中应当测定所有收集到的病原菌的MIC值，计算MIC50和MIC90值等。

（7）菌种的分组和特殊菌株的统计在评价细菌实验室检测结果和临床疗效时，采用以下的方法可以提高临床相关性的评价：①按范围更广的病原菌分类（例如革兰阳性和革兰阴性）核对感染，并按种进行统计。

②对细菌特定的属和种中的具体的耐药分离株进行统计。

例如对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA），应作为与甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌菌株不同的一个子集。

③对是否产β内酰胺酶进行分析，特别是β内酰胺类抗菌药物。

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6.结果判断：计数结果与初始值（0时 菌数）的常用对数值比较，根据表2进行 判断。试验结果按有效数字的修约规则进 舍，保留一位小数。结果符合表2要求可 判断该产品抑菌效力符合规定。
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表
防腐剂抗菌效力标准
1类供试品 细菌 7天菌数下降不少于1.0 lg，14天菌数下降 不少于3.0 lg ，第14天到28天菌数不增加。 真菌 与初始值比，到7、14、28天菌数均不增加。 2 类供 试 品 细菌 14天菌数下降不少于2.0 lg ， 14天到28天菌数 不增加。 真菌 与初始值比，到14、28天菌数均不增加。 3类供试品 细菌 14天菌数下降不少于1.0 lg ， 14天到28天菌数均不增加。 真菌 与初始值比，14、28天菌数均不增加。 4类供试品 细菌，真 菌 与初始值比，14、28天菌数均不增长。 注：1、表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超 过0.5 lg。 2、0时菌数 供试品加入试验菌，摇匀，立即取样检查，培养，计数， 为0时 ，即初始值。
中国药典2010版药品微生物检查 指导原则
罗慧萍 四川省食品药品检验所
2010年3月
2010-03 1
我国微生物检查发展概况
抑菌剂效力检查法指导原则
药品微生物检验替代方法验证指导原则 微生物限度检查法应用指导原则
药品微生物实验室规范指导原则
2010-03 2
我国微生物检查发展概况
2010-03
320Leabharlann 0-03 72010版药典起草的基本原则 一、坚持保障药品质量、维护人民 健康的原则 二、坚持继承、发展、创新的原则 三、坚持科学、实用、规范的原则 四、坚持质量可控性原则 五、坚持标准先进性原则 六、坚持标准发展的国际化原则

抗微生物药物敏感性试验执行标准抗微生物药物敏感性试验是评价抗菌药物对微生物的作用和微生物对抗菌药物的敏感性的重要手段。

正确执行抗微生物药物敏感性试验，对于指导临床用药、控制细菌耐药性具有重要意义。

本文将详细介绍抗微生物药物敏感性试验的执行标准。

1. 试验菌株的选取。

试验菌株的选取是抗微生物药物敏感性试验的第一步。

应根据临床感染的部位和病原菌的种类，选择相应的菌株进行试验。

同时，应注意菌株的来源、保存和传代方式，以保证试验结果的准确性和可重复性。

2. 试验方法的选择。

根据不同的抗菌药物和微生物，选择合适的试验方法进行抗微生物药物敏感性试验。

常用的试验方法包括纸片扩散法、微量稀释法等。

在选择试验方法时，应考虑到试验的灵敏度、特异性和操作的简便性，并严格按照相关标准进行操作。

3. 试验条件的控制。

试验过程中，应严格控制试验条件，包括温度、湿度、培养基的配制和质量等。

试验操作人员应具备良好的实验操作技能，严格按照操作规程进行操作，避免外界因素对试验结果的影响。

4. 试验结果的解读。

试验结束后，根据试验结果进行解读。

应根据相关标准和临床实际，判断微生物对抗菌药物的敏感性，确定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）等参数。

同时，应注意对试验结果的统计学分析，确保结果的科学性和可靠性。

5. 结果报告和数据保存。

试验结果应及时进行报告，包括试验方法、试验菌株、试验条件、试验结果等内容。

同时，应将试验过程中的原始数据进行保存，以备查验。

在报告中应注明试验人员、试验时间、试验地点等信息，确保结果的可追溯性和可信度。

6. 质量控制和质量保证。

在抗微生物药物敏感性试验过程中，应严格执行相关质量控制和质量保证程序。

包括对试验菌株的鉴定、对试验方法的验证、对试验条件的控制等方面进行严格管理，确保试验结果的准确性和可靠性。

7. 相关标准和法规的遵守。

在执行抗微生物药物敏感性试验时，应严格遵守相关的标准和法规，包括药典规定、临床实验室质量管理规范等。

中华人民共和国农业部公告第1596号为加强兽药研究指导工作，规范兽药研究活动，提高兽药研究水平，根据《兽药管理条例》、《兽药注册办法》和《新兽药研制管理办法》规定，我部组织制订了《兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则》等5个兽药研究技术指导原则，现予发布，请参照执行。

特此公告。

附件：兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则等5个技术指导原则二〇一一年六月八日兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则等5个技术指导原则兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则一、概述临床试验是指在一定控制条件下科学地考察和评价兽药治疗或预防靶动物特定疾病或证候的有效性和安全性的过程。

充分、可靠的临床研究数据是证明所申报产品安全性和有效性的依据。

兽用中药、天然药物的研制过程，与西兽药相比，既有相同点，也有其特殊性。

首先，中药新药的发现或立题，多来源于临床的直接观察及经验获得的提示；其次，中药内在成分及其相互作用的复杂性致使其药学、药效及毒理的研究面临更多的困难；再者，影响研究结论客观性和准确性的因素也相对较多。

因此，临床试验对中药有效性和安全性的评价具有更加特殊的意义。

为了保证兽用中药、天然药物临床试验结论的确实可靠，规范临床研究行为，根据《兽药注册办法》和《新兽药研制管理办法》制定本指导原则。

本指导原则旨在阐述兽用中药、天然药物临床试验设计和实施过程中应把握的一般性原则及关键性问题，为兽用中药、天然药物新产品研发提供技术指导。

二、兽用中药、天然药物临床试验的基本内容根据试验目的的不同，兽用中药、天然药物的临床试验一般包括靶动物安全性试验、实验性临床试验和扩大临床试验。

申请注册新兽药时，应根据注册分类的要求和具体情况的需要，进行一项或多项临床试验。

(一)靶动物安全性试验靶动物安全性试验是观察不同剂量受试兽药作用于靶动物后从有效作用到毒性作用，甚至到致死作用的动态变化的过程。

该试验旨在考察受试兽药使用于靶动物的安全性及安全剂量范围，为进一步临床试验给药方案的制定提供依据。

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时间短，血药浓度高，代谢和消除快。诺氟沙星、环丙 沙星、恩诺沙星、氧氟沙星等都属于喹诺酮类抗生素， 因喹诺酮类抗生素具有抗菌广谱、机体吸收效果好、 半衰期相对较长等特点从而得到人们的广泛应用［5］。 1.2 蚕桑生产使用抗生素类蚕药的分析
近年来广西桑蚕饲养规模越来越大，蚕茧产量 一直位居全国前列，主要得益于“东桑西移”工程有 效落实，特别 2017 年蚕茧价格达到历史新高，部分地 区鲜茧收购价达 66 元 / kg，在高价格驱动下，蚕农想 方设法扩大饲养规模、增加饲养密度及提高饲养成 功率。广西地处亚热带地区，养蚕期高温多湿，病原 菌容易滋生繁殖，蚕病时有发生，饲养技术水平较低 的部分蚕农不注意前期的消毒防病，蚕病暴发时过 于依赖不法经营者推荐的“全能蚕药”。在走访部分 蚕区发现有些蚕农为了提高蚕体的抗病力，在饲养 过程中过量添食抗生素类蚕药，还发现已经撤销相 关兽药产品批准文号的诺氟沙星原料药的各种盐、 酯及其各种制剂，仍在市场上售卖给蚕农使用，甚至 出现人用青霉素蚕用的现象。由于抗生素类蚕药宣 传不到位，蚕农不了解抗生素类蚕药的作用、利弊及 使用方法，这无疑导致抗生素类蚕药的超标添食及 滥用问题。据秦美云［6］调查，一到养蚕季节，违法制 售、使用禁用兽（蚕）药行为屡禁不止。在家蚕饲养 过程中添食抗生素类蚕药来提高养蚕成功率，追求 经济效益成为部分蚕农通用做法。
抗生素类蚕药的使用分析及讨论
谭汪英 1，贾雪峰 1，黄胜 1，李秋云 1，陈枝 1，黄双平 2，黄守洋 3
（1.广西壮族自治区蚕业技术推广总站，南宁市 530007； 2.柳州市柳江区蚕业技术服务指导站，柳州市 545100；3.柳州市鹿寨县蚕业指导站，柳州市 545600）
摘 要 抗生素类药剂自发现后被广泛用于畜禽饲养，其优缺利弊各有评价。蚕农在饲养家蚕过程中添食抗生素 类蚕药也屡见不鲜。通过分析蚕农使用抗生类蚕药的利弊，讨论添食常见抗生素类蚕药对蚕桑生产的影响以及滥 用抗生素类蚕药通过桑蚕饲养进入食物链进而对生态环境和人体造成素类蚕药，规范鲜蛹生产，利用生物菌发酵蚕粪。 关键词 种桑养蚕；抗生素；蚕药；影响 中图分类号 S884.1； 文献标识码 A； 文章编号 1006-1657（2018）02-0035-04

水产养殖用抗菌药物药效试验技术指导原则一、概述水产养殖用抗菌药物药效试验用于评价抗菌药物防治水产动物目标适应症的效果和发现可能存在的不良反应，以确定药物的有效性和给药方案。

本指导原则适用于水产养殖用抗菌药物的药效试验，仅代表目前对水产养殖用抗菌药物药效试验研究的一般性认识，旨在为水产养殖用抗菌药物药效试验研究者和药品注册申请人制订、实施与监督药效临床试验方案提供技术指导和参考。

二、试验设计原则试验应遵循《兽药临床试验质量管理规范》（GCP）的规定。

试验设计应遵循“随机、对照、重复”的基本原则。

随机，即按机遇原则进行分组、取样和试验；对照，进行试验研究必须设立对照组，通过对照来鉴别处理因素与非处理因素之间的差异，抵消或减少试验误差；重复，即实验要有足够的样本含量，有重复的例数和平行操作，且试验结果要有重现性。

此外还应考虑均衡原则，均衡就是使对照组与试验组中的非处理因素尽量达到均衡一致，使处理因素的试验效应能更真实地反映出来。

不同的抗菌药物作用机制不同，各有特点，本指导原则不可能涵盖水产养殖用抗菌药物药效试验研究的全部实际情况，当进行药效试验研究时应结合受试药物的自身特点、受试动物及其感染疾病的种类，遵循“具体问题具体分析”的原则，根据实际情况确定药效试验的内容和顺序。

三、基本内容（一）环境条件每个试验水体应能保持环境稳定，不受外界环境变化或污染的影响，且相对独立。

试验水体必须能满足水产动物的生理要求，单位试验水体体积一般不小于100L,放养密度应控制在不影响受试动物正常生理活动的范围。

试验用水的水质应符合GB11607《渔业水质标准》要求，自来水应曝气48h以上，天然水应自然沉淀24h再过滤后使用。

一般应在以下表格中规定的条件下进行试验，特殊情况下按自然发病水温进行试验。

必要时可采取充气、换水、控温等措施以满足受试动物必要的正常生长条件，试验期间应按要求定期测定并记录水温、pH、溶氧或盐度（海水）等参数，试验用水的排放应符合G C P相关要求。

蚕药的研发历程
传统经验阶段
蚕药的研发最初是基于传统经验和民间偏方，通过对病原 体进行观察和识别，逐渐筛选出有效的中草药和化学药物 。
科学实验阶段
随着生物学、药理学等学科的发展，蚕药的研发逐渐进入 科学实验阶段，通过实验室试验和临床试验等手段，对药 物的疗效和安全性进行评估。
现代化阶段
近年来，随着生物技术的飞速发展，基因组学、蛋白质组 学等技术逐渐应用于蚕药的研发，为新药的发现和优化提 供了新的途径。
05
蚕药的发展趋势与挑战
蚕药的市场前景与预测
蚕药市场持续增长
随着蚕业生产的稳步发展和蚕病危害的增加，蚕药市场需求持续增长，市场前景广阔。
新型蚕药研发推动市场
针对新型蚕病和抗药性问题的出现，研发新型高效、安全的蚕药是市场发展的重点，也将推动蚕药市 场的增长。
蚕药的研发难点与热点
研发难点
蚕药的研发需要针对不同的蚕病种类和 发病机制进行，研发过程复杂，周期长 ，投入大，是蚕药研发的难点。
目前无特效药，主要是加强饲养管理 ，提高蚕体抗病力。
真菌性病害
使用抗真菌药，如制霉菌素，按比例 混入桑叶中喂养。
蝇蛆病
使用杀虫剂，如敌百虫，喷洒在蚕体 和蚕室中杀灭蝇蛆。
蚕药的选用原则
01
根据蚕病症状选择合适的药物 ，不随意使用抗生素和其他药 物。
02
注意药物的安全性，选用无残 留、无毒性的药物。
蚕药的市场现状
01
市场规模
蚕药市场在近年来持续增长，市场规模不断扩大。随着养蚕业的不断发
展，蚕药市场的需求也在不断增加。
02
主要产品
目前市场上主要的蚕药产品包括抗生素类、抗菌类、抗病毒类、抗真菌
类、营养补充类等。其中，抗生素类药品是市场上的主要产品之一。

兽用中药和天然药物临床试验技术指导原则
(一)靶动物安全性试验 (二)实验性临床试验 (三)扩大临床试验
靶动物安全性试验每组最低动物数
受试动物种类
马、牛等大动物 羊、猪等中动物 兔、貂、狐等小动物
犬、猫等宠物 家禽
动物数
5 8 10 8 15
实验性临床试验每组最低动物数
受试动物种类
马、牛等大动物 羊、猪等中动物 兔、貂、狐等小动物
犬、猫等宠物 家禽
动物数
自然病例
病症模型
10
5
20
10
20
15
15
10
30
15
扩大临床试验每组最低动物数
受试动物种类
马、牛等大动物 羊、猪等中动物 兔、貂、狐等小动物
犬、猫等宠物 家禽
动物数
散发病例
群发病例
20
30
30
50
30
50
20
30
50
300
兽用生物制品实验室安全试验技术指导原则
一次单剂量接种的安全试验 单剂量重复接种安全试验 一次超剂量接种的安全试验 对怀孕动物的安全性及对动物生殖功能影响试验 对非靶动物、非使用日龄动物的安全试验 疫苗接种对靶动物免疫学功能影响试验 疫苗水平传播试验 对靶动物生产性能的影响试验
动物试验相关指导原则
2020-6-16
临床试验技术规范（试行） 一、抗寄生虫药物试验
抗蠕虫药：包括驱吸虫、 线虫、绦虫等
抗原虫药：包括抗锥虫、梨 形虫、球虫等
杀虫药：包括驱、杀昆虫、蝇、 虻、蚊、蜱、螨、蠓、虱、蚤等
抗球虫药
1. 试验动物大、中家畜可采用人工感染与自然感染相结合的方式。小家畜及家禽 均采用人工感染方式。

生物制品稳定性试验指导原则稳定性试验是贯穿于整个药品研发、临床、上市及上市后质量研究的重要内容，是产品有效期制定的依据，为药品的生产工艺、制剂处方、包装材料、贮存、运输条件等方面提供依据，同时也是产品质量标准制订的基础。

生物制品对温度、湿度、光照等环境因素影响更为敏感，为保证其安全有效，避免失活或降解，必须根据产品的特点开展相应的稳定性试验。

本技术指导原则适用于生物制品稳定性研究设计和结果分析等。

对于一些特殊品种，如基因治疗和细胞治疗类产品等，还应根据产品的特点开展相应的研究。

本指导原则的目的是规范生物制品稳定性试验研究与评价，以便更加全面、科学、有效的开展相应工作。

1.方案制定稳定性试验应制定产品稳定性评价的详细方案。

该方案能支持产品建议的贮存条件和有效期。

方案应包含证明产品稳定性的试验类别、试验样品、试验项目、试验条件、试验时间和结果分析等内容。

2.试验类别稳定性试验主要包括影响因素试验、加速试验和长期试验等。

影响因素试验是考察各种极端因素（如高温、光照、反复冻融、振动、氧化、酸碱等相关条件）对产品的影响，目的是探讨药物的固有稳定性、了解影响其稳定性的因素及可能的降解途径与降解产物，为制剂生产工艺、包装、贮存条件和建立降解产物分析方法提供科学依据。

加速试验是通过不同的温度探讨药物的稳定性，为制剂设计、包装、运输、贮存提供依据。

长期试验是在设定的贮存条件范围内进行，其目的是为制定有效期提供依据。

3.试验样品可分为上市前和上市后试验样品，通常包括原液、成品及产品自带的稀释液或重悬液等。

对需要保存一定时间的中间产品也应进行相应的稳定性研究。

上市前稳定性试验的样品至少应为三批，上市后稳定性试验的样品批数可根据产品特性、工艺、规模等因素确定。

若发生会影响产品稳定性的变更应取三批样品进行稳定性试验。

原液或中间产物尽量采用与规模化生产时相同材质的容器和密闭系统；成品应采用与规模化生产时相同的包装容器与密闭系统。