2 附子研究概况
附子为亚门毛茛科(Ranunculaceae)植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx．)侧根(子根)的加工品，其性大热、辛、甘，归心、肾，生品极毒。中医认为附子具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛、逐风通痹、温阳行水等功效。附子始载于《神农本草经》，主风寒咳逆邪气，温中，金疮，破症坚积聚，血瘕，寒湿，拘挛膝痛，不能行步[1]。
2.1 附子化学成分研究
国内外学者对附子化学成分的研究表明，附子的化学成分分为生物碱类物质、脂类物质和多糖类物质三大类。其中生物碱类物质为其主要成分，包括脂溶性生物碱：乌头碱（aconitine），中乌头碱（新乌头碱mesaconitine），次乌头碱（下乌头碱、海帕乌头碱hypaconitine），塔拉乌头胺（talatisamine），和乌胺（higeramine）棍掌碱氯化物（coryneine chloride）[2]，异飞燕草碱（isodelphinine），苯甲酰中乌头碱（benzoyl mesaconitine），新乌宁碱（neoline），北乌头碱（beiwutine），多根乌头碱（karakoline），去氧乌头碱（deoxyaconitine），准葛尔乌头碱（songorine）；水溶性生物碱：江油乌头碱（jiangyouaconitine），新江油乌头碱（neojiangyouaconitine）、尿嘧啶(Uracil)[3]、附子亭碱（fuzitine）、消旋去甲基衡州乌药碱（demethylcoclaurine）[4]、、附子宁碱（fuziline）、去甲猪毛菜碱（salsolinol）[5]等。其中双酯型生物碱乌头碱（aconitine），中乌头碱（mesaconitine），次乌头碱（hypaconitine）为其主要成分，约占0.4%-0.8%，易溶于氯仿、苯、无水乙醇和乙醚，难溶于水，微溶于石油醚，既是附子的药效成分，又是毒性成分。三者易水解成为毒性较小的单酯型生物碱：苯甲酰乌头碱（乌头次碱Benzoylaconine)、苯甲酰中乌头碱(Banzoylmesaconine)、苯甲酰次乌头碱(Benzoylhypaconine)[6]。其毒性仅为双酯型生物碱的1/1000。单酯型生物碱如果进一步水解则变为毒性更小或无毒的醇胺类生物碱：乌头胺(乌头原碱Aconine)、中乌头胺(Mesaconine)、次乌头胺(Hypaco-nine)。其毒性仅为乌头碱的1/2000左右[7]。此外，附子还含有棉子油、蓖麻油、附子脂酸等脂类物质和乌头多糖。
2.2附子主要药理作用
2.2.1 对心血管系统的作用
研究表明，附子对心血管系统的用主要体现在以下几个方面。首先是强心作用，附子的强心机理是附子中的强心成分致β受体兴奋，释放儿茶酚产生强心作用。已经被证明的具有强心作用的成分有去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱、氯化甲基多巴胺、尿嘧啶以及附子苷，其中去甲乌药碱活性很强，对体内心脏、离体心脏和功能衰竭的心脏均有较强的强心作用，在稀释至10-9时仍表现出强心作用。秦永刚[8]等用离体蛙心，对不同蒸煮时间的附子进行了强心作用及心脏毒性的初步
实验观察，实验结果表明，蒸煮8h、10h、12h的附子具有强的正性肌力作用，且心脏毒性显著降低。张志仁[9]等的研究表明附子炮制前后有效部位对正常及心衰大鼠血流动力学作用趋势一致，且对心衰大鼠血流动力学作用较正常大鼠血流动力学作用显著。第二是抗心肌缺血缺氧的作用。附子中的生物碱具有扩张冠状血管和四肢血管的作用，可抗急性心肌缺血及常压下缺氧[10]。第三是增强心率、对抗缓慢型心律失常。附子中水溶性成分能对抗乌头类生物碱所诱发的心律失常，但是对多巴因、三氯甲烷所引起的心律失常无效，具有特异性。附子注射液可对抗垂体后叶素所致的各种不同类型的心律失常[11]。第四是对血压的影响。附子中的水溶性成分对血压的影响具有双重性，去甲乌药碱可以降血压，而氯化甲基多巴胺和去甲猪毛菜碱具有升压的作用。第五是抗休克作用。附子煎剂及复方可减缓血压下降、心率减慢等，能显著延长休克动物生存时间[12]。
2.2.2 抗炎镇痛作用
大鼠足踝肿胀实验证明，附子具有显著的抗炎和对外周性疼痛的镇痛作用。其抗炎镇痛机理，学术界的看法不一，除了已经被证明的具有较好抗炎作用的乌头类生物碱[13]和一些水溶性的成分外，还有一部分学者认为附子的抗炎镇痛与垂体-肾上腺皮质系统有关[14]。因此，附子的抗炎及镇痛的作用机理和有效活性成分有待进一步研究探讨[15]。
2.2.3 免疫系统作用
附子对免疫系统的作用表现为增强脾细胞的增值反应，增强巨噬细胞表面Ia抗原表达，增强红细胞免疫复合物(RBC—IC)花环形成率，产生抗体，提高免疫能力。马健[16]等研究发现乌头碱可增强巨噬细胞表面Ia抗原表达，提高抗原能力，从而增强机体免疫应答反应。此外，阮期平[17]等研究还发现附子中有两种糖复合物，同样具有抗癌、抗衰老和增强免疫机能的作用。
2.2.4抗肿瘤作用
附子具有很好的抗肿瘤作用，其抗肿瘤成分为多糖类成分，抗肿瘤机制为增强机体细胞的免疫功能，诱导肿瘤细胞凋亡，调节癌基因的表达。多位专家对此进行了研究，彭文珍[18]等研究发现附子多糖对HL-60有诱导分化作用。
2.2.5 其他作用
除上述介绍的药理作用外，附子还具有抗衰老、抗肾上腺素[19]、兴奋离体肠管自发性收缩、降糖等作用。张涛[20]等研究结果表明，附子能提高老年大鼠血清总抗氧化能力及抗氧化酶活性，降低自由基代谢产物的含量，提高机体抗自由基能力，减少脂质过氧化，改善细胞膜的流动性，从而保证细胞膜的完整和功能，起到延缓衰老的作用。附子多糖可以通过提高对葡萄糖的利用，但不提高胰岛素水平的方式起到降糖的作用。
2.3 乌头碱的毒性及中毒机制
附子的主要成分为双酯型的生物碱，包括乌头碱、次乌头碱、新乌头碱，它们既是附子的活性药效成分又是毒性成分。中毒剂量为0.2mg，服用剂量为2～4mg时即可致死。乌头碱的毒性主要作用于神经系统、消化系统、心血管系统和呼吸系统。对于神经系统，乌头碱能够对各种神经末梢和中枢系统产生一个先兴奋后再抑制的过程，并对心肌直接作用，进而造成呼吸中枢麻痹，中枢性血压下降，甚至引起室癫而死亡。对于心血管系统，乌头碱对心脏的损害最严重，临床表现为心悸、胸闷、血压下降、心率失常、心率减慢或过速，严重甚至发生心跳骤停、急性心源性脑缺血综合症等[21]。对于消化系统，乌头碱对胃肠迷走神经的兴奋作用可引起流涎、吞咽困难、恶心、频繁呕吐、胃部灼热、腹痛、腹泻、肠鸣音亢进，严重者可导致呕吐咖啡色样液及解鲜血样粪便，里急后重，酷似痢疾等表现[22]。对于呼吸系统，乌头碱的毒性可导致呼吸困难、呼吸麻痹甚至休克死亡。
2.4 附子有效成分的检测
附子化学成分复杂，其中药效表现最为明显的当属生物碱类成分，然而其剧毒性也是有目共睹的。附子的药效大小可以用总生物碱的含量来衡量，但不能以此来衡量附子的毒性大小。因为总生物碱包含多种类型的生物碱，各类型生物碱之间毒性差异极大，其中以双酯型生物碱的毒性最大，其他如单酯型、氨醇型生物碱的毒性很小。因此当以双酯型生物碱的含量作为毒性指标。附子中有效成分的检测方法主要有以下几种：
2.4.1总生物碱的检测
附子总生物碱的测定有两种常用方法，其一为药典方法，即中和滴定法，分为直接滴定法和回滴定法，直接滴定法的滴定终点不明显，不易判断；回滴定法灵敏度低，误差大。其二为酸性染料比色法，该法的原理是在酸性染料的作用下，生物碱类药物和氢离子结合而成的阳离子与酸性染料中的阴离子定量的结合成有色离子，经有机溶剂的提取后，在一定波长下测其吸收值，经数据处理后可得总生物碱的含量。该法灵敏度高，样品用量少，专属性好，但是对实验条件的要求严格，对实验条件十分敏感，稍作改变即会对结果产生较大影响，因此最好能找出一种更好的替代方法[23]。
2.4.2 双酯型生物碱与单酯型生物碱的检测
单一成分的酯型生物碱的含量测定方法主要有3种：第一为薄层色谱法，在一定的波长下用紫外或是可见光照射薄层板，在薄层板上对紫外或可见光有吸收的物质就会产生相应的斑点，对其进行扫描，扫描得到的图谱和积分值可用做药材的质量检查。该法可同时分析多个样品，展开剂用量少、选择多，样品处理简单。范时根[24]等以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(10:5:1)为展开剂，改良碘化铋钾试剂喷雾，样品波长500nm，参比波长600nm，测定附子中的乌头碱含量，效果良
好。第二为高效毛细管电泳法，该法具有分离时间短、杂质干扰少、使用有机溶剂少、操作简便等优点，已被香港工业署组织的中药质量控制实验室用作有毒中药材的质量管理控制，是一种很有应用前景的分析方法[25]。第三为高效液相色谱法法(HPLC)，该法是现代中药检测中应用最多的方法，该法检测准确、灵敏度高、分离效果好、线性范围广，且能够同时检测几种生物碱含量。近年来，运用HPLC 法对附子中的生物碱进行检测的研究报道较多，方法不尽相同。如刘岚等[26]选用Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱，以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:1:0.15)为流动相同时检测成药中4种乌头类生物碱含量。贾金艳[27]等采用Welchrom-C18(5μm, 4.6mm×250mm)色谱柱，以甲醇-水-三乙胺(75:25:0.033)为流动相检测了附子中新乌头碱的含量，实验结果表明该法稳定可行,准确性好。侯大斌[28]等采用Zorbax extend-C18(150mm×4.6mm,5.0μm)色谱柱，乙腈—0. 1%乙二胺为流动相进行梯度洗脱，时间程序为0→15→30→35→60 min，乙腈体积分数相应为35%→50%→75%→35%→35%，对附子不同组织中的生物碱含量进行了测定与比较。
2.5附子炮制工艺研究概况
附子因其出色的临床效果为医家首肯，然而又因其毒性，让人敬而远之，为了安全考虑，临床上必须使用经过炮制的制附子。附子的炮制历史悠久，古人从汉代即开始对附子进行加工炮制，随着时代的发展，附子的炮制方法不断得到改进，到现在已经发展出多种工艺十分成熟的炮制方法，既有对传统炮制方法的改进又有现代创新的新炮制工艺。现从传统炮制工艺和现代炮制工艺两方面进行说明。
2.5.1 传统炮制工艺
传统的附子炮制工艺以减毒为主要目的，以此来保证用药的安全性，现在临床上使用最多的主要有以下几种：
盐附子：选择大小均匀的泥附子，洗净，于食用胆巴水溶液中浸泡过夜，然后加食盐，再浸泡，每日取出晒晾，并逐步延长晒晾时间，直至附子表面出现大量结晶盐粒（盐霜）、体质变硬为止，即得盐附子。
淡附片：取盐附子，清水浸漂，每日换水2～3次，至盐分漂尽，与甘草、黑豆加水煮至透心，切开后口尝无麻舌感时，取出，除去甘草，黑豆，切薄片，晒干。每 100kg盐附子，用甘草 5kg、黑豆10kg。即得淡附片。
黑顺片：取泥附子，洗净，于食用胆巴水溶液中浸泡数日，连同浸液煮至透心，捞出，水漂，切片（厚约0.5cm），再用水浸漂，用调色液将附片染成浓茶色后取出，蒸至出现油面、光泽，烘至半干，再晒干或继续烘干，即得。
白附片：选择大小均匀的泥附子，洗净并浸入食用胆巴的水溶液中，数日后，连同浸液煮至透心，捞出，剥皮，切片（厚约0.3cm），用水浸漂，取出，蒸透，
晒干，即得。
2.5.2 现代炮制工艺
传统的炮制方法因为过分强调安全性，以减毒为目标，导致有效活性成分流失，在降毒的同时药效大打折扣，并且整个过程费时费力，劳动强度大，度难以把握。有文献报道附子在炮制过程中，胆巴水泡损失31.6％生物碱，漂片损失33.6％生物碱，水解损失16.19％生物碱，生物碱减少量达81.39％”[29]。因此，在保证药效的前提下，有必要将传统炮制方法与现代科学结合，对炮制工艺进行创新。
高压蒸煮法：将洗净的附子经胆巴水浸，清水漂后切片， 110℃及68.65KPa 下蒸30min，干燥即得。该法降低了生物碱的毒性，减少了活性成分的流失，节省了时间，提高了效率。
微波炮制法：将制好的淡附片，再蒸制10～20min，晾干或烘干后，用微波进行辐射干燥，制得最终含水量在10%以下的附片。微波炮制法生产效率高，成本低，火候易控制，制得的附子毒性低，药效好。研究结果显示，将生附子制成微波附子后，水溶物和石油醚溶出物比例明显增大，而以毒性双酯型乌头碱为主的乙醚溶出物含量相对变化不大，这说明微波炮制使药物质地疏松，有效成分溶出率增大，同时破坏了毒性成分[30]。
附子颗粒：将附子通过水提醇沉的方式进行提取，将提取液浓缩，然后进行喷雾干燥制成附子颗粒。该法在保持药效的同时还表现出了增效特性，提高了附子的价值，是一种高效、稳定、可控的中药附子新型颗粒制剂[31]。
由此可见，尽管附子的炮制在传统基础上已有所创新，但是过程依然复杂，不易把握尺度，即使是制附子入药一般也要求煎煮较长时间以保证用药的安全，而煎煮时间过长则会影响疗效，给临床应用带来诸多不便。因此，应该寻求一种全新的炮制方法使附子的达到减毒增效的作用。
3 中药生物转化研究
长久以来，中药以其独特的入药方式、作用方式以及卓越的疗效为中华名族做出了巨大的贡献，特别是在一些疑难杂症上，中药往往更能切中要害，带来突出疗效。然而，我国的中草药在国际天然药物中却无法大放异彩，而且近年来，在国内也有发展变缓的趋势。究其原因主要是现代中药研究技术的相对落后，科技含量低，西方医药管理部门不认可直接以中药或中药复方为药，以及中医理论与现代科学技术脱节。因此，如何寻找一条新的途径或引入一种新的理论，使传统的中药与现代科学技术相结合，是我国中药现代化的重要课题。中药生物转化技术就是将中药与现代生物技术、生物工程技术和酶工程技术相结合所发展起来的一种新的中药炮制方法，已被列为国家科技部“十五发展规划”中的重要项目之一[32]。
生物转化是指利用酶或有机体(细胞、细胞器)作为催化剂实现化学转化的过程,又称生物催化,是生物体系(包括细菌、真菌、植物组织、动物组织培养系或生物体系的酶制剂)对外源性底物进行结构性修饰所发生的化学反应[33]。
中药生物转化是指将优选的一种或几种菌种，加入经预处理的中药（粉碎或提取液），利用微生物的生长活动产生的酶或有机体(细胞、细胞器)作为催化剂，实现对外源性底物的结构性修饰，最后经药化和药理实验对转化前后进行分析比较的过程，可以说是一种全新的中药炮制方式。
3.1 中药生物转化的历史
在我国悠久的中医中药发展史上，中药的生物转化其实并不陌生，早在千年前，我国就开始了用生物转化的方法制药，直到今天临床上仍有在应用的生物转化(制品)中药，比如六神曲、半夏曲、淡豆豉、豆黄等,它们均为固态发酵，且都在天然条件下进行。中药生物转化技术改变了传统的煎、煮、蒸、熬、浸等炮制工艺，而通过微生物的生长代谢和生命活动产生代谢产物的方式，使中药的药效提高或药性发生改变，以达到提高中药药效、改变药性、降低毒副作用等目的[34]。如中药淡豆豉，若以桑叶、青蒿生物转化，药性偏于寒凉，多用于治疗风热感冒或热病胸中烦闷；若以麻黄、紫苏生物转化，则药性偏于辛温，多用于治疗风寒感冒头痛[35]。但是由于传统的中药生物转化都是利用自然界的菌种，在天然条件下进行，存在菌种不纯、菌种有限、易染菌、针对性不强、难以有目的地定向的改变药物性质的问题，所以中药的生物转化发展缓慢。
3.2 中药生物转化的研究现状
中药的生物转化研究起步较晚，始于20世纪80年代。在天然药物化学研究领域，人们在不断寻找新的中药活性结构的同时，也不断对已知的中药活性化合物进行结构优化和改造，以期获得疗效强，毒副作用小的新型产物[37]。
现代研究表明，微生物菌群具有氧化、酯化、甲基化、羟基化、还原化等多种生物转化能力[38]。研究初期主要研究真菌类自身生物转化产生次生代谢产物，多为单一生物转化，如灵芝菌丝体、冬虫夏草菌丝体生物转化等[39]。随着研究的深入与发展，中药生物转化菌种由真菌类生物转化转向细菌、霉菌、酵母菌等生物转化，单一菌种向多菌种混合生物转化发展，生物转化方式也分为了固态发酵、液态生物转化和药用真菌双向固态发酵。生物转化技术还可以应用于体外模型进行药物代谢的研究。目前有关天然产物研究报道较多的是人体肠内菌群对天然产物的转化作用。
目前国外关于中药生物转化的报道较少，一些研究者对中药中单一有效成分的转化研究较为深入，得到了一些新化合物，部分化合物的活性超过了母体化合物。日本的纳豆胶囊是国外中药生物转化研究的典型，采用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis Natto）生物转化大豆，可以提取纯化一种具有溶栓活性的纳
豆激酶（nattokinase）,该酶可以延长血栓形成时间，提高血栓再通率，减少肺内血栓的形成，且起效快、药效长。Suzukia[40]等研究发现，纳豆激酶能显著的降低血浆优球蛋白的溶解时间，降低血浆纤维蛋白原的含量，增加纤维蛋白裂解产物的含量。
3.3 中药生物转化的作用机理
生物转化是指利用酶或有机体(细胞、细胞器)作为催化剂实现化学转化的过程,又称生物催化,是生物体系(包括细菌、真菌、植物组织、动物组织培养系或生物体系的酶制剂)对外源性底物进行结构性修饰所发生的化学反应[41]。中药生物转化机理比较复杂，主要是利用不同微生物种群间的协同效应，依靠微生物生长代谢产生的代谢产物对中药进行生物转化以产生新的药效或提高药效。
一般说来，微生物生物转化在常温常压条件下进行，因此在此条件下的中药生物转化能够最大限度地保护中药中活性成，尤其是热敏感的芳香类挥发油、维生素等活性成分。微生物在生物转化时，中药中的物质成分可能对微生物的生长和代谢有促进或抑制作用，产生新的代谢反应，从而改变代谢途径，产生新的未知成分或改变已知成分的含量。同时微生物的分解作用也可能分解中药中的有毒成分，降低药物的毒副作用。
微生物分解中药成分主要依靠微生物代谢所产生的酶，不同种类的微生物以其独有的代谢方式产生不同种类和不同功效的酶。微生物代谢产生的酶主要有纤维素酶、木质素酶、淀粉酶、蛋白酶、脂酶等多种胞内酶类和胞外酶类。此外微生物在新陈代谢中还会产生丰富的次生代谢产物。
3.4 中药生物转化的优势
通过微生物生物转化来炮制中药,可以比一般的物理或化学的炮制手段更大地增强或调整药性,从而提高中药疗效,降低中药毒副作用,扩大中药适应症[42]。现代研究表明，作为一种新的中药炮制方法，较之中药的其他炮制方法，中药生物转化具有很多优势，具体有以下几点。
3.4.1 提高药效
通过中药的生物转化来提高药效的方式主要有两种。一种是提高中药有效成分的提取率，因为微生物在生物转化过程中会分泌纤维素酶、果胶酶、淀粉酶等多种胞外酶，这些酶能使细胞破裂，细胞间隙增加，使中药的有效成分更易向胞外扩散，从而提高提取率。盾叶薯采用预生物转化的方式可以明显提高其有效成分盾叶薯苷元的含量。另一种是提高有效成分的吸收和利用，中药中不能被人体利用的大分子有效成分经生物转化后分子量小的活性物质，更易被人体吸收利用。
3.4.2产生新物质
在中药生物转化的过程中，微生物会产生多种酶和多种代谢物质能够将中药
中的某些成分分解转化成其他物质；同时在生物转化过程中，中药中的某些成分会对微生物的生长产生促进或抑制作用，甚至会改变自身的代谢方式，中药中的某些物质会被酯化、氧化、甲基化、异构化等转化形成新物质。这种形成新物质的化学变化较之简单的化学反应具有反应选择性强、反应条件温和、副产物少、不造成环境污染和后处理简单等优点[43]。如李国红[44]用枯草芽孢杆菌对三七须根进行生物转化，得到了5个新的成分。
3.4.3减毒增效
研究表明，在中药生物转化过程中，微生物可能将中药中的有毒物质分解或异构化，从而降低药材本身的毒性，有的甚至会增加药效。利用微生物生物转化的这一优点，对某些有毒性的中药的炮制就显得特别有意义。如乌头类药材，其药效成分亦为毒性成分，若能找到一种能将毒性成分进行结构修成异构体或结构类似物，毒性减小但作用效果不变的微生物，对乌头类药材进行生物转化，将会对乌头类药材的炮制开辟一片新的天地。如喜树碱虽然能够很好的抑制肿瘤活性但又具有严重的胃肠毒性，在抑制骨髓功能的时候引发出血性的膀胱炎。朱关平[41]采用无毒黄曲霉菌株将有毒的喜树碱经生物转化成了10-羟基喜树碱，10-羟基喜树碱为喜树碱的结构类似物，药效与喜树碱相似但毒副作用很小，且转化率达到了50%以上。
3.4.4保护活性成分免遭破坏
微生物生长通常是温和的常温、常压下进行，中药的有效成分在此条件下能够免遭破坏，尤其是一些对热较敏感的芳香类挥发油、维生素等活性成分能够更好的得到保护[45]。
3.4.5节省药源和能源
中药经生物转化后能够提高含量，提高药效，因而较之其他用药方式，可以减少中药用量，同时由于中药转化都是在温和的条件下进行，对动力的要求不高，所以能够节约能源。
3.4.6提高中药现代化水平
通过微生物生物转化有针对性的处理中药的特定成分，将对中药炮制技术与生物技术相结合，提高中药现代化水平，可以实现产业开发。
3.5中药生物转化的方法步骤
无论是单味中药还是复方中药，实质上都是一个由多种成分组成的混合物，中药生物转化的目的就是将其中一种或几种特定有效成分试图通过微生物的作用转化成其他新的物质或是提高目标物质的含量，然后对新物质进行药理试验，并最终应用于临床，实现生物转化与中医中药理论的现代化结合。通常中药的生物转化分为以下几个步骤：
3.5.1中药材的选择和前处理
在选择用以生物转化的药材是应选择药物成分明确、药效明显的单味药材或是中药复方，并对中药材进行前处理（粉碎或提取）。李国红等用枯草芽孢杆菌对50种中药进行生物转化,检测生物转化产物与原料对结核分支杆菌和榛色青霉的抗菌活性，部分中药的生物转化产物抗菌活性增加，部分中药的生物转化产物抗菌活性降低，部分中药的则活性没有变化[46]。
3.5.2筛选菌种
不同中药中有效成分不同，能利用这些有效成分的微生物种类各不相同。真菌由于能分解纤维素酶、淀粉酶、蛋白质酶等功能强大的酶类，对天然培养基的分解能力较强，故而在前期的研究中是中药生物转化的主要功能菌；随着研究的深入，细菌以生长繁殖速度快、针对性强、有较强的综合转化能力等优点受到广泛关注，特别是利用人体肠道中的有益菌群对中药进行转化已然成为当前中药生物转化研究的热点。杨秀伟等利用肠道细菌对苷类、黄酮类、香豆素类等中药活性成分进行生物转化[47]。
3.5.3最佳生物转化工艺
结合当前中药生物转化的研究，影响中药生物转化的主要因素是生物转化工艺。在整个生物转化过程中，微生物种类、培养基成分、培养条件（PH、温度、水分、时间、氧气）等都会对微生物的生长，微生物对培养基的利用，甚至是生物转化产物的组成比例造成影响，因此在生物转化时应该对其最佳生物转化条件进行研究，确定最佳生物转化工艺。过去由于科技水平和生产技术的限制，中药生物转化的条件难以控制，尤其是温度和湿度的控制只能凭经验,因此影响了中药生物转化质量的稳定性。随着科技的发展，现在无论是实验室还是生产上已经可以进行精确的控制，因而大大的提升了中药生物转化的质量和稳定性。如杨红亚等利用正交试验设计法，优化薏苡仁生物转化条件，并对其进行抗肿瘤活性研究，探讨其最佳转化条件[48]。药理实验
药理实验是检验中药生物转化效果好坏的重要保障，能更加明确微生物的性质和生物转化过程。通过药理实验将药材原料与生物转化产物进行对比研究，对药材生物转化前后有效成分、药理药效及毒性进行对比，达到筛选微生物和寻找天然产物替代物的目的。药理实验分为体外实验和体内实验，体外实验常用于大量筛选，体内实验常用于针对性较强的成分，体内实验较之体外实验省时、省力、成本低。何晨等利用芽孢杆菌生物转化炮制中药红花,药理学研究表明生物转化后可提高纤溶酶活性、抗凝作用,增强溶血栓药效[49]。
3.6 生物转化技术在中药炮制中的应用展望
中药生物转化作为一种新的中药炮制方法，不仅具有提高药效、减毒增效、节约能源药源等优点，更重要的是它可以为中药的深入发展和多元化研究提供方向。通过中药的生物转化提高中药的有效成分，可以实现产业开发；利用微生物
对某些天然活性成分的结构改造与修饰，产生新物质的特点，可以用于开发新型天然药物及大量稀有天然药物，寻找和开发新的高效低毒药物或其替代物，特别是在中药新药开发方面，利用生物转化技术可以扩大中药的治疗范围、进行剂型改进、创制新药，同时与高效快速药物筛选手段结合，不仅能为中药新药研究开发注入新的活力并带来革命性的变革，还对开发具有自主知识产权的新药、形成具有中国特色的生物转化研究体系具有重要意义，这已经被证明是最行之有效的开发新药的途径之一，具有广阔的发展前景。
然而，复杂的中药材与复杂的生物转化技术的结合必然更复杂，必须要找到一个合适的切入点，才能更好的把握中药生物转化技术的发展方向，可以说，中药的生物转化的发展方向将会影响到中药未来的发展。因此，对于今后中药生物转化的发展方向可以从以下几个方面进行研究。第一，对用于生物转化的菌种应进行广泛筛选，除了肠道有益菌群以外，也可以尝试利用毒菌生物转化中药，有时候可能会产生意想不到的效果。如毒蝇鹅膏菌含有神经毒素,能引起人的精神幻觉,在欧美还有食毒蝇菌的嗜好。采用这类毒菌生物转化相应的戒毒中药,有可能对开发戒毒类药物有所帮助。第二，微生物的生长条件是中药生物转化的关键，必须完善中药生物转化技术及设备，以便能更好的控制生物转化条件；第三，研究复合微生物协同生物转化技术；第四，应用现代分析技术,建立快速灵敏的分析检测方法；第五，对生物转化中药及组方进行药理研究，建立有效的筛选模型；第六，将中医理论与现代技术相结合，建立新的中医理论。
4 中药指纹图谱研究
众所周知，中华民族的中医历史源远流长，中药更是整个民族的瑰宝。在中医传统理论中，中药体现的是某一复方中多味药材配伍、相生相克所表现出来的物质群的整体效果。复方中的各味药材，在煎煮、炮制等过程中会发生某些反应产生一些原药材所不存在的物质，正是这些物质有的时候产生了对人体有益的整体疗效。所以作为中医防病治病的物质载体，中药原料药材质量的的好坏会直接影响到中医临床疗效和安全。同时某些名贵中药材物以稀为贵，使得一些不法商人铤而走险，以次充好，做假冒伪劣产品，这些伪劣产品仅靠外观鉴别难以辨识，给人民、给社会带来了极大的损失。因此，必须对原料药材、饮片、半成品甚至成品进行质量控制。
目前，我国现行的质量控制体系对中药的质量控制内容包括外观鉴别、性状检查以及有效成分的含量测定[50]。
外观鉴别和性状检查方面，主要靠肉眼观察以及简单的理化检查，对外观相似和成分相近的种属，其局限性不言而喻。有效成分的含量测定方面，主要是通过测定中药中1~2个具有代表性的有效成分来进行定性和定量的分析，以控制中药原料或饮片的质量。然而这就与中药成分多样性，发挥药效时多成分、多靶点
协同作用的特性不吻合。所以无论是外观鉴别、性状检查还是含量测定，都存在专属性不强的弱点，具有很大的局限性，并不能完全的表达中药的整体特征，较难科学全面的对药材或饮片等进行评价。所以在这种环境之下，中药指纹图谱质量控制技术也就应运而生。
中药指纹图谱质量控制技术是指通过将药材中所含的多种代表性成分进行分离并给出相应数据和信息，然后形成具有专属性的物质群的指纹图谱，再与其它图谱进行比较和相似度分析来完成从整体性角度的评价和质量控制。它借用了法医学中指纹鉴定的概念，将作为对照的药材或提取物所表达出来的整体特征作为“指纹”，通过综合的、可量化的鉴定手段，将供试品与“指纹”进行相似度的比较，以达到鉴别真伪、评价原料药材或中成药批次间质量是否统一、稳定的目的。具有专属性的物质群所表现出的指纹图谱具有相同（似）性，即体现了中药指纹图谱的“整体性”和“模糊性”。所以中药指纹图谱是指中药原料药材、饮片、半成品、成品等经过适当的处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱[51]。其基本属性是“整体性”和“模糊性”[52]。中药指纹图谱能够全面反映中药材中所含化学成分的种类与数量，具有专属性强、稳定性和重现性好等优点[53]并且可以依据指纹图谱信息特征，采用模糊数学的处理方法科学地、恰当地评价中药材和中成药的质量[54]。同时它也具有一定的局限性，比如至今没有一个完整的专家系统或是数据库以供大家查阅，指纹图谱相关信息不系统，给大家带来了极大的困扰，且目前常用的色谱技术只能对生物碱、挥发油、皂苷等大部分中药有效成分进行检测，对一些大分子物质如蛋白质、多糖等就难以进行检测，所以指纹图谱难以成为常规的分析方法[55]。
指纹图谱常用的方法有：色谱法，包括薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)；光谱法，包括紫外光谱法（UV）和红外光谱法(IR)；核磁共振法(NMR)；联用技术，包括气质联用（GC-MS）、液质联用(LC-MS)、核磁共振氢谱（IH-NMR）和LC-DAD（二极管阵列）-MS；其中色谱法为主流方法。下面对这些方法的优缺点进行一个简单的比较，见表1.1。
表1.1 中药指纹图谱方法比较
Table1.1 The Research Method of TCM FP 方法特点
色谱法HPLC
柱效高、灵敏度高、分离速度快、分析时间短、应用范
围广，可配以不同流动相及检测器,可分析绝大多数的有
机化合物
GC
快速高效、分析时间少、样品用量少，对于富含挥发油
类中药材的鉴别是首选方法
TLC
快速、经济、操作简单、应用范围广、重现性好、结果
直观，可以提供彩色图像
光谱法
IR
操作简便、分析迅速、专一性强、不破坏药品、安全，
近红外法（NIRS）更适合现场和在线检测、
UV
灵敏度高、精密度好、操作简便、样品用量少，凡是对
紫外有吸收的物质均可检测
NMR
主要用于新药的开发，鉴定结构，可与多重设备仪器联
用
AAS
主要用于测定中药中锌、铜、铁、铬等微量元素的含量、
简便、灵敏、准确
XRD
各组分对X线照射而产生的衍射效应的叠加，样品用量
少、前处理简单、操作方便、图谱信息量大、指纹性强
联用法
LC-MS
GC-MS
IH-NMR
LC-DAD-MS
常与其他检测方式联用；可以进行药材或药物的分析、
结构鉴定，灵敏、精确、样品用量少
5 创新点
5.1 有利于中药炮制方法现代化的研究
在传统中药炮制中，通过煎、煮、熬、炼、蒸、浸的传统工艺，改变药物的药性，降低药物的毒副作用，使药效提高。生物转化的方法在中药的炮制中也常有用到，它就是以微生物生物转化的方法改变药物的性质。将炮制理论与现代生物转化技术相结合，以中药的毒性成分作为生化反应的底物，进而降低毒性成分的毒性，增加药物的功效，有利于中药炮制方法现代化的研究。
5.2 有利于中药炮制理论的继承与发展
中药炮制理论是中药理论的重要组成部分，以生物转化技术进行附子的减毒增效为突破口，可加快中药炮制对中药药性改变的深入研究，这不但可以证实中
药炮制理论的合理性和实用性，而且有助于对中药炮制理论进行科学的整理，使中药炮制理论更易被传承，有利于中药炮制理论的发展。
5.3 有利于提高临床用药的安全性
附子含有剧毒化学成分双酯类生物碱毒性，炮制或用药不当可引起严重的不良反应，甚至导致死亡。通过合理炮制有利于降低毒副作用，能有效提高临床用药的安全性，提高临床用药的疗效。生物转化的方法通过温和的生物生化代谢反应将药物结构进行修饰和改造，使药物具有更强的特异性和选择性，能挖掘出药物的的潜在作用。
第二章附子中3种双酯型生物碱含量测定方法的建立
生附子为毛茛科植物乌头（A conitum carm ichaeli Debx.）的子根（侧根），制附子为其加工炮制品，主产地为四川，湖北、湖南亦有。附子性味辛、甘、大热，归心、脾、肾经，有剧毒，具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪的功效。附子的主要化学成分是乌头类生物碱，可分为单酯类、双酯类和胺基醇类生物碱三类。其中双酯型生物碱包括乌头碱、次乌头碱、新乌头碱，它们含量高毒性大既是附子的药效成分又是毒性成分。
本实验以乌头碱、次乌头碱、新乌头碱对照品为对照，采用高效液相色谱建立一种可以同时测定附子中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱含量的测定方法，并对该法进行方法学验证。
1材料与试剂
1.1 材料
生附子产自四川省江油市，清水洗净，切片，约2cm厚，60℃烘干，打碎，过40目筛，备用。
1.2 试药
乌头碱对照（110797-200404）中国药品生物制品鉴定所
次乌头碱对照（110798-200404）中国药品生物制品鉴定所
新乌头碱对照（110799-200404）中国药品生物制品鉴定所
甲醇、乙腈色谱纯成都科龙试剂厂
乙酸铵色谱纯成都科龙试剂厂
氨水分析纯成都科龙试剂厂
异丙醇分析纯成都科龙试剂厂
乙酸乙酯分析纯成都科龙试剂厂
盐酸分析纯成都科龙试剂厂
乙醇分析纯成都科龙试剂厂
三蒸水自制
1.3 仪器
LC-20高效液相色谱仪日本岛津
Diamonsil C18柱5um(200*4.6mm)
T-50型溶剂过滤器天津市津腾实验设备有限公司
JJ1004小型超声波清洗机东莞市嘉劲机械有限公司
水相、有机相0.45 μm微孔滤膜天津市津腾实验设备有限公司
0.45 μm微孔滤头天津市津腾实验设备有限公
Milli-Q Academic超纯水仪密理博中国有限公司
BT 423S型电子天平Sartorius
DHG-9070A电热恒温鼓风干燥箱上海齐欣仪器有限公司
SHB-3循环式真空泵郑州杜甫仪器厂
旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂
HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂
2方法
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18柱5μm(200*4.6mm)；
流动相：乙腈-0.4mol/L乙酸铵溶液（氨试液调PH=8.0）；梯度洗脱，洗脱程序见表2.1。
检测波长：240nm；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃
表2.1 梯度洗脱程序
Table2.1 Gradient eluation program
时间（min）
流动相组成
乙腈A（%）醋酸铵溶液B（%）
0.00-13.00 15 85
13.00-14.00 24 76
17.00-68.00 40 60
2.1.1 检测波长的确定
将乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的对照品溶液于200～800nm下进行全波长扫描，以确定其最佳检测波长。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取乌头碱、次乌头碱及新乌头碱对照品，置于25ml容量瓶中，加甲醇-0.05%盐酸（体积比）溶液溶解，摇匀，定容至刻度，制得乌头碱对照品为0.34mg/ml，次乌头碱0.52mg/ml，新乌头碱0.6mg/ml。
分别精密吸取上述对照品溶液，乌头碱对照品1ml、次乌头碱0.5ml，新乌头碱0.5ml置于10ml容量瓶，加甲醇-0.05%盐酸（体积比）溶液定容，制得混合标准品，其浓度为乌头碱0.17mg/ml，次乌头碱0.13mg/ml，新乌头碱0.15mg/ml。
2.3供试品溶液的制备
2.3.1提取方式考察
2.3.1.1 超声提取法
取附子粉末4.0g（过40目筛），精密称定，置具塞100ml锥形瓶中，加氨试液（即25%的氨溶液）4ml,浸润30min，精密加入乙酸乙酯-异丙醇（1:1）混合液100ml，摇匀，称定重量，超声60min，放冷称量，用上述混合试剂补足失重，摇匀，滤过，精密称取滤液50ml，40℃下减压回收溶剂至干，用0.05%盐酸-甲醇（体积比）溶解残渣，过滤，定容至10ml作为供试品1。分别吸取混合对照品和该供试品各10μl，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。
2.3.1.2 回流提取法
称取生附子粉（过40目筛）4.05g，置于锥形瓶中，加7倍量95%的乙醇回流提取3次，每次1h，合并滤液，定容至80ml，在35℃下减压回收乙醇，用0.05%盐酸-甲醇溶解残渣，过滤，定容至10ml作为供试品2。分别吸取混合对照品和该供试品各10μl，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。
2.3.1.3 水提醇沉法
称取生附子粉（过40目筛）30.105g，加10倍量水煮5h，合并滤液定容300ml，冷却，80%乙醇醇沉得滤液550ml，在35℃下减压回收乙醇，用0.05%盐酸-甲醇溶解残渣，过滤，定容至50ml作为供试品3。分别吸取混合对照品和该供试品各10μl，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。
2.3.2 提取时间考察
取附子粉末4.0g（过40目筛），共3份，置具塞100ml锥形瓶中，加氨试液（即25%的氨溶液）4ml,浸润30min，精密加入乙酸乙酯-异丙醇（1:1）混合液100ml，摇匀，称定重量，分别超声30min、60min、90min，放冷称量，用上述混合试剂补足失重，摇匀，滤过，精密称取滤液50ml，40℃下减压回收溶剂至干，用0.05%盐酸-甲醇（体积比）溶解残渣，过滤，定容至10ml作为供试品1、2、3号。分别吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10μl，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。
2.4 线性关系考察
分别吸取混合标准品溶液1、2、4、8、10、16ul，照上述色谱条件测定峰面积值，采用外标法，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并计算回归方程。
2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液10μL，重复进样5次，于240nm下测定，并计算峰面积的相对标准偏差值RSD
2.6 重复性试验
按供试液制备方法，取同一批样品5份，按上述供试品溶液制备方法制成供
试品溶液，测得乌头碱、次乌头碱、新乌头碱峰面积值及RSD 值。 2.7 对照品稳定性试验
取混合标准品溶液于0，2，4、6，8h 分别进样10μL ，于240nm 下测定，测得乌头碱、次乌头碱、新乌头碱峰面积值并计算RSD 值。 2.8 供试品稳定性试验
按供试品溶液制备方法制备供试液，于0，2，4、6，8h 各进样20μL ，于240nm 下测定，测得乌头碱、次乌头碱、新乌头碱峰面积值并计算RSD 值。 2.9 加样回收试验
精密量取已知含量的样品10g ，共6份，分别加入一定体积一定浓度的对照品溶液，按上述样品制备方法制得供试品溶液，按含量测定方法操作，测定乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的含量，按照公式计算回收率。
回收率（%）=%100?-B
A
C 其中，A ：供试品被测成分含量
B ：加入对照品量
C ：实际测得值 3 实验结果 3.1 检测波长的确定
取乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的对照品溶液于200～800nm 下进行全波长扫描，结果见图2.1～2.7。
图2.1 乌头碱紫外扫描图
Fig2.1 Ultraviolet Scanning Graph of Aconitine
图2.2 次乌头碱紫外扫描图
Fig2.2 Ultraviolet Scanning Graph of Hypaconitine
图2.3 新乌头碱紫外扫描图
Fig2.1 Ultraviolet Scanning Graph of Mesaconitine
图2.4 混合对照品紫外扫描图
Fig2.1 Ultraviolet Scanning Graph of Mix Reference
min
-250
25
mAU
230nm,4nm (1.00)
图2.5 混合对照品230nm 处HPLC 色谱图 Fig2.5 The HPLC Chromatogram of 230nm
min
-10010203040mAU
235nm,4nm (1.00)
图2.6 混合对照品235nm 处HPLC 色谱图 Fig2.6 The HPLC Chromatogram of 235nm
min
010203040mAU
240nm,4nm (1.00)
图2.7 混合对照品240nm 处HPLC 色谱图 Fig2.7 The HPLC Chromatogram of 240nm
由图2.1～2.7可知，乌头类生物碱的紫外最佳吸收波长在230～240nm 之间，结合混合对照品在230nm 、235nm 、240nm 处的HPLC 色谱图(图2.5～2.7)可知，混合对照品的HPLC 色谱图在波长为230～240nm 之间峰形及分离度均较好，但在230nm 和235nm 处，基线不稳，在240nm 处，基线平稳。故该试验选择波长240nm 为检测波长。 3.2 系统适用性试验
分别乌头碱对照品溶液、次乌头碱对照品溶液、新乌头碱对照品溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各10μL ，按照上述色谱条件进行测定，分别记录色谱图，结果见图2.8～2.12。
2 附子研究概况 附子为亚门毛茛科(Ranunculaceae)植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx．)侧根(子根)的加工品，其性大热、辛、甘，归心、肾，生品极毒。中医认为附子具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛、逐风通痹、温阳行水等功效。附子始载于《神农本草经》，主风寒咳逆邪气，温中，金疮，破症坚积聚，血瘕，寒湿，拘挛膝痛，不能行步[1]。 2.1 附子化学成分研究 国内外学者对附子化学成分的研究表明，附子的化学成分分为生物碱类物质、脂类物质和多糖类物质三大类。其中生物碱类物质为其主要成分，包括脂溶性生物碱：乌头碱（aconitine），中乌头碱（新乌头碱mesaconitine），次乌头碱（下乌头碱、海帕乌头碱hypaconitine），塔拉乌头胺（talatisamine），和乌胺（higeramine）棍掌碱氯化物（coryneine chloride）[2]，异飞燕草碱（isodelphinine），苯甲酰中乌头碱（benzoyl mesaconitine），新乌宁碱（neoline），北乌头碱（beiwutine），多根乌头碱（karakoline），去氧乌头碱（deoxyaconitine），准葛尔乌头碱（songorine）；水溶性生物碱：江油乌头碱（jiangyouaconitine），新江油乌头碱（neojiangyouaconitine）、尿嘧啶(Uracil)[3]、附子亭碱（fuzitine）、消旋去甲基衡州乌药碱（demethylcoclaurine）[4]、、附子宁碱（fuziline）、去甲猪毛菜碱（salsolinol）[5]等。其中双酯型生物碱乌头碱（aconitine），中乌头碱（mesaconitine），次乌头碱（hypaconitine）为其主要成分，约占0.4%-0.8%，易溶于氯仿、苯、无水乙醇和乙醚，难溶于水，微溶于石油醚，既是附子的药效成分，又是毒性成分。三者易水解成为毒性较小的单酯型生物碱：苯甲酰乌头碱（乌头次碱Benzoylaconine)、苯甲酰中乌头碱(Banzoylmesaconine)、苯甲酰次乌头碱(Benzoylhypaconine)[6]。其毒性仅为双酯型生物碱的1/1000。单酯型生物碱如果进一步水解则变为毒性更小或无毒的醇胺类生物碱：乌头胺(乌头原碱Aconine)、中乌头胺(Mesaconine)、次乌头胺(Hypaco-nine)。其毒性仅为乌头碱的1/2000左右[7]。此外，附子还含有棉子油、蓖麻油、附子脂酸等脂类物质和乌头多糖。 2.2附子主要药理作用 2.2.1 对心血管系统的作用 研究表明，附子对心血管系统的用主要体现在以下几个方面。首先是强心作用，附子的强心机理是附子中的强心成分致β受体兴奋，释放儿茶酚产生强心作用。已经被证明的具有强心作用的成分有去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱、氯化甲基多巴胺、尿嘧啶以及附子苷，其中去甲乌药碱活性很强，对体内心脏、离体心脏和功能衰竭的心脏均有较强的强心作用，在稀释至10-9时仍表现出强心作用。秦永刚[8]等用离体蛙心，对不同蒸煮时间的附子进行了强心作用及心脏毒性的初步
附子的炮制方法 附子经过加工，可以制成盐附子、黑顺片、白附片。附子的毒性较大，服用时需要格外谨慎，附子炮制的目的主要在于降低其毒性，使人内服后可以取得壮阳补肾的功效。古代和现代都有关于附子的具体炮制方法的记载，大家可通过下文对比古代和现代的附子炮制方法的相同之处以及区别。 ★附子炮制方法： 【古代炮制方法】汉代始有火炮法(《玉函》)。晋代有炒炭(《肘后》)法。南北朝刘宋时代有用东流水并黑豆浸(《雷公》)的方法。唐代有蜜涂炙(《千金》)、纸裹煨(《理伤》)的方法。宋代有水浸(《圣惠方》)；生姜 煮(《博济》)；姜汁淬、醋浸、以大小麦酿曲造醋浸(《证类》)；烧灰存性、盐汤浸炒、黄连炒、姜汁煮(《总录》)；黑豆煮、盐水浸后炮、醋淬(《三因》)；童便浸后煨，作一窍人朱砂
，湿面裹煨(《妇人》)；童便煮(《痘疹方》)；赤小豆煮、生姜米泔浸(《朱氏》)；姜炒(《百问》)等炮制方法。明代增加了煮制，蜜水煮，巴豆 煮，防风、盐、黑豆同炒(《普济方》)；青盐炒、猪脂煎(《奇效》)；童便浸后炮(《理例》)；姜汁、盐、甘草、童便同煮(《纲目》)；盐、姜汁煮、黄连、甘草、童便煮(《仁术》)；童便浸(《禁方》)；盐、米泔水煮(《准绳》)；麸炒(《保元》)；炒制、甘草汤浸炒(《景岳》)；醋炙(《济阴》)；童便，甘草汤煮(《必读》)等方法。清代又增加了单蒸(《握灵》)，甘草、防风同煮后再用童便煮(《说约》)，姜汁浸后煨(《大成》)，甘草汤泡(《新编》)，黄连甘草制(《逢原》)，酒泡(《良朋》)，童便、甘草汤煮(《必用》)，甘草、甘遂 、酒煮(《串雅外》)，甘草汤煎(《霍乱》)，甘草汤浸后煨(《增广》)，盐腌(《问答》)等。此时其炮制方法已达40余种。
附子生物碱提取影响因素的实验探讨 梁春妹3,严汝庆 (广西贺州市人民医院药剂科,广西贺州542800) [摘要] 目的:探讨附子生物碱提取的影响因素,确定适宜的提取条件。方法:以药典法测定提取物收率,以分光光度法测定生物碱含量,采用单因素试验法,对可能影响附子生物碱提取的因素分别进行考察。结果:提取溶剂以85%乙醇为宜,采用药材中粉作为提取原料,加10倍量的提取溶剂提取2次,每次1.75h。以此条件制得的提取物收率为1.21%,生物碱含量为0.33%。结论:单因素试验所确定的提取条件稳定可行。 [关键词] 附子;生物碱;提取 [中图分类号]R283 [文献标识码]A [文章编号]100125302(2004)0320222203 附子是常用的中药,具有回阳救逆、补火助阳之功。在许多经方如四逆汤、附子汤、参附汤、真武汤等中均有应用。其主要有效成分为生物碱类,其中有乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等。临床上附子大多使用炮制品熟附片、黑附片、黄附片等,主要是因为生附子毒性较大,经炮制加工后其中酯型生物碱被部分除去或水解,而毒性低的乌头原碱含量则增加。本笔以临床上常用的黑附片为药材样品,对其提取生物碱的工艺中常见的影响因素进行实验探讨。 1 材料、仪器 1.1 材料 黑附片(贺州市药材公司,经严汝庆鉴定为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaili Debx.的子根的炮制加工品),乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所)。其余试剂为市售分析纯。 1.2 仪器 UV-751型分光光度计(上海第三分析仪器厂);pHs-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。 2 方法 2.1 样品中生物碱的含量测定[1] 2.1.1 乌头碱对照品溶液配制 精密称取乌头碱6mg,置25m L量瓶中,加0.01m ol?L-1盐酸溶液,并添加至刻度,摇匀,即得0.24g?L-1的乌头碱对照品溶液。 2.1.2 pH缓冲溶液(pH 3.05) 精密称取无水乙 [收稿日期] 2002202210 [通讯作者] 3梁春妹酸钠0.3g,加适量水溶解,加冰醋酸11.2m L,再加水至1000m L。混匀。用pH计测定该溶液的pH值为3.05。 2.1.3 0.1%溴甲酚绿溶液 精密称取溴甲酚绿200mg,用0.05m ol?L-1NaOH溶液 3.5m L研磨,加水溶解至200m L,滤过,以氯仿除去脂溶性杂质。 2.1.4 标准曲线制备 精密量取乌头碱标准溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2m L,分别置干燥分液漏斗中,加乙酸钠缓冲液5.0m L与溴甲酚绿指示液2.0m L,加蒸馏水使总体积达到10.0m L,摇匀。再精密加入氯仿10.0m L,充分振摇3min,静置1h 后,分取氯仿层,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,收集续滤液至已放入0.5g无水硫酸钠的试管中,放置0.5h。用751型紫外分光光度计,于416nm处测定吸收度。回归方程:A=0.00312C-0.03568,r= 0.9985。乌头碱含量在48～288μg具有良好的线性关系。 2.1.5 样品测定方法 取各样品溶液10m L,置分液滤斗中,用浓氨水调pH10～11。用氯仿萃取5次(每次10m L),收集氯仿液,水浴蒸干。残渣用0.01 m ol?L-1HCl溶解并定容于10m L量瓶中,混匀。取此样品供试液2m L,按标准曲线方法操作,测定总生物碱含量。 2.2 样品提取物收率的测定 参照药典法[2],取各样品溶液10m L,置已恒重的蒸发皿中水浴蒸干,105℃下干燥3h,取出置干燥器中放冷30min,称重。按下式计算提取物收率(%):收率(%)=[(W2-W1)/W]×100%。式中, ? 2 2 2 ?
第17卷第4期 化 学 研 究V o.l 17 N o .42006年12月CHE M I CAL RESEARC H D ec .2006 金线莲总生物碱的提取及含量测定 钟添华1,黄丽英1,王 勇2 (1.福建医科大学药学院,福建福州350004; 2.福建省药物检验所,福建福州350004) 收稿日期:2006-08-02. 作者简介:钟添华(1980-),男,硕士,主要从事天然药物有效成分的提取及结构鉴定工作,E O m ai:l zt h23-1980@163.co m. 摘 要:建立了金线莲总生物碱的提取和测定方法.将金线莲全草粉末用p H =2的水溶液提取,以阳离子交换 树脂吸附后,经酸化,用氯仿/甲醇(体积比2B 1)对其进行索氏提取,蒸发有机溶剂.冷冻干燥即得金线莲总生物 碱.以盐酸麻黄碱为对照品,酸性染料比色法测定总生物碱,折算为盐酸麻黄碱获得总生物碱含量.测得金线莲 总生物碱含量是0.0794%,线性回归方程A =0.0092C -0.0016(r =0.9999),回收率103.13%.本提取及 含量测定方法操作简单,总生物碱的提取率较高. 关键词:金线莲;总生物碱;提取分离;酸性染料;比色法 中图分类号:R 284.2文献标识码:A 文章编号:1008-1011(2006)04-0068-03 Extraction and Deter m i nation of t he A l kaloi ds i n Anoectochil us For mosanus Z HONG T i a n-hua 1,HUANG L-i y i n g 1,WANG Y ong 2 (1.P har m ac y C oll ege of Fujian M e d ic a l Un i versit y,Fuzh ou 350004,Fujian,Ch i na; 2.F ujian Insitit u te for D rug Control ,Fuzhou 350004,Fujian,Ch i na ) Abstract :Developed a m ethod to extract and deter m ine the to tal alkaloids fro m anoectoch ilus for m osa - nus .H erbs of anoectochilus for m osanus w ere leached by aci d ifi e d w ater ,and the total alka l o ids i n t h e leached so l u ti o n w ere absorbed by cation i c exchange resi n ,then t h e resi n w as acidified and extracted w ith a m i x ed organ ic so lvent i n a Soxh let extractor .The tota l a l k alo i d s w ere tested at 412n m w ith t h e spectroscopy by acid dye .The cali b rati o n cur ves of alka l o ids w ere li n ear(r =0.9999).The recovery w as perfect(103.13%).M ostly ,the content o f the to tal alka loids i n the herb is 0.0794%.The m et h od for ex traction and de ter m inati o n is si m ple ,qu ick w it h h i g h recovery . Keywords :anoectochilus for m osanus ;to ta l a l k alo i d s ;extracti o n ;acid dye ;co l o ri m etric m ethod 金线莲系兰科(Orchi d aceae)开唇兰属(Anoectochil u s )多年生草本植物,该属植物已发现35种,在我国约有20种[1].本属的部分种全草民间作药用,其中具有神奇功效、享有/药王0、/金草0、/乌人参0的珍稀草药 金线莲备受人们的关注[2] ,特别在福建和台湾民间,广泛用于治疗肝炎、肾炎、肺炎、小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肿瘤、风湿病等 [3],还兼治小儿发育不良及毒蛇咬伤[4].据报道,金线莲中含有糖苷类化合物、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物、糖类化合物、生物碱[5-10]等.作者主要研究了金线莲中总生物碱的提取及测 定.1 实验部分 1.1 仪器与试剂 DJ -10A 型倾倒式粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司),UV-752PC 型紫外分光光度计(上海光谱
目录
2、生产工艺流程
4、质量监控：见“SCGL545301 附子生产关键工序质量监控要点”。 5、原辅料、半成品、成品质量标准 5.1 附子原料质量标准：见“ZLJS100101 原药材质量标准”。 5.2 附子中间产品质量标准：见“ZLJS400101 饮片中间产品质量标准”。 5.3 附子成品质量标准：见“ZLJS500101 饮片成品质量标准”。 6、包材质量标准和文字说明 6.1 包材质量标准：见“ZLJS300101～ZLJS300601包装材料质量标准” 6.2 包装说明文字： 品名：黑顺片 规格： 产地： 重量： 产品批号： 生产日期： 贮藏：置干燥处 生产企业： 7、生产区的工艺卫生要求 7.1 生产区卫生要求：执行“SCGL008201毒性药材处理间卫生管理规程”， 7.2 生产区清洁工作要求：执行“SCSOP004601毒性药材生产区清洁规程”， 7.3 生产区设备管理要求：执行“SCGL008001处理毒性药材用设备管理规程”， 7.4 生产区工作服管理要求：执行“SCGL008101处理毒性药材用工作服管理规
程”。 9、技术经济指标核算 9.2包装材料物料平衡 使用量+残损量+剩余量 塑料袋物料平衡= ×100% (99.0-101.0%) 本批领用量 使用数+残损数+剩余数 标签物料平衡= ×100% (99.0-101.0%) 本批领用数
10、技术安全及劳动保护 10.1 员工转岗或新工上岗前均要进行安全操作培训，熟悉本岗位的操作要点、质控要点及注意事项。 10.2 严格按工艺规程和岗位标准操作程序操作，切忌擅改工艺和岗位操作方法，工作应严肃认真。 10.3 电机设备严禁用水直接冲洗，清洁时亦不可用湿布擦拭。在确保一切准备工作就绪后方可开机，以防轧手等事故发生。 10.4 设备定期保养，严格按设备维护保养管理制度操作使用。 10.5 拣选、切药、干燥、筛分等产尘、产湿岗位应有除尘排湿装置。 11、劳动组织和岗位定员 11.1 劳动组织 11.1.1 由生产制造部下达生产指令，车间依此组织生产。 11.1.2 车间根据生产指令从仓库领用原料组织生产。按生产工序依次为净选、洗润、切制、干燥、炮制、筛药、包装，经检验合格后入库。 11.1.3 生产班制：为一班制。
附子配伍运用汇粹 附子味辛、甘，大热。主入心、肾、脾经。有回阳救逆，温肾补火，祛寒止痛之功。善治阴盛阳衰，大汗亡阳，吐利厥逆，虚寒泻痢，及一切沉寒痼冷之疾。为温里回阳，救逆固脱之要药。附子气味俱厚，走而不守，“火性迅速，无处不到”(《本草经读》)。能上助心阳以通脉，下补肾阳以益火。最善温肾气、补元阳、救厥逆、祛寒湿、除痼冷。虞摶谓：“附子禀雄壮之质，有斩关夺将之气，能引补气药行十二经，以追复散失之元阳；引补血药入血分，以滋养不足之真阴；引发散药开腠理，以祛除在表之风寒；引温里药达下焦，以除在里之冷湿。”《伤寒蕴要》谓：“附子，乃阴证要药。凡伤寒传变三阴及中寒夹阴，虽身大热而脉沉者必用之，或厥冷腹痛，脉沉细，甚则唇青囊缩者，急须用之，有退阴回阳之力，起死回生之功。……夹阴伤寒，内外皆阴，阳气顿衰，必须急用人参建脉以益其原，佐以附子温经散寒，舍此不用，将何以救之。”《本草正义》曰：附子“其性善走，故为通行十二经重阳之要药，外则达皮毛而除表寒，里则达下元而温痼冷，彻内彻外，凡三焦经络，诸脏诸腑，果真有寒，无可不治。” 附子是中医临床的一味要药、峻药和猛药，因其能起沉疴、拯垂危而受到古今众多名医的推崇。如明代名医张景岳把附子列为“药中四维”之一。他说：“夫人参、熟地、附子、大黄，实乃药中之四维……人参、熟地者，治世之良相也；附子、大黄者，乱世之良将也。”清代名医陆懋修称“药之能起死回生者，惟有石膏、大黄、附子、人参。有此四药之病一剂可以回春。舍此之外则不能。”现代名医吴佩衡则把附子、干姜、肉桂、麻黄、桂枝、细辛、石膏、大黄、芒硝、黄连列为中药十大主帅，指出“此十味药品，余暂以十大主帅名之，是形容其作用之大也。”已故名医何绍奇谓“附子一物，可上可下，可攻可补，可寒可热，可行可止，可内可外，随其配伍之异而变化无穷，用之得当，疗效卓著，在群药中具有不可替代的作用，说它是‘百药之长’，是并不过分的。”从上述昔贤论述中，足见附子在名医
科类农学学号2011311854 本科生毕业论文 附子二萜生物碱成分研究 Composition of Diterpenoid Alkaloids from Aconitum carmichaeli Debx 谢成 指导教师：张丽梅职称副教授 云南农业大学昆明黑龙潭 650201 学院：农学与生物技术学院 专业：中草药栽培与鉴定年级： 2011 论文提交日期： 2015年5月10日答辩日期： 2015年5月17日 答辩委员会主任：郭华春 云南农业大学 2015年5月
附子二萜生物碱成分研究 谢成 云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201 摘要 【研究目的】对毛茛科乌头属植物附子（Aconitum carmichaeli Debx.）根进行化学成分研究。【方法】采用不同的色谱技术进行分离,根据化合物的理化性质和光谱数据分析（1H-NMR，13C-NMR，MS）鉴定化合物的结构。【结果】从总碱中分离鉴定了11个二萜生物碱类化合物，分别为：江油附子碱甲（jiangyoufuzine A，1），江油附子碱乙（jiangyoufuzine B，2），苯甲酰下乌头原碱（benzoylhypaconine，3），下乌头碱（hypaconitine，4），中乌头碱（mesaconitine，5），苯甲酰中乌头原碱( benzoylmesaconine，6)，乌头碱（aconitine，7），附子灵（fuziline，8），卡拉可林（karakoline，9），尼奥灵（neoline，10），松果灵(songorine,11)。【结论】化合物1～2为首次从附子中分离得到。 关键词：附子；毛茛科；二萜生物碱 Composition of Diterpenoid Alkaloids from Aconitum carmichaeli Debx XIE Cheng College of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University Kunming 650201 China ABSTRACT
野生半夏总生物碱含量的测定 【关键词】半夏；,,生物碱；,,紫 外光谱 摘要：目的用紫外分光光度法测定东北地区野生半夏中总生物碱的含量。方法以溴百里香本分蓝为显色剂,λmax=407 nm，测得生物碱在1.6~8.0 μg/ml范围内具有良好线性关系，r=0.999。结果生物碱含量为0.137 7%。结论与其他地区相比，该含量较高。 关键词：半夏；生物碱；紫外光谱 Determination of the Content of Alkaloids in Wild Pinellia ternate Abstract：ObjectiveTo determine the content of alkaloids in wild Pinellia ternate in north east Yunnan area by UV spectrophotometry.MethodsThe bromothymol was used as the chromogenic agent, and the detection wavelength was 407 nm, the calibration curve was linear in the range of 1.6~8.0 μg/ml(r=0.999).ResultsThe content of alkaloids in wild Pinellia ternate was 0.137 7%.ConclusionThe content of alkaloids is very rich in wild pinellia ternate in north east Yunnan area compared to other areas. Key words： Pinellia ternate; Alkaloids; UV spectrum 半夏Pinellia ternate(Thunb.) Breit.为天南星科植物，是一味使用了2000多年的常用中药，药材部分为干燥的块茎；具有燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结之功［1］。首载于《神农本草经》，其性温，味辛，有小毒，归脾、胃、肺经。《中国药典》1963～2005年均有记载。具有十分重要的药用价值，目前市售镇咳类中药复方制剂中多含有半夏［2］。麻黄碱具有抗哮喘的作用［3］，因此半夏中生物碱的含量可以作为其品质的标准［2］。滇东北地区的半夏一直是半夏市场的重要产地［4］，半夏块茎粒大，质白，表观品质好；其生物碱含量测定未见报道，本文测定了该地区半夏中总生物碱的含量，并与其它地区半夏的总生物碱含量做了比较，为该地区半夏开发利用提供理论依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器与试剂TU1800PC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)； Na2HPO4NaH2PO4缓冲液(pH 6.8)（0.2 mol/L Na2HPO4 240 ml与0.2 mol/L NaH2PO4250 ml配制而成）［5］；溴百里香酚蓝溶液（0.1 g溴百里香酚蓝加0.05 mol/L NaOH溶液3.2 ml溶解，加水稀释至200 ml配制而
生物碱是一类含氮有机化合物，广泛存在于毛茛科、芸香科、豆科等科植物的根、果中。它们能引起摄食者轻微的肝损伤，但中毒的第一反应是恶心、腹痛、腹泻甚至腹水，连续食用生物碱食品2周甚至2年才有可能出现死亡。由于生物碱大都具有苦涩性，容易使动物产生拒食，所以引起人体生物碱中毒的主要食物源有：①谷物等农作物被含生物碱的杂草污染，进入面粉及相关食品中；②食用含生物碱植物的动物所产的奶和蜂蜜等食品；③特殊食疗食品、个别调味料和特殊提取物饮料等[1-2]。一些嗜好植物（如咖啡、可可、烟草、槟榔、茶、罂粟等）含有咖啡碱、可可碱、尼古丁等生物碱成分。大多数辛香料也含生物碱成分（如辣椒中的辣椒碱），有毒植物则有不少种类含有有毒生物碱[3]。 1生物碱对人体的生理学作用 生物碱对机体的作用具有特异性，且与摄入量有关。适量对人体具有止痛、欣快、催眠等功效，过量或反复摄入，将导致成瘾。毒品就是一大类特殊生物碱品种[4-9]。 2食品中常见生物碱及其利用价值 2.1罂粟壳中的阿片生物碱 许多食品中都包含对人体有害的有毒生物碱，对这些生物碱的分析将有助于防止生物碱滥用或中毒[10]。罂粟壳中含有大量吗啡碱，易成瘾，不宜常服[11]。近年来，发现有不少在食品中违法添加罂粟壳，损害消费者健康的案例。通过测定食品中阿片生物碱，可判断是否掺入罂粟壳，其测定方法主要有薄层扫描法、高效液相法、快速ELISA检测法、气相色谱法等[12-17]。 2.2番茄中的生物碱 番茄中青果生物碱含量较高，具有抑菌抑虫、抗炎、降低胆固醇、调节机体免疫功能等作用。作为天然食品防腐剂具有良好开发前景[18]。 2.3绿茶中的生物碱 茶叶中咖啡碱含量较高，在一定浓度范围内，对人体具有强心、利尿、解毒等作用。可取代部分添加剂和药物，有巨大开发潜力[19-20]。茶梗和纤维废料作为燃料使用没有经济价值，但是在特定条件下提取咖啡因将带来巨大的经济效益并且环保[21]。 2.4荷叶中的生物碱 荷叶总碱具显著降血脂和降胆固醇活性，在减肥降脂产品中应用越来越广泛。研究其富集和分离方法、制定质量标准是非常必要的[22]。在离子液体中用微波辅助萃取，已从荷叶中成功提取了3种生物碱[23]。 2.5莲子心中的生物碱 莲子心含有莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱等生物碱。具有降压、抗心律失常、体外抗氧化活动、抗心律失常等药理作用[24]。 2.6槟榔中的生物碱 槟榔中主要含有的生物碱为槟榔碱、槟榔次碱、去甲基槟榔次碱等，均与鞣酸结合存在[25]。槟榔碱具有免疫抑制、肝毒性、致突变和畸形作用，在大鼠体内可能干扰某些内分泌器官[26]。2.7魔芋中的生物碱 魔芋生物碱影响昆虫生长、发育和繁殖，且有较强毒杀作用，用于绿色蔬菜生产，还可减少环境污染问题[27]。 2.8辣椒中的生物碱 辣椒碱是辣椒中引起辛辣的主要化学物质。其低纯度形式，如辣椒精、辣素等已作为添加剂广泛应用于食品工业中。与 食物中常见生物碱研究进展 吴丹1，巩江2，高昂1，曹梦晔1，陈晔丹1，赵婷1，路锋1，李易非1，倪士峰1*１．西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室／西北大学生命科学学院，陕西西安７１００６９； ２．西藏民族学院医学院，陕西咸阳７１２０８２ 摘要：检索大量文献基础上，对食物中常见生物碱的种类、主要活性及利用价值等方面进行了概述，为相关研究和开发提供科学资料。 关键词：生物碱；生物活性；利用价值 中图分类号：Q946.88文献标识码：A文章编号：1002-204X（2011）03-0063-02 Recent Developments of Common Alkaloids in Food WU Dan et al（Key Laboratory of Resource Biology&Biotechnology in Western China of Ministry of Education/College of Life Sciences，Northwest University，Xi’an，Shaanxi710069） Abstract Based on the vast literature retrieval，relevant materials for the research and development information on main activity and utilization value etc of common alkloids in food have were summarized，in order to provide basis information for its further development. Key words Alkaloid；Bioactivity；Use value 项目基金：西部资源生物与现代生物技术实验室教育部重点实验室基 金（KH09030）；西藏自治区科技厅重大科技专项基金（20091012）；陕西 省教育厅科学研究项目计划（2010JK862）资助。 作者简介：吴丹（1988-），女，陕西西安人，硕士研究生，研究方向：中 药生物工程。*通讯作者，博士后，副研究员，从事中药化学、中药资源 学、中药现代化与中医学研究。 收稿日期：2011-01-27 宁夏农林科技，Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech.2011，52（03）：63-64，6663
附子配伍药对详解 导读：附子味辛、甘，大热。主入心、肾、脾经。有回阳救逆，补火助阳，散寒止痛之功。善治阴盛阳衰，大汗亡阳，吐利厥逆，虚寒泻痢，及一切沉寒痼冷之疾。附子气味俱厚，走而不守，“火性迅速，无处不到”。附子是中医临床的一味要药、峻药和猛药，因其能起沉疴、拯垂危而受到古今众多名医的推崇。如明代名医张景岳把附子列为“药中四维”之一。他说：“夫人参、熟地、附子、大黄，实乃药中之四维……人参、熟地者，治世之良相也；附子、大黄者，乱世之良将也。”清代名医陆懋修称：“药之能起死回生者，惟有石膏、大黄、附子、人参。有此四药之病一剂可以回春，舍此之外则不能。”现代名医吴佩衡则把附子、干姜、肉桂、麻黄、桂枝、细辛、石膏、大黄、芒硝、黄连列为中药十大主帅，指出“此十味药品，余暂以十大主帅名之，是形容其作用之大也。”历代善用附子之医家举不胜数，近代更有以附子为名者如祝附子（祝味菊）、吴附子（吴佩衡）、李附子（李彦师）、附子先生（傅梦商）等，他们十分推崇附子的卓越疗效，并善用附子而充分发挥附子的功用，以此博得医林佳名。然则，附子性大热，力峻猛，有大毒，临床应用顾忌重重，加之附子中毒屡见不鲜，故有“终身视附子为蛇蝎”者。故恽铁樵曾说附子“为最有用亦最难用”。之所以会出现附子中毒的情况，除认证欠准、剂量失宜、煎煮不当、服法欠妥、机体对药物的敏感性等之外，配伍不当也属常见。故本文拟对历代著名医家运用附子之经验中关于附子的配伍方面进行收集整理，为充分发挥附子之独特疗效，提高医疗质量添一绵薄之力。 一、附子配干姜 附子长于回阳救逆，走而不守，能通彻内外上下。干姜具有回阳通脉之功，守而不走，温中回阳。二药配伍，相须并用，干姜能增强附子回阳救逆的作用，正如前人所说：“附子无姜不热”。且附子有毒，配伍干姜后，干姜能减低附子毒性，附子配干姜有增效减毒之功。故附子用于亡阳证，常与干姜配伍。附子配干姜被称为“仲景附子配伍法”，仲景四逆汤即姜、附、草同用，以温中散寒，回阳救逆。附子配干姜尚有温肾暖脾，散寒止痛之功，如赤石脂丸、乌梅丸虽用姜附，却旨在散寒止痛。 主要用于： 1、阳气衰微，阴寒内盛或大汗、大吐、大泻而致的四肢逆冷，汗自出，脉微欲绝等亡阳证。 2、治脾肾阳虚之慢性腹泻，如《附子配伍治六顽疾》治张男患慢性泄泻3年，日行大便3～4次，便后小腹冷痛，必以热毛巾温敷，其痛方缓，舌胖苔白腻，脉沉细。大便常规正常。用附子6g，干姜10g，党参15g，炒白芍15g，乌梅6g，苍术10g，随证加减，调治20多剂而获效。
亳芍生物碱提取及含量测定 作者周飞 指导教师陈乃东 摘要：用95%乙醇提取亳芍干粉，总提物回收乙醇后以盐酸酸化，继以二氯甲烷萃取，水相加氨水至pH ﹥8.0后以氯仿萃取，回收氯仿获粗提物。对该粗提物的TLC检测表明，亳芍中含有生物碱，且可能是乌头碱类生物碱。酸碱滴定法初步测定的生物碱含量，以乌头碱计，亳芍中总生物碱含量约为0.07%。 关键词：亳芍生物碱显色反应酸碱滴定 The primary research of the extracting and assaying of the alkaloids from Baishao Paeoniae Radix Alba Bachelor candidator Fei Zhou Adviser Nai-Dong Cheng Abstract：Total extract was extracted from Root of herbaceous peony's dry powder by using95%alcohol.We recover alcohol from the total extract,then join hydrochloric acid,then using methylene chloride to extract.We join ammonia to pH﹥8.0in aqueous phase,then using chloroform to extract. We recover chloroform to get rough extract.TLC testing indicated that Baishao Radix Paeoniae Alba contains alkaloids,and the alkaloids may be aconitine class.Acid-base titration rough determination showed that Baishao Paeoniae Radix Alba content about0.07%total alkaloid with the aconitine represented. Key words：Baishao Paeoniae Radix Alba Alkaloids Color reaction Acid-base titration 亳芍(Radix Paeoniae Alba)，即亳白芍，主产安徽省亳州地区，为安徽道地药材之一，是芍药科植物芍药(Paeonia lactiflora)或其变种毛果芍药(Paeonia trichocarpa)栽培品的根。芍药为多年生草本植物，夏秋季采挖其根部，去净泥土和支根，沸水浸或略煮至受热均匀，再经晒干等处理后即炮制成中药亳芍，加工后的亳芍呈粉白色或白色。亳芍具有抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、护肝等作用，对胃肠道疾病和心血管疾病也有一定的疗效[1]。
（转帖）(转载 半部居士实地调研附子的采挖及炮制过程一 附子历来被称为“百药之长”、“回阳第一要药”。在医圣张仲景的《伤寒论》里，使用附子来治疗阳虚、脱阳的方比比皆是，如着名的“四逆汤”、“白通汤”、“附子汤”、“附子理中汤”、“桂枝加附子汤”等等。据统计，《伤寒论》全部112方中使用到附子共计10余方。而对于中医扶阳学派（火神派）来说，附子如同一国之君一般，其重要性更是不可言喻。在卢氏扶阳学派祖师爷卢铸之、卢永定老先生立法处方中，附子的运用占到全部处方的3/4以上。但到了现今“卢火神第三代传人”卢崇汉先生，附子的运用却在减少，甚至有段时间卢火神已少用附子，是什么原因促使最擅用附子的卢火神少用自己的拿手好药呢？卢火神的回答是：“附子的质量在下降，附子的药效在降低，甚至还有副作用在增加！” 附子的生长特性是：冬至一阳生时栽种，三月末打尖、去枝、修根（促进根茎和附子的生长），四月末二次修根，到夏至阳尽之时，附子已秉足天地一岁之全阳之气，也正是采挖之时，如不及时采挖附子将很快烂掉。 很早卢火神就想亲自前往附子的产地实地考察附子的生长、采挖以及炮制过程，探索附子药效下降的真正原因，谋求恢复附子功效的方法。 夏至刚过数天，我们一行7、8人随从卢火神一道前往附子的道地之地——江油中坝，实地调研附子的采挖及炮制过程。 已时左右，驱车到达中坝的河西大桥。国家中药材公司中坝附子公司的汪总一行已在此等候多时，随及步行前往附近的田间观看采挖情况。 附子原图
半部居士实地调研附子的采挖及炮制过程二 汪总从事附子有关工作已近40年，对附子生长、采挖、炮制均有发言权。据他介绍，中坝种植附子始于唐代，兴于宋代，盛于明清。而到60年代时达到鼎盛，种植面积最多达5000余亩。但从此开始衰退，近十多年更是快速萎缩，今年的种植面积仅为1200余亩。当然收购价格也是一低再低，前几年甚至为每公斤三、四块钱左右，极大挫伤了种植户的积极性，近两年价格才略略回升。汪总在分析这种现状时，总结出两点原因：一是教材原因，50年代为大力发展中医中药，在全国新办了许多中医院校，将全国优秀的名老中医从民间汇集于中医院校及中医医院，在课程设置上放弃中医经典，大肆采用统编教材，而统编教材的编制者恰恰是受金元以降医学思想影响较深之人，误解阴阳平衡，重用寒凉之法，加上教学与实践脱离，近亲繁值几代后，培养出的学生已无疗效水平，更不用说灵活使用温阳重剂——附子，大都陷入“附子有毒；非身凉、四肢厥则不可用；非危证不用”的怪圈，用汪总的话就是：“学院派不用附子”。二是政策原因，“药典”颁发后，里面明确记载附子用量的上限是15克，如果能用附子的医生开方用量超过15克的话，则有可能成为医疗事故的责任人，而根本不管这医疗事故是不是附子用量造成的。综上所述，这是导致附子市场极度萎缩的两个主要原因。 我们不由得感概，从附子市场的衰败也可从一方面折射出中医、中药市场的全面衰败。政策往往是一把双忍剑，不管发心如何好，结果往往事与愿违。大办中医院校，无非是想大力发展中医中药，想通过西方的教学模式大规模复制人才，但结果呢？现在许多中医院校的老师根本没有能力看病，不能看病的老师能培养出能看病的学生吗？基本上是天方夜谭。而
附子配伍运用汇粹 附子的确在很多病症中都可用，但火神派药理偏矣。四逆汤是对脾用药，不是补肾阳。附子的作用是温经散寒，能通十二经络，能使阳气外达，干姜和甘草对脾起作用。之所以很多病用附子能起作用，是因为人病之后，会出现经络阻滞，附子的作用就是温通经络，使气机流畅而恢复正常，同时，诸药也才起作用。郑钦安的用药是没错，但其理有疏漏，看看伤寒论就知道，四逆汤是针对太阴症的。凡是寒湿阻滞，都可以用附子温通，所以，祝味菊对附子的认识是对的！四逆汤的方解应该是这样的：用附子荡去群阴，以利于浮散之阳能回，干姜守而不走，干姜，甘草固护脾阳。如果寒湿过盛，就得适当加大附子。仲圣防脱有四逆汤和独参汤，皆着眼于脾，而非肾也！火神派擅用的四逆辈法，其实质是温经散寒，固护中州，但火神大家对此却隐而不彰。吾今和盘而出，诚一片救世的仁心。举个例：火神派治口舌生疮等虚火症，用四逆法效果很好，其理何也？盖中州寒湿阻滞，使君火不能下降之故也。故效显！火神不神也！——中州是需时时固护的重点啊！附子非补肾阳之药。其功用在于温通十二经络，它是可以在很多方剂中使用以助药效，但对非寒湿阻滞之人使用，则会生热风，不宜使用！即使用，也得合理配伍。人之内伤杂症，多因
为血瘀气滞痰阻，医者治疗的时候，有的用大黄祛邪，有的用马钱子，而火神派的显著特点是用“附子”以消阴翳，用干姜，甘草培土以补中气（但火神派说是用四逆辈补肾阳）。当然，在阴阳症侯的辩症上，也有些不一样。 附子在火神派用药中，相当于一个“先锋官”的作用，现在的火神派传人对附子的运用，似乎有违钦安先生原旨，钦安先生用药，有时也用阴药的，现在的火神有的好像不用阴药，不知现在的火神还是否执定中州而兼顾三焦，对附子动则用上百克，是否本末倒置了？不知是对“温经散寒，固护中州”是故意隐而不彰，还是根本没有领会----人之身体，相火（肾阳）为体，君火（心火）为用。“附子为药品中最大英雄也！治人，人健而身轻；治国，国泰而民安；治天下，亿万年皆成盛世也！” 附子，为草本植物乌头块根上所附生的块状子根，如子附母，故曰附子。本药味辛甘，性大热，纯阳无阴，燥烈有毒。具有温补脾肾、助阳引水、逐寒祛湿、温经止痛的功效。为救治元阳衰微、阴寒内盛、风寒湿痹、水湿肿满之要药。 古代医家经验 东汉张仲景为应用附子的大家。在其所著的《伤寒论》、《金匮要略》中，用附子之方达30余首。如四逆汤、真武汤、麻黄附子细辛汤、桂枝附子汤、附子泻心汤、附子粳米汤、大黄附子汤、肾气丸、九痛丸等。张用附子胆大而心细，
实训二十一华山参片总生物碱的含量测定 一、实训目的 1.掌握紫外-可见分光光度法（对照品比较法）含量测定的一般操作步骤和技能。 2.理解紫外-可见分光光度法（对照品比较法）含量测定原理 二、测定依据 1.华山参片药品标准 [《中国药典》2005年版（一部）正文部分 440页] 本品为华山参浸膏片 【含量测定】对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1ml相当于含莨菪碱7μg的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品40片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于12片的重量），置具塞锥形瓶内，精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）25ml，振摇5分钟，放置过夜，用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得。 测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml，分别置分液漏斗中，各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0）10ml，再精密加入用上述缓冲液配制的0.04%溴甲酚绿溶液2ml，摇匀，用10ml三氯甲烷振摇提取5分钟，待溶液完全分层后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml量瓶中，再用三氯甲烷提取3次，每次5ml，依次滤入量瓶中，并用三氯甲烷洗涤滤纸，滤入量瓶中，加三氯甲烷至刻度。照紫外-分光光度法（附录ⅤA）分别在415nm的波长处测定吸光度，计算，即得。 本品含生物碱以莨菪碱（C17H23NO3）计，应为标示量的80.0%～120.0％。 【规格】0.12mg 2.紫外-可见分光光度法[《中国药典》2005年版（一部）附录Ⅴ A] 三、测定原理 1.本品有效成分为莨菪类生物碱，主要有莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪内酯等（图5-36）。药品标准以莨菪碱为指标，测定总生物碱的含量，以此控制药品质量的优劣。
炮制对生物碱类药物的影响 摘要:目的：阐明在中药炮制加工过程中，采用不同的炮制方法，使用不同的辅料，对生物碱类药物的疗效将有不同影响。方法：通过实例分析，明确了不同药物在不同的加工炮制条件下产生了一定的性变。结果：发现药物经过加工炮制后可使药物的有效成分和疗效最大化。结论：应以传统炮制技术经验和中医用药特点为基础，运用现代先进科学技术，探索科学的、规范的、实用的炮制技术。 关键词：炮制；生物碱；影响 炮制：古称“炮灸”，又称“修事”或“修治”。从古代口耳相传至古藉《五十二病方》有文字记载以来，叙述炮制的专著相继有《神农本草经》、《雷公炮灸论》和陈嘉漠的《本草蒙荃》等，到清代张仲岩著《修事指南》，所记载的炮制方法已十分全面。新中国成立后，全国各省市制定出版了《中药炮制规范》，要求各级医院严格按规范进行炮制。在现代自然科学迅速发展的今天，为了中药事业自身发展的需要，我们应对古今炮制进行研究，应用化学分析、仪器分析及药理学、免疫学等多种现代科学技术，探索炮制原理，制定合理的炮制方法，改进炮制工艺，制订炮制品的质量标准等，以达到临床用药的安全有效。在此仅浅析炮制对生物碱类药物的影响。 1 醋制能提高生物碱类药物的有效成分 大多数生物碱不溶于水或难溶于水，而能溶于乙醇等有机溶剂，但遇酸生成的生物碱盐却溶于水或易溶于水。生物碱大都是结晶固体，在高温条件下不稳定，受热可被破坏、分解。因此，含生物碱类药物在加辅料炮制时，应使用米醋、黄酒或白酒类。米醋是一种稀酸，可使游离的生物碱转化为盐而溶于水，煎煮时易煎出有效成分而增强疗效，如延胡索是中医常用的止痛良药，为了提高止痛效果，自宋代始便采用其醋制品。现代药理研究证明，延胡索含有多种生物碱成分，其中延胡甲索、乙索均具有镇痛作用，以左旋延胡索乙素镇痛作用较为明显。研究证明，当元胡生品和醋元胡入汤时，其生物碱的煎出量是不同的。生元胡水煎液中的总生物碱含量为25.06%，而醋元胡则为49.33%。说明醋制元胡的水煎剂中的总生物碱含量要比生品高出1倍，其止痛效果亦得到增强。这是由于元胡经醋制后，其生物碱与醋酸作用后生成了易溶于水的生物碱。 2 炮制能降低或消除生物类药物的毒副作用 炮制可利用生物碱的特性，降低或消除药物中非药效成分或有毒副作用的生物碱。如马钱子中含量最高、毒性最大的生物碱是士的宁，研究证明，马钱子在炮制时，当温度超过270℃，其士的宁含量就相应地减少，如生品含士的宁为1.18%，而经油制(200～300℃)即减低为0.58%，经砂烫(250～300℃)即减低为0.89%，制炭后即全部破坏。这表明不同的炮制方法均可降低毒性，其中，砂烫和油炸的炮制品的总生物碱含量与生品相比只下降了7.9%和8.4%，而其急性毒