1. 目的（Objectives）
本规程规范了普析通用TU-1901型紫外分光光度计校验的方法，确保在法定计量
部门校验后的有效期内普析通用TU-1901型紫外分光光度计使用的有效性，保证
检验结果的准确可靠。
2. 范围（Scope）
本规程适用于质量控制部普析通用TU-1901型紫外分光光度计的定期校验。3. 定义（Definition）
无
4. 职责（Responsibilities）
4.1. 质量控制部责本规程的起草、修订、审核、培训和执行。
4.2. 质量保证部和工程部负责本规程的审核。
4.3. 质量负责人负责对本规程的批准。
5. 引用标准（Reference Standards）
5.1. 《中国药典》（2010年版）
5.2. 中国药品检验标准操作规范2010年版
5.3. JJG 178-2007紫外、可见、近红外分光光度计检定规程
6. 材料（Resource）
6.1. 质量分数为0.060/1000重铬酸钾的0.001mol/L的高氯酸标准溶液。
6.2. 10%高氯酸溶液。
6.3. 4%高氯酸钬溶液。
6.4. 碘化钠标准溶液：浓度为10.0g/L。
6.5. 亚硝酸钠标准溶液：浓度为50.0g/L。
7. 流程图（Flow Chart）
无
8. 内容（Contents）
8.1. 校验项目及可接受标准
8.2. 校验前准备
8.2.1. 操作室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性物质，无强烈的机械振动和电磁干扰，
无强光直射，排风良好。
8.2.2. 温度在15℃~35℃；相对湿度为45%~80%（假如室温大于30℃，相对湿度不
得大于70%）。
8.2.3. 仪器应有名称、型号、编号、制造厂名、出厂日期、工作电源电压、频率及检定
签标识等
8.2.4. 检查吸收池，不得有裂纹，透光面应清洁，无划痕和斑点。
8.3. 校验方法
8.3.1. 基线平直度
8.3.1.1. 扫描参数的设置
8.3.1.2. 操作：按8.3.1.1设定方法，基线扫描3次，记录图谱和数据。以测量图谱中起
始点内吸光度与最大偏离起始点的吸光度之差作为检出的基线平直度。
8.3.1.3. 可接受标准为≤0.002Abs，并将结果填入记录。
8.3.2. 吸收池的配套性
8.3.2.1. 扫描参数的设置
8.3.2.2. 操作：按8.3.2.1设定方法，装纯化水于220nm处，将一个吸收池的透射比调
至100%，测量另一吸收池透射比值，其差值即为吸收池的配套性，测定透射比
2次，记录图谱和数据。
8.3.2.3. 可接受标准为≤±0.5%，并将结果填入记录。
8.3.3. 噪声与漂移
8.3.3.1.
8.3.3.2. 操作：
1) 噪声：在250nm波长下设置参比光束和样品光束，以空气为空白，调整仪
器的透射比为100%，扫描2min，记录范围99%~101%，测量图谱上最大
值与最小值之差，即为仪器透射比100%的噪声。在样品光路中插入挡光板，
调整仪器透射比为0%，扫描2min，计算图谱上最大值与最小值之差，即为
仪器透射比0%的噪声。500nm波长下同法操作。
2) 漂移：按上述要求测得透射比0%噪声和100%噪声后，波长置于500nm处，
扫描30min，测得图谱上最大值和最小值之差即为仪器的透射比100%漂移。
8.3.3.3. 计算：
1) 噪声：
A. 透射比0%的噪声
%0min %0max %0??-=?T T T %0T ?——透射比0%的噪声； %0max ?T ——透射比0%时的最大值； %0min ?T ——透射比0%时的最小值； B. 透射比100%的噪声 %100min %100max %100??-=?T T T %100T ?——透射比100%的噪声； %100max ?T ——透射比100%时的最大值； %100min ?T ——透射比100%时的最小值； 2) 漂移： min max T T D -=? D ?——漂移； m ax T ——透光率的最大值； m in T ——透光率的最大值； 8.3.3.4.
可接受标准
1) 透射比0%的噪声：≤0.1% 2) 透射比100%的噪声：≤0.2% 3) 透射比100%线漂移：≤0.2%/30min 8.3.3.5.
将结果填入记录。 8.3.4.
透射比最大允许误差和重复性 8.3.4.1.
8.3.4.2.
操作：按5.3.4.1设定方法，用质量分数为0.060/1000重铬酸钾的0.001mol/L
的高氯酸标准溶液分别在235，257，313，350nm 处测量透射比3次，记录图谱和数据。
8.3.4.3. 可接受标准：透射比最大值与最小值相差不大于0.2%，每一波长与标准值比较
偏差不大于0.5%，并将结果填入记录。
8.3.5. 波长示值误差和重复性
8.3.5.1. 试液配制
1) 10%高氯酸溶液：量取8.5ml 高氯酸（70%~73%）至100ml 量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀。
2) 4%高氯酸钬溶液：取氧化钬4.0g ，置100ml 量瓶中，加10%高氯酸溶液稀释至刻度，摇匀即可。 8.3.5.2.
操作：用空气作空白，进行仪器的基线校准，扫描速度“慢”、狭缝宽度（2nm ），采样间隔（0.5nm ），在波长220nm ~660nm 范围内，进行单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值与标准值比较。 8.3.5.3.
计算： 波长示值误差：标λλλ-=?；波长重复性： min max λλδλ-= 式中：λ——3次测量的平均值； 标λ——波长标准值； m ax λ、min λ——分别为3次测量波长的最大值和最小值。 8.3.5.4.
高氯酸钬溶液较强的吸收峰波长为241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64、640.52nm 。 8.3.5.5.
可接受标准：波长准确度：-0.5nm~+0.5nm ；波长重复性：＜0.5nm 。 8.3.6.
氘灯波长准确度 8.3.6.1.
8.3.6.2. 操作：按8.3.5.1设定方法，在660nm~650nm处与490nm~480nm处各扫描3
次，测得各峰值的波长，记录图谱和数据。
8.3.6.3. 将标准波长656.1nm、486.0nm处实测波长结果填入记录。
8.3.7. 杂散光
8.3.6.1.
8.3.6.2. 操作：按5.3.6.1设定方法，用10.0g/L的碘化钠标准溶液于220nm处，50.0g/L
的亚硝酸钠标准溶液于360nm处，10nm标准石英吸收池，纯化水作参比，光
谱带宽2nm，分别测定透射比3次，记录图谱和数据。
8.3.6.3. 结果填入记录。
8.4. 校验周期
8.4.1. 每年对仪器进行内部校验一次。
8.4.2. 当仪器关键部件（如氘灯或光路系统）维修或更换时，应再次进行内部校验，以
证明仪器满足使用要求。
8.4.3. 如一次校验不合格，应内部调整后再校验，如结果仍超标，则应停止使用，进行
维修。
9. 注意事项（Notice）
无
10. EHS要求（EHS Requirements）
无
11. 派生记录（Derived Records）
紫外分光光度计校验记录
12. 相关文件（Related Documents）
12.1. 实验室仪器设备的管理SOP
12.2. 校验合格证
12.3. TU-1901紫外可见分光光度计使用、清洁维护SOP
13. 变更记载（Change History）
紫外可见分光光度计常见故障的排除 光源部分： （1）故障：钨灯不亮； 原因：钨灯灯丝烧断（此种原因几率最高）； 检查：钨灯两端有工作电压，但灯不亮；取下钨灯用万用表电阻档检测。 处置：更换新钨灯； （2）故障：钨灯不亮； 原因：没有点灯电压； 检查：保险丝被熔断； 处置：更换保险丝，（如更换后再次烧断则要检查供电电路）； （3）故障：氘灯不亮； 原因：氘灯寿命到期（此种原因几率最高）； 检查：灯丝电压、阳极电压均有，灯丝也可能未断（可看到灯丝发红）； 处置：更换氘灯； （4）故障：氘灯不亮； 原因：氘灯起辉电路故障； 检查：氘灯在起辉的过程中，一般是灯丝先要预热数秒钟，然后灯的阳极与阴极间才可起辉放电，如果灯在起辉的开始瞬间灯内闪动一下或连续闪动，并且更换新的氘灯后依然如此，有可能是起辉电路有故障，灯电流调整用的大功率晶体管损坏的几率最大。 处置：需要专业人士修理； 二．信号部分： （1）故障：没有任何检测信号输出； 原因：没有任何光束照射到样品室内；
检查：将波长设定为530nm，狭缝尽量开到最宽档位，在黑暗的环境下用一张白纸放在样品室光窗出口处，观察白纸上有无绿光斑影像； 处置：检查光源镜是否转到位？双光束仪器的切光电机是否转动了（耳朵可以听见电机转动的声音）？ （2）故障：样品室内无任何物品的情况下，全波长范围内基线噪声大； 原因：光源镜位置不正确、石英窗表面被溅射上样品； 检查：观察光源是否照射到入射狭缝的中央？石英窗上有无污染物？ 处置：重新调整光源镜的位置，用乙醇清洗石英窗； （3）故障：样品室内无任何物品的情况下，仅仅是紫外区的基线噪声大； 原因：氘灯老化、光学系统的反光镜表面劣化、滤光片出现结晶物； 检查：可见区的基线较为平坦，断电后打开仪器的单色器及上盖，肉眼可以观察到光栅、反光镜表面有一层白色雾状物覆盖在上面；如果光学系统正常，最大的可能是氘灯老化，可以通过能量检查或更换新灯方法加以判断； 处置：更换氘灯、用火棉胶粘取镜面上的污物或用研磨膏研磨滤光片（注意：此种技巧需要有一定维修经验者来实施）； （4）故障：样品室放入空白后做基线记忆，噪声较大，紫外区尤甚； 原因：比色皿表面或内壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白样品对紫外光谱的吸收太强烈，使放大器超出了校正范围； 检查：将波长设定为250nm，先在不放任何物品的状态下调零，然后将空比色皿插入样品道一侧，此时吸光值应小于0.07Abs；如果大于此值，有可能是比色皿不干净或使用了玻璃比色皿；同样方法也可判断空白溶液的吸光值大小； 处置：清洗比色皿，更换空白溶液； （5）故障：吸光值结果出现负值（最常见）； 原因：没做空白记忆、样品的吸光值小于空白参比液； 检查：将参比液与样品液调换位置便知； 处置：做空白记忆、调换参比液或用参比液配置样品溶液； （6）故障：样品信号重现性不良；
Lambda 750 紫外/可見/近紅外分光光度計使用說明 Lambda 750資料獲取（Data Collection）頁是一個圖形化的設置介面，但需要設置的參數是類似的，下面就以掃描方法設置為例來看看每一個專案的情況。 以掃描方法為例，資料獲取頁面讓您設置掃描的開始和結束範圍，縱座標類型和狹縫寬度。其他可以設置的參數包括掃描速度（Scan speed）、資料間隔（Data interval）、迴圈次數（Number of cycles）等。 設置掃描範圍時，開始（Start）值必須大於結束（End）值。不然的話數值將被互換。 縱座標類型從下拉清單中選擇。可選擇的縱座標類型（Ordinate mode）有： A ——Absorbance，吸光度 %T ——Transmittance，透過率
E1 ——樣品光路能量值 E2 ——參考光路能量值 %R ——Reflectance，反射率 狹縫寬度（Slit width）的選擇： 狹縫寬度在紫外／可見範圍內以nm表示， 通常選擇狹縫寬度為所測量的譜帶寬度的五分之一到十分之一之間，設置寬的狹縫可以 增加能量，提高信噪比，但同時會降低解析度和準確度，並且可能引起譜帶增寬；設置一個較小的狹縫可以增加解析度和光度計的準確度，但會降低信噪比。 掃描速度（Scan speed）——掃描速度（nm / min）。從下拉清單中選擇需要的掃描速度，慢掃描速度適用於窄峰，並且可以改善信噪比，使用較快地掃描速度適用於寬峰。如果選擇快速掃描，資料間隔會被自動設定。 資料間隔（Data interval）——採樣的數據間隔（nm） 迴圈次數（Number of cycles）——迴圈（重複）掃描的次數。 最快迴圈（Cycle as fast as possible）——儘快地迴圈，一個迴圈結束就立即開始下一個。 迴圈時間（Cycle time）——自行輸入一個迴圈時間，並選擇時間單位。迴圈 時間必須比最小迴圈時間長。 燈切換（Lamp change）——切換使用氘燈或鎢燈進行測量的波長位置（nm）。 如果您關心的光譜峰正好位於默認的切換波長（326 nm）附近，編輯改變該波長缺
实训二紫外可见分光光度计的校正 一、实训目的 1、了解紫外-可见分光光度的基本构造。 2、熟悉紫外可见分光光度计的操作技术。 3、熟悉校正波长和测量吸收值精度的原理和方法。 二、仪器与试剂 1、仪器：紫外-可见分光光度计，石英吸收池（1cm），容量瓶（1000m1），烧杯。 2、试剂：0.0600g→1000ml的K2Cr2O7的硫酸标准溶液（0.005mol/L），NaI溶液（10g/L），NaNO2溶液（50g/L）。 三、实训原理 紫外-可见分光光度计是单光束手工操作仪器，备有钨灯及氢灯两种光源，可用于可见及紫外光区。它是具有色散能力较高的单色器，狭缝可调，可得到较纯的单色光，适用于定性鉴别和定量分析。 新仪器启用前或仪器修理后或长期使用后均需对仪器的性能进行检定。仪器的性能主要是波长准确度与重现性、单色器的分辨能力、吸光度的准确性和重现性及杂散光等。 四、实训操作 1、吸收池配对性试验 每次测定前，应先用蒸馏水做吸收池配对性试验。两个吸收池透光率T相差应＜0.5％。 2、波长准确性与重现性 校验波长是否准确，可用谱线校正法。在吸收池中置一白纸挡住光路，转动波长至486nm附近，遮光观察白纸上蓝色斑。轻微移动波长，至使此蓝色光斑最亮时止。根据调整的波长范围观察所得到的相应颜色，并进行对比核对，判断波长的准确性。 3、吸收度的准确性与透光率重现性 在紫外-分光光度计中用作读取透光率的电位器的精度可达到0.2％，但是，由于其他原因，例如电压变化等，实际测得的透光率误差大于0.2％。一般要求透光率的精度、稳定性和重现性不超过0.5％。透光率的准确性可用已知吸光系数的物质核对，常用的是重铬酸钾。取在120℃干燥至恒重的基准K2Cr2O7约60mg，精密称定，用H2S04溶液(0.005mol／L)溶解并稀释至1000ml，摇匀。按下表规定的吸收峰与谷波长处测定。 将测得的吸光度，计算出其吸光系数，取平均值与表中规定值核对，如相对偏差在土1％以内，则透光率准确性好。K Cr O的H S0溶液（0.005mol／L)的E cm1% 透光率重现性可结合透光率准确性实验同时进行，即在固定波长、溶液浓度以及狭
UV1000紫外-可见分光光度计操作规程 一、开机 开机前将样品室内的干燥剂取出，确认电源是否连接。打开仪器电源开关，等待仪器自检通过，自检过程中禁止打开样品室。 二、使用 自检结束后（7个项目均出现OK字样），仪器进入主界面，屏幕显示如下四个功能项：1.光度测量；2.定量测量；3.动力学；4.系统应用。仪器经20min 热稳定后，就可以进入正常测量。 1.光度测量 在主界面上选中[光度测量]项后，按[ENTER]键进入光度测量主界面→ 按[SET]键进入测量模式选择界面选择相应的模式→ 按[ENTER]键确认→ 按[RETURN]键返回光度测量主界面→按[GOTOλ]键进入波长设置设定界面，用数字键输入你所需的波长值→ 按[ENTER]键确认→ 屏幕提示： 请稍等……，仪器自动将波长移动到你所需测定的波长值→按[RETURN]键返回光度测量主界面→打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架上，关上样品室盖→按[ZERO]键进行自动效零，屏幕提示： 请稍等…… → 把待测试样拉入光路，按[START]键进入测量界面→再次[START]键，可在当前工作波长下对样品进行测量，并记录相应的数据。 2.定量测定建立浓度曲线，直接测定样品的浓度 主菜单中选中[定量测定]项后，按[ENTER]键进入定量测量主界面。 （1）工作曲线法： 测量已知浓度的一系列标准样品吸光度，建立工作曲线来测定未知浓度 在定量测量主界面选择●“工作曲线法”，按[ENTER]键确认进入工作曲线法界面→按[GOTOλ]键设定所需的波长→按[RETURN]键返回工作曲线主界面→打开样
品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖→ 按[ZERO]键调零→ 按[SET]进入设定测量参数界面→ 选择●浓度单位→ 按[ENTER]键进入浓度单位设定界面→ 按数字键输入所需的浓度→按[ENTER]键确认→按[RETURN]键返回设定界面→ 选择●标样数→按[ENTER]键进入标样数设定界面→按数字键输入标样数→ 按[ENTER]键确认→ 将标准样品从低到高放入比色皿架，关上样品室盖→按[RETURN]键返回设定界面→按[ZERO]键调零→选择●标样浓度→ 按[ENTER]键进入标样浓度设定→ 按数字键输入标样浓度值→按[ENTER]键确认，测量标样的吸光度，系统进入下一个标样的设定界面，→ 把待测标样拉入光路，用同样的方法测量所有标样的吸光度→ 按[ENTER]键确认，待所有标样测定以后，按[RETURN]键返回●“工作曲线法”→ 按[ENTER]键进入工作曲线界面可查看（或选定）已经生成的工作曲线→ 将样品按浓度从低到高放入比色皿架中→ 按[START]键进入测量结果显示界面→再次按[START]键，将参比拉入光路→ 按[ZERO]键进行调零→ 将待测样品依次拉入光路。每按一次按[START]键，系统进行一次测量。记录相应的测量结果。（按[PRINT]可对测量结果进行打印。） （2）系数法 在定量测量主界面选择●“系数法”→按[ENTER]键确认进入系数法公式选择界面选择所需公式→按[ENTER]键确认→ 按[SET]键进入设定测量参数界面分别设定测量系数K、测量系数 B、选择浓度单位、设定工作波长→按[ENTER]键确认→ 打开样品室盖，在当前光路的比色皿架位中放入空白样品，关上样品室盖→ 按[ZERO]键调零→ 将样品放入比色皿架中→ 按[START/STOP]键进入数据测量界面→ 拉动比色皿架，使被测样品处于光路中→按[START/STOP]键测量。 （3）动力学（略） 三、关机 将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。
紫外可见吸光分光光度法在环境分析中的应用领域 摘要：紫外可见分光光度法是一种应用很广的方法。在学习其基本原理和仪器结构后，得到该分析方法是一种具有广谱适用性的分析方法。本文综述了紫外可见分光光度法的原理特点以及在环境监测中的应用，并且具体举例说明，概述了紫外可见分光光度法的应用方法以及注意事项。 关键词：紫外可见分光光度法，朗伯比尔定律，特点，水与废水，大气 1.引言 随着社会环保意识的增强，人们对环保工作越来越重视。企业废水的分析与处理已经极大地影响着企业的发展和效益。更深刻影响着人们的日常生活。现在测试水和废水的仪器有紫外可见分光光度计。它已在各个科学研究领域和现代生产与管理部门广泛应用。 2.紫外可见分光光度计基本原理 紫外可见吸光光度法是根据物质对紫外光和可见光选择性吸收而进行分析的方法。吸光光度法的理论基础是光的吸收定律———朗伯—比尔定律，其数学表达式为 A=Kdc 朗伯—比尔定律的物理意义是，当一束平行单色光垂直通过某溶液时，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度d成正比。当液层厚度d以cm、吸光物质浓度c以“mol·L-1”为单位时，系数K就以ε表示，称为摩尔吸收系数。此时朗伯—比尔定律表示为 A=εdc 式中摩尔吸收系数单位为L·mol-1·cm-1。 吸光光度法具有较高的灵敏度和一定的准确度，特别适宜于微量组分的测量。 3.特点 （1）应用广泛 由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，因此均可借此法加以测定。到目前为止，几乎化学元素周期表上的所有元素（除少数放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。
Kr Rb Sr Y Zr Nb Mo Tc Ru Rh Pd Ag Cd In Sn Sb Te I Xe Cs Ba La Hf Ta W Re Os Ir Pt Au Hg Tl Pb Bi Po At Rn Fr 注： 图内实线圈内的元素可用直接法测定，虚线圈内的元素可用间接法测定。 带A 的表示与环境污染有关的元素。其中放射性元素只有铀和钍常用光度法测定，其它元素都采用放射性分析测量。 （2）灵敏度高 由于相应学科的发展，使新的有机显色剂的合成和研究取得可喜的进展，从而对元素测定的灵敏度大大提高了一步。特别是由于多元络合物和各种表面活性剂的应用研究，使许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到几十万。相对于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和准确度一致公认是比较高的。 （3）选择性好 目前已有些元素只要利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定，如钴、铀、镍、铜、银、铁等元素的测定，已有比较满意的方法了。 （4）准确度高 对于一般的分光光度法来说，其浓度测量的相对误差在1-3%范围内，如采用示差分光度法测量，则误差往往可减少到千分之几。 （5）适用浓度范围广 可从常量（1-50%）（尤其是使用示差法）到痕量（10-8-10-6%）（经预富集后）。（6）分析成本低、操作简便、快速 由于分光光度法具有以上优点，因此目前仍广泛地应用于化工、冶金、地质、
752紫外可见分光光度计 一、仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。 τ=I/Io log I/Io=KCL A= KCL 从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。 二、仪器的安装、使用、安装 1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。 2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。 使用：仪器使用前需开机预热30min。 本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F 1SD 2 ▽／0％ 3?／100％ 4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。 A——吸光度（Absorbance） T——透射比（Trans） C——浓度（conc） F——斜率（Factor） (2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置） 5SD键：该键具有2个功能 a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。 b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。 6 ▽／0％键：该键具有2个功能 a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。 b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。而按键开始自动减1。 7 ?／100％键；该键具有2个功能 a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。 b）上升键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动加1，如果按住本键不放，自动加1会加快速度，如果F值为1999后，再按键它会自动变为0，再往键开始自动加l。 例如：设置斜率为1500。 方法一 T）按A／τ／C／F键切换到F状态。 b）如果当前F值为1000，则按?／100%键，直到F值为1500。 C）再按SD键，表示当前的F值为1500，然后自动回到C状态，假如所测的A值为0．234，则此时显示C值为0351。
紫外可见分光光度计 一．基本简介 紫外可见分光光度计简介1852年，比尔(Beer)参考了布给尔(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所发表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液层厚度相等时，颜色的强度与呈色溶液的浓度成比例，从而奠定了分光光度法的理论基础，这就是著名的比尔朗伯定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人将此理论应用于定量分析化学领域，并且设计了第一台比色计。到1918年，美国国家标准局制成了第一台紫外可见分光光度计。此后，紫外可见分光光度计经不断改进，又出现自动记录、自动打印、数字显示、微机控制等各种类型的仪器，使光度法的灵敏度和准确度也不断提高，其应用范围也不断扩大。 [1]从仪器理论上讲，各种紫外可见分光光度计，都是根据比耳定律设计的；而比耳定律研究的是在平行光、单色光的条件下，物质对光的吸收。但是，紫外可见分光光度计的单色器不可能得到真正的单色光。并且，单色器系统不同，它产生的单色光的纯度（光谱带宽）也不同，并且光通过物质时，也不可能是真正的平行光。因此，严格地说，实际工作中，任何紫外可见分光光度计，都不可能真正满足比耳定律。所以，紫外可见分光光度计都是针对近似平行光、近似单色光的条件设计的。所以，就看谁设计、制造仪器最能满足或接近比耳定律（或产生的比耳定律的偏离最小），谁的仪器到了使用者手里，由于非平行光或非单色光产生的分析误差最小，谁的仪器就最好（当然还有杂散光、噪声、稳定性等要求）。这就是从仪器学理论，去看紫外可见分光光度计的设计、制造误差的最根本、最本质的问题；也是使用者从仪器学理论去看紫外可见分光光度计的分析误差的最根本、最本质的问题。 二．工作原理 吸收光谱 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
721可见分光光度计使用方法 一、开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 二、波长调整 转动波长旋钮，并观察波长显示窗，调整至需要的测试波长。 注意事项：转动测试波长调100%T/0A后，以稳定5分钟后进行测试为好(符合行业标准及质监局检定规程要求)。 三、设置测试模式 按动“功能键”，便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下：*开机默认的测试方式为吸光度方式 四、结果打印(721型无此功能) 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果(需外接标准串行打印机)。 五、光源切换(适用于752、754、755B型) 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源，所以需要波动光源切换杆来手动的切换光源。建议的光源切换波长为340nm，即200nm-339nm适应氘灯，340nm-1000nm使用卤素灯。 注意事项：如果光源选择不正确，或光源切换杆不到位，将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 六、比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。适应比色皿一套两只，供紫外光谱区使用，置入样品架时，两只石英比色皿上标记Q或箭头方向要一致。玻璃比色皿一套四只，供可见光谱区使用。 石英比色皿和玻璃比色皿不能混用，更不能和其他不经配对的比色皿混用。用手拿比色皿应握比色皿的磨砂表面，不应该接触比色皿的头光面，即透光面上不能有手印或溶液痕迹，待测溶液中不能有气泡、悬浮物，否则也将影响样品的测试精度。比色皿在使用完毕后应立即清洗干净。 七、调T零(0%T) 1.在T模式时，将遮光体置入样品架(如图七所示)，合上样品室盖，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键，显示器上显示“00.0”或“-00.0”，便完成调T零，完成调T零后，取出遮光体。 注意事项：1.测试模式应在透射比(T)模式； 2.如果未置入遮光体合上样品室盖，并使其进入光路便无法完成调T零；
TU-1810SPC紫外可见分光光度计验证方案 （一）、验证方案首页 文件编号VP-X-XXXX-XX 起草人/修订人日期年月日审核人日期年月日 批准人日期年月日执行日期年月日 印制份数份发出份数份 分发部门： 品质部：[ ] 营销部：[ ] 生产设备部：[ ] 人力资源部：[ ] 供应部：[ ] 财务部：[ ] 备注：请在收到验证报告部门后的[ ]里打“√”，不需使用本文件的打“---”
(二)、概述 UV759S紫外可见分光光度计采用新型的不对称分束技术，具有双光束的高稳定性，其 主光束的高光通量，确保了仪器的高信噪比。集高分辨率，低杂散光，点阵式液晶显示扫描 于一身，功能齐全、性能稳定、测试准确，能满足众多领域的日常分析及科学研究的要求， 广泛的应用于临床检验、生物化学、药品检验、环境监测、有机化学、矿物分析和动力学测 试等领域。波长范围190nm～1100nm (三)、验证目的 确认UV759S紫外可见分光光度计的安装、运行、性能确认符合中国药典标准，为日常 检验提供准确的检测结果。 (四)、验证依据及标准 《药品生产验证指南》2003年版 《中国药典》2010年版二部附录 (五)、验证判断标准： 1．安装确认判断标准：仪器应具备的技术资料齐全，仪器安装后符合设计要求。 2．运行确认判断标准：安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。 3．性能确认判断标准：符合《中国药典》2010年版二部附录要求。 (六)、验证人员 检验仪器及方法验证专业小组人员名单 验证项目：UV759S紫外可见分光光度计验证 组长 姓名职务/职称部门职责 傅旭东品质部经理品质部验证方案、验证报告的审核、验证 的组织与实施 参与人员 姓名职务/职称部门职责 QC员品质部验证方案的起草、验证的具体实施 QC员品质部药化分析 QC员品质部药化分析
UV2600型紫外分光光度计操作规程 一、开机 1.打开仪器电源。 2.打开电脑，点击UV Analyst 进入光谱分析软件。 3.软件将自动搜索仪器端口，点击“联机”，软件与仪器联机成功。 二、选择测试模式 根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“波长扫描”“时间扫描”“定点测量”“定量测量”“核酸测量”和“蛋白质测量” 【波长扫描】主要用以检测样品对一定范围波长光的吸收情况，以便对样品进行定性测量。 1.点击左侧主功能栏中的“波长扫描”即可进入波长扫描界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以扣除空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 注意：在“基线测量”中所选择的基线必须与参数设置中基线一致！ 【时间扫描】是检测样品在特定波长范围内吸光度（或透过率）随时间的推移而发生变化情况。主要用以检测样品的稳定性或进行化学动力学研究。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以后扣除样品空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 【定点测量】是检测样品在特定波长中的吸光度（或透过率）。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“自动校零”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“测量”，以完成样品的吸光度（或透过率）的测量。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 【定量测量】可通过检测标准样品或输入特定的系数建立标准曲线后测量样品的浓度值。
TU-1800紫外分光光度计确认／验证方案 1 概述 2 仪器原理 3 确认方案制定的依据 4 确认目的 5 验证小组成员、职责与人员培训 6 相关文件确认 7 仪器、仪表、容量器具校准确认 8 验证过程风险评估 9 确认与验证的内容 10 异常情况处理 11 再确认 12 确认结果评定与结论 13 附件
1.1 仪器名称：紫外分光光度计 1.2 仪器型号：TU1800 1.3 仪器编号：YQ4-06-1 1.4 仪器生产厂家：北京普析通用仪器有限公司 1.5 出厂日期： 2003年12月 1.6 安装位置：实验室紫外室 2 工作原理 本仪器采用ZSZ-6-A和ZSZ-6-B紫外线灯管及滤光片组成。ZSZ-6-A发出短波254.0nm，ZSZ-6-B发出365.0nm，可以单独使用长波、短波，也可同时混合使用两种波长。本机在底座内装有4瓦普通日光灯，可作层析的点样照明作用。 3 确认方案制定的依据 依照新版《药品生产质量管理规范 2010年版》、《药品GMP指南》、《中国药品检验标准操作规程》所示的原则，制定了本确认方案，由检验仪器与检验方法确认小组会同设备管理部人员及化验室操作人员实施确认。 4 确认目的 因仪器变更使用场所，所以按照 GMP 的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定目前的实验室环境能否满足仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足确认可接受标准和日常分析测试工作的需要。 5 验证小组成员、职责与人员培训 5.1 验证小组成员 姓名所在部门岗位或职务组内职务签名 质量管理部经理组长 实验室主任副组长 质量管理部QA 组员 设备动力部经理组员 实验室QC 组员 实验室QC 组员 人力资源部经理组员
TU-1901/1900操作规程 一、开机 1．1 依次打开打印机、计算机，Windows完全启动后，打开主机电源。 二、仪器初始化 2．1在计算机窗口上双击图标，仪器进行自检，大约需要四分钟。如果自检各项都“”，软件自动进入工作界面，预热半小时后，可以进行测量工作。 三、测量 A：光度测量 参数设置： 单击按钮（上方或左侧），进入光度测量。单击设置光度测量的参数：具体输入： 1.清除以有的波长点，输入要测量的波长值（从长波到短波）添加到测量波长点内； 2.重复测量次数，是否计算平均值，SD，RSD，等要求； 3.选择光度模式（一般为T%或Abs）； 4.单击退出参数设置，进行测量。 校零和测量： 单击,将两个样品池中都放入参比溶液，单击。仪器自动完成校零，校零完成后，取出外池的参比溶液。倒掉取出的参比溶液，放入样品溶液，单击；即可测出样品的Abs 或T%值。 测量完成后，可以随时进行打印或保存。 B：光谱扫描 参数设置： 单击，（上方或左侧）进入光谱扫描。单击，设置光谱扫描参数，具体输入： 1．波长范围（先输长波再输短波）； 2．测光方式（一般为T%或Abs）； 3．扫描速度（一般为中速）； 4．采样间隔（一般为1nm或0.5nm）； 5．显示范围（一般为0--1）。 6．单击退出参数设置。 基线校正： 单击，将两个样品池中都放入参比溶液单击，校零完成后单击存入基线，取出外池的参比溶液。 样品的光谱扫描： 倒掉取出的参比溶液，放入样品单击进行扫描， 当扫描完毕后，单击查看检出图谱的峰、谷相对应的波长值及Abs值。可以根据需要，调整阈值增加或减少检出的峰和谷数量 测量完成后，可以随时进行打印或保存。 C：定量测量 参数设置 单击（上方或左侧），进入定量测量；单击，设置具体参数：
紫外可见分光光度计及其应用 科技论文写作期末作业 西北民族大学生命科学与工程学院 11级生物技术(1)班 符朝方 学号:P112114841 紫外可见分光光度计及其应用 李诗哲 西北民族大学生命科学与工程学院兰州 730100 摘要:紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。下面介绍了紫外分光光度计的原理、结构及其特点，并介绍了它在生物领域的应用及其他方面的应用1引言:紫外可见分光光度计是一类很重要的分析仪器，无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域，还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理行业，紫外可见分光光度计都获得了日益广泛的应用。 2原理:紫外可见分光光度法 【1】紫外可见分光光度法是根据物质分子对波长为200~760nm的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长的光线能量小，波长短的光线能量大。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了人射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有不同的分子、原子和不同的分
子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的 某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 【2】2.1有机化合物的紫外可见吸收光谱 有机化合物的电子跃迁 与紫外可见吸收光谱有关的电子有三种[[4]，即形成单键的σ电子、形成双键的π电子以及未参与成键的n电子。 跃迁类型有:σ?σ*、n?σ*，π?π*、n?π四种。 饱合有机化合物的电子跃迁类型为σ?σ*，n?σ*跃迁，吸收峰一般出现在真空紫外区，吸收峰低于200nm，实际应用价值不大。不饱合机化合物的电子跃迁类型为n?π*，π?π*跃迁，吸收峰一般大于200nm. 2.2有机化合物的吸收带 吸收带(absorption band):在紫外光谱中，吸收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分子轨道的种类，可将吸收带分为四种类型。 (1)R吸收带 (2)K吸收带 (3)B吸收带 (4)E吸收带 2.3无机化合物的紫外可见吸收光谱 无机化合物的UV-Vis光谱吸收光谱主要有:电荷 迁移跃迁及配位场跃迁。 (1)电荷迁移光谱
U V-2600型紫外可见分光光度计验证文件 2017年 （设备编号：XXXXXXXXXXX） XXXXXXXXXXXXX有限公司 目录 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10再确认
1验证方案的起草与审批 1.1验证方案的起草及执行 仪器名称仪器编号验证编号 岛津UV-2600型 紫外可见分光光度计 起草人部门日期 1.2验证方案的审批 审核人部门日期 批准人部门日期 2概述： 设备名称：紫外分光光度计 设备编码： 规格型号：UV-2600 制造商：岛津仪器（苏州）有限公司
本紫外分光光度计是双光束紫外分光光度计，测定波长范围是185～900nm，波长精度±0.3nm，光谱带宽0.1/0.2/0.5/1/2/5 nm，具有数字显示，可以记录吸收光谱。 当单色光通过溶液时，溶液的吸收度与溶液的浓度和溶液的厚度（光路长度）成正比，即A=E·C·L，据此通过测定吸收度计算溶液的浓度得到被测物质含量。 本仪器主要用于测定原料和成品的紫外比值、透光率及含量等。 3 4 5验证支持文件
《中国药品检验标准操作规范》2010年版 《中国药典》2015版四部 《岛津紫外分光光度计UV-2600使用说明书》 6相关文件检查 相关文件检查结果 文件名称存放地点标准安装报告书 紫外分光光度计说明书 紫外分光光度计标准操作规程 仪器使用记录 设备保养计划 检测人复核人日期 相关文件检查结果 相关文件检查偏差： 建议： 相关文件检查结论： 相关文件检查确认人：日期： 7仪器状态检查 7.1目的：检查仪器各部件及配套设施完好如初，安装环境符合要求。 7.2检查确认仪器各设备部件的现场状态，记录各项指标。
应用 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。 基本原理 分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= kcl 式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 组成 各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。 1.光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 2．单色器 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。 单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。 3.吸收池 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。 4、检测器 检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。 5、信号显示系统 常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
UV-2600型紫外可见分光光度计验证文件 2017年 （设备编号：XXXXXXXXXXX）
XXXXXXXXXXXXX有限公司
目录1验证方案的起草与审批 2概述 3验证目的 4再验证人员 5验证支持性文件 6相关文件检查 7仪器状态检查 8运行确认 9性能确认 10再确认
1验证方案的起草与审批1.1验证方案的起草及执行 1.2验证方案的审批
2概述： ?设备名称：紫外分光光度计 ?设备编码： ?规格型号：UV-2600 ?制造商：岛津仪器（苏州）有限公司 本紫外分光光度计是双光束紫外分光光度计，测定波长范围是185～900nm，波长精度±0.3nm，光谱带宽0.1/0.2/0.5/1/2/5 nm，具有数字显示，可以记录吸收光谱。 当单色光通过溶液时，溶液的吸收度与溶液的浓度和溶液的厚度（光路长度）成正比，即A=E·C·L，据此通过测定吸收度计算溶液的浓度得到被测物质含量。 本仪器主要用于测定原料和成品的紫外比值、透光率及含量等。 3验证目的： 3.1设备安装状态检查：检查设备各部件完整无损，电源稳定可靠，安装环境符合要 求。
3.2运行确认：确认仪器的使用具有权限控制并能通过自检，各种控制功能与性能符 合要求；在正常运行情况下，确认仪器的波长、吸收度、杂散光、吸收池配对误差等性能指标符合要求；确认工作站稳定，数据处理稳定可靠。 3.3性能确认：以某某产品检测为例，证明紫外分光光度计检测的线性、重复性等性 能符合要求 4再验证人员： 5验证支持文件 《中国药品检验标准操作规范》2010年版 《中国药典》2015版四部 《岛津紫外分光光度计UV-2600使用说明书》 6相关文件检查 6.1相关文件检查结果
U-3900分光光度计简易操作说明书 1. 开机 插上电脑、主机电源，打开电脑、主机开关。 2. 打开测试软件，进行自检（自检时不放任何东西，自动进行），自检后主机预热15-20min 再开始测量。 3. 基线校正 将两个比色皿装上空白样放入样品槽中，合上盖子。单击baseline，工作界面出现use1，单击ok，开始扫描，扫描结束出现绿色标示“ready”后即可进行下步操作。 4. 样品最大吸收波长扫描 4.1点击屏幕右侧
4.2 在instrument标签栏data mode选ABS（吸光度）； 在Start/end wavelength根据需要设置起始扫描波长（可在199-1099nm间任意设定）； 在scan speed一栏中设置合适得扫描速度（一般选取中间值，如300nm/min）。 其它默认。 4.3 在monitor标签栏，Y-axis Max和Min可根据实际样品的abs峰值调整，其它默认。
4.4 在processing和Report标签栏，一般取默认设置。 4.5
5. 样品标准曲线的绘制 5.1 配制标准试样（一般5个）。 5.2 点击屏幕右侧
光学分析法：根据物质发射的电磁辐射或电磁辐射与物质相互作用而建立起来的一类分析化学方法。 电磁辐射与物质相互作用的方式：发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射、偏振等。光学分析法的分类： 1.光谱法：基于物质与辐射能作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。 2.非光谱法：基于物质与辐射相互作用时，测量辐射的某些性质，如折射、散射、干涉、衍射和偏振等变化的分析方法。非光谱法不涉及物质内部能级的跃迁，电磁辐射只改变了传播方向、速度或某些物理性质。 光谱法的分类： 原子光谱：由原子外层或内层电子能级的变化产生的。表现形式：线光谱 分子光谱：由分子中电子能级、振动和转动能级的变化产生的。表现形式：带光谱 原子光谱分析法：原子发射光谱法（AES)、原子吸收光谱法（AAS)、原子荧光光谱法（AFS)、X射线荧光光谱法（XFS) 分子光谱分析法：紫外-可见分光光度法（UV-Vis）、红外光谱法（IR）、分子荧光光谱法（MFS）、分子磷光光谱法（MPS) 电磁辐射的基本性质：波动性、粒子性 波动性：电磁辐射以波动形式传播，例如：折射、衍射、偏振和干涉等现象。 粒子性：电磁辐射的波动性不能解释辐射的发射和吸收现象，需要把辐射看作是微粒（光子）才能满意地解释。电磁辐射的能量是“量子化”的。这种能量的最小单位即为“光子”。 紫外—可见区的光谱是由原子和分子外层电子的跃迁产生的。 描述电子运动状态的四个变：主量子数(n)、角量子数(l)、磁量子数(ml)、电子自旋量子数(ms) 最低能量原理：np＞（n－1）d＞（n－2）f＞ns 泡利不相容原理：在同一个原子中没有也不可能有运动状态完全相同的两个电子存在，这就是泡利不相容原理。 分子轨道和原子轨道的主要区别： 1. 在原子中，电子的运动只受1个原子核的作用，原子轨道是单核系统；而在分子中，电子则在所有原子核势场作用下运动，分子轨道是多核系统。 2. 原子轨道的名称用s、p、d…符号表示，而分子轨道的名称则相应地用ζ、π、δ…符号表示。 几个原子轨道可组合成几个分子轨道：成键分子轨道、反键分子轨道、非键分子轨道 有机化合物的紫外-可见吸收光谱决定于分子的结构、分子轨道上的电子性质。
UV-2600型紫外分光光度计操作指导书 1概况 1.1仪器概况： UV-2600型紫外分光光度计是由日本岛津（Shimadzu ）生产制造，与功能强大的操作软件UVProbe 结合，操作简单方便，且符合SH/T0181方法的测量精度要求。 1.2主要技术参数 1.3使用条件 操作温度：15～35℃ 操作湿度：30%～805% 2仪器结构 仪器由UV-2600型紫外分光光度计和计算机组成。 3操作步骤 3.1 开机 在使用前先确认仪器和计算机的工作电源，检查仪器样品室应无遮挡光路的物品。确认后先开启计算机，然后开启仪器电源。待分光光度计外侧的指示灯显示绿色时，启动电脑桌面上的UVPROBE 程序。 首先从下拉式菜单的仪器项上追加需要的仪器，操作完毕如下图①所示，然后点击上图的连接键②，这样仪器与计算机连接（当然，中间的通讯电缆的连接、通讯口的指定等都是
必须的，此处不再赘述）并开始下示的初始化面。 初始化大约需要5分钟左右，进行一系列的检查和初置，如一切顺利通过就可以开始测定。 3.2 测定 首先选择测定的方式，在主菜单上能发现右图 所示的各键，自左至右 分别为： ①报告生成器：用于制作各种格式的报告。 ②动力学测定方式：一般测定吸收值随时间的变化，通常用于酶反应随时间的变化。 ③光度测定（定量）方式：可进行多波长、单波长、峰高或峰面积定量。校准曲线可使用多点、单点、K 因子等方法。由于具有自定义方程的功能，DNA/蛋白质测定等以前需 ① ② ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩ ⑾ ⑿ ⒀ ⒁
要特殊选购的软件才能进行的工作，使用UVPROBE 可自编程序进行测定。 ④光谱测定方式：可进行紫外可见区的光谱测定。 3.3光谱测定方式 3.3.1参数的设定 点击菜单栏上的键，即可出现如下图所示的选择测定条件的画面： 在此对话框中可选择波长测定的范围、扫描的速度、采样间隔等条件。 点击图中［试样准备］标签，可输入重量、体积、稀释因子、光程长等信息。 点击图中［仪器参数］标签，可选择测定种类（吸收值、透射率、能量、反射率）以及通带（狭逢）等条件。 点击主菜单上的 键，可分别开关图象面板（图中的左键）、数据处理面板 （中）以及方法面板（右键）。 3.3.2 光谱测定 首先点击上图的②进行基线校正，然后点击③波长设置到500nm ，再点击①自动调零。 数据处理面板 方法面板 图象面板 ① ② ③ ④ ⑤