华中科技大学同济医学院
硕士学位论文
大叶蛇葡萄的化学成分及其药理活性的研究
姓名：刘启明
申请学位级别：硕士
专业：药物化学
指导教师：陈邦银
2002.5.1
摘＋要
大叶蛇葡萄系葡萄科蛇葡萄属植物，本实验用柱层析方法大叶蛇葡萄的水提取物中分离得到一种化合物，经理化性质及紫外、红外、核磁共振、质谱和元素分析，鉴定为３，３’，４’，５，５’，７一六羟基～２，３一双氢黄酮醇，即蛇葡萄素（ｈｍｐｅｌｏｐｓｉｎ）。并合成得到其乙酰化衍生物。
用兔胸主动脉环研究了蛇葡萄素对去甲肾上腺素（ＮＥ）、ＫＣＩ和ＣａＣＩ。所致兔胸主动脉环收缩反应量效曲线的影响。结果表明，蛇葡萄素能显著抑制ＮＥ、ＫＣＩ和ＣａＣＩ：所致兔胸主动脉环的收缩，使量效曲线右移，最大反应降低。对高Ｋ＋所致主动脉环收缩的抑制作用明显大于ＮＥ所致兔胸主动脉环的抑制作用。蛇葡萄素对ＮＥ所引起的依赖内Ｃａ２＋释放的收缩有明显的抑制作用。而对ＮＥ依赖细胞外ｃａ２。陛收缩仅在较高浓度时才显示有抑制作用。提示蛇葡萄素可能对电压依赖性钙通道（ＰＤＣ）有选择性阻滞作用。
关键词：大叶蛇葡蒹蛇葡萄篆兔胸主动藤环、收缩爱＆、
量效曲线、阻滞电压依赖性钙通道
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＡｍｐｅｌｏｐｓｉｓｍｅｇａｌｏｐｈｙｌＩａＤｉｅｌｓｅｔＧｉｌｇ；Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｎｄｏｓｅ—ｅｆｆｅｃｔｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｃｕｒ＼，ｅ；ｒａｂｂｉｔａｏｒｔａ；ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ；ｄｅｐｒｅｓｓＰＤＣ
硕ｌ学位沧文
第一章绪论
２１世纪，随着人类要回归大自然思潮的兴起以及医疗模式和疾病谱的变化，国际社会对中药和天然产物的需求日益扩大。在世界药品市场中，由天然物质制成的药品约占３０％，国际上植物药品市场份额已达３００亿美圆，且每年以２０％以上的速度增长。目前国际医药主流市场更容易接受我国的一类中药有效成分和二类中药有效部位中药新药。因此，２１世纪中药产业将迎来前所未有的大好时机。
另一方面，入世后我国的医药行业将面ｌ临巨大的压力和冲击。以前我国医药行业的快速发展在很大程度上得益于仿制国外药品，我国生产的化学药品中９７．４％是仿制药品。我国对加入ＷＴＯ在医药行业作出了加强对知识产权保护的承诺，因此象以前一样仿制国外药品的途径已经行不通了，必须走自主开发、技术创新之路。但新的化学药物开发难度越来越大，从化学合成中获得新药的成功率很低。而且，我国化学药品的生产在技术水平、生产工艺、产品质量等都与国外先进水平差距甚远，无法走出国门竞争。作为中药的故乡，我国中药行业有独特的资源优势和人才优势。加快中药基础研究和应用研究从传统中草药中寻找有效成分和有效部位，是我国研究开发新药的重要途径。正是在这样的思路指导下，我们把天然药物作为仓ＪＳｆＪ新药研究对象。
大叶蛇葡萄（ＡｍｐｅｌｏｐｓｉｓｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａＤｉｅｌＳ）系葡萄科蛇葡萄属植物，主要分布于湖北、陕西、四川、甘肃等地。民间将其茎叶当茶叶饮用，称之为霉茶。味微涩，性凉，具有清热凉血之功效。用于治疗高血压、头昏目胀症。有临床报道：用大叶蛇葡萄水煎剂治疗原发性高血压，５０例患者中有３６例（占７２％）症状消失或明显改善。但关于大叶蛇葡萄的化学成分和药理研究的报道甚少。大叶蛇葡萄在我省恩施地区资源丰富，于是我们设想将其开发为一个新药。希望为湖北地区的经济发展作出贡献。为此，我们对其水提取物用聚酰胺柱层析和硅胶聚层析方法对大叶蛇葡萄进行化学成分的分离，得到一种白色固体，运用四大光谱对其进行了结构鉴定，并对其药理活性进行了研究。
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第二章综述
’第一节蛇葡萄属植物的研究进展
葡萄科蛇葡萄属植物约有２５种，我国境内有１５种，资源丰富，分布广泛，除白蔹为常用中药外，绝大多数为民间中草药。多具有活血散瘀、消炎、止血、清热解毒等功效，用于治疗风湿痹痛骨髓炎、无名肿毒等疾病。８０年代以前除临床报道外，深入研究甚少。近年来，该属植物引起了中外药学者较大关注，研究报道颇多。
一、化学成分的研究
１．显齿蛇葡萄（ＡｍｐｅｌｏｐｓｉＳｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａｗ．Ｔ．ｗａｎｇ）
主要分布于广西、广东、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建。藤茶为植物显齿蛇葡萄的茎叶，亦称田茶藤、田婆茶、乌蔹。具有清热解毒、祛风湿、强筋骨之功效。民间用于治疗黄疸型肝炎，感冒风热，咽喉肿痛，急性结膜炎等。湖南中医学院周天达…等对水提取物用硅胶柱层析分离，以甲苯一乙酸乙酯甲醇（１０：８：５）洗脱，首次分离得到双氢黄酮醇成分双氢杨梅树皮素（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）。
广西中医药研究所袁阿兴”１等对显齿蛇葡萄的地上部分以水提取，水提取物的沉淀部分以乙醇，氯仿一乙醇反复重结晶得到福建茶素；对水提取物依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分用硅胶柱层析分离得到龙诞香醇（ａｍｂｒｅｉｎ）、Ｂ一谷甾醇（Ｂ—ｓｉｔｏｓｔｅｒ０１）、杨梅黄素（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）和杨梅甙（ｍｙｒｉｃｉｔｒｉｎ）等。
显齿上蛇葡萄还含有２８种香气成分，占香精油总量的６４％，主要为反２一己烯醛、苯乙醛、三甲基吡嗪”１。
２．蛇葡萄（Ａ．Ｓｉｎｉｃａ．ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ）
药用根内皮，有清热解毒、消肿祛湿、利尿消炎、止血等功效。民间用于治疗慢性骨髓炎、无名毒肿、淋症等多种疾病。该植物含有三萜、甾体、强心甙及大量鞣质。其乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、甲性链球菌有较好的抑制作用，对大肠杆菌也有一定的抑制作用。
湖北中医学院陈科力”１用柱层析等方法，从蛇葡萄根皮（采集于湖北麻城县）的乙醇浸膏中分离得到Ｂ一谷甾醇、胡萝ｈ甙、羽扇豆醇（１ｕｐｅ０１）、（＋）
竺生燮！：！一！！二型二—兰二一儿茶素（ｃａｔｅｃｈｉｎ）、蔗糖、棕榈酸（ｐａｌｍｉｔｉｃ）、３－羟（３Ｂ，２４Ｓ）５－烯甾烷及没食子酸。
上海医科大学药学院徐志红”１从蛇葡萄根（安徽铜陵产）中分离得到Ｂ一谷甾醇、胡萝ｈ甙、（＋）一儿茶素、３一羟（３１３，２４Ｓ）一５－烯甾烷、没食子酸、香树脂醇、白桦脂醇、香草酸、没食子酸乙酯、山奈酚（ｋａｅｍｐｆｅｒ０１）、３，５一二甲基苯甲酸、香橙素、藜芦醇（Ｖｅｒａｔｒｙｌａｃｏｈ０１）。其中没食子酸乙酯和白桦脂酸具有抑制ＰＫＣ（蛋白激酶）的作用。
３．小叶蛇葡萄
江氏‘“从小叶蛇葡萄根中分离得到齐墩果酸和白桦脂酸。
４．广东蛇葡萄（ｈ．ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉＳ（Ｈｏｏｋ．ｅｔＡｍ）Ｐ１ａｎｄ．）
无刺根为植物广东蛇葡萄的枝叶及根。其枝叶（炮制品为藤婆茶饼，泡茶饮）有清热、凉血之功效，用于高血压、头昏目胀症；其根有清热利湿、活血化瘀之功效，用于痢疾、跌打损伤、小便不利等症。无刺根还具有消炎解毒功效，用于治疗骨髓炎、急性淋巴炎、脓包疮、湿疹、丹毒、疖肿、嗜热菌食物中毒等症。无刺根现代临床用于葡萄球菌、绿脓杆菌等感染性疾病４０００例，治愈率达７０％，无不良反应。］刘氏从无根刺中提取的蛇葡萄素对黑色素瘤具有抑制作用。
中山医科大学王玫馨‘７１分别对原生药、藤婆茶饼的水煎剂进行聚酰胺柱层析，以Ｈ２０一不同浓度的乙醇洗脱，然后用重结晶法分离得到蛇葡萄素和杨梅素。５．白蔹（ＡｍｐｅｌｏｐｉＳｊａｐｏｎｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｍａｋｉｎｏ）
中药白蔹（又名白根、五爪藤、山地瓜）为植物白蔹的干燥块根，具有清热解毒、消痈散结、生肌止痛之功效。白蔹叶中含有单宁类化合物…】；根含富马酸、谷甾醇和胡萝ｈ甙１…。广东药学院郭丽冰等“０１对白蔹乙醇提取物的各部位进行硅胶柱层析，分离出正二十五烷（Ｉ）、三十烷酸（１Ｉ）、二十八烷酸（１ｌＩ）、Ｂ谷甾醇（Ⅳ）、豆甾醇（Ｖ）、槲皮素（Ⅵ）和豆甾醇一Ｂ—Ｄ－葡萄糖甙（Ⅶ）七个化合物。
邹济高等…１后来又从白蔹中分离得到大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、卫茅醇五个化合物。大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、没食子酸具有抗菌和抗真菌作用，这与中医药关于白蔹的临床应用相一致。
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小结：对蛇葡萄属植物化学成分的研究发现黄酮类、有机酸、酚酸、鞣质、低聚芪类、五环三萜类、甾醇类、甙类等化合物。现归纳如下
类别化合物
黄酮类香橙素（Ａｒｏｍａｄｃｎｄｒｉｎ）
儿茶素（Ｃａｔｅｃｈｉｎ）
山奈酚（Ｋａｅｍｆｅｒ０１）
杨梅素（Ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）
槲皮素（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）
蛇葡萄素（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｎ）
杨梅甙（Ｍｙｒｉｃｉｔｒｉｎ）
有机酸棕榈酸（Ｐａｌｍｉｔｉｃａｃｉｄ）
硬脂酸（Ｓｔｅａｒｉｃａｃｉｄ）
３，５一二甲氧基一４一羟基苯甲酸（３，５Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ４ｈｙｄｒｏｘｙ
ｂｅｎｚｏｌｃａｃｉｄ）
香草酸（Ｖａｎｉｌｌｉｃａｃｉｄ）
富马酸
没食子酸（Ｇａｌｌｉｃａｃｉｄ）
有机醇藜芦醇（Ｖｅｒａｔｒｙｌａｃｏｈ０１）
白藜芦醇（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒ０１）
鞣质１，２，６－Ｔｒｉ—ｏ—ｇａｌｌｏｙｌ一Ｂ—Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ
１，２，３，６－Ｔｅｔｒａ—ｏ—ｇａｌｌｏｙｌ—Ｂ—Ｄ～ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ
１，２，３，４，６Ｐｅｎｔａ—ｏ—ｇａｌｌｏｙｌ—Ｂ～Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ
低聚芪类蛇葡萄素Ａ，Ｂ，Ｃ（ＡｍｐｅｌｏｐｓｉｎＡ，Ｂ，Ｃ）
蛇葡萄素Ｄ，Ｅ，Ｈ（ＡｍｐｅｌｏｐｓｉｎＤ，Ｅ，Ｈ）
顺式蛇葡萄素Ｅ（ｃｉｓ—ａｍｐｅｌｏｐｓｉｎＥ）
蛇葡萄素Ｆ，Ｇ（ＡｍｐｅｌｏｐｓｉｎＦ。Ｇ）
五环三萜类羽扇豆醇（Ｌｕｐｅ０１）
Ｂ一香树脂醇（Ｂ—Ａｍｙｒｉｎ）
白桦脂醇（Ｂｅｔｕｌｉｎ）
齐墩果酸（０ｌｅａｎ０１ｉｃａｃｉｄ）
无羁萜（Ｆｒｉｅｄｅｌｉｎ）
龙诞香醇（Ａｍｂｒｅｉｎ）
甾醇类１３一谷甾醇（Ｂ—ｓｉｔｏｓｔｅｒ０１）
豆甾醇（Ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒ０１）
甙类胡萝ｈ甙（Ｄａｕｃｏｓｔｅｒ０１）
Ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌ—Ｄ—９１ｕｃｏｓｉｄｅ
云杉新甙（Ｐｊｃｅｉｄ）Ｊ
顺式云杉新甙（ｃｉｓ—ｐｉｃｅｉｄ）ｌ
Ｆ－｝，¨｛＾Ｊ、｝埘?ｆ，｝仃，论正二、药理作用的研究
（１）抗炎镇痛作用
福建医学科学院研究所林建峰等”…研究藤茶的抗炎镇痛作用，发现藤茶对小鼠巴豆油性耳廓水肿、大鼠角叉菜胶性足趾肿胀及腹腔毛细血管通透性具有抑制作用，提示藤茶对急性、亚急性炎症渗出过程具抑制作用。它对切除肾上腺大鼠角叉菜胶性足趾肿胀仍有抑制作用，表明其抗炎作用并不完全依赖于垂体～肾上腺皮质系统。对大豆棉珠肉芽肿增生具有抑制作用，表明其对慢性增殖性炎症也有抑制作用。其对小鼠扭体反应和热反应的抑制作用显示藤茶具有一定的镇痛作用，能提高小鼠的痛闽水平。
（２）抗菌作用
蛇葡萄：黎氏“”运用改良Ｚａｋ大鼠慢性骨髓炎模型研究蛇葡萄根膏对实验性慢性骨髓炎的疗效。经骨髓腔细菌计数和ｘ光片分析，结果表明，蛇葡萄根膏能明显抑制骨髓内金葡菌，减轻炎症程度，疗效与利福平相近。
张家界市武陵高等专科学院熊大胜等…１用三种不同提取方法浸提显齿蛇葡萄幼嫩茎叶中有效成分，对其进行真菌和细菌的抑制作用及其最低抑菌浓度进行研究。结果表明：显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物对金黄葡萄球菌、枯草杆菌均有很强的抑制作用，对黑曲霉、黄曲霉、青霉及交链霉均有不同程度的抑制效果。对黑曲霉、黄曲霉最低抑菌浓度分别是０．７％、１．１％，对金黄葡萄球菌、枯草杆菌最低抑菌浓度均小于０．０７％。
小叶蛇葡萄：其粗提取物２０％溶液能抑制大肠杆菌，２％溶液可完全抑制金葡菌生长。
白蔹：阂氏…｜将其生品、炒黄品、炒焦品分别水煎醇沉，其沉淀物仅炒黄品、炒焦品对金葡菌有抗菌作用，醇溶液部分则对金葡菌、绿脓杆菌、福氏痢疾杆菌、大肠杆菌均有明显的抗菌作用，且炒焦品＞炒黄品＞生品，表明炒制后体外抗菌作用增强，且炒焦品最好；《中药大辞典》记载水煎剂（１：３）在试管内对同心性毛藓菌等皮肤真菌有不同程度的抑制作用。
此外，Ｙｅｎｋｕｎ—ｙｉｎｇ报道该属植物的乙醇提取物对金葡菌、甲型链球菌、大肠杆菌有抑制作用。
（３）抗病毒作用：
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湖北中医学院陈科力等用蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｓｉｎｉｃａ）根提取物进行细胞内抗单纯疱疹病毒的实验，发现其中除去鞣质后的水溶性部分具有抑制单纯疱疹病毒的活性作用…６】。用其治疗鸭乙肝病毒（ＤＨＢＶ）感染呈阳性的雏鸭，并用ａ一干扰素治疗组作为阳性对照，根据鸭血清中乙肝病毒表面抗原的滴度测定、结合肝组织学观察结果，发现蛇葡萄根提取物有一定抗ＤＨＢＶ的作用，且作用持久【Ｉ７】
（４）心血管系统药理
赵氏”…为探讨白蔹反乌头的机理，研究了白蔹对心脏的作用，发现其对离体蛙心收缩频率作用不明显，在低浓度下对离体蛙心收缩强度作用不明显，高浓度下则有较强抑制作用。
（５）保肝作用
１９８７年我国台北医学院Ｙａｎｇｌｉｎｇ—ｌｉｎｇ等”“以ＣＣＩ。和半乳糖胺诱导初期培养的大鼠肝细胞产生毒性，从１２０种植物的醇提取物中筛选抗肝细胞毒性的药物，发现蛇葡萄根及其变种光叶蛇葡萄根可显著降低ＣＣＩ。和半乳糖胺所致谷丙转氨酶（ＧＰＴ）的升高。兹后，他们又进一步确定了光叶蛇葡萄根中抗肝细胞毒性的活性成分。
湖北中医学院陈科力”０１用蛇葡萄属三种植物蛇葡萄、异叶蛇葡萄Ａ．ｈｕｍｉｌｉｆｏｌｉａｖａｔ．ｈｅｔｒｏｐｈｙｌｌａ（Ｔｈｕｎｂ）Ｋ．Ｋｏｕｃｈ、三裂叶蛇葡萄Ａ．ｄｅｌａｖａｙａｎａＰＬ．的根对Ｄ一氨基半乳糖（Ｄ－６ａｌＮ）所诱导的大鼠急性肝损伤进行治疗，并用联苯双酯作为阳性对照组进行比较，发现这三种植物的根都有一定程度促进肝细胞修复的作用。其中蛇葡萄根在一定剂量下具有显著的降酶保肝作用。
张秀明””用Ｄ一氨基半乳糖（ＤＧａｌＮ）制备大鼠急性肝损伤模型，检测血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）和肝匀浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量，观察肝组织病理变化，以探讨中药蛇葡萄根对急性肝损害的保护作用。结果显示：蛇葡萄根能显著降低血清ＡＬＴ、ＡＮＴ含量，提高ＳＯＤ含量，降低ＭＤＡ含量，高剂量组还能减轻肝细胞受损程度。提示蛇葡萄根具有保肝降酶及抗自由基损伤作用。
湖北中医学院肝病研究所张亚兵等”“采用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）诱导小鼠建
立实验性肝损伤的动物模型，以地塞米松对照，观察高、中、低剂量蛇葡萄根组血浆肿瘤坏死因子ａ（ＴＮＦａ）、一氧化氮（Ｎ０）含量、丙氨酸转氨酶（ＡＬＡ）活性及肝脏病理变化。结果表明：高、中剂量可减轻肝脏病理变化，明显降低血浆ＴＮＦｎ、Ｎｏ含量及ＡＬＡ活性，与地塞米松组无显著差异。证明蛇葡萄根可通过抑制ＴＮＦ—ｏ的产牛和ＮＯ的诱生而对ＣｏｎＡ诱导小鼠肝脏损伤起到保护作用。
（６）抗癌作用
１９８８年，台湾ＬｅｅＨｕｅｉ””等，从３６种抗癌中草药的筛选中发现，蛇葡萄Ａ．ｂｒｅｖｉｐｅｄｕｎｃｕｌａｔａ根的沸水提取物有中等程度的抗苦酮酸和苯并芘所致突变的活性”０１。
１９９０年孟正木等报道１“１甜茶藤Ａ．ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉＳｖａｔ．ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ全株的醇提取物，采用短期试验法改良的Ａｍｅ’Ｓ系统测定，其降低苯并芘所致突变的活性为１０２％，细胞毒性为３９％。
（７）抗纤维化作用
另据日本专利公告”…，蛇葡萄根中具有抗纤维化活性的成分没食子酸儿茶素酯，可用于预防肝纤维化、肺纤维化和动脉硬化。
（８）其它作用
发汗作用周氏”“报道防感藤茶水煎剂有明显发汗作用其乙醇提取液能显著降低致热后家兔体温，促进汗液和唾液分泌，增强巨噬细胞吞噬功能和溶血素抗体的形成。
利尿作用小叶蛇葡萄２０％提取液对豚鼠有利尿作用
止血作用小叶蛇葡萄提取液有止血作用。
兴奋作用赵氏“…在研究白蔹的镇痛作用时发现：白蔹对小白鼠无镇痛作用而有一定兴奋作用。
三、蛇葡萄属植物的临床应用
１．外伤科
（１）慢性骨髓炎：麻城县岐亭卫生院李学祥等””以野葡萄根膏（民问草药野葡萄根为蛇葡萄Ａ．ｓｉｎｉｃａｗ．Ｔ．ｗａｎｇ、光叶蛇葡萄Ａ．ｓｉｎｉｃａｖａｔｈａｎｃｅｉ（ｐ１．）ｗ．Ｔ．ｗａｎｇ、异叶蛇葡萄Ａ．ｈｕｍｉｌｉｆｏｌｉａｖａｒｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ（Ｔｈｕｎｂ）ｉ．ｋｏｕｃｈ、
坝ｌ学ｆ＿沧卫三裂叶蛇葡萄Ａ．ｄｅｌａｖａｙａｎａＰＬ．四种植物的根）外敷为丰治疗慢性骨髓炎９０例。结果：痊愈６２例，临床症状全部消失，伤口愈合，功能正常，经ｘ射线拍片对照，死骨脱尽，骨纹清晰，密度均匀，骨制修复。好转２７例，蛇葡萄减轻或部分消失，伤口组织新鲜，分泌物减少，经ｘ射线拍片对照，死骨脱离，骨皮质变薄，骨制无进一步破坏。总有效率达９８．１％。
（２）扭挫伤：用白蔹加食盐捣泥外敷，治疗扭挫伤５０例，有效６６例，有的用药４天即愈。
（３）各种出血：将蛇葡萄叶制成注射液含有效提取物４０ｍｇ或６０ｍｇ／２ｍｌ，肌注。亦可作局部止血外用，治疗消化道出血、手术出血、血尿、外伤出血等各种出血共４３例，显效３５例，有效５例，初步观察，对静脉出血、上消化道出血效果明显，对再障出血也有不同程度疗效。
（４）局部感染、烫伤、乳腺炎、睾丸炎等，湖南武警总队卫生所阮沸翔”“将蛇葡萄根内皮制成粉剂、浓缩液，将粉剂用矾士林调成３０％软膏外敷，治疗疖肿、外伤感染、急性淋巴结炎、烫伤、急性乳腺炎、急性睾丸炎等６种病症共１１７例，总有效率达９７。４％。另以浓缩液纱布外用治左下肢慢性溃疡患者，用药１月痊愈。将白蔹根去皮研末，取１５０９（酌情加减）以沸水搅成团后加７５—９０％酒精调成糊状外敷，日１次，对疖、症、蜂窝织炎、淋巴结炎、各种炎症肿块等急性感染初期有显著疗效，观察３１例，除个别病情危急、全身反应加重者加用抗生素外，一般不用其他药物，治疗２—３天即愈。
２．内科
（１）心血管疾病：湖北恩施医专门诊部”慵霉茶（原植物为大叶蛇葡萄）治疗原发性高血压５０例，其中显效３２例占６４％，有效１３例占２６％，总有效率为９０％。他们还观察了霉茶对血脂的影响，选择了ｌＯ例血胆固醇大于２２０ｍｇ的患者，系统观察了２个月，１０例患者治疗后，平均下降６１．６ｍｍＨｇ，有明显促进胆固醇下降的作用。
（２）上感、中暑：周氏”…用藤茶治疗上感４５例，中暑２２例，显效９０％左右。
（３）脚气水肿：阮氏以蛇葡萄根内皮制成的根皮粉剂内服，根内皮鲜品水煎外洗双下肢，治疗该病ｌ例，１周获愈。
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３．皮肤科
孙氏５”Ｊ将蛇葡萄根内皮制成糊剂外涂治疗带状疱疹４２例，用氧化锌油组作对照，两组均先用生理盐水擦拭，涂２％龙胆紫溶液，不用其他疗法，结果４日治愈率１００％，对照组４日治愈率ＩＯ％。
型－型！！：兰—————』生型二堕二参考文献：
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毕一｝ｔ科技大学硕卜学位论文第二节蛇葡萄素药理作用的研究概况
１９４０年Ｋｏｔａｋｅ和Ｋｕｂｏｔａ…从葡萄科蛇葡萄属植物福建茶即楝叶玉葡萄Ａ．ｍｅｌｉａｅｆｏｌｉａ的叶中分离得到化合物３，３。，４’，５，５’，７六羟基一２，３双氢黄酮醇，命名为蛇葡萄素Ａ．ｍｐｅｌｏｐｓｉｎ。１９９３年越南学者”１开始对粤蛇葡萄中的蛇葡萄素进行结构鉴定、含量测定以及抗氧化作用的研究。１９９５年魏捷【”等人从棠茶中分离出蛇葡萄素，通过药理实验证明其对肺炎球菌、流感杆菌、金黄葡萄球菌和Ａ族乙型链球菌的ＭＩｃ为１．２５２．５ｍｇ／ｍｌ。
１９９８年广西中医药研究所钟正贤等人“】通过动物实验对蛇葡萄素进行祛痰止咳、降脂、保肝作用的研究。结果表明，蛇葡萄素大小剂量组（１．Ｏｇ／ｋｇ、０．５９／ｋｇ）能明显抑制ＣＣＩ。所致小鼠ＧＰＴ、ＧＯＴ活性升高并降低ＴＢＩＬ的含量，但比阳性对照药联苯双酯稍弱。证明蛇葡萄素有明显的降酶退黄的保肝作用。他们按单爱莲介绍的喂高乳剂小鼠高血脂症进行实验，结果表明，蛇葡萄素大小剂量组能明显降低血清ＴＣ（总胆固醇）、ＴＧ（甘油三酯）值，还能使ＨＤＬ—Ｃ值（高密度脂蛋白胆固醇）略有升高。证明蛇葡萄素能抑制高脂肪乳剂引起的小鼠血脂升高，具有降脂作用，其强度与阳性对照药安妥明相似。他们按氨水引咳法实验研究蛇葡萄素的止咳作用，结果表明，蛇葡萄素能明显延长咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数，其中大剂量组（１．Ｏｇ／ｋｇ）与阳性对照药咳必清相当。提示蛇葡萄素对小鼠实验性咳嗽有明显的抑制作用。他们采用酚红法实验，结果表明，蛇葡萄素大小剂量组和阳性对照ＮＨ。ｃＩ组能增加气管的酚红排泌量。提示蛇葡萄素有明显的祛痰作用。
中山医科大学刘德育等人还发现蛇葡萄素是很强的酪氨酸酶抑制剂”１。在此基础上进行了蛇葡萄素抗肿瘤作用的研究。该课题组通过体外细胞毒实验，采用ＭＴＴ法（四氮唑蓝法）先后测定了蛇葡萄素对人白血病细胞ＨＬ一６０、Ｋ５６２以及人肝癌Ｂｅｌ一７４０２细胞的抑制作用…１，结果显示，蛇葡萄素对肿瘤细胞Ｂｅｌ—７４０２、ＨＬ一６０和Ｋ５６２增殖有明显的抑制作用，Ｉｃ。值分别为１８．６５、１２．４１和１８．３９ｕｇ／ｍｌ。他们还以ＭＴＴ法测定了蛇葡萄素对人鼻咽癌ＨＫ１及人乳癌ＭＣＦ一７细胞的体外细胞毒作用”１。测得蛇葡萄素对人鼻咽癌ＨＫ一１及人乳癌ＭＣＦ一７细胞的ＩＣｓ。（半数抑制浓度）分别为５０．Ｏｕｇ／ｍｌ和７９．４ｕｇ／ｍｌ。以同样的方法测定蛇葡萄素对小鼠Ｂ１６黑色素瘤的抑制作用”１，测得蛇葡萄素在
华ｒ｛，科技大学硕ｊｊ学位沦文５×１０１ｍｏｌ／１的浓度下对Ｂ１６黑色素瘤的抑制率为７９．８％，并做了急性毒性试验，测得对小鼠单剂量空腹给药的ＬＤ５０为１．０２５ｍｇ／ｋｇ。而氮烯咪胺（ＤＴＩＣ）对小鼠单剂量空腹给药的ＬＤ５０为８５９ｍｇ／ｋｇ”“，在４×１０－４ｍｏｌ／１的浓度下对Ｂ１６黑色素瘤的抑制率为６４．７％。初步显示，蛇葡萄素对黑色素瘤的抑制效果与目前临床抗黑色素瘤的首选药物ＤＴＩＣ相当，而毒性却更低。随后，他们采用Ｃ５７小鼠进行体内移植Ｂ１６黑色素瘤的抑瘤预实验”１，观察蛇葡萄素对Ｃ５７／ＢＬ小鼠移植性Ｂ１６黑色素瘤的体内抑瘤作用。测得在ｌＯＯｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ的剂量下，对Ｃ５７ＢＬ／６小鼠移植性Ｂ。。黑色素瘤的抑瘤率分别为２５．５４％、（Ｐ＜Ｏ．０５）、３２．０３％（Ｐ＜Ｏ．叭）及５４．５５％（Ｐ＜Ｏ．００１）；而６ｍｇ／ｋｇ氮烯咪胺（阳性对照组）的抑瘤率为５９．３１％，与２００ｍｇ／ｋｇ的蛇葡萄素组比较无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。表明蛇葡萄素对小鼠移植性黑色瘤具有显著抑制作用。他们还用流式细胞仪测定含药小鼠血清对Ｂ１６细胞周期及细胞增殖的影响。结果显示，蛇葡萄素腹腔给药后ｌＯｍｉｎ，Ｂ１６细胞在２种剂量（１５０ｍｇ／ｋｇ及２００ｍｇ／ｋｇ）的含药血清的作用下，Ｇ．期和Ｇ：／Ｍ期细胞数均比阴性对照组的同周期细胞数增高，ｓ期细胞数减少，使细胞周期阻止于Ｇ。一Ｓ期；分裂指数分别为１９．１％和２１．７％，均有降低。表明蛇葡萄素有可能抑制细胞的ＤＮＡ合成。从体外细胞毒抑制实验结果看，蛇葡萄素对人鼻咽癌ＨＫ一１及人乳癌ＭＣＦ一７细胞以及人肝癌Ｂｅｌ—７４０２细胞和白血病细胞ＨＬ一６０、Ｋ５６２都有较强的抑制作用；从体内肿瘤生长抑制实验结果看，蛇葡萄素在２００ｍｇ／ｋｇ的剂量下与目前临床抗黑色素瘤的首选药物ＤＴＩＣ的抑制率相近。然而蛇葡萄素属天然单体成分，具有毒性低、来源广的优点，提示蛇葡萄素可能是一种广谱抗癌剂。
综上所述，蛇葡萄素具有止咳、祛痰、保肝、降脂以及抗菌、抗肿瘤和抗氧化的作用。
毕中科技大学硕１．学位论文参考文献：
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硕Ｉ．学位论文
第三章实验部分
第一节大叶蛇葡萄化学成分的研究
一、蛇葡萄索的提取分离
［主要仪器］
旋转蒸发器ＲＥ一５２ＡＡ：上海亚荣生化仪器厂
ｚＦＩ型三用紫外分析仪：上海顾村电光仪器厂
［主要试剂］
聚己内酰胺（２０—４０目，湖南省澧县一中试剂厂）、柱层析用硅胶（２００３００目，青岛海洋化工集团公司出品）、薄层层析用硅胶ＧＦ。（６０型，青岛海洋化工集团公司出品）、９５％医用乙醇、石油醚（ＡＲ）、氯仿（ＡＲ）、甲醇（ＡＲ）、丙酮（ＡＲ）、乙酸乙酯（ＡＲ）
［方法］
１．提取
将大叶蛇葡萄全草洗净、干燥、粉碎，取３００９，加水３０００ｍｌ煮沸１ｈ，过滤。残渣再加水３０００ｍ１煮沸１ｈ，过滤，合并滤液。滤液于旋转蒸发器上减压浓缩至１０００ｍ］。加９５％医用乙醇３０００ｍｌ搅拌，置冰箱中放置一夜，析出沉淀（主要为多糖成分）。抽滤，滤液于旋转蒸发器上浓缩至４００ｍｌ。滤饼保存备用。２．脱脂
将浓缩液用石油醚（６０—９０＂Ｃ）萃取３次，每次用石油醚２００ｍｌ。以脱去脂溶性成分。将萃取后的液体浓缩后准备作柱层析。
３．聚酰胺柱层析
装柱：将２５０９聚己内酰胺于烘箱中１ＩＯ。Ｃ的温度下活化１小时，干法装柱，加甲醇１０００ｍｌ浸泡一夜。
加样：放出甲醇液，用无水乙醇将聚酰胺柱冲洗３遍。将脱脂后的浓缩液与１５９硅胶搅拌均匀后，吹干，加入柱顶部。
洗脱：依次以无水乙醇５００ｍＩ，９５％７，醇１０００ｍｌ，７５％乙醇１０００ｍｌ，５０％乙醇１０００ｍ］，２５％７，醇１０００ｍｌ，蒸馏水作梯度洗脱，每１５０ｍｌ收集一次。
合并：将各部分洗脱液在硅胶板上作薄层层析，展开剂为氯仿：甲醇＝４：１，
硕Ｉ：学位论文兰！型苎查堂
将含有相同成分的各部分洗脱液合并。
４．水洗
将合并后的初始洗脱液浓缩，再作薄层层析，显示三个主斑点。然后置于冰箱中放置，析出浅绿色固体物。晾Ｔ－后称量，约６９。将固体物以蒸馏水洗涤三次。取少许，以丙酮溶解，再作薄层层析，只有两个主斑点。（薄层板图如下）
水洗前
水洗后
５．硅胶柱层析
装柱：取５０９硅胶于烘箱中１１０＇Ｃ活化ｌ小时后，以氯仿调成糊状，湿法装柱。
加样：取上述固体物２９，以少量丙酮溶解后，与ｌｇ硅胶搅拌均匀，吹Ｔ－，加入柱顶端。
洗脱：依次以氯仿、氯仿一甲醇（１０：１）、甲醇洗脱。其中的一部分洗脱液放置后有白色絮状沉淀析出，过滤，得白色固体粉末。
６．薄层鉴定
取上述固体物少许，以丙酮溶解，点于ＧＦ２５４薄层板（自制）上，分别以三种展开系统作薄层层析（氯仿一甲醇＝４：ｌ、石油醚一乙酸乙酯＝１：１、石油醚一丙酮＝２：１），晾干，置于紫外灯下（２５４ｎｍ）观察，均只有一个斑点。Ｒｆ值分别为０．６３，０．６４，０．７３。
７．讨论：
黄酮类化合物的分离：
（１）对黄酮类化合物柱层析来说，聚酰胺是较理想的吸附剂，与纤维素粉比较，其吸附容量较高，分离能力也较强，它通过分子中的酰胺羰基与黄酮类化合物分子中的酚羟基形成氢键而产生吸附作用。吸附强度主要决定于黄酮
华巾科技大学硕ｆ：学位沦文类化合物分子中羟基的位置与数目。溶剂分子与聚酰胺或黄酮类化合物分子形成氢键的能力越强，则洗脱能力越强。通常，各溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强依次排列为：
水＜甲醇＜丙酮＜ＮａＯＨ水溶液＜甲酰胺＜ＤＭＦ＜尿素水溶液
我们在实验中曾经采用常法按乙醇水溶液的浓度逐渐升高作梯度洗脱，但分离效果并不好。于是采用反相梯度洗脱，效果较好。
（２）聚酰胺柱层析的初洗脱液作ＴＬＣ，有三个斑点。我们曾经尝试重结晶法，希望得到单体，但结果不理想。我们还试验以乙酸乙酯等溶剂除去脂溶性成分，结果也不理想。最后，以水洗涤除去水溶性成分后只有两个斑点。
（３）硅胶柱层析：我们曾经以石油醚乙酸乙酯、乙醚等作洗脱剂，但分离效果不好。
提取分离过程示意图：
大叶蛇葡萄
ＪｒＨ２０
水提取物
高
ｌ浓缩
’
浓缩液
溶液沉淀
』
浓缩液
ｌ石油醚脱脂
，
下层
ｊ
聚酰胺柱层析
｛
‘
硅胶柱层析
ｌ
化合物