代料块栽香菇的培养基配制的技术方法
香菇体菌种的培育，一般有孢子分离法、组织分离法和蒸水分离法三种。孢子分离法是有性繁殖，菌种生活力强，但变异率高，一般难掌握，选育新品种时可采用此法。组织分离法及菇木分离法系无性繁殖，种性比较稳定、而且简便易行，生产上应用较多。
<1>培养基配制的原理
培养基是香菇菌丝体生长发育的基质、可以提供香菇菌丝体生长发育所必需的水分、碳源、氮源、各种元素和生长因素，使菌丝体能正常、健壮地生长。
a.水分：香菇菌丝中含有大量的水分。水分不仅是菌丝细胞原生质的主要成分，而且菌丝的一切生理活动均需在有水的情况下进行。因此，在配制各级培养基时，均要加入一定量的水分。
b.碳源：单糖(葡萄糖)、双糖(蔗糖、麦芽糖)、多糖(淀粉)都是香菇菌丝能够利用的有机碳源。一般来说，碳素是菌丝细胞中有机物的基本元素，并且也是能量的来源。
c.氮源：氮素是构成菌丝细胞中的蛋白质和核酸的主要元素，而蛋白质和核酸又是细胞质和细胞核的重要成分，生命活动中起着重要的生理作用。有机氮(氨基酸、蛋白质、尿素)和氨态氮(硫酸铵)都是菌丝细胞氮的来源。
d.无机盐类：菌丝所需的无机盐类数量很少，但在其生命活动中都是不可缺少的。在配制培养基时，要加入少量的磷、钾、硫、钙、镁等。培养基中加入磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钙等，可满足对上述元素的要求。
e.生长因素：能调节香菇菌丝代谢活动的微量有机物，称之为生长因素。一般用作碳源的天然成分，如马铃薯、麦芽汁、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，无需另加。维生素B1可促进香菇菌丝生长，制斜面培养基时可加入少量。
f.凝固剂：常用的凝固剂为琼脂(洋菜)，是由石花菜提制而成。培养基中各种营养物质的比例对香菇菌丝生长的影响很大。要根据香菇菌丝生长对各种营养物质的需要按比例配制。要注意对培养基pH值的调节。
<2>培养基配制的方法
香菇菌种分为母种、原种和栽培种三种。
a.母种培养基的制作配方：
马铃薯200克;葡萄糖20克;琼脂18～20克;水1000毫升(pH值5.5～6)
该配方适合香菇及多种食用菌分离和培育母种之用。如果作保藏菌种用，在配方中可再添加磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，维生素B110毫克。
制法：选择质量好的马铃薯洗净去皮(已发芽的要挖去芽及周围一小块)，将其切成薄片，称取200克。放入铝锅中，加入清水1000毫升，加热煮沸，维持30分钟，用四层纱布过滤，取其汁液，然后将琼脂放在水中浸泡后加入马铃薯汁液中，继续加热至全部溶化(加热过程中要用玻璃棒不断搅拌，以防溢出和焦底)，最后加入葡萄糖，并且热水补足1000毫升，测定并调节pH值(用5%的稀盐酸或5%的氢氧化钠溶液)到所需范围内。配制好的培养基要趁热分装入试管，装入量约为试管长度的1/5，装管时要注意勿使培基沾附试管口。分装完毕塞上棉塞，棉塞要求松紧适度，塞入长度约为棉塞总长度的2/3左右，使之既有利通气又能防止杂菌侵入。
塞好棉塞后，把试管直放在小铁丝筐中，盖上油纸或牛皮纸，用绳扎好，或用绳子把试管扎成几捆，棉塞部分用牛皮纸包扎好，竖直放入高压灭菌锅内，进行灭菌，在1.5公斤/厘米2压力下维持30分钟。
灭菌后，待培养基温度下降至60℃时，再撰成斜面，以防冷凝水积聚过多。摆斜面时，先在桌上放一木棒，将试管逐支斜放，使斜面长度不超过试管总长度的 1/2，冷却凝固后，即成斜面培养基。
灭菌后的斜面培养基，要进行无菌测定，可从中取出2～3支，放入30℃左右的恒温箱中培养3天，培养后表面如仍光滑，无杂菌出现，就可供接种。多次制作后，已有把握，可不做无菌测定试验。
高压灭菌操作步骤和注意事项：
(Ⅰ)在灭菌锅内加水至水位标记高度，首次使用需先进行一次试验，水过少易烧干造成事故，水过多棉塞易受潮。
(Ⅱ)放火锅内的材料，不宜太挤，否则会影响蒸汽的流通和灭菌效果。体积大的瓶子，要分层放置或延长灭菌的时间。
(Ⅲ)盖上锅盖，同时均匀拧紧锅盖上的对角螺旋，勿使漏气，关闭气阀。
(Ⅳ)点火、逐渐升温。水沸后，待锅内压力升至0.5 公斤/厘米2时，逐渐开大放气阀，放净锅内冷空气至压力降至"0"，再关闭放气阀。如不放尽冷空气，即使加大至所需压力，而温度达不到应有的程度，也不能达到彻底灭菌的要求。
(V)继续DO%至所需压力时，开始记灭菌时间，调节火力大小，始终维持所需压力至一定时间。
(Ⅵ)停火。让压力自然回降至"0"时，打开放气阀。
(Ⅶ)打开锅盖，用木块垫在盖下，让蒸汽渐渐溢出，借余热烘干棉塞。
(Ⅷ)取出已灭菌的材料，并清除剩水，以防锅底锈蚀。
b.原种培养基的制作
配方甲：
锯木屑78%;米糠(或麸皮)20%;蔗糖1%;硫酸钙(石膏粉)1%;水适量;
配方乙：
棉籽壳40%;锯木屑40%;麸皮或米糠20%;蔗糖1%;石膏粉1%;水适量
制法：木屑以阔叶树的为好，棉籽壳(木屑)均要求干燥无霉烂、无杂质。米糠或麸皮要求新鲜、无虫。将木屑(或棉籽壳)与麸皮、石膏粉拌匀，蔗糖溶于水，将其加直至用手紧握一把培养料时，指缝间有水渗出而不下滴为宜。然后将其装入菌种瓶中，边装边用捣木适度压实，直装至瓶颈处为止，压平表面，再在培养基中央钻一洞直达瓶底。最后用清水洗净瓶的外壁及瓶颈上部内壁处，上棉塞。用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用绳扎紧。放入高压锅内，在1.5 公斤/厘米2
的压力下维持1.5小时。如采用土法灭菌，当蒸笼内达100℃后再维持6～8小时。
c.栽培种培养基的制作
栽培种培养基的配方及制作方法同源种。当采用其他用料栽培香菇时，可将上述两种配方中的锯末屑用料代替，其余成分不变，构成多种代用料配方。
<3>菌种的分离和培育
香菇菌种制作分母种、原种、栽培种三个逐步扩大的阶段。实践证明，香菇菌种的好坏优劣，不仅直接影响到香菇的产量和质量，而且关系到香菇栽培的成败。因此，必须认真做好菌种分离和培育工作。
a.母种的分离和培育
母种是菌种生产的关键，直接关系到原种和栽培种的质量，也是香菇丰产的保证。因此，必须认真做好种菇的选择和分离培育工作。
种菇要选择符合该品种特性的个体：要在出菇早、出菇均匀、产量高的菌块上或菇木上挑选，选出朵形端正、盖肉肥厚、柄短粗、无虫害的子实体做种菇。
组织分离法：选择符合种菇要求的菇蕾。用75%酒精揩拭表面后，用小刀把菇蕾纵剖为二，在菌盖与菌精交界处，切取0.5立方厘米的一小块菌肉，移放在斜面培养基中央。如用已开伞的香菇做分离材料，则选菌盖与菌柄交界的菌肉。
接种后，将试管放在22℃～24℃恒温箱中培养2～3天后，组织块上长出白色的菌丝，并向培养基上蔓延生长。当菌丝在斜面上长满后，再移到新的斜面培养基上，培育成母种。
b.原种和栽培种的培育
把母种接到木屑(或棉籽壳)、米糠培养基上进行培育，用以繁殖栽培种用的菌种称为原种。已培育好的母种用接种针挑取蚕豆大一小块放入原种培养基上，经22℃～24℃下培育35～45天，菌丝体长满全瓶，即成原种。母支每种约可接6～8瓶原种。
原种直接到相同培养基中扩大培养;用于压块用种为栽培种。从原种里掏出菌种移入灭过菌的瓶子中，培养温度22℃～24℃，培育时间约2个月以上。每瓶原种可接栽培种60～80瓶。
培育原种和栽培种注意事项：
第一，原种及栽培种的接种必须遵照无菌操作要求。
第二，当接种后，从第三天开始就要经常检查有无杂菌污染，发现有污染的瓶子要及时取出处理。一般检查要继续到香菇菌丝体覆盖整个培养基表面并深入培养基2厘米时为止。
第三，培养好的菌种如暂时不用，要将其移放在凉爽、干净、清洁的室内避光保存，勿使菌种老化。
<4>菌块的制作
掏瓶作块的时间，7月中旬制作的栽培种，10月上旬即可掏瓶作块。掏瓶时要求作到：掏瓶用具、瓶口、盛器及掏铲等所用工具均用0.1%高锰酸钾溶液或2%～3%来苏儿消毒;要剥尽老化褐色菌皮，要尽量成块掏出，切勿掏得过碎;要随掏随做块，不要推得过久，更不宜过夜。
做块方法：将掏出的菌种倒入30厘米见方，边高为7厘米的框内，用手压实，四周要紧一些，块的表面压平，不宜过紧过松。用配方甲一般11～12瓶菌种可做菌砖一块(30厘米2)，厚度以4.5厘米左右;若用配方乙时，一般12瓶菌种做一块，厚度6厘米上下为宜。
菌块直接压在势有消过毒的塑料薄膜的木架或地上，块与块之间距离3～4厘米，以利空气流通。压好后用薄膜覆盖，以利保湿。
其中正确掌握香菇菌丝的菌龄，选择适宜的季节压块，是香菇生产中的一大关键。
菌丝的生产过程，就是累积营养的过程。当养分积累到一定时期，在外界条件(如温度、水分、空气、光、营养、PH值)影响下，产生突变，以营养生长转入生殖生长，即菌丝生长进入子实体生长。
菌龄太长;瓶壁上形成一层很厚的菌皮，这是营养被消耗、菌龄老化的一种表现，压块后，虽然转色较快，但颜色略淡;这时压块若遇高温(30℃以上)菌丝容易衰老，造成霉烂。菌龄太短，菌丝成熟度不够，仍处旺盛生长阶段，压块后，菌丝容易徒长，转色也慢，颜色黄褐色，由于营养积累不足出菇也就延迟。
因此，压块最适宜的菌龄(即菌丝成熟度)应该是：
① 菌丝发展到瓶底和塑料袋底的10～20天，此时瓶壁处开始呈现白色突起(原基);
②透过瓶可看到瓶内表面的菌丝洁白，中央黄白色;
③揭开瓶盖塞有浓厚的菇香气味;
④菌种上表面覆盖一层黑褐的菌膜，菌种本身粘结力很强。以上四点是完全成熟菌种的特点。
具有以上特点的菌种即可掏瓶做块。由于菌龄适当，压块后菌丝愈合快，转色及时呈红棕色，若外界条件适宜，一般压块后15～20天左右便可现蕾。
菌龄是内因，当菌龄适宜时，还必须给其合适的外界环境条件，才能使菌丝体发生突变，形成子实体。香菇属变温型菌类，菌丝体生长适温是25℃，子实体是15℃。如关中地区一般在10月上中旬压块，此时气温已降至25℃以下，并在做块后则天内，能维持22℃～25℃;以后气温下降，正值出菇时期，因此，各地栽培香菇必须根据当地气候条件正确确定做块时期，才能获得香菇的高产。
香菇品种类型及适合的栽培条件 香菇品种繁多,可按需要划分品种类型,可按栽培基质划分、按出菇早晚划分、按销售型式划分、按大小划分、按出菇温度划分等. ①按栽培法划分.香菇可段木栽培,可代料栽培,代料又分为若干类型,为木屑、蔗渣、玉米芯、稻草等.因此,可划分为段木种、木屑种(代料种)草料种、菌草种、段木代料两用种等五大类型. ②按出菇早晚划分.按此划分可分为早生种(接种后70—80天出菇)、迟生种(接种后120天以上出菇). ③按适宜的产品型式.这主要分为干销种和鲜销种,干销种相对菇质紧密,含水量低,出干率高,适于干制；鲜销种则菇质较疏松,含水量较高. ④按大小划分.可分为大叶种、中大叶种、小叶种三大类.前者菌盖多在5-15厘米,后者4-6厘米,居二者大小之中的为中大叶种. ⑤按出菇温度划分.可分为低温种、中温种、高温种、广温种4类. 低温种：出菇的中心温度大致为5-15℃. 中温种：出菇的中心温度大致为10-20℃ 高温种：出菇的中心温度大致为15-25℃. 广温种：出菇温度范围较广,在5-28℃,但以10-20℃出菇
最高,品质最好.栽培者要根据自己的实际需求选择适当品种. 三、代料栽培的主要品种 近年我国代料栽培香菇已占总产量的90％以上,段木栽培已是一种限制生产的栽培方式,因此,本文不再对段木种和栽培技术进行介绍,而只介绍代料栽培的品种.为了便于栽培者了解品种及其合理使用,本文以栽培季节介绍品种. 1．春栽迟生品种 目前,代料香菇应用的主要有241—4、庆元9015(花菇939)、花菇135三个菌株. (1)名称、来源和基本性状 ①241—4241—4香菇菌株是我国第一个大量应用于代料栽培香菇的春栽迟生型品种,从1988年始至今累计应用量约25亿袋以上.该品种由浙江省庆元县食用菌研究所吴克甸主持选育成功.是浙江省法定推广品种.241—4菌株系从段直木241菌株的子实体分离获得的自然变异新菌株.其子实体大叶型,朵型园整,肉厚,菌盖真径6—10厘米,肉厚1．8—2．2厘米,柄短而细,品质优,国外称为“仿生菇”,属中温偏低型,出菇温度范围6-20℃,以12—16℃为最适,接种到出菇(菌龄180天,适宜的接种期为2—5月,出菇期10-翌年4月.该菌株抗逆性强,适应性广,在全国香菇产地均有应用.出菇期以低棚保湿、脱袋出菇的方式为主,在一定的温差范围内利用干湿刺激催蕾效果最佳.是代料香菇感观和品质最优的品种,也是香菇出
gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。可作为GUS报告基因 检测方法 根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。 组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus 基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。 CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。主要用于提取生物DNA 步骤（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。 （2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状； （3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动； （4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二； （5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min 后取出； （6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀； （7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中； （8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物； （9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；
袋料香菇高产栽培技术 一、栽培条件 (一)物质条件 1、原料：(1)各种新鲜无霉烂、无变质的阔叶树木屑和农作物秸秆，以及各种菌草等。(2)麸皮、米糠、玉米粉，新鲜、无霉变、无虫蛀均可。 2、药品：硫磺、甲醛(或气雾消毒剂)、酒精、石灰等。 3、生产用器材：塑料袋15厘米×55厘米×0.05厘米、接种钳、棉花等。 (二)设备设施条件 1、发菌室：发菌室需符合三个条件：(1)房间清洁干燥；(2)保温性能好，调温方便；（3)使用方便，环境卫生，无污染源。 2、灭菌灶：我县目前广泛使用常压灭菌灶，将3-4个油桶装上约3/4的水，作产生蒸汽的发热源，用管子将蒸汽直接通入用塑料膜紧紧包围的料袋堆内完成灭菌，每次可灭菌2500—3000筒料袋。 3、菇棚：位置应选择在通风、向阳处。菇棚按3500袋生产规模设计：菇棚用端正的竹竿或木杆搭架，菇棚长18米，宽4米，中墙高2.8米，边墙高1.7米，棚架上面盖上6丝以上厚的薄膜，薄膜上面铺草帘，在中墙上面1米高处用遮阳网搭建荫棚，荫棚落地与薄膜之间距离为0.6米。菇棚内走道宽0.8米，两边棚架为六层，中间棚架为七层，层架宽0.4米，层距0.25米，第一层距地面0.10米，菌筒间距离为3厘米。菇棚间距为3米。 二、栽前准备 袋栽香菇生产规模可大可小，要量力而行。以每个劳动力管理3000袋为宜。 一般每生产1000袋(15cm×55cm)香菇应备足下列原辅材料： 杂木屑800公斤（干木屑）或1250公斤（湿木屑），麦麸150—175公斤，糖9-10公斤，石膏粉12.5公斤，过磷酸钙0.5公斤, 香菇营养素2包。内袋1000个，外袋1000个。甲醛500毫升，高猛酸钾300毫克，新洁尔灭500毫升，酒精500毫升，或气雾消毒盒(科达、菇保)3盒，香菇栽培种17袋(13×55)，灭菌用柴700公斤，捆扎袋子的塑料绳1斤左右。 同时，事先备好常压灭菌锅(灶)、装袋机、接种箱、培养室以及拌料和接种所需的工用具等。
香菇种植技术 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
香菇种植技术 一、概述： 香菇是我国特产之一，多年一直出口，我国香菇产量1999年已达100多万吨，居世界第一。香菇也是世界性消费的菇类。我国香菇多以干品销售，近年也有一定鲜品出口。 二、栽培方式、工艺和品种类型 1、栽培方式及工艺 香菇有段木栽培、人造菇木栽培和地栽三大基本方式，随着代料栽培技术的不断完善和人们保护森林意识的增强，近几年段木栽培已经很少，我国香菇主要来自代料栽培，其基本工艺为配料--分袋—灭菌—接种—发菌—出菇。 2、栽培季节 主要有春栽和秋栽两大季节，有早春播种春末夏出，春播夏出，春播秋冬出，秋播冬春出这样几大生产运作方式。 3、品种类型 香菇品种繁多，可按需要划分品种类型，可按栽培基质划分、按出菇早晚划分、按销售型式划分、按大小划分、按出菇温度划分等。 （1）、按栽培法划分。香菇可段木栽培，可代料栽培，代料又分为若干类型，为木屑、蔗渣、玉米芯、稻草等。因此，可划分为段木种、木屑种（代料种）、草料种、菌草种、段木代料两用种等五大类型。 （2）、按出菇早晚划分。按此划分可分为早生种（接种后70-80天出菇）、迟生种（接种后120天以上出菇）。
（3）、按适宜的产品型式。这主要分为干销种和鲜销种，干销种相对菇质紧密，含水量低，出干率高，适于干制；鲜销种则菇质较疏松，含水量较高。 （4）、按大小划分。可分为大叶种、中大叶种、小叶种三大类。前者菌盖多在5-15厘米，后者4-6厘米，居二者大小之中的为中大叶种。 （5）、按出菇温度划分。可分为低温种、中温种、高温种、广温种4类。 低温种：出菇的中心温度大致为5-15℃。 中温种：出菇的中心温度大致为10-20℃。 高温种：出菇的中心温度大致为15-25℃。 广温种：出菇温度范围较广，在5-28℃，但以10-20℃出菇最高，品质最好。栽培者要根据自己的实际需求选择适当品种。 三、代料栽培的主要品种 近年我国代料栽培香菇已占总产量的90%以上，段木栽培已是一种限制生产的栽培方式，因此，本文不再对段木种和栽培技术进行介绍，而只介绍代料栽培的品种。为了便于栽培者了解品种及其合理使用，本文以栽培季节介绍品种。 1、春栽迟生品种 目前，代料香菇应用的主要有241-4、庆元9015（花菇939）、花菇135三个菌株。 （1）、名称、来源和基本性状 ①、241-4香菇菌株是我国第一个大量应用于代料栽培香菇的春栽迟生型品种，从1988年始至今累计应用量约25亿袋以上。该品种由
培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。 待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整 培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
香菇栽培技术 1. 1形态特征 香菇菌丝白色、绒毛状，有横隔和分枝，细胞壁薄，多锁状联合，成熟后扭结成网状，老化后形成褐色菌膜。子实体中等大至稍大。菌盖直径5~12cm，扁半球形，边缘内卷，成熟后渐平展，深褐色至深肉桂色，有深色鳞片。菌肉厚，白色。菌褶白色，密，弯生，不等长。菌柄中生至偏生，白色，内实，常弯曲，长3~8cm，粗0. 5~1. 5cm，中部着生菌环，窄，易破碎消失，环以下有纤维状白色鳞片。孢子椭圆形，无色，光滑。 1. 2生活条件 1. 2. 1营养 香菇是一种木生菌，以纤维素、半纤维素、木质素、果胶质、淀粉等作为生长发育的碳源，但要经过相应的酶分解为单糖后才能吸收利用。香菇以多种有机氮和无机氮作为氮源，小分子的氨基酸、尿素、铵等可以直接吸收，大分子的蛋白质、蛋白胨就需降解后吸收。香菇菌丝生长还需要多种矿质元素，以磷、钾、镁最为重要。香菇也需要生长素，包括多种维生素、核酸和激素，这些多数能自我满足，只有维生素B1需补充。 1. 2. 2温度 香菇属变温结实性菌类。菌丝生长温度范围较广，为5~32℃，适温为25~27℃，子实体发育温度在5~22℃之间，以15℃左右为最适宜。变温可以促进子实体分化。温度过高，香菇生长快，但肉薄柄长质量差;低温时生长慢，菌盖肥厚。质地较密;特别在4℃雪后生长的，品质最优，称为花菇。 1. 2. 3湿度 香菇菌丝生长期间湿度要比出菇时低些，适宜菌丝生长的培养料含水量为60% ~65%，空气相对湿度为70%左右，出菇期间空气相对湿度要保持85% ~90%为适宜，一定的湿度差，有利于香菇生长发育。 1. 2. 4空气 香菇亦为好气性菌丝，对二氧化碳虽不如灵芝等敏感，但如果空气不流畅，环境中二氧化碳积集过多，就会抑制菌丝生长和子实体的形成，甚而导致杂菌孽生。所以菇场应选择通风良好的场所，以保证香菇正常的生长发育。 1. 2. 5光线 香菇是好光性菌类。香菇菌丝虽在黑暗条件下也能生长，但子实体则不能发生，只有在适度光照下，子实体才能顺利地生长发育，并散出孢子。但强烈的直射光对菌丝生长和出菇都是不利的。光线与菌盖的形成、开伞、色泽有关。在微弱光下，香菇发生少、朵形小、柄细长、菌盖色谈。
培养基配方 1 斜面菌种保存培养基 1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 1.2麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 2.1平板计数琼脂培养基 将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。 3志贺氏菌检测
3.1 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。pH7.0 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。 3.2 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。
香菇袋料栽培技术 职业技术学院万南安 香菇是我国最早进行人工栽培的食用菌之一，传统的栽培方式以椴木为主，椴木香菇质地紧密，品质优良，但是生产周期长，产是低，成本高。代料栽培技术具有原料来源广泛生产周期短，产量高，收益大等优点，成为目前香菇栽培的主要方式。香菇代料栽培生产过程大体上可以分为制袋，脱袋转色和出菇管理三个方面。 一、制袋香菇是腐生菌，本身不含叶绿素，不能进行光合作用，只能从提供给它的基质吸收碳水化合物和含氮化合物以及少量矿物质和生长素进行生长。 常用的配方有： 1．杂木屑78％，麸皮20％，糖1％，石膏1％，水120—125斤，PH值自然。 2．杂木屑78％，麸皮15％，麸面5％，石膏1％，过磷酸钙1％，水120—125斤，PH值自然。 3．杂木屑40％，棉壳40％，麸皮18％，糖1％，石膏1％，水120—125斤，PH值自然。 4．杂木屑20％，蔗渣58％，麸皮20％，糖0．5％，石膏1．5％，水120一125斤，PH值自然。 5．棉壳90％，麸皮8％，糖1％，石膏1％，水110一130斤，PH值自然。以上各种原料，必须新鲜、无霉变、无虫蛀。其中松、杉以及含芳香类物质较多的樟木木屑不能用于香菇的代料栽培。 使用以上配方时，加入0．1％的多菌灵(50％的含量)对抑制杂菌有一定的效果。即1000公斤科中加多菌灵1公斤。 将培养科98—100℃灭菌10—12小时，待菌袋冷却后进行接种发菌和菌袋培养。接种时必须进行严格的无菌操作。菌袋培养时，料温应保持在18—23℃，在菌丝培养过程中，料温会逐渐上升，当料温达到25℃时；要及时翻堆，同时打开门窗散热，接种5—7天后，需要进行检查菌丝是否吃科，有无杂菌感染等，以后每隔5—7天翻堆一次，发现杂菌应立即淘汰。菌袋培养50-60天，菌筒成
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
PDA培养基的配制及试管斜面制作 1.实验材料 1.1试剂材料 土豆，葡萄糖，琼脂，试管，试管架，天平，注射用硫酸链霉素，注射用青霉素钠，三角瓶，灭菌锅，电磁炉，超净工作台，烧杯，1mL移液器，培养皿 1.2PDA培养基配方 土豆（去皮）200g 葡萄糖20g 琼脂15-20g 蒸馏水1000mL pH 自然 2.实验方法与步骤 2.1称量和熬煮 将土豆去皮，按自己所需的量（例如配制1L）称取土豆，将土豆切成小块放入锅内，加入适量的蒸馏水，在电磁炉上加热至沸腾，30min后用4层纱布在大量杯上过滤，弃掉滤渣，滤液用蒸馏水补足1L。 2.2溶解 用天平称取20g葡萄糖加入滤液中，用玻璃棒搅拌，使其完全溶解。 2.3分装 称取8-10g琼脂，加入所用三角瓶中，然后将滤液分装到三角瓶中，每瓶500mL，用玻璃棒将琼脂搅匀。 2.4加棉塞 培养基分装完毕后，在三角瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。 2.5包扎 加塞后，在棉塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。 2.6灭菌 将配制完成的培养基，包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌（见灭菌锅使用方法）。 3.试管斜面制作方法与步骤
3.1前两步同2.1，2.1步骤 3.2加热溶解 量取500mL滤液到1000mL的烧杯中，再加入8-10g的琼脂，用玻璃棒搅匀，放入微波炉缓慢加热溶解，加热其间注意不要让培养基溢出烧杯，不时用玻璃棒搅拌。 3.3分装 等琼脂溶解后，将培养基分装到事先准备好的试管中。分装量约占试管高度的1/4，管口尽量不要沾染培养基。 3.4加塞 培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞或橡胶塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。 3.5包扎 加塞后，试管7-9支捆用橡皮筋捆好，在塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。 3.6灭菌 将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。 3.7摆斜面 灭菌完成后，将试管拿出，在超净工作台下摆成斜面，根据自己需要选择合适的倾斜度。
香菇代料栽培技术要点 1、栽培季节选择 由于香菇属变温结实性菌类，结合我市气候特点，品性特征，应采取春季制袋，秋季出菇。制袋接种时间应在2月下旬到4月底。 2、品种选择 结合我市气候特点，经市农科所多年试验示范，我应选择中低温品种，如908、9608、839等，这些品种属单生、大叶型、产量高、肉厚。 3、原料选择 原料选择以阔叶树的枝桠、枝梢、玉米芯、豆秆、果树、桑树修剪的枝条及工农业加工的下脚料粉碎后均可作为代料香菇主料，要求无霉变，辅料也要求新鲜、无霉变、无虫蛀。 4、培养基配方 一般采用配方如下：木屑80%或木屑50%、玉米芯或豆秆30%，麸皮18%，石膏1%，生石灰1%，营养素每千克6包，防霉剂每千袋1公斤。先将麸皮、石膏、生石灰、营养素、防霉剂按比例称好，充分搅拌，然后再添加到木屑中，干翻搅2-3次，然后加水，含水量达到55-60%，再搅拌2-3遍，建堆闷2-3小时即可装袋。 5、装袋 采用18×60×0.05cm的聚乙烯折角袋和免割保水膜，采用机械装袋， 先将免割保水膜套于装袋机筒上，再套上筒袋，料必须装实，装好的袋面必须光滑、无皱，手捏袋子有顶突感，然后用细绳扎紧袋口或用封口机封口。 6、灭菌 将装好的袋子分层摆蒸汽包内（一般每次灭菌3000-4000袋），在5小时之内用大火烧到100℃，保持18-20小时。再停火焖一夜，当
温度降到60℃左右即可出料袋。 7、接种 接种以接种箱最好。将灭菌的袋子放入已消毒的房间，袋温度降到30℃时，开始接种。首先将袋子，接种工具，菌种放入接种箱，每箱用气雾消毒剂2包点燃，待30分钟后先用75%酒精棉球擦手，开始接种，每袋打孔3—5个，将菌种夹成长条形，接入孔内，并套上外袋，扎紧袋口。 8、菌丝培养 接好种的菌袋立即移入消过毒的培养室或中拱棚内（如果用拱棚发菌，棚上必须离膜30cm搭建双层遮阳网遮阳）就地堆放，室（棚）内温度最初5-6天以25-28℃左右，然后保持在25℃，保持通风，湿度控制在45-60%；保持室内黑暗。当菌丝吃料达8cm以上开始第一次刺孔，刺孔应在菌丝外沿2cm以内刺孔，深度2cm左右，且忌不能在无菌处刺孔，以“#”字或“△”型堆放，堆高以7层为宜。当接种孔之间菌丝链接后，进行第二次刺孔培养，刺孔10-20个；当菌丝满袋后进行第三次刺孔。在刺孔过程中特别注意通风、降温。 9、转色管理 转色是在菌袋上长出瘤状物达到80%以后，表面菌丝倒状，菌丝分泌出褐色水珠，而后在菌筒表面形成一层具有一定活力棕色菌皮，它可起保水、避免杂菌侵染的作用。进入转色期，增加散射光照、通风，空气相对湿度控制在70%左右，及时检查放掉黄水，以防烂袋。同时上下倒袋，以保证转色均匀，以保高产。 10、越夏管理 菌袋菌丝满袋后已进入5、6月份，也是第三次扎孔通氧时间，每次扎孔后，菌丝呼吸作用加强，代谢旺盛而使菌袋内温度高于室温3-5℃，扎孔越多、越深、越粗袋内温度升高就愈多，易产生烧袋现象。因此，第三次所扎孔数量以50个左右为宜，且要细、浅，无论
培养基母液的配制方法 一、实验目的 1.了解无菌操作 2.掌握培养基母液的配制方法 二、实验原理 配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 三、实验器材和药品 器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。 四、实验步骤 1、大量元素母液的配制
各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。 表1 MS培养基大量元素母液制备 注意： (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
PDA培养基的配制方法 一、目的要求 1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2．学习并掌握棉塞的制作方法。 二、培养基的配制原理 培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训 和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不 同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。 三、实训材料和用具 琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布， 四、操作方法与步骤 (一) 培养基的配制 PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。 (1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小 块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁 热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放 在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再 补充水分至所需量。 (3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用 三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超 过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4) 加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试 管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防 止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 (二) 棉塞的制作 棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基
培养基配方1 斜面菌种保存培养基 培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 平板计数琼脂培养基 将?胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为，分装，在115℃高压灭菌15min。 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基 蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克 水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基 在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基 牛肉 500克 蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。 将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基） 可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克
FeSO4 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基 马铃薯 200克 蔗糖 10克 琼脂 20克 水 1000毫升 自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基 将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克 蔗糖 30克 琼脂 15～20克 水 1000毫升 自然pH
PDA培养基的配方及配制方法 PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。 PDA培养基的配方 土豆 200g 葡萄糖 20g 琼脂 15～20g 水 1000mL pH值自然 PDA培养基的配制 (1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4)加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
香菇栽培技术要点 一、准备菌种 1、菌种的选择。袋式栽培香菇菌种一般选用高温型、子实体发生的最适温度为15-25℃，高温发生型菌株可在中温或低温环境中出菇。 2、菌种生产。包括生产日程、数量和质量检查等内容。进行规模生产菌种用量较大，所需菌种应在料筒生产之前培养好，菌龄60-90天，利于提高菌筒产品率。菌种用量由栽培规模和接种密度决定，每袋接种4-6穴，每千克菌种可接种70-80袋。菇农应根据栽培计划，提前向信誉好的菌种长订购菌种。 二、准备原料 用代料栽培香菇需要多种原料，现以木屑为主要培养料，生产一万袋为例。1、配制培养料原料：①杂木屑按每袋0.8kg备料，提前建堆，淋水让其自然发酵，中间翻拌2次，堆积半年以上再利用。棉产区可用棉秆粉代替部分木屑。②麦麸或米糠1.6-2吨，要求新鲜无霉变、生虫现象。③糖100kg。④石膏粉100-200kg。 2、辅料类：聚乙烯塑料袋1万个、封口胶布50筒、农用塑料薄膜50kg、其他物资适量。 三、料袋制备与接种。 1、生产日程。采用秋栽模式，一般8月下旬开始整地做畦，9月中旬制作料袋。 2、制袋技术 （1）、配料：主要原料是杂木屑，其次为玉米芯、棉籽壳、棉秆粉等。
（2）拌料:先将木屑、棉秆粉、麦麸等干料混拌均匀，将糖、尿素等可溶性辅料用清水配成母液，分次加水混入干料、用铁锹来回翻拌5次以上。目前采用“握料法”和水分测量仪检测，一般含水量为55%-65%。 （3）装袋：将配制好的培养料装入塑料袋中，15*55cm的小袋，填料长度40cm，每袋填料1.8-2kg；24*55cm的大袋，填料长度40cm，每袋填料3.6-4kg。 （4）灭菌：料袋制作要求流水作业，当天拌料装袋，当天灭菌。（5）冷却：灭菌后，暂缓出锅，待其冷却至60℃左右时即可出锅。生产规模较大时，也可在工棚内冷却。冷却场地必须在使用前24小时进行清扫和消毒处理，以保持料袋的无菌状态。 （6）接种：当料袋温度降至30℃以下时即可接种，代料栽培香菇的接种工作应遵守无菌操作原则。 四、菌袋培养 接种后的料袋称为菌袋。菌袋培养期间的管理要点是：避光、调温、通风、增氧、翻堆与去杂。 1、菌袋培养室与菌袋堆积。为了提高培养室利用率，室内应设施培养架，菌袋呈立式排列，以利于散热。 2、发菌管理：接种定植至发菌成熟，需60-120天，早熟菌株60-80天，晚熟菌株90-120天。其中包括萌发定植期、菌丝生长期、菌丝生长成熟期。 五、转色管理 菌筒在畦面薄膜罩2-4天内，尽量不要去翻动膜罩，保持罩内相对恒温恒湿，使脱筒后菌筒有一适应过程，同时促使筒表层菌丝恢复。罩内温度超过25℃，要短时间掀薄膜降温。由于薄膜内外的温差大，在膜内壁上出现水珠属正常现象。绒毛菌丝长接近2mm，要增加掀膜次数，降温降湿。一般连续一周转色，先从白色转成粉红色，再转成红褐色。在这一转色过程中，菌筒外表分泌出黄水珠，这是出菇先兆。若遇上连续的高温闷热天气，或没有挖排水沟，极易爆发毁灭性绿色木霉感染。因此在黄水珠形成初期，应加厚顶棚厚度，延长掀膜时间。
细胞培养基及其配制方 法 Revised as of 23 November 2020
D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分
DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。
（1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。 ?
培养基及其制备方法 1、营养肉汤培养基 胨10g 肉浸液1000ml 氯化钠5g 取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 2、营养琼脂培养基 照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为 7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 3、虎红琼脂培养基 胨5g 虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g 葡萄糖10g （或0.133％虎红溶液10ml） 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g 琼脂15～20g 硫酸镁(MgSO4.7H2O) 0.5g 水1000ml 除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。 4 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD) 胨10g 琼脂15～20g 酵母浸出粉5g 水1000ml 葡萄糖20g 除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。 5 、胆盐乳糖培养基(BL) 胨20g 牛胆盐 1.3g 乳糖5g （或去氧胆酸钠0.25g） 氯化钠5g 水100ml 磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.3g 除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。 6 、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB) 营养琼脂培养基100ml 2％曙红溶液2ml 20％乳糖溶液5ml 0.5％亚甲蓝溶液 1.3～1.6ml
香菇种植技术 一、概述： 香菇是我国特产之一，多年一直出口，我国香菇产量1999年已达100多万吨，居世界第一。香菇也是世界性消费的菇类。我国香菇多以干品销售，近年也有一定鲜品出口。 二、栽培方式、工艺和品种类型 1、栽培方式及工艺 香菇有段木栽培、人造菇木栽培和地栽三大基本方式，随着代料栽培技术的不断完善和人们保护森林意识的增强，近几年段木栽培已经很少，我国香菇主要来自代料栽培，其基本工艺为配料--分袋—灭菌—接种—发菌—出菇。 2、栽培季节 主要有春栽和秋栽两大季节，有早春播种春末夏出，春播夏出，春 播秋冬出，秋播冬春出这样几大生产运作方式。 3、品种类型 香菇品种繁多，可按需要划分品种类型，可按栽培基质划分、按出 菇早晚划分、按销售型式划分、按大小划分、按出菇温度划分等。 （1）、按栽培法划分。香菇可段木栽培，可代料栽培，代料又分为 若干类型，为木屑、蔗渣、玉米芯、稻草等。因此，可划分为段木种、木 屑种（代料种）、草料种、菌草种、段木代料两用种等五大类型。 （2）、按出菇早晚划分。按此划分可分为早生种（接种后70-80天出菇）、迟生种（接种后120天以上出菇）。 （3）、按适宜的产品型式。这主要分为干销种和鲜销种，干销种相 对菇质紧密，含水量低，出干率高，适于干制；鲜销种则菇质较疏松，含 水量较高。
（4）、按大小划分。可分为大叶种、中大叶种、小叶种三大类。前 者菌盖多在5-15厘米，后者4-6厘米，居二者大小之中的为中大叶种。 （5）、按出菇温度划分。可分为低温种、中温种、高温种、广温种 4类。 低温种：出菇的中心温度大致为5-15℃。 中温种：出菇的中心温度大致为10-20℃。 高温种：出菇的中心温度大致为15-25℃。 广温种：出菇温度范围较广，在5-28℃，但以10-20℃出菇最高，品质最好。栽培者要根据自己的实际需求选择适当品种。 三、代料栽培的主要品种 近年我国代料栽培香菇已占总产量的90%以上，段木栽培已是一种限制生产的栽培方式，因此，本文不再对段木种和栽培技术进行介绍，而只介绍代料栽培的品种。为了便于栽培者了解品种及其合理使用，本文以栽培季节介绍品种。 1、春栽迟生品种 目前，代料香菇应用的主要有241-4、庆元9015（花菇939）、花菇135三个菌株。 （1）、名称、来源和基本性状 ①、241-4香菇菌株是我国第一个大量应用于代料栽培香菇的春栽 迟生型品种，从1988年始至今累计应用量约25亿袋以上。该品种由浙江省庆元县食用菌研究所吴克甸主持选育成功。是浙江省法定推广品种。 241-4菌株系从段直木241菌株的子实体分离获得的自然变异新菌株。其子实体大叶型，朵型园整，肉厚，菌盖直径6-10厘米，肉厚18-22厘米，柄短而细，品种优，国外称为“仿生菇”，属中温偏低型，出菇温度范围 6-20℃，以12-16℃为最适，接种到出菇，菌龄180天，适宜的接种期为