大曲中红曲霉的简易分离方法
李晓楼
（四川职业技术学院，四川遂宁 629000 ）
摘要：本文采用无菌过滤收集大曲中红曲霉孢子悬液和基内接种技术，运用稀释平板法，实现了从大曲中简易分离红曲霉，文章介绍了红曲霉的生物学特征，阐述了从大曲中分离红曲霉的原理、分离培养基的设计与制作、大曲中红曲霉分离纯化的技术方法及过程，为获取红曲霉纯菌及红曲生产爱好者提供参考。
关键词：大曲；红曲霉；分离；基内接种；稀释平板法
红曲霉的用途非常广泛，利用红曲霉生产红曲，古称丹曲，是我国古代的伟大发明。红曲不但用于酿酒，而且还应用于发酵食品、食品色素等方面[1] 。此外有的红曲霉能产生 Monacolin 类活性物质，具有很强的降低胆固醇的作用；某些红曲霉种还含有较高的麦角甾醇，可防止婴儿佝偻病，促进孕妇和老年人对钙、磷的吸收；另外有报道红曲霉的有些种还有酯化能力[2] 。因此有关红曲霉在酿酒、保健、食疗等方面的作用越来越受到人们的重视。本文采用无菌过滤收集大曲中红曲霉孢子悬液和基内接种技术，运用稀释平板法，实现了从浓香型大曲中简易分离红曲霉，文章介绍了红曲霉的生物学特征，阐述了从大曲中分离红曲霉的原理、分离培养基的设计与制作、大曲中红曲霉分离纯化的技术方法及过程，为获取红曲霉纯菌及红曲生产爱好者提供参考。
1 红曲霉的生物学特征
红曲霉（Monascus sp . ）是腐生菌，分布较广，常存于乳品或乳制品中，多数出现在乳酸自然发酵的基物里，制曲作坊和大曲等都是它们适宜的繁殖地。红曲霉属于不整子囊菌纲、散囊菌目、红曲科、红曲属。已描述过的红曲霉约有19 个种[3] 。
1.1 形态特征
红曲霉一般多用麦芽汁琼脂培养。在生长的过程中能形成红色色素，菌落初为白色，老熟后变成淡红、紫红等颜色。菌丝有隔，多核，多分枝。分生孢子着生在菌丝及其分枝的顶端，单生或以向基式生出 2 — 6 个成链，形状多为梨形，闭囊壳球形，内散生 10 多个子囊，子囊球形，内含有 8 个子囊孢子，成熟后子囊壁解体，孢子留在闭囊壳内[4] 。
1.2 生理特性
红曲霉的最适温度一般在30 ℃—35 ℃ ，25 ℃ 以下40 ℃ 以上不利于生长。最适 pH 值一般在 3 —5 ， pH 值在 3 以下，生长缓慢， pH 值在 5 以上，不利于色素的形成。同时酿酒用的红曲霉能够耐受一定的酒精度[4] 。
2 大曲中红曲霉的分离原理
根据红曲霉的生物学特征以及生理特性，在适合红曲霉生长的培养基中加入选择性抑制剂，设计制作成适合红曲霉生长的选择性分离培养基，选取富含红曲霉的优质大曲为菌源，无菌过滤，收集红曲霉孢子悬液，采用稀释平板分离可以得到较纯红曲霉[5] 。
3 分离培养基的设计与制作
选择性分离培养基的设计与制作，是成功分离红曲霉的关键。设计与制作红曲霉选择性分离性培养基，包括设计原理；配方以及制作过程。
3.1 设计原理
选择性分离培养基是利用目的微生物对各种化学物质敏感程度的差异，在培养基中加入选择性抑制剂，用以抑制非目的微生物的生长，并使目的微生物生长繁殖，从而实现红曲霉的纯种分离。
3.2 具体配方
根据红曲霉分离的原理，设计麦芽汁琼脂培养基加选择性抑制剂用于红曲霉分离。具体配方： 8 —10 波美度的麦芽汁 900ml ，无水乙醇 100ml ， 25g 琼脂，然后用乳酸调 pH 值在 4.0 左右， 1.05kg /cm 2 灭菌 20 分钟即成选择性分离培养基。使用前加 30ppm 的链霉素 1ml — 2ml ，用于抑制原核微生物如细菌和放线菌的生长。
3.3 制作过程
取小麦若干，用水洗净，浸水 6 —12 小时，15 ℃ 阴暗处发芽，当麦根长至麦粒的两倍时，摊开烘干。将干麦芽磨碎，取 1 份麦芽加 4 份水，在65 ℃ 水浴锅中糖化 3 — 4 小时，然后用 4 — 6 层纱布过滤，滤液用鸡蛋清法除浊后稀释到 8 — 10 波美度。按 3.2 设计配方配制， 1.05kg /cm 2 灭菌 20 分钟即成[5] 。
4 大曲中红曲霉的分离方法与技术
4.1 方法
稀释平板法（ pour plate method) 即运用无菌操作，将目的菌源微生物用无菌水作梯度稀释，取定量菌液通常不超过 1ml 于无菌培养皿中，然后倒入融化冷却至50 ℃ 的培养基，混合摇匀，凝固后倒置、恒温培养 1 —3 天，就会出现单菌落，达到纯种分离的目的。稀释平板法，接种温度较高，接种器具简单，适合于利用孢子悬液等分离。
4.2 技术
根据红曲霉的生物学特征及其生理特性在红曲霉的分离纯化过程中主要采用了基内接种技术和无菌过滤收集孢子悬液技术。
4.2.1 基内接种技术
基内接种技术是相应于稀释平板法而言的，菌液接种于培养基的内部，菌液与培养基充分混合，基内接种技术，接种温度较高，可使某些热敏感菌死亡，同时培养基内部缺氧，某些好氧菌的生长受到抑制，可减少非目的微生物在培养基上的生长，而红曲霉的孢子有一定的耐受性和抗逆力，因此影响不大。
4.2.2 无菌过滤收集红曲霉孢子悬液技术
采用无菌过滤收集红曲霉孢子悬液，用于红曲霉纯菌分离，可以缩短分离纯化的次数，确保分离培养基平板上的红曲霉菌落是单菌落，同时红曲霉孢子的耐受力较强，有一定的抗逆性，适合基内接种。
4.2.2 .1 无菌过滤装置的准备
用一玻璃短柄漏斗，在漏斗柄和颈结合处包棉花成棉塞状，将漏斗柄插放到试管或三角瓶内，棉塞要松紧适宜（以手握漏斗，试管或三角瓶不掉为准），漏斗内放折叠好的圆锥形滤纸，要求滤纸边缘低于漏斗边缘，然后用牛皮纸将整个漏斗包扎，灭菌备用。
4.2.2 .2 无菌过滤操作
用无菌小刀在漏斗的牛皮纸上划一锐角形小口，在无菌环境中，用无菌镊子掀起小口，将待滤样液缓缓倒入漏斗，样液不要超过滤纸边缘。完毕后，轻轻取下漏斗，保留棉塞，注意旋转一下棉塞，以消除棉塞中部的小孔。所得滤液即为基内接种的孢子悬液。
5 大曲中红曲霉的分离纯化过程
5.1 大曲的选取
选取有红心的优质中高温大曲，无菌粉碎备用。红心大曲的选取，目的性强，可以缩短分离时间，减少分离过程中目的菌种的富集培养。
5.2 红曲霉的分离
从红心大曲中分离得到红曲霉纯菌，要经过一系列的过程，在整个过程中，无菌操作和无菌意识显得尤为重要，包括以下过程。
5.2.1 无菌水的制备
量取 90ml 蒸馏水于 250ml 三角瓶中，塞上棉塞，包扎，另取 2 支
18mmX180mm 的试管，分装 9ml 蒸馏水，塞上棉塞，包扎。 1.05kg /cm 2 灭菌 20 分钟。
5.2.2 红曲霉孢子悬液的制备与稀释
将无菌粉碎的红心大曲粉 10g 浸泡在装有 90ml 无菌水的三角瓶中振荡
20 分钟，无菌过滤，滤液即为 10 -1 浓度的红曲霉孢子悬液，用 1ml 的无菌滴管吸取 10 -1 浓度的孢子悬液 1ml 于一管 9ml 的无菌水中，吹洗三次，摇匀得 10 -2 浓度的红曲霉孢子悬液，同样到 10 -3 浓度的红曲霉孢子悬液。
5.2.3 平板分离
取 9 套无菌培养皿，依次编号为 10 -1 ， 10 -2 ， 10 -3 ，，每个稀释度设两个重复即各三个。采用基内接种技术，用 1 支 1 ml 无菌滴管从低浓度开始，分别吸取 1ml 菌液于相应编号的培养皿内，要求吸前摇匀样液。然后将融化冷却到50 ℃ 左右的分离培养基（向培养基中加入 30ppm 的链霉素 1 —2ml ，）倒平皿，旋转平皿，使培养基和孢子悬液充分混匀。冷凝后倒置于培养箱中32 ℃ 恒温培养 2 — 4d ，注意观察菌落的形态和颜色。
5.2.4 红曲霉的转接
从稀释平板上选取菌落初为白色，老熟后变红、紫红的菌落无菌操作转接到麦芽汁琼脂试管斜面上32 ℃ 恒温培养 6 — 7d ，作好标记。
5.2.5 红曲霉的纯化
如果转接的菌苔不纯，可在培养 7 天左右后，向试管中无菌操作加入 10ml 无菌水，用接种铲刮洗菌苔，无菌过滤，将滤液按 5.2.2 、 5.2.3 操作，进一步纯化、培养、转接即得红曲霉纯种。注意纯化时孢子悬液的稀释度，最好取 10 -3 ， 10 -4 ， 10 -5 三个稀释度，因为此时的菌相当于经过了富集培养，较纯，孢子数量大，浓度较高。
5.2.6 镜检
取洁净的无菌载玻片，加一滴乳酸石碳酸液。用接种针挑取分离转接的试管红曲霉菌丝少许，在液滴中涂布，盖上盖玻片，火焰固定后镜检。观察菌体的形态、菌丝的形态、有无横隔，分枝情况；分生孢子着生方式、形状；有无闭囊壳及其形状等鉴定是否是红曲霉。镜检后将确定的红曲霉菌种作好标记。
5.2.7 红曲霉菌种的保藏
将分离得到的纯种红曲霉作好标记后冰箱保存备用。在实践生产中可以用试管麸皮法保存红曲霉，该方法简单、实用，保存时间较长。
总之，采用上述方法，从大曲中分离红曲霉，目的性强，成功率高，简便易行，耗时短，同时分离得到的红曲霉来源于大曲，有一定的糖化力和耐酸性，在实际生产上有更大的实用价值。
参考文献：
[1] 傅金泉．我国红曲生产与应用的现状及发展前景 [J] ．食品与发酵， 1995 ，（ 5 ）
[2] 毛宁，陈松生．降脂红曲霉的生产研究 [J] ．中国酿造， 1997 ，（ 5 ）
[3] 颜耀祖．真菌分类学 [M] ．北京：中国农业大学自编教材， 96~98
[4] 傅金泉．中国红曲及其实用技术 [M] ．北京：中国轻工业出版社， 1997
[5] 周群英，高廷耀．环境工程微生物学 [M] ．北京：高等教育出版社， 2000 作者介绍：
-- 《中国西部科技.学术》 2007年第5期 --
中药抗烟曲霉菌的研究 发表时间：2014-11-24T10:20:09.233Z 来源：《世界复合医学》2014年第3期供稿作者：荀彦1 刘金辉[导读] 烟曲霉菌是导致免疫低下患者肺部感染、侵袭性肺曲霉病（IPA）等深部感染的常见真菌，特别是IPA 死亡率高达80%-90%，预后差。 荀彦1 刘金辉21.南昌大学第一临床医学院临床112 班；2.南昌大学医学院微生物学教研室南昌 330000 【摘要】烟曲霉菌是导致免疫低下患者肺部感染、侵袭性肺曲霉病（IPA）等深部感染的常见真菌。近年来随着侵入性治疗的运用、骨髓移植、广谱抗生素的滥用等情况，烟曲霉感染呈上升趋势。中药抗菌的特殊机理，不易产生耐药性，中药用于治疗烟曲霉菌感染，对于临床很有实际意义。本文总结近年资料后，对烟曲霉的致病，中药抗烟曲霉菌的效果，机制及相关影响因素进行探讨。 【关键词】中药抗菌；烟曲霉菌 【中图分类号】R435.72【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2014）03-040-02 烟曲霉菌是导致免疫低下患者肺部感染、侵袭性肺曲霉病（IPA）等深部感染的常见真菌，特别是IPA 死亡率高达80%-90%，预后差。 近年来，由于脏器移植患者增加，艾滋病发病率迅速增长和广谱抗生素、免疫抑制剂及激素的大量应用，IPA 的发病率有明显上升趋势[1]。 因中药抗菌的特殊机理，不易产生耐药性，中药抗曲霉菌研究引起了广泛兴趣。中药用于治疗深部真菌感染的深入探讨研究，特别是棘手的烟曲霉菌，目前还是研究较少的领域，而对临床治疗的进行很有实际意义。本文在总结近年资料后，对烟曲霉的致病，中药抗烟曲霉菌的效果，机制及影响因素进行探讨。 1 烟曲霉菌致病1.1 曲霉致病机制侵袭力是真菌致病因素的重要组成部分[2]，曲霉侵袭机体的过程多数都是机体吸入曲霉的孢子，孢子生长成菌丝进一步侵袭组织引发各种严重临床症状。 烟曲霉菌菌丝片段和孢子被吸入气道后，致少量细胞因子甚至抑制细胞因子产生，不能使足够的炎症细胞向局部趋化，逃避吞噬，长期存活、芽生、释放大量过敏原，引起哮喘发作或过敏性支气管肺曲霉病（ABPA）等[3]。 1.2 曲霉致病因子[4]1. 2.1 胞壁及外膜等相关成分曲霉的细胞壁拥有大量的多糖成分，β（1-3）葡聚糖是其胞壁中最主要的结构，组成基本骨架，它可以被宿主细胞识别，通过激活激活蛋白1（activator protein 1）激活宿主的炎症反应。 曲霉表面一层突起的疏水蛋白，利于曲霉的黏附和定植。 曲霉孢子还表达细胞色素成分，能帮助曲霉抵御紫外线，氧自由基。色素缺乏的孢子易被补体结合、吞噬细胞吞噬且对抗真菌药物敏感。 曲霉的细胞壁至少含有九种糖基磷脂酰肌醇相连的蛋白（GPI-linked protein）连接于多糖形成的骨架上，对曲霉的正常生长甚为重要。其合成相关的重要基因突变后，曲霉菌丝生成速度下降。 1.2.2 曲霉产生的毒素曲霉的基因较原核生物要复杂得多，毒素的种类也非常复杂。主要包括：①胶霉毒素（gliotoxin）；②烟曲霉素（fumagillin）；③其他毒素：烟曲霉文（fumigaclavine C）、可弥漫性物质（diffusiblesubstance）、局限曲霉素（restrictocin）、核糖毒素（ribotoxin）等。 这些毒素可以抑制DNA、蛋白质的合成或抑制免疫反应，或者破坏局部的组织，而利于曲霉的生长繁殖。 曲霉感染的过程相当复杂，单纯抑制其中某个基因的表达常难取得预期效果。基因组学，蛋白组学的研究可能会带来新的进展。 1.3 曲霉耐药性的产生有研究表明随着烟曲霉生物膜的成熟，对普通抗菌药物的敏感性进一步下降。据实验研究，与游离的孢子相比，在烟曲霉生物膜形成的过程中，药物外排泵基因和唑类靶酶基因表达量的逐渐升高可能对其抗药性增加有所影响[5]。 陈剑等的研究发现长期服用伊曲康唑的患者体内烟曲霉对伊曲康唑产生获得性耐药以及停药后回复敏感，可能系其14α脱甲基酶第220位M220I 的替换，即基因发生突变[6]。 对于侵袭性肺曲霉病，现在一般的抗菌药物如伏立康唑、伊曲康唑，也只有50%~70%的有效，多建议几种抗生素联合用药[7]。但多种常用抗生素的临床治疗效果愈发不佳，副作用大，对本就因免疫力低下而患烟曲霉病的病人更不适合。现临床上肺曲霉病大多数就是在原有肺部疾患的基础上或长期使用抗生素和激素后继发感染。故探寻并总结中药治疗方法以资解决这一问题。 2.中药汤剂的抑菌2.1 中药汤剂对烟曲霉体外抑菌实验有报道认为中药方剂四君子汤可以抑制体外培养的烟曲霉菌的生长[8]。以一定剂量的四君子汤和氟康唑处理的1000 个烟曲霉菌孢子涂布在沙氏固体培养基培养源凿，计算并比较烟曲霉菌生长形成的菌落数量、菌落大小、镜下计数孢子柄与孢子的数量。结果显示，与对照组相比，四君子汤和氟康唑可以显著降低烟曲霉菌的菌落数量和菌落大小、抑制孢子柄与孢子的的形成（P<0.05），结果呈现剂量-效应关系。提示四君子汤在治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值。 王刚生等应用试管药基法，测定中药提取组合物胶囊对念珠菌（白念、热带、克柔氏）、曲霉（烟曲、黄曲）的最小抑菌浓度（MIC），结果发现中药提取组合物胶囊对致病性念珠菌及曲霉体外均有很强的抗菌活性[9]。 还有研究通过微量液基稀释法分别测定中药活性成分肉桂醛和柠檬醛对常见深部条件致病菌黄曲霉、烟曲霉的抗菌活性。肉桂醛对黄曲霉、烟曲霉MIC 分别为0.01μg/ml，0.050μg/ml，柠檬醛对黄曲霉、烟曲霉的MIC 分别为：2.600μg/ml、0.650μg/ml。证明中药活性成分肉桂醛和柠檬醛具有高效抗曲霉作用[10]。 2.2 中药对烟曲霉体内抑菌试验任金贤等复制粒细胞减少期并发IPA 大鼠模型进行研究，证明黄芪多糖（APS）能够提高该模型大鼠的胸腺免疫功能，可能减轻环磷酰胺免疫抑制和曲霉感染的程度。黄芪多糖联合两性霉素B 注射组半乳甘露聚糖值也明显更低，说明其联合治疗粒细胞减少大鼠并发烟曲霉病有减轻疾病程度的作用[11]。 研究发现四君子汤对侵袭性肺曲霉病（IPA）模型小鼠的作用[12]：将小鼠随机分成8 组，建立 IPA 模型后分别给小鼠灌服高、中、低不同剂量四君子汤及酮康唑 7d，于第 8 天处死，取肺、肝、脾、肾做组织烟曲霉培养及病理切片，观察各脏器烟曲霉菌的培养情况及病理变化，同时另取小鼠做生存实验。结果显示，不同剂量四君子汤治疗组小鼠各脏器烟曲霉的菌落数均比 IPA 模型组少，烟曲霉色素明显减弱，以中剂量组最为明显；病理切片结果显示，IPA 模型组肺组织可见大量菌丝，中剂量和高剂量四君子汤组肺组织未见菌丝，低剂量组可见少量菌丝。生存实验表明，中剂量四君子汤组小鼠的生存时间及质量明显优于 IPA 模型组。结论：四君子汤可缓解 IPA 小鼠的肺组织病理损伤，明显减缓 IPA 的发展，尤以中、高剂量组明显。
几种分离混合物的方法 1．过滤 [情境一]：现在有一份食盐(NaCl)和一份砂子，把它们混到了一起，想一想：要把它们分开，怎么办？分开后的砂子与原来的砂子相比较，有没有减少，我们怎么知道？用什 么方法证明？为什么会有这样的结果？ 知识贮备：①砂子不溶于水(H2O)。 ②食盐可溶于水。 ③想一想：日常生活中用过的筛子的用途。 ④测定物质的质量大小可用托盘天平。 新知识补充：滤纸是一种可以让水顺利透过的纸，但泥砂却不能透过。 实验前的准备： 1．过滤器的准备：①选择一个漏斗和一张滤纸， ②想一想：怎么把滤纸放进漏斗？ ③怎样安装一个右图所示的过滤装置？ 2．托盘天平的使用：①调整好托盘天平，准备称量。 ②分别称取20 克砂子和20克食盐。 实验用品：铁架台（带铁圈）、漏斗、滤纸、玻璃棒、烧杯（2只）、托盘天平、药匙。 实验步骤：①将称量好的砂子和食盐混合于烧杯中。 ②加入少量水使其中的食盐完全溶解。 ③过滤。 ④称量滤渣。 ⑤保留滤液（食盐水）以备下一个实验用。 思考：1、步骤②的水为什么只加少量而不是越多越好？ 2、步骤④的称量合适不合适？为什么？应该怎么办？ 3、用同样的实验方法还可以分开什么样的混合物？举例说明。
2．蒸发 [情境二]：在[情境一]的实验中我们只实现了砂子与食盐水的分离，但食盐与水还是混合在一起。如果我们现在就想把食盐和水分开，从而实现把砂子与食盐分开后得到混 合前的砂子和食盐，怎么办？ 知识贮备：①常温下，水（可用H2O表示）为液态，当温度升高到100℃（水的沸点）时就会转变为水蒸气而汽化。 ②食盐（化学名为氯化钠，用NaCl表示）在常温下为固体，熔点：801℃沸 点：1413℃ ③食盐溶解于水中时，只是由原来比较大的用肉眼可以看得见的颗粒分散成很小的肉眼看不见的微粒扩散到了水中。 新知识补充：1、日常生活中可以用锅煮开水，实验室则可以用蒸发皿来代替“锅”。 2、注意观察酒精灯的火焰，有什么特点？想一下什么位置的温度会最高？ 实验前的准备：安装一个右图所示的蒸发装置，想一下：如何安装会更合理？ 实验用品：铁架台（带铁圈）、酒精灯、玻璃棒、蒸发皿、托盘天平 实验步骤：①把食盐水注入蒸发皿中。 ②点燃酒精灯，开始对食盐水加热，并不断搅拌。 ③加热到适当的时候就可以得到食盐固体。 ④称量所得到的食盐（NaCl）的质量。 思考： 1、步骤②中为什么要用玻璃棒不断搅拌？ 2、步骤③中的“适当的时候”是指什么时候？ 3、步骤④中称出的食盐的质量与20克有什么不同？为什么？ 4、用同样的实验方法还可以分开什么样的混合物？举例说明。
1.多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。 1．1溶剂法 1．1．1水提醇沉法 水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。1．1．2酸提法 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之处。 1．1．3碱提法 多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。 1．1．4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。超临界流 体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。由于CO2的超临界条件（TC＝304．6 ℃，Tp＝7．38 MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。 该法的缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限。 1．2酶解法 1．2．1单一酶解法 单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合
第8章 分析化学中常用的分离和富集方法 教学目的：学习各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用，掌握复杂体系的 分离与分析；分离法的选择、无机和有机成分的分离与分析。 教学重点：掌握各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用。 教学难点：萃取分离的基本原理、实验方法和有关计算。 8.1 概述 干扰组分指样品中原有杂质（溶解）或加入试剂引入的杂质，当杂质量少时可加掩蔽剂消除干扰，量大或无合适掩蔽剂时可采用分离的方法。 分离完全的含义：（1）干扰组分少到不干扰；（2）被测组分损失可忽略不计。 完全与否用回收率表示 100?分离后测得的量回收率＝％原始含量 对回收率的要求随组分含量的不同而不同： 含量（质量分数） 回收率 1％以上 >99.9％ 0.01－1％ >99% 0.01%以下 90－95％ 常用的分离方法：沉淀、挥发和蒸馏、液－液萃取、离子交换、色谱等。 8.1.1沉淀分离法 1.常量组分的分离（自己看书：5分钟） （1） 利用生成氢氧化物 a. NaOH 法 b. NH3法（NH 4＋存在） c. 有机碱法 六次（亚）甲基四胺 pH ＝5-6 d. ZnO 悬浮液法 pH ＝6 （2） 硫化物沉淀 （3） 有机沉淀剂 2.痕量组分的共沉淀分离和富集 （1） 无机共沉淀分离和富集 a. 利用表面吸附进行共沉淀 CuS 可将0.02ug 的Hg 2＋从1L 溶液中沉淀出 b. 利用生成混晶 （2） 有机共沉淀剂 灼烧时共沉淀剂易除去，吸附作用小，选择性高，相对分子质量大，体积也大，分离效果好。 a. 利用胶体的凝聚作用进行共沉淀：辛可宁，丹宁，动物胶b. 利用形成离子缔合物进行共沉淀：甲基紫，孔雀绿，品红，亚甲基蓝c. 利用“固体萃取剂”进行共沉淀。 8.1.2挥发和蒸馏分离法 挥发法：选择性高 As 的氢化物，Si 的氟化物，As 、Sb 、Sn 、Ge 的氯化物 蒸馏法：N －NH 4＋－NH 3↑（酸吸收） 利用沸点不同，进行有机物的分离和提纯。 8.2 液－液萃取分离法 8.2.1萃取分离法的基本原理 萃取：把某组分从一个液相（水相）转移到互不相溶的另一个液相（有机相）的过程。 反萃取：有机相→水相
重庆小曲固态法白酒生产工艺简介 一重庆小曲白酒的发展历史 重庆小曲白酒以江津白酒闻名，江津酿酒历史悠久，以盛产高粱白酒而享有“酒乡”之称。江津气候温和，日照充足，十分适宜种植高粱，为酿酒业提供了优质的原材料。早在宋代，江津就有了酿酒业的雏形，历经发展，到清代末年，江津成为四川著名产酒县，《蜀海丛谈》一书记述道：“全省酒税收入，以江津、泸州、什邡、绵竹等地产酒之区，收数为最旺。”江津名列第一，可见酿酒业的兴盛。当时，江津白沙烧酒最为著名。清代光绪年间，白沙白酒生产已经有了相当规模，酿酒作坊多建于驴溪河畔，相接形成1华里的槽坊街。 由于当时白沙地处水运交通要道，是远近闻名的水码头。白酒由水路交通往外销售，上至赤水、贵州，下至汉口、上海，遍及全国很多地方，还有白沙烧酒用船运一过汉口时酒味特别香醇的传说。由于该酒的酒度高，可用火点燃烧干不留多少水分，所以人们叫它干酒，白沙干酒由此而名声远扬，光绪32年，白沙干酒年产量己达7、8千缸，每缸重约40至50斤。民国4年，白沙酿酒达到极盛。全镇有酿酒槽坊230多家，年产酒1000万斤以上，江津酒厂的前身宏美酒坊于1908年创建于江津白沙。 白沙干酒由于历史优久，而白沙镇上的酒厂最为出名被称为老白沙干酒，简称“老白干”。由于水运发达，商业兴旺，给白沙带来了较大的发展，成为全国有名的大镇，原江津县所在地因此而设在白沙镇，因此又叫“江津老白干”。后来随着社会的进步，交通条件改善，将县所在地由白沙镇搬迁到江津县城“几江镇”。1951年，国家规定酒类专卖，江津创办了首家国营酒厂，酿酒业逐步成为地方工业的重要支柱，酿酒工艺得到进一步提高。江津酒厂注册了“几江”牌商标，“几江”牌江津老白干由此而得名。随着酿酒科技的进步，白酒生产得到了较快发展，酒种不断增加，酒类行业各酒种按用曲的型状分类，将江津老白干这一酒种按曲药的型状归类为小曲白酒。也是当时全国产量最大的一个酒种，是国民不可缺少的主要酒类产品。江津白酒是按国家计划分配，用桶装调往全国很多省市和地区，供应给市民以及矿山、井下、高寒地区的作业人员饮用。为了方便运输，江津白酒开始瓶装销往全国各地，一九六三年，江津白酒就被列入四川省名酒行列。 1980年，财经出版社出版的《中国酒》一书对“几江牌”白酒列专条介绍：“无色、清香、醇和、回甜”，“具有四川地方小曲酒的特殊风味。”商务印书馆出版的《中国土特产辞
综述 联合用药防治曲霉感染研究进展 刘洁一胡小平 (北京大学深圳医院皮肤性病科,深圳５１８０３６) ?摘要?一目前临床上治疗曲霉感染的药物主要有三唑类二多烯类和棘白菌素类,这些药物对控制曲霉感染具有重要作用.然而,随着抗真菌药耐药报道逐年增多,为提高临床疗效和避免曲霉耐药的发生,需要研发新型抗真菌药物或者寻找更为有效的治疗方法.由于研发新药周期长和成本高,越来越多的研究人员着眼于联合用药防治曲霉感染.抗真菌药物之间的联合用药,棘白菌素联合三唑类或多烯类药物可产生协同效应,多烯类联合三唑类药物产生拮抗作用,而抗真菌药物和非抗真菌药之间的联合用药具有较高的临床价值. ?关键词?一真菌感染;曲霉;联合用药 ?中图分类号?一R５１９．８一R９７８．５一一?文献标识码?一A一一?文章编号?一１６７３Ｇ３８２７(２０１９)１４Ｇ０１２４Ｇ０５ 一一近年来,随着骨髓移植和器官移植的广泛开展二A I D S患者人数的增加二广谱抗生素的普遍应用二免疫抑制剂以及侵入性治疗的增多,侵袭性真菌感染发病率和死亡率呈现逐年上升趋势[１],这严重危及到患者的生命健康.曲霉是引起侵袭性真菌感染的主要病原体[２],据报道系统性曲霉感染的病死率超过５０％[３],这为临床上防治曲霉感染带来了重大挑战.缺乏特异的临床表现二诊断手段欠佳使得该类患者难以获得准确的早期诊断,此外,抗真菌药不能获得理想疗效也是一个重要原因[４].目前临床上治疗曲霉感染的药物主要有三唑类二多烯类和棘白菌素类,这３类药物具有不同的作用机制[５](见图１).相较于临床上多达２４种的抗细菌药物和６种抗逆转录病毒药物[６],抗真菌药因特异性细胞靶点少[５]而种类有限.随着曲霉对抗真菌药耐药报道逐年增多,而研发新药科研难度较大和经济负担较重,越来越多的研究人员着眼于联合用药防治曲霉感染. １一现有抗曲霉感染药物 １．１一三唑类抗曲霉感染 在近十多年中,唑类药物在预防和治疗曲霉疾 基金项目:北京大学深圳医院科研项目(J C Y J２０１８０１１);深圳市三名工程项目资助(S Z S M２０１８１２０５９) 作者简介:刘洁,女(汉族),硕士研究生在读,EＧm a i l:l a u２m i n０５１５＠１６３．c o m 通信作者:胡小平．EＧm a i l:x i a o p i n g７７５２＠s o h u．c o m 病方面发挥了重要作用[７].三唑类抗真菌药最早于１９８０年合成,其主要包括氟康唑二伊曲康唑以及第二代抗真菌药伏立康唑和泊沙康唑等.作用机制主要是抑制羊毛甾醇转化为麦角固醇过程中重要的靶酶１４αＧ去甲基化酶,而麦角固醇是真菌细胞膜的主要成分,其合成受阻使三唑类药物发挥抗真菌作用[８].随后,麦角固醇的损耗以及有毒的麦角固醇前体的累积在真菌细胞膜上产生了膜应力,从而抑制其生长.唑类药物包括咪唑类和三唑类衍生物两种类型.咪唑类通常用于治疗皮肤表皮感染,而三唑类药物由于具有良好的药动学效应和安全性,通常用于治疗深部真菌系统性感染.三唑类药物是治疗侵袭性曲霉(i n v a s i v e a s p e r g i l l u s,I A)感染的一线用药. １．２一多烯类抗曲霉感染 多烯类是１９５０年发现的一种广谱天然抗真菌药,在临床上广泛用于真菌感染的治疗,常用的药物有两性霉素B和制霉菌素.多烯类药物抗真菌机制主要与真菌细胞膜上的麦角固醇相结合,干扰代谢和增加细胞膜的通透性,最终导致细胞死亡[９].由于麦角固醇和哺乳动物的类胆固醇结构相似,多烯类药物在临床不当使用会产生严重的全身毒性和肾脏毒性.因此,在新药研发方面,目前主要集中在降低多烯类抗真菌药的毒副作用.尽管该类药物在临床上长期广泛使用,但是关于多烯类药物耐药鲜有报道[１０]. １．３一棘白菌素类抗曲霉感染 ４２１ 一中国真菌学杂志２０１９年４月第１４卷第２期一C h i n JM y c o l,A p r i l２０１９,V o l１４,N o．２一
可在各种禽类中发生，常见于鸡、火鸡及水禽，野鸟、动物园中的鸟以及笼养鸟也偶有发生。胚胎及6周龄以下的雏鸡与雏火鸡比成年鸡易感，4～12日龄最为易感，幼雏常呈急性爆发，发病率很高，死亡率一般在10％～50％之间，成年禽仅为散发，多为慢性。本病可通过过多种途径感染，曲霉菌可穿透蛋壳进入蛋内，引起胚胎死亡或雏鸡感染，此外通过呼吸道吸入、肌肉注射、静脉、眼睛接种、气雾、阉割伤口等感染本病。曲霉菌经常存在于垫料和饲料中，在适宜条件下大量生长繁殖，形成曲霉菌孢子，若严重污染环境与种蛋，可造成曲霉菌病的发生。一临床症状幼禽发病多呈急性经过，病鸡表现呼吸困难，张口呼吸，喘气，有浆液性鼻漏。食欲减退，饮欲增加，精神萎顿，嗜睡。羽毛松乱，缩颈垂翅。后期病禽迅速消瘦，发生下痢。若病原侵害眼睛，可能出现一侧或两侧眼睛发生灰白混浊，也可能引起一侧眼肿胀，结膜囊有干酪样物。若食道沾膜受损时，则吞咽困难。少数禽由于病原侵害脑组织，引起共济失调，角弓反张，麻痹等神经症状。一般发病后2～7天死亡，慢性者可达2周以上，死亡率一般为5％～50％。若曲霉菌污染种蛋及孵化后，常造成孵化率下降，胚胎大批死亡。成年禽多呈慢性经过，引起产蛋下降，病程有拖延数周，死亡率不定。二病理变化病理变化主要在肺和气囊上，肺脏可见散在的粟粒，大至绿豆大小的黄白色或灰白色的结节，质地较硬，有时气囊壁上可见大小不等的干酪样结节或斑块。随着病程的发展，气囊壁明显增厚，干酪样斑块增多，增大，有的融合在一起。后期病例可见在干酪样斑块上以及气囊壁上形成灰绿色霉菌斑。严重病例的腹腔、浆膜、肝或其它部位表面有结节或圆形灰绿色斑块。三诊断根据发病特点饲料、垫草的严重污染发霉，幼禽多发且呈急性经过、、临床特征呼吸困难、、剖检病理变化在肺、气囊等部位可见灰白色结节或霉菌斑块、等，作出初步诊断，确诊必须进行微生物学检查和病原分离鉴定。四防治 1.加强饲养卫生管理应防止饲料和垫料发霉，使用清洁、干燥的垫料和无霉菌污染的饲料，避免禽类接触发霉堆放物，改善禽舍通风和控制湿度，减少空气中霉菌孢子的含量。为了防止种蛋被污染，应及时收蛋，保持蛋库与蛋箱卫生。 2.发生禽曲霉菌病的处理 1、清扫消毒应尽早移走污染霉菌的饲料与垫料，清扫禽舍，喷酒1： 2000的硫酸铜溶液，换上不发霉的垫料。严重病例扑杀淘汰，轻症者可用1： 2000或1： 3000的硫酸铜溶液饮水连用3～4天，可以减少新病例的发生，有效地控制本病的继续蔓延。 2、使用中草药方剂①金银花、连翘、莱菔子炒、各30克，丹皮、黄芩各15克，柴胡18克，桑白皮、枇杷叶、甘草各12克，水煎取汁1000毫升，为500只鸡的一日量，每日分4次拌料喂服，每天1剂，连用4剂，治疗鸡曲霉菌病效果显著。②桔梗250克，蒲公英、鱼腥草、苏叶各500克，水煎取汁，为1000只鸡的用量，用药液拌料喂服，每天2次，连用1周。另在饮水中加0.1％高锰酸钾。对曲霉菌病鸡用药3天后，病鸡群停止死亡，用药1周后痊愈。对于珍贵禽类，可考虑用制霉菌素、两性霉素及其它抗霉菌制剂进行治疗。更多请访问https://www.doczj.com/doc/4e19107364.html,/
高效液相色谱法的分类及其分离原理 高效液相色谱法分为：液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法。 1.液-固色谱法（液-固吸附色谱法） 固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分配的。 ①液-固色谱法的作用机制 吸附剂：一些多孔的固体颗粒物质，其表面常存在分散的吸附中心点。 流动相中的溶质分子X（液相）被流动相S带入色谱柱后，在随载液流动的过程中，发生如下交换反应： X（液相）+nS（吸附）<==>X（吸附）+nS（液相） 其作用机制是溶质分子X（液相）和溶剂分子S（液相）对吸附剂活性表面的竞争吸附。 吸附反应的平衡常数K为： K值较小：溶剂分子吸附力很强，被吸附的溶质分子很少，先流出色谱柱。 K值较大：表示该组分分子的吸附能力较强，后流出色谱柱。 发生在吸附剂表面上的吸附-解吸平衡，就是液-固色谱分离的基础。 ②液-固色谱法的吸附剂和流动相 常用的液-固色谱吸附剂：薄膜型硅胶、全多孔型硅胶、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等。 一般规律：对于固定相而言，非极性分子与极性吸附剂（如硅胶、氧化铜）之间的作用力很弱，分配比k较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸附剂之间的作用力很强，分配比k大，保留时间长。 对流动相的基本要求： 试样要能够溶于流动相中 流动相粘度较小 流动相不能影响试样的检测 常用的流动相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等。 ③液-固色谱法的应用 常用于分离极性不同的化合物、含有不同类型或不；数量官能团的有机化合物，以及有机化合物的不同的异构体；但液-固色谱法不宜用于分离同系物，因为液-固色谱对不同相对分子质量的同系物选择性不高。 2.液-液色谱法（液-液分配色谱法） 将液体固定液涂渍在担体上作为固定相。 ①液-液色谱法的作用机制 溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定液中溶解度较大的组分容易进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。 液-液色谱法与液-液萃取法的基本原理相同，均服从分配定律：K=C固/C液 K值大的组分，保留时间长，后流出色谱柱。 ②正相色谱和反相色谱 正相分配色谱用极性物质作固定相，非极性溶剂（如苯、正己烷等）作流动相。 反相分配色谱用非极性物质作固定相，极性溶剂（如水、甲醇、己腈等）作流动相。
《化工原理》任课教师：杨雪峰Prof. Dr. Yang Xuefeng Principles of Chemical Engineering
第十四章 其他传质分离方法
结晶( Crystallization ) 结晶是从蒸气、溶液或熔融物中析出晶体的过程。 由于晶体与气体、液体以及非晶体固体不同，所以晶体有其自身的共同规律和基本特性。 结晶操作的分类 溶液结晶、熔融结晶、升华结晶、反应沉淀及盐析等类型。结晶操作的特点 (1)能从杂质含量较多的溶液中获得高纯度的固体产品； (2)与蒸馏等单元操作相比，结晶操作过程的能耗较低（一 般来讲，结晶热仅为汽化热的1/3~1/7）； (3)结晶操作可用于高熔点混合物、共沸物以及热敏性物质 等难分离物系的分离。
基本概念和操作原理 溶液结晶过程是涉及溶质由液相转入固相的相际传质过程，而且由于影响晶体成长的因素较多，使问题变得更为复杂。晶核的生成（Nucleation ） 晶核的生成机理主要有三种：初级均相成核、初级非均相成核和二次成核。 晶体的成长（Crystal growth） 晶体的成长机理可分为两步： (1)溶质由溶液主体向晶体表面的扩散过程，其推动力为溶 液主体与晶体表面溶质的浓度差； (2)溶质在晶体表面以某种方式嵌入空间晶格而组成有规则 的结构，并放出结晶热。该过程也称为表面反应过程。
结晶只可能在过饱和溶 液中发生。 饱和溶液： 溶质与溶液共存并处于相平衡状态。其浓度即是该温度下固体溶质在溶剂中的溶解度(平衡浓度)。不饱和溶液： 浓度<饱和浓度的溶液。过饱和溶液： 浓度>饱和浓度的溶液。
侵袭性肺曲霉病 侵袭性肺曲霉病(IPA)是曲霉菌直接侵犯肺或支气管引起的肺部感染性疾病，最常见烟曲霉。主要病理改变是呈急性广泛坏死性出血性肺炎或有肉芽肿，曲霉丝侵入血管，导致坏死性血管炎。 【诊断要点】见三级诊断标准。 1.临床表现：急性肺炎症状(咳嗽、咯痰、发热、咯血)，抗生素治疗无效。抗生素治疗无效的持续性发热、干咳、呼吸困难、咯血 2.辅助检查： 影像学表现：（1）急性侵袭性肺曲霉病：CT早期可见晕轮征(磨玻璃样环状阴影环绕病灶周围)，2-3周出现空气新月征(原有病灶中出现新月状的低密度透光区)，后期可形成曲霉球。（2）慢性坏死性肺曲霉病：CT可见上叶和下叶背段肺浸润性病变或结节影，伴有或不伴有空洞，可见曲霉球。（3）气道侵袭性肺曲霉病：影像学提示；①急性气管-支气管炎：X线多数正常；②细支气管炎：HRCT可见小叶中心性结节和“树-芽”征；③支气管肺炎：肺外周细支气管分布区小片实变影；④阻塞性支气管肺曲霉病：曲霉在官腔内呈团块状生长，好发于下叶，可有支气管扩张、大量黏液嵌塞。 微生物检查：GM试验阳性。 微生物检查：合格痰标本、支气管吸取物、BALF或胸腔积液涂片典型形态为45°分枝的有隔菌丝。
【治疗要点】 一线治疗：首选伏立康唑。 备选治疗：卡泊芬净、两性霉素B、两性霉素B脂质体。 缓解期用药：口服伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑，直到临床或影像学表现缓解或者稳定。 大咯血时如有条件可行手术治疗或支气管动脉栓塞。 【药物处方】 一线治疗： 伏立康唑：第一天0.9%氯化钠/5%葡萄糖250ml+伏立康唑400mg(6mg/kg)静点12小时1次；以后0.9%氯化钠/5%葡萄糖250ml+伏立康唑 200mg(3mg/kg)静点12小时1次。 备选治疗： 处方1：卡泊芬净：第一次负荷量：0.9%氯化钠250ml+卡泊芬净70mg 静点(至少1h)。维持量：0.9%氯化钠250ml+卡泊芬净50mg 静点(至少1h) 每日1次。 处方2：两性霉素B：5%葡萄糖7-10ml/kg+两性霉素B 0.7-1mg/kg静点每日1次。
稀土元素的高效分离方法 日本东北大学新近开发成功一种高效分离稀土元素的方法，利用低卤化物形成稀土元素盐（二价盐），是不同于传统溶剂萃取法和离子交换法的一种干式高效率分离法。稀土元素的低卤化物盐相对于三价的稀土类盐，其蒸气压差较小，容易与蒸发的三价盐分离。所用的实验装置采用置于两台卧式电炉之中的不锈钢反应容器（外径约40mm，长约50cm），在分离钐的低卤化物盐与三价钕时，利用金属铅作还原剂，加热到900~l000C进行真空蒸馏，在反应容器内将稀土元素成功地进行了分离。此法也能将最难分离的镨与钕分离，其分离效率比传统分离技术提高了5~60倍左右。新的分离工艺可望实现工业化生产。（启明取自《日刊工业新闻》，2000.8.23）
稀土元素的高效分离方法 刊名： 金属功能材料 英文刊名：METALLIC FUNCTIONAL MATERIALS 年，卷(期)：2000,7(6) 本文读者也读过(10条) 1.王毅军.刘宇辉.郭军勋.王素玲.翁国庆盐酸优溶法回收NdFeB废料中稀土元素的研究与生产[会议论文]-2006 2.涂星.廖列文稀土元素的分离技术[期刊论文]-贵州化工2003,28(3) 3.张智勇.王玉琦.孙景信.李福亮.柴之芳.许雷.李信.曹国印分子活化分析研究植物原生质体中的稀土元素[期刊论文]-科学通报2000,45(5) 4.张志峰.李红飞.国富强.李德谦.孟淑兰.Zhang Zhifeng.Li Hongfei.Guo Fuqiang.Li Deqian.Meng Shulan溶剂萃取法制备的纳米CeF3紫外吸收性能研究[期刊论文]-中国稀土学报2008,26(4) 5.王素玲.王毅军.WANG Su-ling.WANG Yi-jun从废铁合金中回收稀土的研究与生产[期刊论文]-稀有金属与硬质合金2009,37(2) 6.何展伟.李永华.He Zhanwei.Li Yonghua镍钴铜铁和稀土混合废料中各元素的分离提纯[期刊论文]-广东化工2006,33(5) 7.韩旗英.李景芬.白炜.HAN Qi-ying.LI Jing-fen.BAI Wei环烷酸分离提纯钇工艺技术优化[期刊论文]-材料研究与应用2010,04(2) 8.莉华应对危机共商良策科学发展——2009年全国稀土应用与市场信息交流会在厦门市隆重举行[期刊论文]-稀土信息2010(1) 9.李继东.刘英.伍星八级杆碰撞/反应池技术在高纯稀土分析中的应用研究[会议论文]-2007 10.张丽清.张风春.关瑾.于春玲从超导材料废料分离回收稀土元素钕的研究[期刊论文]-沈阳化工学院学报2003,17(4) 本文链接：https://www.doczj.com/doc/4e19107364.html,/Periodical_jsgncl200006045.aspx
习题 1 1. 分离方法在定量分析中有什么重要性？分离时对常量和微量组分的回收率要求如何？（参考答案）答： 在定量分析，对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰，以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定，必须采用分离富集方法。换句话说，分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果，保证分析结果的准确性，扩大分析应用范围。 在一般情况下，对常量组分的回收率要求大于99.9%，而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低，对回收率要求也降低。 2.在氢氧化物沉淀分离中，常用的有哪些方法？举例说明。（参考答案） 答： 在氢氧化物沉淀分离中，沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此，采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中，通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有： A.氢氧化钠：NaOH是强碱，用于分离两性元素(如Al3+，Zn2+，Cr3+)与非两性元素，两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中，而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 B.氨水法：采用NH4Cl-NH3缓冲溶液(pH 8-9)，可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 C.有机碱法：可形成不同pH的缓冲体系控制分离，如pH5-6六亚甲基四胺-HCl缓冲液，常用于Mn2，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn2+，Cd2+与Al3+，Fe3+，Ti(IV)等的分离。 D.ZnO悬浊液法等：这一类悬浊液可控制溶液的pH值，如ZnO悬浊液的pH值约为6，可用于某些氢氧化物沉淀分离。 3. 某试样含Fe，A1，Ca，Mg，Ti元素，经碱熔融后，用水浸取，盐酸酸化，加氨水中和至出现红棕色沉淀（pH约为3左右），再加六亚甲基四胺加热过滤，分出沉淀和滤液。试问。为什么溶液中刚出现红棕色沉淀时人们看到红棕色沉淀时，表示pH为3左右？过滤后得到的沉淀是什么？滤液又是什么？试样中若含Zn2+和Mn2+，它们是在沉淀中还是在滤液中？（参考答案）
烟曲霉菌感染的实验室检查方法 周艳(综述) 烟曲霉菌为空气中常见的腐生菌，为一种机会致病真菌，其孢子直径很小，可被动吸入呼吸道，在一般的环境下，人们每天都能吸入上百个烟曲霉菌孢子，但是通常情况下都不致病。近20年来随着广谱抗生素的滥用、肿瘤放疗和化疗，造血干细胞移植术、实体器官移植术后应用免疫抑制剂及糖皮质激素等药物以及肠外营养人数的增加以及艾滋病的流行等免疫抑制人群逐年增长[1]，临床上越来越多的免疫力低下的人群感染烟曲霉菌导致侵袭性肺曲霉病（invasive pulmonary aspergillosis,IPA）。侵袭性曲霉菌感染的发病率日益增长，其发病率已经超过了最常见的真菌感染—侵袭性念珠菌病。免疫力低下的老年病人发生侵袭性曲霉菌感染后的死亡率也一直居高不下。IPA以肺部感染为主，主要为急性坏死性出血性肺炎，并可波及骨骼、脑、肝、肾、心脏等全身多个重要器官，其预后极差，死亡率高达80％－90％[2]。由于IPA的发病机制尚未阐明，从而导致IPA的诊断极为困难，治疗成功率很低。为此，发展有效的烟曲霉菌感染实验室检查方法对于该病的诊断与治愈显得尤为重要，目前常见的实验室检测方法有：显微镜检查、病原生物学培养方法、血清免疫学检测法、分子生物学检测法等。本文就这些方法的研究作一综述。 关键词：烟曲霉菌；聚合酶链反应；血清学诊断 1、显微镜检查 显微镜检查主要包括直接显微镜检查和组织病理学检查，都是以形态学特点为基础来对病原微生物进行诊断。曲霉菌直接镜检呈现玻璃样透明的菌丝，但是其菌丝结构特点的特异性并不突出，其他种类相似的真菌如青霉菌亦可呈现类似
的镜下特点。另一方面，组织病理学检查虽也是侵袭性曲霉菌感染确诊的“金标准”，病理表现为真菌菌丝侵入和定植于组织或者血管造成炎症改变。但是其报告总中经常会出现曲霉样形态学特点等描述性的诊断结果，这对在镜下类似曲霉菌类的其他病原微生物的鉴别诊断带来一定的困难，误诊的出现几乎不可避免。若是发生误诊的两种病原微生物的治疗方案相差较大，就会严重影响治疗效果，从而进一步导致预后不良。此外，检查者的主观因素也有可能对诊断结论产生影响。 2、病原微生物的培养 病原微生物的培养是诊断细菌与真菌感染的常规方法，特异性高，同时还可以用于细菌与真菌感染的药敏试验，为临床合理使用抗生素提供可靠的依据。标本病原微生物的培养结果是侵袭性曲霉菌感染确诊的“金标准”，这是曲霉菌感染的诊断基础[3]。 烟曲霉菌培养是通过取病人血液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液（BAL）、尿液及感染病理组织等标本，接种于真菌培养基培养，其中血液、BAL及感染组织为常用的取材标本。各实验室采用的培养基及培养温度时间各有不同，如蔡氏培养基适用26℃培养3-4天，沙保培养基适用35℃培养1-2天，但因为培养时间长且敏感性不高，因而可能延误病人的诊断和治疗。与白色念珠菌、新型隐球菌等单细胞真菌比较，烟曲霉菌为丝状型真菌，组织的机械破碎对丝状真菌成活力及培养有很大影响[4]。此外，由于曲霉菌是机会致病菌，从有菌区获取的阳性培养结果并不能明确是由于定植的正常菌群或是侵袭性感染所致。 3、血清免疫学检测法 血清免疫学检测法是一种诊断病原因子感染的经典方法，原理是根据抗原
酿酒-川法小曲清香酒酿造方法 泡粮是酿酒的第一步，尤其是以高粱为原料的四川小曲酒，通过泡粮，高粱吸收水分，使其在蒸煮过程中易蒸透心，糊化良好。且高粱中含的单宁，在泡粮过程中，大部分可溶于水中被除去，有利于糖化和发酵。同时，高粱中的灰砂杂物经泡粮后可除去，使原料更加干净。 1、操作方法 每天蒸完酒后，洗净底锅。烧开水，泡次日粮。每100公斤高粱，约需泡粮用水165公斤左右。泡粮时将开水迅速舀入泡粮桶内，然后将高粱倒入，即先水后粮。这样可使泡粮桶内上下水温一致，使高粱受热均匀、吸水均匀。泡水温度应在90℃以上。高粱倒入泡粮桶后，用木锨或铁铲沿桶边至桶
心将高粱翻拌一次，刮平粮面。泡粮水位应淹过粮面约 25cm，此时检查水温应在75℃以上，随即加盖保温。待2～3小时后揭盖检查一次，不使粮粒露出水面。经6～10小时后放出泡水。吊至蒸粮甑。泡后粮食每100公斤增重至160～170公斤。 2、泡粮的要点
泡粮水温要适当，水温过高，部分淀粉粒开始受热糊化。水温过低，又不能阻止粮粒中固有淀粉酶的活力，它们都会减少淀粉粒的机械强度，削弱粮粒遇冷收缩时淀粉粒间相互挤压的力量。特别是当水温低的时候，淀粉酶的活力会加强，粮粒中的糖量增多，会增加蒸粮中可发酵性物质的损失，以及加大培菌过程中控制杂菌的困难度。适宜的泡粮水温一般为73-75℃，不能偏低。 3、泡粮要达到什么要求 泡粮要透心、均匀，吸水适量。粮粒吸水过量，受热容易破皮，会扩大甑底、甑面粮粒因受热时间不同产生的差距。透心、均匀可以使淀粉粒受热时膨胀一致，受压时碎裂一致。为此，应该加强泡粮保温工作，使泡桶周围和中心的粮粒吸水一致。泡后干发一段时间，使粮粒中的水分分布均匀。组织紧密的粮粒受热后膨胀较大，泡粮吸水可以偏少，适当干
分析化学中常用的分离富集方法 思考题 11-1 在分析化学中，为什么要进行分离富集？分离时对常量和微量组分的回收率要求如何？答：在定量分析，对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰，以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定，必须采用分离富集方法。换句话说，分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果，保证分析结果的准确性，扩大分析应用范围。在一般情况下，对常量组分的回收率要求大于99.9%，而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低，对回收率要求也降低。 11-2 常用哪些方法进行氢氧化物沉淀分离？举例说明。 答：在氢氧化物沉淀分离中，沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此，采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中，通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有： a 氢氧化钠：NaOH是强碱，用于分离两性元素（如Al3+，Zn2+，Cr3+）与非两性元素，两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中，而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 b 氨水法：采用NH4Cl-NH3缓冲溶液（pH8-9），可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 c 有机碱法：可形成不同pH的缓冲体系控制分离，如pH5-6六亚甲基胺-HCl缓冲液，常用于Mn2+，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn2+，Cd2+与Al3+，Fe3+，Ti（IV）等的分离。 d ZnO悬浊液法等：这一类悬浊液可控制溶液的pH值，如ZnO悬浊液的pH值约为6，可用于某些氢氧化物沉淀分离。 11-3 某矿样溶液含Fe3+，A13+，Ca2+，Mg2+，Mn2+，Cr3+，Cu2+和Zn2+等离子，加入NH4C1和氨水后，哪些离子以什么形式存在于溶液中？哪些离子以什么方式存在于沉淀中？分离是否完全？ 答：NH4Cl与NH3构成缓冲液，pH在8-9间，因此溶液中有Ca2+，Mg2+,，Cu(NH3)42-、Zn(NH3)42+等离子和少量Mn2+，而沉淀中有Fe(OH)3，Al(OH)3和Cr(OH)3和少量Mn(OH)2沉淀。试液中Fe3+，A13+，Cr3+可以与Ca2+，Mg2+，Cu2+和Zn2+等离子完全分开，而Mn2+分离不完全。 11-4 如将上述矿样用Na2O2熔融，以水浸取，其分离情况又如何？ 答：Na2O2即是强碱又是氧化剂，Cr3+、Mn2+分别被氧化成CrO42-和MnO4-。因此溶液有AlO22-，ZnO22-，MnO4-和CrO42-和少量Ca2+，在沉淀中有：Fe(OH)3，Mg(OH)2和Cu(OH)2和少量Ca(OH)2